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利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究 被引量:2
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作者 谢秀菊 夏启玉 +7 位作者 霍姗姗 杜晓希 麦贤俊 张雨良 郭安平 李峰 孔祥义 赵辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2534-2541,共8页
番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番... 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番木瓜植株感染PRSV的方法,利用这2种方法检测多株转基因番木瓜与非转基因番木瓜的PRSV含量,并对结果进行比较分析。结果表明:利用PRSV多肽抗原作为标准品制备的抗体建立的标准曲线拟合度较好,可用于ELISA法检测PRSV;qRT-PCR法中选择的内参基因Cpa03g018830在番木瓜的不同生长阶段均稳定表达,可作为PRSV含量测定的内参基因;ELISA法和qRT-PCR法对多株转基因和非转基因番木瓜植株中PRSV含量的检测结果基本一致,表明这2种方法均可用于番木瓜植株中PRSV含量的检测。利用这2种检测手段,可及时发现并铲除感染了PRSV的番木瓜植株,有效预防与控制PRSV传播。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 酶联免疫吸附 荧光定量逆转录PCR
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海南番木瓜PRSV和PLDMV病毒发生情况及分子鉴定 被引量:12
2
作者 张雨良 黄启星 +4 位作者 郭安平 曾会才 赵辉 孔华 刘志昕 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第12期2436-2441,共6页
对海南昌江、乐东、澄迈、文昌和三亚5个主要番木瓜产区的病毒病发生情况进行调查。对76份番木瓜疑似病毒样品进行检测,检测结果表明海南番木瓜病毒病主要有2种:由番木瓜环斑病毒(Papaya ring spot virus,PRSV)引起的番木瓜环斑病毒病... 对海南昌江、乐东、澄迈、文昌和三亚5个主要番木瓜产区的病毒病发生情况进行调查。对76份番木瓜疑似病毒样品进行检测,检测结果表明海南番木瓜病毒病主要有2种:由番木瓜环斑病毒(Papaya ring spot virus,PRSV)引起的番木瓜环斑病毒病和由番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)引起的番木瓜畸形花叶病毒病。其中,番木瓜环斑病毒病最为常见,检出率达77.63%,是影响海南地区番木瓜产业健康发展的主要病毒病;畸形花叶病毒病发生率很低,仅检出2例番木瓜畸形花叶病毒病样品。以PRSV病毒基因组P1和Hc-Pro作为靶标基因进行分子克隆、测序,结果表明海南地区PRSV病毒可明显分为2个株系:HNPRSV-1株系和HN-PRSV-2株系。此外,基于CP基因的系统进化树分析结果表明在海南新发现的PLDMV病毒可能源于台湾和日本。本研究可为开展番木瓜花叶病的防控和创制抗花叶病毒番木瓜新种质提供数据参考。 展开更多
关键词 番木瓜 prsv PLDMV 分子鉴定 系统进化树
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花粉管通道法介导PRSV-CP基因dsRNA转化番木瓜 被引量:7
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作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 陈业渊 蔡群芳 周鹏 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2159-2163,共5页
以番木瓜‘蔬罗Ⅰ号’植株为受体材料,采用花粉管通道技术将番木瓜环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3′-端同源序列dsRNA转入番木瓜子房中。用PCR方法对T0代种子进行了分子检测,获得53株转基因番木瓜,转化率达到8.9%;对获得的T0代转基因... 以番木瓜‘蔬罗Ⅰ号’植株为受体材料,采用花粉管通道技术将番木瓜环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3′-端同源序列dsRNA转入番木瓜子房中。用PCR方法对T0代种子进行了分子检测,获得53株转基因番木瓜,转化率达到8.9%;对获得的T0代转基因番木瓜进行了田间抗病性鉴定,结果表明,转基因番木瓜植株对番木瓜环斑病毒(PRSV)表现为不同程度的抗性,可以推迟发病。 展开更多
关键词 花粉管通道 DSRNA 番木瓜环斑病毒(prsv)
