T3SS通过ERK/ROS信号通路促进铜绿假单胞菌侵袭肺上皮细胞的作用 被引量：1

1

作者 熊浚智 余华 +3 位作者 王兴敏 何晓梅 代黔 邱静 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第22期2493-2504,共12页

目的探究Ⅲ型分泌型系统(type three secretion system,T3SS)在调控铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)侵袭肺上皮细胞中的作用及具体机制。方法采用PA菌株感染人非小细胞肺癌A549细胞,分为未处理组、PAO1(PA实验室标准菌株)组、... 目的探究Ⅲ型分泌型系统(type three secretion system,T3SS)在调控铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)侵袭肺上皮细胞中的作用及具体机制。方法采用PA菌株感染人非小细胞肺癌A549细胞,分为未处理组、PAO1(PA实验室标准菌株)组、△exsA(缺失与T3SS转录激活相关的基因exsA)组、△pscJ(缺失与T3SS蛋白分泌相关基因pscJ)组和PAO1-E(经EGTA诱导后高表达T3SS基因)感染组。采用U0126抑制A549细胞ERK活性或通过apocynin(APO)/N-acetyl-L-cysteine(NAC)抑制A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生并随后感染PAO1或PAO1-E菌株,分为未处理组、PAO1或PAO1-E感染组、抑制剂处理组,以及抑制剂联合PAO1或PAO1-E感染组。选用庆大霉素杀伤胞外细菌并将细胞裂解液倍比稀释后涂布PA筛选平板,通过计数菌落形成单位(CFUs),明确PA感染后细胞内的细菌量;通过荧光探针标记以及流式细胞术检测感染后细胞内ROS水平;通过Western blot检测感染后ERK通路的活化情况。结果与PAO1感染组相比,△exsA和△pscJ感染组的细胞内细菌量减少(P<0.05,P<0.01),且伴随ROS产生减少(P<0.01),而PAO1-E感染组则呈现相反趋势(P<0.01)。PAO1或PAO1-E感染联合APO/NAC处理组的细胞内细菌量明显低于PAO1或PAO1-E感染组(P<0.01)。相较PAO1感染组,△exsA和△pscJ感染组的ERK磷酸化水平增加(P<0.01),而PAO1-E感染组的ERK磷酸化降低(P<0.01)。与PAO1感染组相比,PAO1联合U0126处理组的细胞ERK磷酸化水平降低,伴随ROS产生以及细胞内细菌量增加(P<0.01)。结论T3SS介导ERK通路抑制可通过促进肺上皮细胞ROS产生,增加PA对肺上皮细胞侵袭。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 Ⅲ型分泌型系统 ERK/ROS信号通路 pa对肺上皮细胞的侵袭

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miR-142-5p通过影响上皮间质转化抑制肺腺癌H1650细胞的侵袭与迁移 被引量：7

2

作者 王淼 王郁 +3 位作者 吕微 段玉青 贾云泷 刘丽华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期142-148,共7页

目的:探讨肺腺癌组织中miR-142-5p的表达及其对H1650细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化(epithelieal-mesenchymal transition,EMT)的影响及其作用机制。方法:收集2014年1月至2015年1月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切除并经病... 目的:探讨肺腺癌组织中miR-142-5p的表达及其对H1650细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化(epithelieal-mesenchymal transition,EMT)的影响及其作用机制。方法:收集2014年1月至2015年1月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切除并经病理证实的107例肺腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,以及人肺腺癌细胞系H1650、HCC827、A549、H1975、PC9和人支气管上皮细胞BEAS-2B,用qPCR实验检测肺腺癌组织及细胞中miR-142-5p的表达水平及其与患者临床特征的关系。分别用miR-142-5p模拟物(mimics)、miR-阴性对照质粒(miR-NC)转染H1650细胞后,用CCK8、细胞划痕愈合和Transwell侵袭实验分别检测H1650细胞的增殖、侵袭和迁移能力。使用生物信息学工具预测miR-142-5p的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p对靶基因的调控作用,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及EMT相关蛋白的表达水平。结果:肺腺癌组织及细胞系中miR-142-5p表达水平显著低于癌旁组织及BEAS-2B细胞(均P<0.01);107例肺腺癌组织中,61例(57.01%)低表达miR-142-5p,其表达水平与患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关(均P<0.01)。转染miR-142-5p模拟物后,H1650细胞中miR-142-5p高表达,细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低(均P<0.05或P<0.01)。生物信息学工具预测CDK5是miR-142-5p的靶基因,经双荧光素酶报告基因验证,miR-142-5p可显著降低H1650细胞中CDK5的表达水平,显著提高E-cadherin表达,降低N-cadherin和Snail的表达水平(均P<0.01)。结论:miR-142-5p在肺腺癌组织和细胞中呈低表达状态,其通过下调CDK5表达影响EMT抑制H1650细胞的侵袭与迁移能力。 展开更多

