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NR2A反义寡核苷酸对短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤的保护作用 被引量:1
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作者 刘志安 李梅 +3 位作者 张旭 滕大才 裴冬生 徐铁军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1424-1428,共5页
目的探讨NMDA受体亚单位2A(NR2A)反义寡核苷酸在短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤中的保护作用,为研制和开发针对NR2A的特异性新药提供理论基础和形态学依据。方法健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组... 目的探讨NMDA受体亚单位2A(NR2A)反义寡核苷酸在短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤中的保护作用,为研制和开发针对NR2A的特异性新药提供理论基础和形态学依据。方法健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组。经生理盐水、错义寡核苷酸和反义寡核苷酸预处理后,以四血管阻断法建立短暂性全脑缺血(15min)/再灌注(1、2、3和5d)动物模型。在确定的时间点进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行TUNEL反应、焦油紫染色、原位杂交染色以及免疫组织化学染色。结果短暂性脑缺血/再灌注(I/R)3d,大鼠海马CA1区出现大量的凋亡阳性细胞;I/R5d大鼠海马CA1区细胞严重受损,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。经NR2A反义寡核苷酸预处理后,I/R3d和I/R5d海马CA1区的细胞凋亡和细胞损伤明显减轻,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。NR2A反义寡核苷酸能抑制I/R1d NR2A mRNA表达和I/R2d蛋白质表达,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。结论短暂性全脑缺血后,NR2A反义寡核苷酸能明显地减轻缺血诱导的大鼠海马CA1区细胞凋亡和细胞损伤,且这种作用与NR2A反义寡核苷酸特异性抑制NR2A及其mRNA的表达密切相关。 展开更多
关键词 nr2a反义寡核苷酸 神经保护 nr2a 脑缺血 神经元损伤 大鼠 海马
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NR2B反义寡核苷酸对大鼠脊髓星形胶质细胞体外分泌TNF-α及释放谷氨酸的影响
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作者 花柱明 林世清 +1 位作者 孙怡 李真 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第5期764-766,共3页
目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞(AST)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α及释放谷氨酸(Glu)的影响。方法:取新生2~3d新生的SD大鼠L4~6脊髓背角AST细胞原代纯化培养,C组:正常对照,除... 目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞(AST)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α及释放谷氨酸(Glu)的影响。方法:取新生2~3d新生的SD大鼠L4~6脊髓背角AST细胞原代纯化培养,C组:正常对照,除加入与干预组等量的培养液外不加任何药物;脂多糖(LPS)组:在培养液中加入LPS,终浓度为1mg/L,孵育24h;SNR2B组:在培养液中加入经lipofectamine2000处理的NR2B反义寡核苷酸,终浓度为2μmol/L,孵育48h后再加入LPS,终浓度1mg/L,再孵育24h;ANR2B组:在培养液中加入经lipofectamine2000处理的NR2B正义寡核苷酸,终浓度为2μmol/L,孵育72h后再加入LPS,终浓度1mg/L,孵育24h;5000r/min离心15min后取上清液和细胞,分别用于TNF-α、Glu和NR2B mRNA检测。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中TNF-α的浓度;用高效液相色谱仪测定Glu含量,RT-PCR检测NR2B mRNA的表达。结果:与C组比较,LPS组和ANR2B组释放的TNF-α和Glu显著增加(P<0.01),而SNR2B组无显著变化;与LPS组和ANR2B组相比,SNR2B组释放的TNF-α和Glu减少(P<0.01)。与C组比较,LPS组和ANR2B组AST细胞的NR2B mRNA的表达显著升高(P<0.01),而SNR2B组差异无显著性。结论:NR2B反义寡核苷酸下调脊髓AST细胞NR2B mRNA表达,减少TNF-α和Glu的释放。 展开更多
关键词 寡核苷酸 反义 N甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 星形胶质细胞 脊髓