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西瓜PRSV-W和ZYMV-CH抗性的遗传与连锁分析 被引量:2
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作者 马少芹 许勇 +2 位作者 宫国义 张海英 沈火林 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期731-733,共3页
番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-W)和小西葫芦黄化花叶病毒中国株系(ZYMV-CH)是危害我国西瓜的主要病害。以抗病毒病西瓜野生种质P.I.595203与感病普通西瓜自交系98R为亲本,采用单粒遗传方式得到109个F3代株系。分别对亲本、F1及F3代109... 番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-W)和小西葫芦黄化花叶病毒中国株系(ZYMV-CH)是危害我国西瓜的主要病害。以抗病毒病西瓜野生种质P.I.595203与感病普通西瓜自交系98R为亲本,采用单粒遗传方式得到109个F3代株系。分别对亲本、F1及F3代109个株系群体进行了苗期抗PRSV-W和ZYMV-CH接种鉴定,通过F3代群体的抗感分离情况来推测F2代单株的基因型,并分别对PRSV-W与ZYMV-CH抗性遗传及其这2个抗性基因的连锁关系进行分析。研究结果发现P.I.595203对PRSV-W的抗性是由单隐性基因控制,同时可能存在微效修饰基因,将此基因暂定名为prs-W;同时进一步证实了西瓜对ZYMV-CH的抗性由单隐性基因zym-CH控制,zym-CH和prs-W2个抗性基因在遗传上存在一定连锁关系,其遗传距离是27cM。 展开更多
关键词 西瓜 prsv ZYMV 遗传分析
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混合感染番木瓜PRSV/PLDMV株系基因组全长cDNA的克隆和实时荧光定量PCR分析 被引量:2
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作者 刘芳 庹德财 +3 位作者 沈文涛 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期742-751,共10页
番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)与番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)存在混合感染的现象,近年来混合感染发病率逐年递增,是一种新的威胁番木瓜种植业的病毒病害。运用RT-PCR和RACE方法从混... 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)与番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)存在混合感染的现象,近年来混合感染发病率逐年递增,是一种新的威胁番木瓜种植业的病毒病害。运用RT-PCR和RACE方法从混合感染样品中克隆获得2种病毒基因组全长c DNA,分别命名为PRSV-LM和PLDMV-LM,Gen Bank登录号分别为KT633943和KT633944,基因组序列大小分别为10 325、10 153 nt(不包括3′端的poly A)。序列分析表明:PRSV-LM与单独感染样品中的PRSV海南分离物HN(Gen Bank登录号:EF183499)的核苷酸序列和氨基酸序列相似性最高,为94%;PLDMV-LM与单独感染样品中的PLDMV海南分离物Hainan-DF(Gen Bank登录号:JX974555)核苷酸和氨基酸序列相似性最高,分别高达99%和97%。进化树分析显示,PRSV-LM和PLDMV-LM分别与单独感染样品的PRSV和PLDMV海南分离物有共同的进化起源。进一步利用实时荧光定量PCR对混合感染样品的PRSV与PLDMV病毒积累量进行分析,结果表明,混合感染样品中PLDMV病毒积累量大约是PRSV含量的100倍。研究结果为进一步探究PRSV/PLDMV混合感染发病机制奠定基础。 展开更多
关键词 混合感染 prsv PLDMV 序列分析 绝对定量
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低对比温度下PRSV方程的新温度函数关联式 被引量:3
6
作者 汪萍 李忠杰 项曙光 《石油化工》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期951-955,共5页
通过回归C1~C16 16种饱和烷烃的饱和蒸气压值,提出了低对比温度下PRSV方程的新温度函数关联式.新关联式只与温度和偏心因子有关,不需要物质的特征参数,是一种普遍化形式.通过对53种未参加回归的不饱和烃与极性物质饱和蒸气压的计算表明... 通过回归C1~C16 16种饱和烷烃的饱和蒸气压值,提出了低对比温度下PRSV方程的新温度函数关联式.新关联式只与温度和偏心因子有关,不需要物质的特征参数,是一种普遍化形式.通过对53种未参加回归的不饱和烃与极性物质饱和蒸气压的计算表明,新温度函数关联式较原PRSV温度函数在低对比温度下计算精度有明显提高.通过计算C1~C16饱和烷烃的饱和液体密度表明,改进的温度函数保持了PR和PRSV方程预测饱和液体密度的精度. 展开更多