关键词 肺腺癌 H1650细胞 miR-142-5p 细胞周期蛋白依赖性激酶5 增殖 侵袭 迁移 上皮间质转化

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缝隙连接蛋白β2对肺腺癌患者预后及肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

3

作者 王繁 温馨 +1 位作者 王艺璇 王远 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期716-726,共11页

目的:探讨缝隙连接蛋白β2 (GJB2)在肺腺癌(LUAD) A549细胞中的表达情况和生物学功能,为LUAD治疗提供参考。方法:利用TIMER数据库分析多种肿瘤中GJB2基因表达差异,GEPIA数据库检测LUAD中GJB2 mRNA表达情况,分析GJB2基因与LUAD不同临床... 目的:探讨缝隙连接蛋白β2 (GJB2)在肺腺癌(LUAD) A549细胞中的表达情况和生物学功能,为LUAD治疗提供参考。方法:利用TIMER数据库分析多种肿瘤中GJB2基因表达差异,GEPIA数据库检测LUAD中GJB2 mRNA表达情况,分析GJB2基因与LUAD不同临床分期的相关性,采用Kaplan-Meier plotter数据库分析GJB2蛋白与LUAD患者预后的相关性。收集111例LUAD患者癌组织及癌旁正常肺组织样本,采用免疫组织化学染色法观察LUAD患者癌组织和癌旁正常肺组织中GJB2蛋白表达情况。体外培养人肺腺癌A549细胞,将A549细胞分为GJB2过表达组(OE-GJB2组,转染GJB2过表达质粒)及其阴性对照组(OE-NC组,转染GJB2空载质粒)、小干扰RNA (si-RNA)-GJB2组(si-GJB2组,转染GJB2-siRNA)及其阴性对照组(si-NC组,转染对照si-RNA),采用Western blotting法验证细胞转染效率。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各组A549细胞增殖活性,5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组A549细胞阳性表达率,克隆形成实验检测各组A549细胞克隆形成数,细胞划痕实验检测各组A549细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组A549细胞中侵袭细胞数,Western blotting法检测各组A549细胞中GJB2蛋白和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果:GJB2基因在多种肿瘤中均存在异常表达;与癌旁正常肺组织比较,LUAD患者癌组织中GJB2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),且GJB2的高表达与LUAD患者癌的临床病理分期具有关联性(P<0.05);与GJB2低表达LUAD患者比较,GJB2高表达LUAD患者的总生存期明显减少[风险比(HR)=1.71,95%CI:1.34~2.18,P<0.05];GJB2蛋白在癌旁正常肺泡和支气管上皮细胞中均阴性表达,与癌旁正常肺组织比较,LUAD患者癌组织中GJB2蛋白表达明显增强;LUAD患者癌组织中GJB2蛋白阳性表达与淋巴结转移具有明显关联性(P<0.05),但与患者性别(P=0.626)、年龄(P=0.639)和TNM分期(P=0.837)无关联性(P>0.05)。CCK-8法,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞增殖活性明显升高(P<0.05或P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01)。EdU染色法,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞中EdU阳性表达率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞中EdU阳性表达率明显降低(P<0.01)。克隆形成实验,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞克隆形成数明显增加(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞克隆形成数明显减少(P<0.01)。Transwell小室实验,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞侵袭细胞数明显增加(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。细胞划痕实验,细胞划痕24 h后,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞迁移率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-GJB2组A549细胞迁移率明显降低(P<0.01)。Western blotting法,与OE-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞中GJB2和N钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),E钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与si-NC组比较,OE-GJB2组A549细胞中GJB2和N-cadherin蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:GJB2在LUAD患者癌组织中高表达,并与LUAD患者的不良预后有关。GJB2可促进A549细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT。 展开更多