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bcl-2 mRNA反义寡核苷酸对胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性的影响 被引量:4
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作者 范钰 林庚金 +3 位作者 钱立平 许祖德 李华 徐康 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期483-485,489,共4页
目的 探讨bcl 2反义寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性的影响。方法 应用脂质体瞬时转染法介导bcl 2反义寡核苷酸 ,处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,分别采用Northernblot... 目的 探讨bcl 2反义寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性的影响。方法 应用脂质体瞬时转染法介导bcl 2反义寡核苷酸 ,处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,分别采用Northernblot、Westernblot检测bcl 2mRNA、蛋白表达 ,用端粒微孔板杂交法检测端粒酶活性。结果 bcl 2ASODN处理的胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论 bcl 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 癌基因 细胞 端粒酶 bcl-2 胃癌
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新型bcl-2基因反义寡核苷酸F951诱导人白血病HL60细胞凋亡 被引量:4
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作者 李东良 吕联煌 +1 位作者 林振兴 陈英玉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期260-263,共4页
目的观察新型bcl-2反义寡核苷酸F951诱导人白血病细胞凋亡的作用。方法不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用流式细胞术,DNA Ladder分析,电镜观察,TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果5,10,20μmol.L-1F951分别与HL6... 目的观察新型bcl-2反义寡核苷酸F951诱导人白血病细胞凋亡的作用。方法不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用流式细胞术,DNA Ladder分析,电镜观察,TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果5,10,20μmol.L-1F951分别与HL60细胞共孵育48h后,线粒体凋亡细胞:未处理组、FNS对照组分别为3.00%、13.57%,F9513个剂量分别为30.95%、38.08%、52.55%;Caspase活性细胞:未处理组、FNS对照组分别为0.08%、0.14%,F9513个剂量组分别为43.68%、60.54%、80.37%。凝胶电泳分析:F951处理组可见典型的DNALadder,且随着药物浓度的提高诱导DNA Ladder的作用更加明显;TUNEL和电镜检查:未处理组与FNS对照组中仅偶见凋亡细胞,F951各剂量组凋亡细胞常见,且随着药物浓度的提高凋亡细胞增多。结论F951具有诱导HL60细胞凋亡的作用;F951诱导肿瘤细胞凋亡的作用是通过抑制bcl-2基因,启动细胞凋亡调控通道而实现的。 展开更多
关键词 白血病 基因 bcl-2 寡核苷酸 反义
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bcl-2反义寡核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的影响 被引量:5
5
作者 郑连文 石爱平 +1 位作者 赵忠文 郑国有 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期270-272,共3页
目的 :探讨 bcl-2反义寡核苷酸对培养的膀胱癌 BIU87细胞株的影响。方法 :采用 bcl-2基因第 1外显子的反义寡核苷酸 ,以硫代磷酸修饰 (PS-ASON ) ,序列为 5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′,与膀胱癌细胞株 BIU87共同孵育作为实验组。加入正义... 目的 :探讨 bcl-2反义寡核苷酸对培养的膀胱癌 BIU87细胞株的影响。方法 :采用 bcl-2基因第 1外显子的反义寡核苷酸 ,以硫代磷酸修饰 (PS-ASON ) ,序列为 5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′,与膀胱癌细胞株 BIU87共同孵育作为实验组。加入正义的 bcl-2寡核苷酸 ,序列为 5′-TACCGCGTGCGACCCTCT-3′(PS-SON)作为对照组 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率 ,电镜观察细胞形态变化。结果 :与对照组相比 ,实验组的细胞坏死率明显上调 ,电镜下细胞形态呈坏死改变。结论 :bcl-2的反义寡核苷酸引起膀胱癌细胞大量坏死 。 展开更多
关键词 BCL-2基因 反义寡核苷酸 膀胱癌