关键词 温度函数 prsv方程 状态方程 关联式
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转PRSV复制酶基因T_2代番木瓜植株的抗病性测定 被引量:27
7
作者 阮小蕾 李华平 周国辉 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期12-15,共4页
转PRSV复制酶基因的番木瓜植株,其自交及杂交二代植株经PCR检测和Southern blot杂交的结果表明:目的基因整合在番木瓜的染色体上.人工接种PRSV的Ys、Vb、Sm株系于分子检测阳性的7~8叶期植株,转基因植株均表现高抗.在定植田间的9个月中... 转PRSV复制酶基因的番木瓜植株,其自交及杂交二代植株经PCR检测和Southern blot杂交的结果表明:目的基因整合在番木瓜的染色体上.人工接种PRSV的Ys、Vb、Sm株系于分子检测阳性的7~8叶期植株,转基因植株均表现高抗.在定植田间的9个月中,转基因植株无一发病,而对照则全部发病. 展开更多
关键词 prsv复制酶基因 T2代番木瓜 植株 抗病性测定
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PRSV CP-VPg嵌合型ihpRNA干扰载体转化番木瓜的抗性分析 被引量:1
8
作者 王树昌 言普 +1 位作者 沈文涛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第10期1944-1949,共6页
利用p CAMBIA3300载体为背景,构建PRSV CP-VPg嵌合型植物表达干扰载体p Cambia-hp RNA-CV,通过花粉管通道法将PRSV CP-VPg嵌合型植物表达载体遗传转化番木瓜,并将获得的转化番木瓜种子依次进行除草剂(PPT)筛选、PCR检测。结果表明:获得... 利用p CAMBIA3300载体为背景,构建PRSV CP-VPg嵌合型植物表达干扰载体p Cambia-hp RNA-CV,通过花粉管通道法将PRSV CP-VPg嵌合型植物表达载体遗传转化番木瓜,并将获得的转化番木瓜种子依次进行除草剂(PPT)筛选、PCR检测。结果表明:获得转基因番木瓜植株5株,且RT-PCR实验证明了目标片段在转基因株系中得到表达。采用人工摩擦接种法对转基因番木瓜株系进行攻毒实验,结果显示转基因番木瓜植株对PRSV病毒表现出抗病特性,说明hp RNA-CV成功的干扰了病毒基因的复制。该研究结果为番木瓜抗PRSV育种提供了一种有效的研究手段。 展开更多
关键词 番木瓜 嵌合型ihp RNA 花粉管通道法转化 prsv
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UNIFAC模型与PRSV方程相结合预测二元及三元系统汽液相平衡 被引量:4
9
作者 叶庆国 仲崇立 胡仰栋 《化学工程》 EI CAS CSCD 北大核心 1995年第6期66-70,共5页
采用Wong和Sandler混合规则,将PRSV立方型状态方程与UNIFAC活度系数模型相结合,给出一种预测混合物相平衡热力学性质的方法,并用54个二元体系和9个三元体系的实验数据做了检验,结果表明,该法可以较好地预... 采用Wong和Sandler混合规则,将PRSV立方型状态方程与UNIFAC活度系数模型相结合,给出一种预测混合物相平衡热力学性质的方法,并用54个二元体系和9个三元体系的实验数据做了检验,结果表明,该法可以较好地预测二元及三元体系的汽液相平衡。 展开更多
关键词 二元体系 汽液平衡 UNIFAC模型 prsv方程
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PRSV NIa-pro、NIa-vpg、NIb酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测 被引量:1
10
作者 王明钦 沈文涛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2008年第3期369-373,共5页
用PCR技术获得NIa-pro、NIa-vpg、NIb基因片段,将这些基因分别克隆到pBD-GAL4载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pBD-GAL4-NIa-pro、pBD-GAL4-NIa-vpg和pBD-GAL4-NIb。测序正确后,将重组质粒导入YRG-2酵母菌株,检测其表达产物对酵母... 用PCR技术获得NIa-pro、NIa-vpg、NIb基因片段,将这些基因分别克隆到pBD-GAL4载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pBD-GAL4-NIa-pro、pBD-GAL4-NIa-vpg和pBD-GAL4-NIb。测序正确后,将重组质粒导入YRG-2酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。结果表明,获得了正确的NIa-pro、NIa-vpg、NIb基因片段,并成功克隆到pBD-GAL4诱饵载体中,且转化有诱饵载体的YRG-2在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,说明表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,为下一步利用酵母双杂交系统检测与NIa-pro、NIa-vpg、NIb蛋白相互作用的蛋白奠定基础。 展开更多
