多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162 被引量：1

1

作者 王凤军 许海锋 +2 位作者 陈强 杨伊平 金浩然 《保鲜与加工》 CAS 2023年第3期56-61,共6页

为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PC... 为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162。结果表明,转基因玉米MIR162品系标准品和平行样品中内标基因和品系特异性基因均出现明显扩增曲线,其他转基因玉米品系标准品仅内标基因有扩增曲线,空白对照无扩增曲线,说明该TaqMan-MGB探针对转基因玉米MIR162品系具有扩增特异性。该方法可作为鉴定筛查转基因玉米MIR162品系及其转化体成分的有效方法,用于规范管理转基因产品在市场上的流通。 展开更多

关键词 转基因玉米MIR162 多重实时荧光pcr TaqMan-MGB杂交探针标记法 快速鉴定

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应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立 被引量：4

2

作者 黄以宁 廖灿 +3 位作者 汤雪薇 李焱 谢杏梅 曾瑞萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期148-152,共5页

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快... HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取 6 3份已知HLA DRB型的脐血标本 ,经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交 (RDB)基因分型 ,同时采用SSOP和PCR SSP方法进行比较。结果表明 ,所有样本用RDB方法基因分型均获得成功 ,可准确地分辨 6 0个HLA DRB等位基因 ,且结果与用SSOP和PCR SSP方法的结果完全一致。结论提示 ,RDB方法可准确地分辨HLA DRB等位基因 ,分辨率高 ,操作简单 。 展开更多

关键词 反向斑点杂交技术 HLA-DRB基因分型 脐血 特异性序列引物pcr 序列特异性寡核苷酸探针 白细胞抗原

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反向斑点杂交法快速检测肺炎支原体 被引量：4

3

作者 樊慧珍 于化鹏 黄文杰 《实用医学杂志》 CAS 2005年第21期2349-2351,共3页

目的:探讨早期、快速检测肺炎支原体的方法。方法:根据肺炎支原体特异的P1基因设计引物,通过聚合酶链反应合成一段特异的162bp长链DNA探针,采用反向斑点杂交法检测生物素标记支原体DNA,并应用于痰标本的检测。结果:所合成的162bpDNA探... 目的:探讨早期、快速检测肺炎支原体的方法。方法:根据肺炎支原体特异的P1基因设计引物,通过聚合酶链反应合成一段特异的162bp长链DNA探针,采用反向斑点杂交法检测生物素标记支原体DNA,并应用于痰标本的检测。结果:所合成的162bpDNA探针具有高度特异性,只和肺炎支原体杂交,与其它细菌、真菌、病毒无交叉反应,该探针最低可检测出1ng的DNA。杂交法和培养法分别检测100份痰标本,两者的阳性率分别为12%和2%。结论:该方法快速、特异,对肺炎支原体的早期诊断具有较高的应用价值。 展开更多

关键词 肺炎 支原体 DNA探针 杂交 反向斑点杂交法 肺炎支原体 快速检测 聚合酶链反应 早期诊断 生物素标记

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反向点杂交法检测中国人N-乙酰化酶基因型 被引量：5

4

作者 陈冰 李金恒 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1269-1272,共4页

目的　建立快速方便的反向点杂交法 (RDB)检测中国人N 乙酰化酶 (NAT2 )基因型。方法　采用PCR法扩增生物素标记的DNA片段 ,与固定在尼龙膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行杂交 ,通过非同位素法显色检测杂交结果 ,分析NAT2 5种主要... 目的　建立快速方便的反向点杂交法 (RDB)检测中国人N 乙酰化酶 (NAT2 )基因型。方法　采用PCR法扩增生物素标记的DNA片段 ,与固定在尼龙膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行杂交 ,通过非同位素法显色检测杂交结果 ,分析NAT2 5种主要突变位点。用本法对 4 8名肺结核患者NAT2基因型进行了分析。结果　RDB法与等位基因特异扩增法结果完全一致。 4 8名肺结核患者NAT2 5、 6、 73种突变型等位基因的基因频率分别为 1 0 4 %、2 2 9%和 15 6 %。野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为 33 3%、5 4 2 %和 12 5 %。结论　RDB法检测NAT2基因型准确、方便 ,适用于指导临床合理用药。 展开更多

关键词 N-乙酰化酶(NAT2) 多态性 反向点杂交法(RDB) 等位基因特异性寡核苷酸探针(ASO) 基因分型

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PCR结合反相膜杂交在淋病诊断中的应用

5

作者 鲁卫平 安琳 吴丽娟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期613-614,共2页

目的　探讨PCR结合反相膜杂交用于临床诊断淋病的可行性。方法　以培养法为金标准 ,对PCR电泳法和PCR反相膜杂交法进行了比较研究。结果　PCR反相膜杂交特异性高 ,灵敏度是PCR电泳法的 40倍。结论　PCR反相膜杂交技术不仅可以提高PCR特... 目的　探讨PCR结合反相膜杂交用于临床诊断淋病的可行性。方法　以培养法为金标准 ,对PCR电泳法和PCR反相膜杂交法进行了比较研究。结果　PCR反相膜杂交特异性高 ,灵敏度是PCR电泳法的 40倍。结论　PCR反相膜杂交技术不仅可以提高PCR特异性、敏感性 ,且操作简单 ,无污染 。 展开更多