关键词 缝隙连接蛋白β2 肺腺癌 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移 上皮-间质转化

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上皮间充质转化对肺鳞状细胞癌侵袭和迁移能力的影响 被引量：3

4

作者 郑燕君 孙保存 +6 位作者 赵秀兰 郑旭 李岩磊 邱志强 古强 董学易 张艳辉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期265-270,共6页

目的:研究肺鳞状细胞癌(lung squamous cell carcinoma,LSCC)上皮间充质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的临床意义,并阐述EMT对肺鳞癌侵袭转移能力的影响。方法:对79例肺鳞癌组织切片进行E-cadherin、Vimentin及TGF-β... 目的:研究肺鳞状细胞癌(lung squamous cell carcinoma,LSCC)上皮间充质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的临床意义,并阐述EMT对肺鳞癌侵袭转移能力的影响。方法:对79例肺鳞癌组织切片进行E-cadherin、Vimentin及TGF-β1的免疫组织化学染色,分析其临床意义。将肺鳞癌细胞系SK-MES-1置于含有不同浓度转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)的培养基中,分别诱导培养5、10 d后,利用Western blot、RT-PCR检测E-cadherin、Vimentin的表达变化,以划痕、侵袭实验来判断不同浓度、诱导时间对SK-MES-1细胞功能的影响。结果:肺鳞癌发生淋巴转移病例中E-cadherin表达较未发生淋巴转移者低,而Vimentin表达则高于未发生淋巴转移的病例,差异具有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1阳性表达与淋巴结转移相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot和RT-PCR显示10 ng/m L TGF-β1诱导培养的SK-MES-1细胞中,Vimentin表达增强明显,E-cadherin表达减弱。细胞划痕和侵袭实验结果表明SK-MES-1经诱导后,迁移和体外侵袭能力增强。结论:肺鳞癌的淋巴转移与上皮间充质转化有关,TGF-β1可诱导肺鳞癌细胞发生EMT,增强其侵袭和迁移的能力。 展开更多

关键词 上皮间充质转化 肺鳞状细胞癌 TGF-Β1 侵袭 迁移

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沉默NGAL基因对肺癌细胞迁移及侵袭的影响 被引量：5

5

作者 唐健 李捷 +3 位作者 李少军 李璟波 于长海 尉承泽 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期187-192,共6页

背景与目的检测NGAL在肺癌组织的表达,观察小干扰RNA(si RNA)沉默NGAL基因表达对肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法应用免疫组织化学检测肺癌组织中NGAL表达。通过RNAi技术干扰NGAL后,运用定量PCR、Western blot技术,观察干扰NGAL基... 背景与目的检测NGAL在肺癌组织的表达,观察小干扰RNA(si RNA)沉默NGAL基因表达对肺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法应用免疫组织化学检测肺癌组织中NGAL表达。通过RNAi技术干扰NGAL后,运用定量PCR、Western blot技术,观察干扰NGAL基因效率。干扰NGAL后,MTT检测细胞增殖、Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力,细胞划痕愈合能力,免疫荧光及Western blot方法检测上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关的蛋白E-cadherin及Vimentin的表达情况。结果肺癌中NGAL阳性率高于癌旁组织(P<0.01)。NGAL-si RNA转染组,癌细胞中NGAL基因及蛋白水平表达都受到明显的抑制。NGAL-si RNA转染组细胞增殖能力,迁移及侵袭能力相对于对照组都降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。干扰NGAL,E-cadherin的表达升高,Vimentin的表达水平降低。干扰NGAL,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低。结论 NGAL在肺癌组织高表达,且在肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移及EMT过程中起着重要作用。NGAL可能是肺癌浸润和转移的一个重要参考指标,可为肺癌治疗提供潜在的靶点。 展开更多