关键词 prsv 酵母双杂交 诱饵载体 构建 检测
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番木瓜抗PRSV突变体的抗病性遗传分析 被引量:1
11
作者 黄建昌 肖艳 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期144-147,共4页
人工接种PRSV病毒Ys、Vb和Sm 3个株系,分析了番木瓜抗病突变体岭抗1号(LK-1)和美中红(MZH)的杂交后代的抗病性遗传特性,结果表明,F2代对PRSV Ys和Vb株系的抗病表现为由一对基因控制的质量性状遗传,感抗分离比例为3∶1,BC1代感抗分离比例... 人工接种PRSV病毒Ys、Vb和Sm 3个株系,分析了番木瓜抗病突变体岭抗1号(LK-1)和美中红(MZH)的杂交后代的抗病性遗传特性,结果表明,F2代对PRSV Ys和Vb株系的抗病表现为由一对基因控制的质量性状遗传,感抗分离比例为3∶1,BC1代感抗分离比例为1∶1,抗病为隐性,感病为显性,表明岭抗1号具对PRSV株系专化性的隐性抗病基因,将该隐性抗病基因暂命名为rys基因。 展开更多
关键词 番木瓜 prsv 抗病遗传
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PRSV-CP基因小hpRNA植物表达载体的构建 被引量:1
12
作者 王树昌 言普 +1 位作者 沈文涛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2009年第2期176-180,共5页
将获自海南(prsv-cp hno1~4)、云南(prsv-cp yunnan)和广西(prsv-cp guangxi)的番木瓜环斑病毒株系外壳蛋白(PRSV-CP)基因序列与DQ340771、X97251(来自中国台湾的PRSV株系)以及AY162218、AY231130、DQ374153、S46722、X97251(分别来自... 将获自海南(prsv-cp hno1~4)、云南(prsv-cp yunnan)和广西(prsv-cp guangxi)的番木瓜环斑病毒株系外壳蛋白(PRSV-CP)基因序列与DQ340771、X97251(来自中国台湾的PRSV株系)以及AY162218、AY231130、DQ374153、S46722、X97251(分别来自泰国、墨西哥、巴西、美国的PRSV株系)等外壳蛋白(CP)基因序列进行比对,在CP基因高保守区设计靶向目标序列进行亚克隆,获得长度为50bp的DNA片段,并通过一步套叠PCR把50bp正向片段和反向片段与拟南芥内含子拼接,成功构建了小hpRNA结构的植物表达载体,为进一步培育安全性好、抗谱广的番木瓜转基因新种质奠定了基础。 展开更多
关键词 prsv CP基因 HPRNA 植物表达载体
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接种PRSV番木瓜种苗胞质酵母双杂交cDNA文库的构建与分析 被引量:2
13
作者 沈文涛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2008年第4期419-423,共5页
利用Trizol法提取接种PRSV 4 d的番木瓜种苗总RNA,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,双链cDNA末端经Pfu-DNA聚合酶补平,与EcoR I接头连接,XhoI酶切消化产生粘端。用Sepharose CL-2B柱分离纯化去除小分子cDNA片段,再与pMyr酵母表达载体连... 利用Trizol法提取接种PRSV 4 d的番木瓜种苗总RNA,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,双链cDNA末端经Pfu-DNA聚合酶补平,与EcoR I接头连接,XhoI酶切消化产生粘端。用Sepharose CL-2B柱分离纯化去除小分子cDNA片段,再与pMyr酵母表达载体连接,转化受体菌XL10-Gold,构建了接种PRSV番木瓜种苗胞质酵母双杂交cDNA文库。所获得的原始文库的克隆总数为1.8×106cfu,重组率为100%,文库滴度为2.6×109cfu/mL。对随机选取的34个克隆进行PCR鉴定,结果表明插入片段长度均大于0.5 kb且集中在1 kb左右。文库质量鉴定结果表明,该文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。 展开更多
关键词 番木瓜 prsv CDNA文库 酵母双杂交系统
