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编码脑组织Nav1.5钠通道新外显子的克隆、鉴定和分布 被引量:9
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作者 王军 宗志红 +4 位作者 欧绍武 王运杰 任成涛 林毅 孟晓娜 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期255-259,共5页
Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组... Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组织,通过RT-PCR法对Nav1.5钠通道基因进行克隆发现:Nav1.5/SCN5A基因中的第6A外显子参与编码了该通道,而心肌等其他组织却是第6外显子参与编码该通道.人Nav1.5/SCN5A基因的第6A和第6外显子都定位于3号染色体,共有92个碱基,都可以编码产生30个氨基酸,但却有7个氨基酸不同.人和鼠脑组织Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子仅有一个碱基不同,却产生相同的氨基酸序列.RT-PCR法证实第6A外显子在鼠脑的不同部位表达不同,第6外显子在大鼠不同组织中的表达也不同,这为深入研究不同系统中Nav1.5钠通道的功能提供了基础. 展开更多
关键词 第6A外显子 第6外显子 基因克隆 nav1.5钠通道 脑组织
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Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序的重组质粒构建及蛋白制备
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作者 张峰慧 薛迎春 +6 位作者 许兴荣 邵冬雪 张晨阳 刘岩 苏敬阳 胡慧媛 郝丽英 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期694-698,共5页
目的构建Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定。方法将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Sepharos 4... 目的构建Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定。方法将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Sepharos 4B分离纯化后采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量,pull-down方法检测GST-IQ融合蛋白的生物学活性。结果构建的IQ重组质粒经限制性内切酶和基因测序双重鉴定显示质粒构建成功,融合蛋白经纯化后其浓度和纯度均较高,并具有能够与CSL蛋白浓度依赖性结合的生物学活性。结论本研究成功构建了可以表达生物活性蛋白的NaV1.5钠通道IQ基序原核表达载体,为深入探讨NaV1.5钠通道的生物学功能奠定了重要的物质基础。 展开更多
关键词 nav1.5钠通道 IQ基序 重组质粒 pull down实验
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