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人DOC-2氨基端PID结构域的克隆与原核表达 被引量:4
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作者 刘淑娟 郑维国 +3 位作者 纪宗玲 陈苏民 张新海 杨力军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-141,144,共3页
目的 :克隆人DOC 2氨基端PID结构域 (暂命名为nDOC 2 ) ,并在原核细胞中表达。方法 :用RT PCR从正常人卵巢组织中扩增nDOC 2基因 ,并克隆到载体 pUC 19中。经测序证实后 ,用BamHI/EcoRI双酶切 ,亚克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1,并转化E ... 目的 :克隆人DOC 2氨基端PID结构域 (暂命名为nDOC 2 ) ,并在原核细胞中表达。方法 :用RT PCR从正常人卵巢组织中扩增nDOC 2基因 ,并克隆到载体 pUC 19中。经测序证实后 ,用BamHI/EcoRI双酶切 ,亚克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1,并转化E .coliDH5α菌株。取工程菌 ,用IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE鉴定。结果 :①经RT PCR、测序和酶切鉴定 ,成功地克隆了人nDOC 2基因。②经IPTG诱导的重组质粒pGEX 4T nDOC 2表达出相对分子质量 (Mr)约为 5 0 0 0 0的融合蛋白 ,与预期的结果相符。结论 :成功克隆到人DOC 2氨基端PID结构域 ,并在E .coliDH5α中表达出GST nDOC 展开更多
关键词 DOC-2 肿瘤抑制基因 PID结构域 基因克隆 原核表达
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宣和猪PID1基因外显子3的SNP检测及其与肉质性状的关联分析 被引量:6
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作者 刘梅 朱怡轩 +4 位作者 王孝义 陈强 董新星 严达伟 李明丽 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第7期1707-1714,共8页
【目的】探讨PID1基因多态性对宣和猪肉质性状的影响。【方法】以119头宣和猪为本试验的试验材料,对PID1基因外显子3采取PCR产物直接测序的方法对其进行SNP位点检测,选择最小二乘模型对各突变位点基因型及单倍型组合进行肉质性状方面的... 【目的】探讨PID1基因多态性对宣和猪肉质性状的影响。【方法】以119头宣和猪为本试验的试验材料,对PID1基因外显子3采取PCR产物直接测序的方法对其进行SNP位点检测,选择最小二乘模型对各突变位点基因型及单倍型组合进行肉质性状方面的差异分析。【结果】在宣和猪PID1基因外显子3区域共检测出4个SNP位点,分别为253 643 bp处的T→C(T253643C)、253 675 bp处的G→C(G253675C)、253 734 bp处的A→G(A253734G)和253 827 bp处的G→A(G253827A)。4个SNP位点均检测出3种基因型,分别以等位基因T、G、G、A及基因型TT、GC、AG、AA的频率最高。4个SNP位点共有9种单倍型和24种单倍型组合,其中单倍型CGGA和单倍型组合CGGA/TCAA的频率最高。各位点杂合度在0.4490~0.4997,都属于中度多态且都处于Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),遗传多样性比较丰富。G253675C位点与大理石纹评分存在显著关联,其中GC基因型可显著提高大理石纹评分(P<0.05),并且该基因型失水率、熟肉率以及滴水损失均表现最佳;A253734G位点与失水率和IMF含量存在显著关联,其中AG基因型可显著降低失水率(P<0.05),GG基因型可显著提高IMF含量(P<0.05);G253827A位点与失水率存在显著关联,其中GG基因型可显著降低失水率(P<0.05),并且该基因型大理石纹和熟肉率均表现最佳;单倍型组合中,TCAA/TCAA组合的失水率最高,大理石纹评分、熟肉率和IMF含量最低;CGGA单倍型具有提高大理石纹评分、熟肉率和IMF,降低失水率的效应。【结论】研究结果进一步丰富了PID1基因的SNP标记,初步证实了PID1基因对宣和猪的肉质性状有一定影响,可为实际生产中利用PID1基因标记改良宣和猪肉质性状提供了科学依据。 展开更多
关键词 宣和猪 磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)基因 单核苷酸多态性 肉质性状 关联分析
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DOC-2作用蛋白的筛选及与TGFβⅢ受体相互作用的初步验证
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作者 刘淑娟 韩军涛 +1 位作者 王涛 任睿 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2007年第12期909-913,共5页
背景与目的:人卵巢癌差异表达基因DOC-2既是肿瘤抑制基因也是信号分子,参与细胞的生长分化过程。筛选DOC-2氨基端磷酸酪氨酸作用结构域PID(nDOC-2)的相互作用蛋白并进行初步验证,为研究DOC-2的信号通路提供线索。方法:将含有人DOC-2氨基... 背景与目的:人卵巢癌差异表达基因DOC-2既是肿瘤抑制基因也是信号分子,参与细胞的生长分化过程。筛选DOC-2氨基端磷酸酪氨酸作用结构域PID(nDOC-2)的相互作用蛋白并进行初步验证,为研究DOC-2的信号通路提供线索。方法:将含有人DOC-2氨基端PID结构域cDNA的片断插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母菌AH109并在其内表达,然后转化人胎脑cDNA文库,在营养缺陷培养基和X-α-半乳糖苷酶(X-α-gal)上进行阳性克隆的双重筛选,PCR扩增目的片段,测序,并进行生物学分析,寻找DOC-2氨基端PID结构域的相互作用蛋白。将DOC-2cDNA和TGFβⅢ受体cDNA共转染人卵巢癌细胞系HO-8910,利用免疫沉淀和Western Blot,对TGFβⅢ型受体是否能与DOC-2相互作用进行初步分析。结果:经扩增和筛选胎脑cDNA文库及序列分析,21个侯选阳性克隆中3个克隆为:APLP1、TGFβⅢ型受体的部分mRNA和PCDHGC3(protocadherin gammasubfamily C3)。免疫沉淀及Western blot结果显示,DOC-2与TGFβⅢ型受体相互作用后可形成蛋白复合物。结论:获得的3个基因编码的蛋白可能参与了DOC-2的信号转导,DOC-2与TGFβⅢ型受体可能存在互相作用,并通过TGFβⅢ型受体在TGFβ的信号通路中起作用。 展开更多
关键词 人DOC-2基因 PID结构域 TGFβ信号通路
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