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禾生素、病毒必克和病毒A对番木瓜体内PRSV-CP基因表达的抑制作用 被引量:2
14
作者 张荣萍 李慧林 +1 位作者 陈萍 李和平 《热带农业工程》 2010年第6期43-47,共5页
为了解禾生素、病毒必克和病毒A对番木瓜植株体内PRSV基因表达的影响,以组织培养的日升番木瓜为研究对象,以β-actin基因为内参基因,应用RT-PCR技术对番木瓜体内的PRSV-CP基因进行半定量分析,建立一个特异、稳定的RT-PCR半定量检测体系... 为了解禾生素、病毒必克和病毒A对番木瓜植株体内PRSV基因表达的影响,以组织培养的日升番木瓜为研究对象,以β-actin基因为内参基因,应用RT-PCR技术对番木瓜体内的PRSV-CP基因进行半定量分析,建立一个特异、稳定的RT-PCR半定量检测体系,研究了禾生素、病毒必克和病毒A处理对番木瓜体内PRSV基因表达量的影响。初步说明,0.2%的禾生素及4.0g/L和1.0g/L的病毒必克显著抑制了番木瓜体内PRSV-CP基因的表达,而病毒A及其它浓度的禾生素和病毒必克对番木瓜体内的PRSV-CP基因的增殖没有抑制作用。 展开更多
关键词 番木瓜 prsv-CP基因 禾生素 病毒必克 病毒A RT-PCR
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MicroRNA用于创制抗PRSV番木瓜新种质的展望
15
作者 黄启星 张雨良 +4 位作者 赵辉 孔华 曾会才 Yun J.Zhu 郭安平 《热带农业科学》 2012年第11期40-46,共7页
微小RNA(microRNA,miRNA)是真核生物体内调控基因表达的一类非常重要的小分子RNA,在植物逆境适应过程中发挥着重要的作用。总结番木瓜环斑病毒(papaya ring spot virus,PRSV)致病机理研究的最新进展,探讨miRNA在植物抗病毒中的研究进展... 微小RNA(microRNA,miRNA)是真核生物体内调控基因表达的一类非常重要的小分子RNA,在植物逆境适应过程中发挥着重要的作用。总结番木瓜环斑病毒(papaya ring spot virus,PRSV)致病机理研究的最新进展,探讨miRNA在植物抗病毒中的研究进展和应用前景,提出研究番木瓜miRNA参与抗PRSV机制的途径,为开展番木瓜miRNA研究和创制抗PRSV番木瓜新种质提供理论参考。 展开更多
关键词 MICRORNA prsv 番木瓜
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西葫芦PRSV-W病毒病抗病种质鉴定及抗性遗传分析 被引量:4
16
作者 王凯玥 张沙沙 +5 位作者 张国裕 田佳星 张帆 李海真 王建书 耿丽华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期298-305,共8页
番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-W)是危害西葫芦生产的主要病害之一,为减少产量损失,加快西葫芦抗病品种的选育,本研究拟通过人工苗期子叶摩擦接种,结合酶联免疫吸附测定法(ELISA)及反转录PCR(RT-PCR)检测分析,建立西葫芦PRSV-W抗性鉴定技... 番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-W)是危害西葫芦生产的主要病害之一,为减少产量损失,加快西葫芦抗病品种的选育,本研究拟通过人工苗期子叶摩擦接种,结合酶联免疫吸附测定法(ELISA)及反转录PCR(RT-PCR)检测分析,建立西葫芦PRSV-W抗性鉴定技术,并对148份西葫芦品种及高代自交系育种材料进行抗性评价,同时利用抗、感自交系构建六世代群体,探究西葫芦PRSV-W抗性遗传规律。结果表明,播种2周后最适宜对子叶进行病毒摩擦接种。接种病毒15~25 d后西葫芦抗、感特性表现充分,易于鉴别,从高抗到高感可分为0~4级。148份西葫芦种质材料中,22份种质材料表现为高度抗病,11份种质材料表现为抗病,总抗病种质材料占比22.3%;12份种质材料表现为感病,103份种质材料表现为高度感病,总感病种质材料占比77.7%。此外,在叶片组织的病毒检测中,RT-PCR技术比ELISA更为灵敏准确;在西葫芦高抗自交系BV21中,PRSV-W抗性受1对显性抗病基因控制。本研究结果为西葫芦PRSV-W抗病育种提供了种质材料及技术支持。 展开更多
关键词 西葫芦 番木瓜环斑病毒西瓜株系(prsv-W) 抗病 种质鉴定 遗传分析
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基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证 被引量:5
17
作者 黄静 贾瑞宗 +3 位作者 孔华 郭静远 王绪朋 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期513-520,共8页