关键词 肺肿瘤 NGAL基因 迁移 侵袭 上皮细胞-间质细胞转化

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阿帕替尼对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响 被引量：11

6

作者 李维娜 邓豫 《医药导报》 CAS 2017年第9期967-970,共4页

目的观察阿帕替尼对非小细胞肺癌细胞株A549及H460侵袭能力及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法通过细胞存活实验筛选阿帕替尼适宜剂量,通过Transwell检测其对细胞侵袭能力的影响,通过光学显微镜观察细胞的形态学变化,通过Western blottin... 目的观察阿帕替尼对非小细胞肺癌细胞株A549及H460侵袭能力及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法通过细胞存活实验筛选阿帕替尼适宜剂量,通过Transwell检测其对细胞侵袭能力的影响,通过光学显微镜观察细胞的形态学变化,通过Western blotting检测EMT相关蛋白的变化。结果在A549及H460细胞中加入不同浓度的阿帕替尼,当阿帕替尼的浓度≤120 nmol·L-1时,细胞的存活能力没有明显改变。在60及120 nmol·L-1阿帕替尼作用下,A549细胞侵袭能力降低,并发生间质-上皮转化的形态学变化,EMT相关的E-cadherin表达升高,Vimentin、N-cadherin及Snail的表达降低。结论阿帕替尼可诱导非小细胞肺癌细胞株A549及H460由间质表型向上皮表型转化,并抑制细胞的侵袭能力。 展开更多

关键词 阿帕替尼 癌 肺 非小细胞 侵袭 上皮-间质转化

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PEDF对肺鳞状细胞癌SK-MES-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响 被引量：1

7

作者 马建梅 陈承 李雪萍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期6-9,I0001,共5页

目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对肺鳞状细胞癌(鳞癌)SK-MES-1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,阐明PEDF与肺鳞癌发生发展的关系。方法:培养SK-MES-1细胞,设不加PEDF的细胞为阴性对照组,PEDF干预组细胞分别加入180、360和720nmol·L-1... 目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对肺鳞状细胞癌(鳞癌)SK-MES-1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,阐明PEDF与肺鳞癌发生发展的关系。方法:培养SK-MES-1细胞,设不加PEDF的细胞为阴性对照组,PEDF干预组细胞分别加入180、360和720nmol·L-1 PEDF;MTT法检测各组SK-MES-1细胞增殖抑制率,细胞侵袭实验测定阴性对照组和720nmol·L-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数,倒置显微镜观察各组SK-MES-1细胞形态学,流式细胞术检测各组SK-MES-1细胞凋亡率。结果:PEDF干预组细胞增殖抑制率均显著高于阴性对照组(P<0.01),不同剂量PEDF干预组间比较差异也有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组细胞贴壁生长良好,PEDF干预组细胞排列逐渐稀疏,形态改变明显。720nmol·L-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数(31.6±15.8)低于阴性对照组(75.4±19.3),差异有统计学意义(P<0.01)。随着PEDF干预剂量增加,细胞凋亡率逐渐升高,不同剂量PEDF干预组与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PEDF抑制SK-MES-1细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,对肺鳞癌生长和转移发挥对抗效应。提示PEDF可能成为肺鳞癌患者预后判定、抗癌治疗的有效因子。 展开更多

关键词 色素上皮衍生因子 肺肿瘤 SK-MES-1细胞 细胞增殖 侵袭 细胞凋亡

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小檗碱对肺炎链球菌侵袭A549细胞的保护作用 被引量：3