关键词 淋病 诊断 pcr 反相膜杂交 DNA探针

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不同原理的PCR方法用于地中海贫血产前诊断的验证应用 被引量：9

6

作者 肖奇志 王格 +3 位作者 李恋湘 李磊 谢建红 周玉球 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期994-996,共3页

目的:评估两种不同技术原理的PCR方法用于地中海贫血(下称"地贫")产前诊断的必要性和可行性。方法 :采用双盲法,对509份产前诊断标本分别采用单管多重PCR法(single-tube multiplex PCR,STMP)+反向点杂交法(reverse dot blot,R... 目的:评估两种不同技术原理的PCR方法用于地中海贫血(下称"地贫")产前诊断的必要性和可行性。方法 :采用双盲法,对509份产前诊断标本分别采用单管多重PCR法(single-tube multiplex PCR,STMP)+反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)、探针熔解曲线法(probe melting curve assay,PMCA)检测常见α-地贫和β-地贫基因突变。两种方法所得结果不一致或少见类型地贫突变时,采用DNA测序分析法确诊。所有产前诊断结果均进行验证或随访。结果 :经STMP+RDB、PMCA检测突变谱不同,α-地贫和β-地贫各有1例结果不同。另STMP+RDB检测灵敏度高于PMCA,其差异性在标本受母血污染时有提示作用。结论:两种不同技术原理的PCR方法进行地贫产前诊断,是必要和可行的,两者具有互补性,可确保结果的可靠性和减少单一技术的缺陷。 展开更多

关键词 地中海贫血 多重pcr 反向点杂交 探针熔解曲线 产前诊断

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五种方法检测临床标本中结核分支杆菌的比较分析 被引量：5

7

作者 康润田 胡德华 +2 位作者 黄克峻 唐振良 朱庆义 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期60-60,共1页

关键词 结核分支杆菌 结核病 pcr pcr反向探针膜杂交法 病原体 抗酸染色 细菌培养 荧光染色

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转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化 被引量：7

8

作者 崔学强 张树珍 +1 位作者 沈林波 冯翠莲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期105-109,共5页

对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行... 对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明,改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求;PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高,更适合用于Southern杂交;40μg的DNA在400μL酶切体系中,酶切10 h可获得良好的酶切效果;杂交温度40℃,杂交18 h,可获得清晰的杂交条带。 展开更多

关键词 甘蔗 SOUTHERN杂交 地高辛 pcr法标记探针 酶切

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分子生物学方法在瘤胃微生物研究中的应用 被引量：4

9

作者 王海荣 侯先志 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期92-97,117,共7页

文章综述了以16S rRNA序列分析技术为主的分子生物学技术在反刍动物瘤胃微生态研究中的应用现状,主要包括:序列分析技术、DGGE指纹技术、寡核苷酸探针杂交分析法以及定量PCR等分子生物学方法和技术。今后的发展趋势是加强这些方法间及... 文章综述了以16S rRNA序列分析技术为主的分子生物学技术在反刍动物瘤胃微生态研究中的应用现状,主要包括:序列分析技术、DGGE指纹技术、寡核苷酸探针杂交分析法以及定量PCR等分子生物学方法和技术。今后的发展趋势是加强这些方法间及其与传统方法的有机结合,并发展新的方法,促进瘤胃微生态研究的深入开展。 展开更多

关键词 瘤胃微生物 序列分析技术 探针杂交法 DGGE 定量pcr

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人地中海贫血β654基因作为外源基因用于转基因的制备方法 被引量：1

10

作者 韦相才 卢丽 +3 位作者 黄冰 韩俊英 洪迅 陈系古 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第2期119-123,共5页

目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础。方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连... 目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础。方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连接酶反应将其克隆入含βLCR调控序列的基础载体pBGT51质粒中,经PCR扩增、酶切、反向点杂交及DNA测序鉴定重组质粒,用EcoRⅤ酶切获得转基因所用的外源基因。结果将人地中海贫血β654基因作为外源基因克隆入基础载体pBGT51质粒中构建了重组质粒βBGT51,用EcoRV酶切获得含人β654基因及βLCR调控序列的6.5kb的DNA片段,制备了可用于显微注射转基因的外源基因。结论采用该方法构建的含人地中海贫血β654基因的重组质粒,可获得用于显微注射转基因的外源基因。 展开更多