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一个新的靶向HER-2 mRNA的反义寡核苷酸,HA824,对HER-2表达的影响(英文) 被引量:5
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作者 杨栓平 宋三泰 +2 位作者 宋海峰 郑晓玲 汤仲明 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期87-92,共6页
目的 观察HA82 4 ,这种新合成的靶向HER 2mRNA的反义寡核苷酸对SK BR 3乳癌细胞株mRNA和蛋白表达的特异性作用。方法 以HA4为阳性对照 ,随机序列为随机对照检测了HA82 4对SK BR 3细胞生长的抑制作用与IC50 值 ;采用逆转录聚合酶链反应... 目的 观察HA82 4 ,这种新合成的靶向HER 2mRNA的反义寡核苷酸对SK BR 3乳癌细胞株mRNA和蛋白表达的特异性作用。方法 以HA4为阳性对照 ,随机序列为随机对照检测了HA82 4对SK BR 3细胞生长的抑制作用与IC50 值 ;采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、流式细胞技术、免疫组织化学法检测了对SK BR 3细胞mRNA与蛋白表达的影响。结果 结果表明HA82 4对SK BR 3乳癌细胞的生长有剂量依赖性的抑制作用〔IC50 (nmol·L- 1) :HA82 4 ,(47± 2 6 ) ;HA4 ,(97± 4 1) ;随机序列 ,(2 5 1± 86 )。HA82 4vsHA4 ,P <0 .0 5〕。HA82 4还显著抑制了HER 2mRNA与蛋白的表达 (免疫组化结果 :HA82 4 ,1+染色 ;HA4 ,2 +染色 ;随机序列 ,3+染色 ;流式细胞技术检测结果 ,荧光强度分别为 :HA82 4 ,338.6 ;HA4 ,35 5 .5 ;随机序列 ,5 32 .4 )。结论HA82 4对SK BR 3乳癌细胞生长的抑制作用与特异性的抑制HER 展开更多
关键词 乳腺癌 SK-BR-3细胞 HA824 HER-2 反义寡核苷酸 蛋白表达 逆转录聚合酶链反应
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bcl-2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷联合对恶性淋巴瘤细胞系凋亡的影响 被引量:5
7
作者 聂林 张洹 +1 位作者 张建军 王随照 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第3期197-200,共4页
目的 :研究bcl 2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷 (As2 O3 )联合对恶性淋巴瘤细胞系凋亡的影响。方法 :采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl 2蛋白的表达。结果... 目的 :研究bcl 2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷 (As2 O3 )联合对恶性淋巴瘤细胞系凋亡的影响。方法 :采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl 2蛋白的表达。结果 :10~ 4 0 μmol/Lbcl 2基因的反义寡核苷酸和 0 .5~ 2 .0 μmol/L三氧化二砷均能抑制恶性B淋巴瘤细胞系Raji细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,流式细胞仪检测Raji细胞 ,发现亚G1期细胞明显增多 ,bcl 2蛋白的表达明显降低 ,呈现时间剂量依赖效应 ,两者联合应用比单独应用抑制作用显著。结论 :bcl 2基因的反义寡核苷酸与三氧化二砷联合应用 ,明显抑制恶性B淋巴瘤细胞系生长 。 展开更多
关键词 三氧化二砷 淋巴瘤 BCL-2基因 反义寡核苷酸 细胞凋亡
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一个新的靶点的反义bcl-2寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的研究 被引量:6
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作者 雷小勇 张洹 林剑 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2001年第1期125-128,共4页
目的 :探讨针对bcl- 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对HL - 60细胞bcl - 2蛋白表达和凋亡的作用 方法 :应用台盼蓝拒染法和流式细胞仪检测HL - 60细胞的活性和bcl- 2蛋白表达和细胞凋亡的情况 结果 :10 μmol/L和 2 0 μmol/L的反义... 目的 :探讨针对bcl- 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对HL - 60细胞bcl - 2蛋白表达和凋亡的作用 方法 :应用台盼蓝拒染法和流式细胞仪检测HL - 60细胞的活性和bcl- 2蛋白表达和细胞凋亡的情况 结果 :10 μmol/L和 2 0 μmol/L的反义寡核苷酸能抑制HL - 60细胞bcl- 2蛋白表达和诱导细胞凋亡 ,并且针对bcl - 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl - 2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强 结论 :针对bcl- 2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸能抑制HL - 60细胞bcl- 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 bcl-2 HL-60细胞 细胞凋亡 原癌基因 肿瘤细胞 生长抑制