8

作者 王蓉 徐邦牢 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第16期2538-2539,共2页

目的:通过体外实验,研究小檗碱是否对肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)侵袭人肺Ⅱ型上皮细胞(A549)有保护性抑制作用。方法:用不同浓度的小檗碱预处理A549细胞,并与S.pn一起与A549细胞共同作用,通过用0.025%的Triton X-100裂... 目的:通过体外实验,研究小檗碱是否对肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)侵袭人肺Ⅱ型上皮细胞(A549)有保护性抑制作用。方法:用不同浓度的小檗碱预处理A549细胞,并与S.pn一起与A549细胞共同作用,通过用0.025%的Triton X-100裂解细胞,然后将稀释后的裂解液涂布TSAB平板,培养过夜,计数平板上的菌落数。结果:小檗碱的浓度为0,25,50,100,200μg/mL时,S.pn对24孔板上每孔A549细胞的侵袭数分别为52±21,29±11,13±10,0,0;在其浓度终浓度为100μg/mL时,未得到可测的细菌数。结论:小檗碱可抑制S.pn侵袭A549细胞,两者间存在剂量依赖关系。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 肺Ⅱ型上皮细胞(A549) 侵袭

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黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

9

作者 穆培娟 赵哲 张冬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期40-46,共7页

目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达... 目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果:MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达(均P<0.01),选取表达水平较高的A549细胞进行后续实验。敲低MUC13后,A549细胞的增殖能力显著降低,G0/G1期的细胞数量显著增多、G2/M期及S期的细胞数量显著减少,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01);A549细胞中E-cadherin表达显著上调,N-cadherin、vimentin表达显著下调,p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P<0.01);再加入IGF-1处理后,A549细胞中p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著升高(均P<0.01)。结论:MUC13在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达,其可能通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。 展开更多

关键词 黏蛋白13 肺腺癌 A549细胞 增殖 凋亡 迁移 侵袭 上皮间质转化 EGFR/PI3K/AKT信号通路

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LncRNA PKD2-2-3对肺腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响 被引量：2

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作者 贾利晴 葛小路 +1 位作者 姜琳 周晓燕 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期717-725,共9页

背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肺腺癌患者中异常表达,与肿瘤的发生、发展和化疗耐药密切相关。本研究旨在探讨lncRNA蛋白激酶D2(lncRNA PKD2-2-3)在肺腺癌发生、发展过程中发挥的生物学功能,验证lncRNA PKD2... 背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肺腺癌患者中异常表达,与肿瘤的发生、发展和化疗耐药密切相关。本研究旨在探讨lncRNA蛋白激酶D2(lncRNA PKD2-2-3)在肺腺癌发生、发展过程中发挥的生物学功能,验证lncRNA PKD2-2-3对肺腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。方法:基于Affymetrix人类基因芯片转录组阵列2(Affymetrix?GeneChip Human Transcriptome Array 2.0,HTA2.0)分析3对肺腺癌组织及癌旁组织,寻找在肺腺癌组织中高表达的lncRNA,其中lncRNA PKD2-2-3的表达差异最大。利用基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中GSE19188和GSE30219的数据分析lncRNA PKD2-2-3在肺腺癌组织中的表达和对患者预后的影响。通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lncRNA PKD2-2-3在细胞系(HBE、A549、PC9)中的表达情况。在A549和PC9两种细胞系中使用siRNA干扰技术敲低lncRNA PKD2-2-3的表达,通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验和克隆形成实验检测lncRNA PKD2-2-3表达对肺腺癌细胞增殖和克隆形成能力的影响;划痕实验和transwell实验分别检测lncRNA PKD2-2-3表达对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低lncRNA PKD2-2-3表达后对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平的影响。皮下移植瘤模型探究lncRNA PKD2-2-3在体内对肺腺癌细胞增殖的影响。结果:LncRNA PKD2-2-3在肺腺癌组织中呈高表达,且高表达的患者预后较差。对比正常气管上皮永生化细胞HBE,lncRNA PKD2-2-3在肺腺癌细胞系A549和PC9中高表达,敲低lncRNA PKD2-2-3的表达抑制肺腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。Western blot结果显示,敲低lnc RNA PKD2-2-3后,E-cadherin表达水平升高,N-cadherin表达水平降低。皮下移植瘤实验表明,在体内lncRNA PKD2-2-3敲低后抑制肺腺癌的生长。结论:lncRNA PKD2-2-3在肺腺癌组织中上调表达,且与患者的不良预后相关,lncRNA PKD2-2-3的高表达促进肺腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,体内外实验表明lncRNA PKD2-2-3的表达与肺腺癌的EMT过程密切相关。 展开更多

