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编码脑组织Nav1.5钠通道新外显子的克隆、鉴定和分布
被引量:
9
1
作者
王军
宗志红
+4 位作者
欧绍武
王运杰
任成涛
林毅
孟晓娜
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期255-259,共5页
Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组...
Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组织,通过RT-PCR法对Nav1.5钠通道基因进行克隆发现:Nav1.5/SCN5A基因中的第6A外显子参与编码了该通道,而心肌等其他组织却是第6外显子参与编码该通道.人Nav1.5/SCN5A基因的第6A和第6外显子都定位于3号染色体,共有92个碱基,都可以编码产生30个氨基酸,但却有7个氨基酸不同.人和鼠脑组织Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子仅有一个碱基不同,却产生相同的氨基酸序列.RT-PCR法证实第6A外显子在鼠脑的不同部位表达不同,第6外显子在大鼠不同组织中的表达也不同,这为深入研究不同系统中Nav1.5钠通道的功能提供了基础.
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关键词
第6A外显子
第6外显子
基因克隆
nav1.5钠通道
脑组织
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职称材料
Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序的重组质粒构建及蛋白制备
2
作者
张峰慧
薛迎春
+6 位作者
许兴荣
邵冬雪
张晨阳
刘岩
苏敬阳
胡慧媛
郝丽英
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第8期694-698,共5页
目的构建Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定。方法将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Sepharos 4...
目的构建Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定。方法将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Sepharos 4B分离纯化后采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量,pull-down方法检测GST-IQ融合蛋白的生物学活性。结果构建的IQ重组质粒经限制性内切酶和基因测序双重鉴定显示质粒构建成功,融合蛋白经纯化后其浓度和纯度均较高,并具有能够与CSL蛋白浓度依赖性结合的生物学活性。结论本研究成功构建了可以表达生物活性蛋白的NaV1.5钠通道IQ基序原核表达载体,为深入探讨NaV1.5钠通道的生物学功能奠定了重要的物质基础。
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关键词
nav1.5钠通道
IQ基序
重组质粒
pull
down实验
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职称材料
题名
编码脑组织Nav1.5钠通道新外显子的克隆、鉴定和分布
被引量:
9
1
作者
王军
宗志红
欧绍武
王运杰
任成涛
林毅
孟晓娜
机构
中国医科大学附属一院神经外科
中国医科大学生物化学与分子生物学教研室
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期255-259,共5页
基金
辽宁省教育厅资助项目(05L500)~~
文摘
Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组织,通过RT-PCR法对Nav1.5钠通道基因进行克隆发现:Nav1.5/SCN5A基因中的第6A外显子参与编码了该通道,而心肌等其他组织却是第6外显子参与编码该通道.人Nav1.5/SCN5A基因的第6A和第6外显子都定位于3号染色体,共有92个碱基,都可以编码产生30个氨基酸,但却有7个氨基酸不同.人和鼠脑组织Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子仅有一个碱基不同,却产生相同的氨基酸序列.RT-PCR法证实第6A外显子在鼠脑的不同部位表达不同,第6外显子在大鼠不同组织中的表达也不同,这为深入研究不同系统中Nav1.5钠通道的功能提供了基础.
关键词
第6A外显子
第6外显子
基因克隆
nav1.5钠通道
脑组织
Keywords
exon6A, exon6, gene cloning
nav
l.5 channel, brain tissue
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序的重组质粒构建及蛋白制备
2
作者
张峰慧
薛迎春
许兴荣
邵冬雪
张晨阳
刘岩
苏敬阳
胡慧媛
郝丽英
机构
中国医科大学药学院药物毒理学教研室
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第8期694-698,共5页
基金
国家自然科学基金青年基金(81100108)
辽宁省教育厅科学研究项目-基础研究项目(JC2019035)
+1 种基金
辽宁省中央引领地方科研发展专项(2020JH6/105)
中国医科大学新冠肺炎疫情防控相关科研攻关项目(2020-07)。
文摘
目的构建Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定。方法将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Sepharos 4B分离纯化后采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量,pull-down方法检测GST-IQ融合蛋白的生物学活性。结果构建的IQ重组质粒经限制性内切酶和基因测序双重鉴定显示质粒构建成功,融合蛋白经纯化后其浓度和纯度均较高,并具有能够与CSL蛋白浓度依赖性结合的生物学活性。结论本研究成功构建了可以表达生物活性蛋白的NaV1.5钠通道IQ基序原核表达载体,为深入探讨NaV1.5钠通道的生物学功能奠定了重要的物质基础。
关键词
nav1.5钠通道
IQ基序
重组质粒
pull
down实验
Keywords
nav
1.5
sodium channel
IQ motif
recombinant plasmid
pull down assay
分类号
R966 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
编码脑组织Nav1.5钠通道新外显子的克隆、鉴定和分布
王军
宗志红
欧绍武
王运杰
任成涛
林毅
孟晓娜
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Na_(V)1.5钠通道C末端IQ基序的重组质粒构建及蛋白制备
张峰慧
薛迎春
许兴荣
邵冬雪
张晨阳
刘岩
苏敬阳
胡慧媛
郝丽英
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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