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单独及联合转染survivin和bcl-2反义寡核苷酸诱导胆囊癌细胞凋亡的研究 被引量:2
9
作者 冯立民 王建立 +2 位作者 乌新林 姜希宏 寿楠海 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第4期248-251,共4页
目的:探讨单独及联合转染survivin、bcl-2反义寡核苷酸(AsODN)对胆囊癌细胞系GBC-SD的凋亡促进作用。方 法:设计并合成特异性靶向survivin及bcl-2的AsODN。免疫组织化学法观察胆囊癌细胞中Survivin及Bcl-2蛋白的表达情 况;实验分为4组:... 目的:探讨单独及联合转染survivin、bcl-2反义寡核苷酸(AsODN)对胆囊癌细胞系GBC-SD的凋亡促进作用。方 法:设计并合成特异性靶向survivin及bcl-2的AsODN。免疫组织化学法观察胆囊癌细胞中Survivin及Bcl-2蛋白的表达情 况;实验分为4组:空白对照组、survivin AsODN转染组、bcl-2 AsODN转染组、联合survivin及bcl-2 AsODN转染组。转染24 h 后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin基因表达的变化,电镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪技术检测细胞 凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTF)法检测AsODN对细胞的生长抑制率。结果:Survivin及Bcl-2蛋白在胆囊癌细胞中均有较高 表达;单独及联合转染survivin及bcl-2 AsODN后,胆囊癌细胞内survivin基因mRNA表达下调47.8%;,电镜下胆囊癌细胞呈 典型凋亡样改变;凋亡率分别为11.38%±3.91%(survivin AsODN组)、9.26%±4.15%(bcl-2 AsODN组)、28.45%±6.34% (联合转染组);分别与对照组相比差异有显著性(P<0.01),而联合转染组同单独转染survivin AsODN组及bcl-2 AsODN组相 比差异也有显著性(P<0.05)。各转染组相对于空白对照组的AsODN抑制率分别为54.3%,47.6%,76.5%。结论:Survivin 及Bcl-2蛋白在胆囊癌细胞中呈高表达。 展开更多
关键词 胆囊癌 SURVIVIN BCL-2 寡核苷酸 反义 转染
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氯通道ClC-2反义寡核苷酸对顺铂作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响 被引量:3
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作者 苏静 周磊 +2 位作者 张宏宇 孙连坤 康劲松 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期43-46,F0002,共5页
目的:探讨氯通道ClC-2反义寡核苷酸(AON)抑制ClC-2基因表达对顺铂(DDP)作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响,为ClC-2成为神经胶质瘤综合治疗的新基因靶点提供理论依据。方法:U251细胞按处理方法不同分为对照组(转染无义寡核苷酸)、AON... 目的:探讨氯通道ClC-2反义寡核苷酸(AON)抑制ClC-2基因表达对顺铂(DDP)作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响,为ClC-2成为神经胶质瘤综合治疗的新基因靶点提供理论依据。方法:U251细胞按处理方法不同分为对照组(转染无义寡核苷酸)、AON组(转染ClC-2反义寡核苷酸)、DDP组(无义寡核苷酸与顺铂联用)和AON+DDP组(ClC-2反义寡核苷酸与顺铂联用)。应用RT-PCR检测相关基因ClC-2、cyclin D1、MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell小室侵袭实验检测各组细胞侵袭力;Transwell小室迁移实验检测各组细胞迁移率。结果:与对照组比较,AON组、DDP组和AON+DDP组ClC-2、cyclin D1、MMP-2、MMP-9 mRNA表达率降低(P<0.05);Transwell小室侵袭实验中对照组、AON组、DDP组和AON+DDP组侵袭细胞数分别为81.00±4.58、42.01±4.36、48.33±2.52和12.67±5.13;与对照组比较,AON组、DDP组和AON+DDP组穿透细胞数明显降低(P<0.05)。Transwell小室迁移实验中AON组、DDP组、AON+DDP组细胞迁移率(%)分别为72.40±2.20、51.48±1.29、37.87±1.50,与对照组比较均明显降低(P<0.05)。结论:①转染ClC-2反义寡核苷酸能有效抑制ClC-2 mRNA表达;②抑制ClC-2 mRNA能降低U251细胞的迁移力和侵袭力;③ClC-2 mRNA表达降低可促进顺铂对U251细胞迁移力和侵袭力的抑制作用。 展开更多
关键词 氯通道ClC-2 反义寡核苷酸 顺铂 神经胶质瘤U251细胞 肿瘤浸润