关键词 肺腺癌 lncRNA PKD2-2-3 细胞迁移 细胞侵袭 上皮间质转化

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康莱特注射液调控胆固醇代谢以抑制肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为 被引量：5

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作者 朱广辉 郑琦 +3 位作者 高瑞珂 许博文 徐曼曼 李杰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期973-980,共8页

目的:明确康莱特注射液(KLTi)通过调控胆固醇代谢对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的抑制作用。方法:构建A549细胞体外培养模型,设置空白对照组(CON组)、KLTi组、顺铂(DDP)组及KLTi+DDP组,分别给予对应药物干预,采用CCK-8法检测不同分组... 目的:明确康莱特注射液(KLTi)通过调控胆固醇代谢对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的抑制作用。方法:构建A549细胞体外培养模型,设置空白对照组(CON组)、KLTi组、顺铂(DDP)组及KLTi+DDP组,分别给予对应药物干预,采用CCK-8法检测不同分组的药物干预对A549细胞增殖的影响,并确定IC50值用于后续实验;使用细胞划痕实验、平板克隆形成实验、Transwell侵袭实验观察不同分组药物对A549细胞恶性生物学行为的影响;流式细胞术检测不同分组药物对A549细胞晚期凋亡水平的影响;WB法检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达,ELISA法检测促炎因子释放水平。采用比色法检测细胞胆固醇含量水平的组间差异,借助WB法检测胆固醇代谢相关膜通道蛋白ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)及功能蛋白ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)、肽基脯氨酰异构酶B(PPIB)表达水平差异。结果:KLTi及DDP对A549细胞抑制作用具有时间及剂量依赖性(均P<0.05),最终选择2 mg/mL KLTi、3μg/mL DDP作为干预剂量,按分组加药干预48 h后显示,KLTi单用或联合DDP均可抑制A549细胞克隆形成、迁移、侵袭能力且促进其晚期凋亡,KLTi+DDP组的效果更加明显(P<0.05或P<0.01);KLTi单用或联合DDP可通过调控E-cadherin、vimentin、snail蛋白表达从而影响A549细胞EMT进程(P<0.05或P<0.01),同时下调IL-6及IL-8的释放水平(P<0.05或P<0.01)。KLTi单用及联合DDP均可以明显降低A549细胞胆固醇含量(P<0.05或P<0.01),并且对ABCA1、ACLY、PPIB表达具有调控作用,联合组的效果更加明显(P<0.05或P<0.01)。结论:KLTi可能通过调控胆固醇代谢水平及相关通道蛋白抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为及EMT进程。 展开更多

关键词 康莱特注射液 肺腺癌 A549细胞 胆固醇代谢 增殖 迁移 侵袭 上皮间质转化

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烟曲霉在支气管上皮细胞上形成生物被膜导致抗真菌药物敏感性下降

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作者 Seidler MJ Salvenmoser S +2 位作者 Müller FM 余慧 王明贵 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2009年第4期320-320,共1页

烟曲霉可能引起免疫缺陷宿主（如粒细胞减少的恶性肿瘤患者）侵袭性肺曲霉病，也是支气管哮喘和囊性肺纤维化患者的呼吸道常见定植菌。根据已有研究，某些细菌和酵母形成被膜，致使感染慢性化，并可能导致抗生素耐药。考虑到免疫缺陷宿... 烟曲霉可能引起免疫缺陷宿主（如粒细胞减少的恶性肿瘤患者）侵袭性肺曲霉病，也是支气管哮喘和囊性肺纤维化患者的呼吸道常见定植菌。根据已有研究，某些细菌和酵母形成被膜，致使感染慢性化，并可能导致抗生素耐药。考虑到免疫缺陷宿主感染烟曲霉后的病死率较高，且体外药敏试验与临床疗效之间存在差异，我们推测烟曲霉能够在体内形成被膜。 展开更多

关键词 抗真菌药物敏感性 生物被膜 支气管上皮细胞 烟曲霉 侵袭性肺曲霉病 恶性肿瘤患者 囊性肺纤维化 体外药敏试验

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