根据RNAi原理构建的抗海南番木瓜环斑病毒(PRSV)植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通过基因枪法将载体导入番木瓜的愈伤组织中,经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株。描述转化植株的分子特征同时进行抗病毒试验分析其抗病性。... 根据RNAi原理构建的抗海南番木瓜环斑病毒(PRSV)植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通过基因枪法将载体导入番木瓜的愈伤组织中,经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株。描述转化植株的分子特征同时进行抗病毒试验分析其抗病性。实验结果显示:转基因株系474为单拷贝插入的杂合子,插入位点在第7号染色体supercontig_61的717 141位置;抗病毒试验中,在接种病毒后28 d内非转基因株系1280有高浓度的病毒积累并很快表现出明显的病症,而转基因株系474基本无病毒积累且无发病症状。表明转基因株系474具有较好的PRSV抗性,有待于进一步田间试验。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 番木瓜 RNAI
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番木瓜的PRSV接种及其组培苗的RT-PCR检测 被引量:1
18
作者 孙玉娟 张雨良 +3 位作者 黄启星 王红星 龚殿 刘志昕 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期132-134,5,共3页
随着番木瓜环斑病毒病的加重,对番木瓜进行PRSV病毒接种,是有效防治PRSV和番木瓜抗PRSV重要措施之一。根据GenBank上已有的PRSV-CP基因序列,设计1对特异引物PRSVCP3/PRSVCP4,同时根据EF183499、HQ424465和美国夏威夷PRSV-CP序列设计保... 随着番木瓜环斑病毒病的加重,对番木瓜进行PRSV病毒接种,是有效防治PRSV和番木瓜抗PRSV重要措施之一。根据GenBank上已有的PRSV-CP基因序列,设计1对特异引物PRSVCP3/PRSVCP4,同时根据EF183499、HQ424465和美国夏威夷PRSV-CP序列设计保守区特异性引物PRSVCP1/PRSVCP2,并对接种后的番木瓜组培苗进行RT-PCR检测。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 接种 RT—PCR
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转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价 被引量:7
19
作者 阮小蕾 侯燕 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期381-386,共6页
应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白... 应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白不是已知的致敏源。将复制酶基因进行原核表达,并纯化复性表达蛋白,再通过模拟胃肠液消化试验,结果发现纯化的变性蛋白与复性蛋白均能在15 s内降解,表明复制酶蛋白能在人的消化系统内降解,使人体发生过敏的可能性不大。通过液相萃取法,提取转基因与非转基因番木瓜中的一种内源毒物苄基异硫氰酯(benzyl isothiocyanate,BITC),将浓缩后的样品进行气相色谱分析,结果表明BITC的含量在转基因与非转基因番木瓜中差异不显著。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 食品安全
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VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性 被引量:5
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作者 阮小蕾 王加峰 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期418-422,共5页
将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完... 将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析。结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生。这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系。这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 病毒诱导的基因沉默 抗病机制
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