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bcl-2反义寡核苷酸对肾癌细胞Bcl-2蛋白表达抑制及诱导凋亡作用 被引量:2
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作者 高江平 杨素霞 +3 位作者 陈萍 董隽 洪宝发 李炎唐 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第1期14-17,共4页
目的:评价bcl-2反义寡核苷酸对肾细胞癌细胞Bcl-2蛋白表达抑制及诱导凋亡作用。方法:合成与已知人类基因无同源性的bcl-2反义寡核苷酸(AS1与翻译起始端互补,AS2与编码区互补),以阳离子脂质体Lipofectin为转染载体,MTS比色实验测定细胞活... 目的:评价bcl-2反义寡核苷酸对肾细胞癌细胞Bcl-2蛋白表达抑制及诱导凋亡作用。方法:合成与已知人类基因无同源性的bcl-2反义寡核苷酸(AS1与翻译起始端互补,AS2与编码区互补),以阳离子脂质体Lipofectin为转染载体,MTS比色实验测定细胞活率,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定bcl-2 mRNA的表达,Western杂交法测定Bcl-2蛋白表达,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术测定凋亡细胞。结果:所测定的5个肾癌细胞株均有稳定的。bcl-2 mRNA表达;转染的反义寡核苷酸对ACHN细胞Bcl-2蛋白的表达有明显抑制作用,而正义寡核苷酸无明显影响,AS2的抑制作用大于AS1;反义寡核苷酸可诱导ACHN细胞的凋亡,AS1和AS2的诱导率分别为32.1%和43.2%。结论:bcl-2反义寡核苷酸可抑制肾癌细胞Bcl-2蛋白的表达,并进而诱导细胞的调亡。 展开更多
关键词 肾癌 bcl—2 反义寡核苷酸 凋亡
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hTR反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡过程中Bcl-2,Bax,P16和P21表达的变化 被引量:3
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作者 张蕾 温洪涛 +2 位作者 张岚 高冬玲 张云汉 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第6期1033-1035,共3页
目的:探讨封闭人端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(hTR ASODN)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、P16及P21的表达。方法:应用hTR ASODN1次/d、连续7d转染EC9706细胞,以未加ASODN的脂质体对照组为空白对照,分别于转染后1、3、5、7... 目的:探讨封闭人端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(hTR ASODN)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、P16及P21的表达。方法:应用hTR ASODN1次/d、连续7d转染EC9706细胞,以未加ASODN的脂质体对照组为空白对照,分别于转染后1、3、5、7d采用原位末端转移酶标记法检测EC9706细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax、P16及P21蛋白的表达。结果:与空白对照比较,hTR ASODN转染后肿瘤细胞凋亡率及P16与P21蛋白阳性表达率均明显升高(P<0.05或0.01);而Bcl-2及Bax蛋白的表达未见明显改变。结论:hTR ASODN可能通过上调EC9706细胞周期调控基因P16、P21蛋白的表达调控细胞周期,进而影响EC9706细胞的增殖与凋亡。 展开更多
关键词 食管肿瘤 EC9706细胞 反义寡核苷酸 端粒酶 凋亡 Bcl-2 Bax P16 P21
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BHRF1反义寡核苷酸对BHRF1-CNE2细胞生存能力的影响 被引量:2
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作者 黄海 周江红 +2 位作者 潘星华 余龙 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期720-722,共3页
目的:探讨BHRF1 反义寡核苷酸对表达BHRF1 的鼻咽癌细胞株CNE2 生存能力的影响。方法:检测反义阻断BHRF1 表达后BHRF1-CNE2细胞在喜树碱作用下增殖能力和凋亡指数的变化。结果:在喜树碱作用下,应用B... 目的:探讨BHRF1 反义寡核苷酸对表达BHRF1 的鼻咽癌细胞株CNE2 生存能力的影响。方法:检测反义阻断BHRF1 表达后BHRF1-CNE2细胞在喜树碱作用下增殖能力和凋亡指数的变化。结果:在喜树碱作用下,应用BHRF1 反义寡核苷酸组的癌细胞较对照组的增殖率下降,凋亡率增高。结论:反义阻断BHRF1的表达可降低CNE2细胞的生存能力。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 BHRF1基因 反义寡核苷酸 CNE2细胞
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c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响 被引量:3