关键词 地中海贫血 外源基因 制备方法 转基因小鼠 重组质粒 调控序列 显微注射 pcr扩增 DNA测序 DNA片段 pcr法 分离纯化 基因克隆 LCR 基础 纯合子 杂交法 酶反应 酶切 点杂交 制作 反向 载体 构建

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原位杂交技术展望 被引量：2

11

作者 胡守萍 尹训南 +1 位作者 付德霞 李伟杰 《畜牧兽医科技信息》 2005年第12期14-15,共2页

关键词 原位杂交技术 爪蟾核糖体基因 卵母细胞 细胞定位 探针标记法 免疫pcr技术

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基于地高辛标记对小麦进行Southern杂交分析主要影响因素的优化和验证 被引量：7

12

作者 刘禄 牛焱焱 +4 位作者 雷昊 林志珊 赵翔宇 叶兴国 张宪省 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期182-188,共7页

以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的... 以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的模板和标记后的探针进行纯化可明显提高探针的标记效率,10μg高质量的DNA样品在80μl的体系中,酶切8～12h可获得良好的效果;真空转膜时使用碱性液比中性液获得的转膜效果更干净;试剂纯度、杂交温度及杂交炉转速等均对杂交效果产生重要影响;配合改进的CSPD涂布方法,使用化学发光检测系统比单纯使用X光片显像更易操作,背景更干净;本研究所优化的地高辛标记的小麦Southern杂交分析显示出较高的灵敏度和信噪比,结果稳定,可克服同位素标记对实验条件、设备及实验人员身体状况等限制,在普通实验室推广应用。 展开更多

关键词 小麦 地高辛标记 随机引物 pcr法标记探针 免疫检测 SOUTHERN杂交

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桂西地区869例慢性乙型肝炎病毒基因分型与耐药突变分析 被引量：7

13

作者 许桂丹 肖树荣 +3 位作者 王春芳 韦武均 彭彬 邓益斌 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第11期1163-1166,共4页

目的乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药突变情况与疾病进展和药物疗效密切相关,有效开展其测定具有重要意义。文中旨在检测桂西地区869例HBV的基因型及耐药突变基因,为临床抗HBV治疗提供依据。方法收集2016年1月至2018年3月右江民族医学院... 目的乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药突变情况与疾病进展和药物疗效密切相关,有效开展其测定具有重要意义。文中旨在检测桂西地区869例HBV的基因型及耐药突变基因,为临床抗HBV治疗提供依据。方法收集2016年1月至2018年3月右江民族医学院附属医院感染性疾病科门诊及住院的来自桂西地区且HBV DNA>1.0×103IU/mL的869例慢性乙型肝炎病毒携带(CHB)患者。采用PCR和反向点杂交法技术检测其HBV基因分型与耐药突变情况。结果共检出7种基因分型,分别为B基因型304例(34.98%),C基因型268例(30.84%),D基因型147例(16.92%)及B+C基因型、B+D基因型、C+D基因型、B+C+D基因型。63例患者发生耐药突变,耐药突变率为7.25%,其中C基因型31例(49.21%),B基因型19例(30.16%);突变模式有rt204I、rt181V、rt236T、rt180M+rt204V+rt204I等14种,其中rt180M+rt204V突变频率最高(17.46%)。B、C基因型的总体突变率(19%、31%)差异有统计学意义(P<0.05)。结论桂西地区CHB患者HBV基因型多样,主要以B、C基因型为主,且耐药突变率较高,突变模式复杂,这一结果为桂西地区临床抗HBV治疗提供了依据。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 pcr反向点杂交法 基因型 耐药突变

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基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA 被引量：5

14

作者 曹新民 赵伟 +4 位作者 刘伟 刘全俊 张林 周镇先 刘新珏 《中国全科医学》 CAS CSCD 2005年第8期633-635,共3页

目的研究病毒性肝炎基因芯片的制备,用肝炎基因诊断芯片,免疫组织化学法和原位分子杂交法,检测99例乙型肝炎后肝硬化肝组织,比较各种方法的优缺点。方法将PCR扩增的HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上,并经过点样处理后制备成基因芯片;... 目的研究病毒性肝炎基因芯片的制备,用肝炎基因诊断芯片,免疫组织化学法和原位分子杂交法,检测99例乙型肝炎后肝硬化肝组织,比较各种方法的优缺点。方法将PCR扩增的HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上,并经过点样处理后制备成基因芯片;收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBVDNA和HBcAg。结果53例HBcAg、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例;22例HBcAg阳性组织中基因芯片检测阳性6例;32例HBcAg、HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBVDNA,准确率可达75%,假阳性率低。 展开更多

关键词 基因芯片检测 肝硬化患者 肝炎基因诊断芯片 原位分子杂交法 免疫组织化学法 HBCAG HBVDNA阳性 肝炎后肝硬化 病毒性肝炎 硬化肝组织 DNA探针 pcr扩增 肝组织标本 假阳性率 优缺点 准确率 制备 点样 阴性

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