14
作者 任庆兰 吴永忠 +1 位作者 刘渝 李少林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期421-423,共3页
目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株S... 目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60 Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率。结果 :c -erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达 ,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降 (P <0 .0 1) ,而转染c -erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :c -erbB2反义寡核苷酸通过抑制c -erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。 展开更多
关键词 卵巢癌细胞株 脂质体 c—erbB2反义寡核苷酸 放射敏感性
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新型反义寡核苷酸F951对HL60细胞Bcl-2基因表达及细胞增殖的抑制作用 被引量:2
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作者 李东良 吕联煌 +1 位作者 林振兴 陈英玉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期479-482,共4页
目的 研究新型反义寡核苷酸F951对白血病细胞Bcl- 2基因表达及细胞增殖的影响。方法 不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法检测HL60细胞增殖,用流式细胞术和RT -PCR法检测Bcl- 2蛋白及其mRNA表达,DNA片段化... 目的 研究新型反义寡核苷酸F951对白血病细胞Bcl- 2基因表达及细胞增殖的影响。方法 不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法检测HL60细胞增殖,用流式细胞术和RT -PCR法检测Bcl- 2蛋白及其mRNA表达,DNA片段化分析法检测凋亡细胞。结果 5, 10, 20μmol·L-1F951分别与HL60细胞共孵育1~5d,细胞生长明显受抑,这一抑制作用随F951浓度的升高和作用时间的延长而增强。MTTA值与未处理组相比F951 5, 10, 20μmol·L-1组细胞抑制率分别为: 20 .56%、37 .66%、54 .11%与对照组相比差异均有显著性;F951处理后HL60细胞Bcl 2mRNA水平下降,Bcl- 2蛋白减少;凝胶电泳可见典型的梯形带,且随着浓度提高诱导DNALadder的作用更加明显。结论 F951可下调Bcl -2基因表达,促进细胞凋亡而抑制白血病细胞增殖。 展开更多
关键词 基因 BCL-2 寡核苷酸 反义 HL60细胞
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环氧合酶-2反义寡核苷酸对鳞状细胞癌Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响 被引量:3
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作者 魏志平 马杰 刘彦群 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期144-147,共4页
目的:研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AsODN)对人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:免疫细胞化学法检测Colo-16细胞中COX-2蛋白表达;免... 目的:研究环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AsODN)对人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:免疫细胞化学法检测Colo-16细胞中COX-2蛋白表达;免疫荧光显微镜观察转染情况;蛋白免疫印迹(Western blot)及半定量反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Colo-16细胞MMP-2蛋白和MMP-2mRNA表达水平。结果:Colo-16细胞中COX-2蛋白阳性表达,并分布在胞质、胞核;Colo-16细胞胞质和胞核可见荧光标记的COX-2无义寡核苷酸、反义寡核苷酸;Western blot及RT-PCR检测结果显不COX-2反义寡核苷酸作用Colo-16细胞48 h后,MMP-2表达显著下调(P<0.05)。结论:COX-2反义寡核苷酸能有效下调Colo-16细胞MMP-2表达,提示COX-2反义寡核苷酸可能通过抑制MMP-2表达来阻断皮肤鳞状细胞癌的浸润、转移。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 基质金属蛋白酶-2 Colo-16细胞 鳞状细胞 皮肤
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bcl-2反义寡核苷酸增强NCI-H460细胞对紫杉特尔和放射线的敏感性 被引量:4
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作者 何冬梅 张洹 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期476-479,共4页
目的研究bcl2反义寡核苷酸作用于非小细胞肺癌细胞株NCI H460后,细胞对紫杉特尔、放射线敏感性的变化。方法紫杉特尔与bcl2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸联合作用NCI H460细胞后,MTT法测紫杉特尔半数抑制率(IC50);NCI H460经bcl2反义寡核... 目的研究bcl2反义寡核苷酸作用于非小细胞肺癌细胞株NCI H460后,细胞对紫杉特尔、放射线敏感性的变化。方法紫杉特尔与bcl2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸联合作用NCI H460细胞后,MTT法测紫杉特尔半数抑制率(IC50);NCI H460经bcl2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸作用后,再用放射线照射,MTT法测定细胞生长抑制率;免疫荧光标记观测细胞Bcl2蛋白水平。结果靶向bcl2mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸与紫杉特尔联合作用于NCI H460细胞后紫杉特尔的IC50值为(0.101±0.009)μmol/L,与不加寡核苷酸组紫杉特尔的IC50值[(0.183±0.018)μmol/L]或无义寡核苷酸联用紫杉特尔的IC50值[(0.179±0.016)μmol/L]相比,统计学上具有显著性差异(P<0.05)。bcl2反义寡核苷酸与放射线联合作用NCI H460细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,分别与单用放射线及bcl2无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P<0.05)。bcl2反义寡核苷酸分别与紫杉特尔、放射线作用于NCI H460细胞后显著抑制Bcl2蛋白表达,分别与单用紫杉特尔、放射线或无义寡核苷酸联用紫杉特尔、放射线相比,统计学上具有显著性差异(P<0.05)。结论靶向bcl2mRNA的反义寡核苷酸能增强NCI H460细胞对紫杉特尔、放射线的敏感性。 展开更多
关键词 bcl-2 反义寡核苷酸 NCI-H460细胞 紫杉特尔 放射线 敏感性
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Bcl-2硫代反义寡核苷酸对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 邱实 谭升顺 +3 位作者 饶国洲 王梅 耿松梅 黄艳红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期463-465,共3页
目的:研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2ASODN)对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法、激光共聚焦显微镜、TUNEL法和AnnevinV/PI双染法检测bcl-2ASODN对A375细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR方法,观察... 目的:研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2ASODN)对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法、激光共聚焦显微镜、TUNEL法和AnnevinV/PI双染法检测bcl-2ASODN对A375细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR方法,观察bcl-2ASODN处理前后bcl-2mRNA在A375细胞表达水平的变化。结果:MTT法检测显示bcl-2ASODN抑制A375细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性;经30μmol/LASODN作用48h,激光共聚焦显微镜观察细胞呈现典型凋亡特征;TUNEL染色可见ASODN组多数A375细胞核被标记呈棕褐色,而SODN组和对照组细胞核未被明显标记;AnnexinV/PI检测ASODN组凋亡细胞比例升高,与SODN组和对照组均有显著性差异(P<0.001);RT-PCR结果显示bcl-2mRNA表达水平下降。结论:bcl-2ASODN可抑制A375细胞增殖和诱导A375细胞凋亡,其诱导凋亡的机制是下调bcl-2mRNA的表达。 展开更多
关键词 基因 BEL-2 反义寡核苷酸 A375
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新型bcl-2反义寡核苷酸F951对人白血病裸鼠移植瘤的治疗作用 被引量:1
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作者 李东良 吕联煌 +2 位作者 林锦娟 林振兴 陈英玉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期230-234,共5页
目的研究新型反义寡核苷酸F951对急性髓性白血病(AML)裸鼠移植瘤bcl-2基因表达、肿瘤生长及荷瘤鼠生存期的影响。方法体外大量扩增高表达bcl-2基因的HL60细胞,皮下接种建立AML裸鼠移植瘤模型,采取瘤体局部注射给药,观察F951及F951联合... 目的研究新型反义寡核苷酸F951对急性髓性白血病(AML)裸鼠移植瘤bcl-2基因表达、肿瘤生长及荷瘤鼠生存期的影响。方法体外大量扩增高表达bcl-2基因的HL60细胞,皮下接种建立AML裸鼠移植瘤模型,采取瘤体局部注射给药,观察F951及F951联合小剂量Ara-C对肿瘤生长及荷瘤裸鼠生存期的影响;应用荧光定量RT-PCR检测瘤细胞bcl-2mRNA表达;光镜观察瘤组织形态结构变化。结果治疗14d各组荷瘤鼠瘤体积、瘤重、瘤组织bcl-2mR-NA定量分别为:NS对照组(15.17±3.40)cm3、(12.69±0.92)g、9.79×104Copies.μg-1;无义寡核苷酸(FNS)组(15.91±3.77)cm3,(12.38±1.21)g;8.31×104Copies.μg-1;Ara-C组(1.24±0.55)cm3,(2.32±0.49)g,2.59×104Copies.μg-1;F951组(2.6±1.55)cm3,(3.53±0.67)g;1.01×10Copies.μg-1;F951+Ara-C组(0.62±0.48)cm3,(1.05±0.63)g,9.5×102Copies.μg-1;上述各组数据显示F951有下调肿瘤细胞bcl-2基因表达,抑制肿瘤生长的作用,抑瘤率为72.18%,与NS及FNS对照组比差异均有极显著性(P<0.01),F951联合Ara-C后治疗效果更佳,抑瘤率达91.73%,与Ara-C组相比差异有显著性(P<0.05)。瘤组织病理学检查:F951及F951联合Ara-C治疗组瘤细胞减少,瘤细胞变性坏死,大量纤维组织增生。各组动物生存期观察:NS对照组(13.67±0.82)d、,FNS组(13.50±1.22)d,Ara-C组(28.33±1.86)d,F951组(29.33±7.44)d,F951+Ara-C组(37.83±5.85)d。F951组及F951+Ara-C组生存期延长率分别为114.56%与176.71%,明显延长了荷瘤鼠的生存期(P<0.01)。结论F951能特异性地抑制AML裸鼠移植瘤细胞bcl-2基因表达,激活凋亡调控机制,诱导瘤细胞凋亡,同时增加化疗药物的敏感性,而发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 白血病 骨髓细胞 急性 基因 bcl-2 寡核苷酸 反义 药效学
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HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bcl-2表达及凋亡的影响 被引量:3
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作者 蔡文涛 陈安民 +1 位作者 郭风劲 管频华 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第11期948-952,共5页
背景与目的:本实验研究缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸(antisense oligonueleotides,ASODN)在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响,进一步探讨HIF-1α在缺氧诱导肿瘤细胞凋亡的过程中的作用机... 背景与目的:本实验研究缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸(antisense oligonueleotides,ASODN)在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响,进一步探讨HIF-1α在缺氧诱导肿瘤细胞凋亡的过程中的作用机制。方法:设计针对HIF-1α RNA亚基的反义、正义寡核苷酸(sense oligodeoxynueleotides,SODN),并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,观察缺氧培养不同时相(8、16、24h)5μmol/L的HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α、P53和Bcl-2 mRNA的转录水平,免疫组化(SP法)和免疫印迹(Western Blot)检测HIF-1α、P53和Bcl-2蛋白表达情况。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:HIF-1α转录水平(8~24h)单纯缺氧组(22.0%~22.6%)及SODN缺氧组(22.0%~22.8%)与常氧组(20.2%~20.9%)比较未见明显改变,而在ASODN缺氧组(16.8%~18.5%)显著降低(P〈0.01)。其蛋白表达单纯缺氧组(33.1%~88.9%)、SODN缺氧组(32.5%~88.7%)随缺氧时间延长明显升高;而P53、Bel-2 mRNA水平单纯缺氧组、SODN缺氧组较常氧组均显著增强(3.4~7.5倍不等)(P〈0.05)。其蛋白的表达这二组也较常氧组均显著增强(2~大于37倍不等)(P〈0.05)。然而在ASODN缺氧组P53、Bel-2 mRNA活性明显减弱(11.5%~13.9%)(P〈0.05),蛋白表达水平也显著降低(13.6%~35.4%)(P〈0.05):细胞凋亡率其他三组未见明显变化,但ASODN缺氧组显著增加(P〈0.05)。结论:缺氧可以通过诱导野生型P53的突变使HIF-1α和Bcl-2的过表达,从而抑制肿瘤细胞的凋亡。而HIF-1α反义寡核苷酸抑制HIF-1α活性后,可以抑制野生型P53的突变,降低Bcl-2的表达,导致细胞凋亡的增加。 展开更多
关键词 骨肉瘤 反义寡核苷酸 缺氧诱导因子-1Α P53 BCL-2 细胞凋亡
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