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NOS2基因DNA甲基化编辑调节NO浓度影响肌肉发育通路基因的表达
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作者 申琦 王凯 +7 位作者 赵真坚 陈栋 余杨 崔晟頔 王俊戈 陈子旸 吴平先 唐国庆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期984-994,共11页
旨在探究对一氧化氮合成酶(NOS)2进行DNA甲基化编辑后对肌红蛋白的调控作用机制,并研究其对神经元一氧化氮合酶(nNOS)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平是否有影响。本试验采用DNA甲基化编辑技术在猪肾细胞系PK-15细胞对基因NOS2... 旨在探究对一氧化氮合成酶(NOS)2进行DNA甲基化编辑后对肌红蛋白的调控作用机制,并研究其对神经元一氧化氮合酶(nNOS)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平是否有影响。本试验采用DNA甲基化编辑技术在猪肾细胞系PK-15细胞对基因NOS2进行甲基化编辑,在猪肾细胞中检测NOS2基因启动子DNA甲基化水平、NOS2表达水平、细胞内一氧化氮浓度以及肌纤维和肌红蛋白相关基因的表达。结果发现,NOS2基因启动子前500 bp区域平均DNA甲基化水平降低,但差异不显著,而gRNA2结合位点附近的CpG位点甲基化水平增高。此外,对NOS2进行甲基化编辑后,NOS2基因表达量和其iNOS蛋白质表达量显著降低。随着NOS2表达降低,nNOS和eNOS表达显著增加。MYHC-Ⅱb和MYHC-Ⅱx的表达水平显著下降,Myoglobin蛋白表达也显著下降。综上,NOS2基因的异常表达能够影响细胞中的NO生成,同时也会影响NOS1和NOS3的表达,以及和肌肉发育相关基因的表达。 展开更多
关键词 nos2 DNA甲基化 NO 肌纤维 肌红蛋白
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NFκBp65、NOS2在去势雄兔角膜、结膜和泪腺中的表达及意义 被引量:15
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作者 刘超 王传富 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第1期81-81,共1页
关键词 泪腺组织 nos2 兔角膜 去势 结膜 干眼症 炎症反应
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重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子活性及基因表达的影响 被引量:1
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作者 乔笑芹 王进雅 +2 位作者 路康 曹倩 周国平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1143-1147,共5页
目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、... 目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、大肠杆菌转化等方法将NOS2基因启动子区克隆至pGL3-Basic载体上,将所构建重组报告质粒转染至人胚肾(HEK293T)细胞中,利用双荧光素酶活性分析检测该重组报告质粒启动子活性及检测rPla a2对人NOS2基因启动子活性的影响;用实时荧光定量PCR法检测rPla a2对人NOS2基因mRNA水平的影响。结果:成功构建含有NOS2启动子的重组报告质粒,与对照(p GL3-Basic)组相比,含NOS2启动子区的重组质粒转染组荧光素酶活性显著增高;与不加刺激(NOS2)组相比,加入rPla a2刺激后含NOS2启动子区的重组报告质粒转染组荧光素酶活性显著增高,加入rPla a2刺激后NOS2 mRNA相对表达水平显著增高。结论:rPla a2可增强人NOS2基因启动子活性,并增加其基因表达。 展开更多
关键词 诱导型一氧化氮合酶(nos2) 重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2) 启动子 哮喘
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GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白 被引量:2
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作者 周鑫琦 王颖洁 +1 位作者 张文慧 张亚妮 《中国家禽》 北大核心 2020年第9期19-25,共7页
为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到31... 为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 nos2 GST pull-down 质谱分析技术 蛋白质相互作用
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NFκBp65、NOS2在维生素A缺乏干眼模型兔角膜中的表达及意义 被引量:4
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作者 刘超 耿燕 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第1期19-22,共4页
目的检测NFκBp65、NOS2在维生素A缺乏干眼模型兔角膜中的表达和改变,探讨干眼的发病机制。方法实验组6只兔以维生素A完全缺乏饲料喂养6个月制作维生素A缺乏干眼兔模型,正常对照组6只兔喂养正常饲料,采用免疫组织化学SP方法,对模型兔和... 目的检测NFκBp65、NOS2在维生素A缺乏干眼模型兔角膜中的表达和改变,探讨干眼的发病机制。方法实验组6只兔以维生素A完全缺乏饲料喂养6个月制作维生素A缺乏干眼兔模型,正常对照组6只兔喂养正常饲料,采用免疫组织化学SP方法,对模型兔和对照兔角膜组织中NFκBp65、NOS2的表达进行检测。结果与正常对照组相比,实验组维生素A缺乏干眼模型兔角膜组织中NFκBp65、NOS2的表达明显增多(P<0.01),NFκBp65在细胞中表达明显,NOS2在间质中表达明显。结论维生素A缺乏兔角膜组织中的免疫炎症反应可能是导致干眼的主要病理过程,NFκBp65、NOS2在此过程中起重要作用。 展开更多
关键词 干眼 NFκBp65 nos2 维生素A缺乏
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团头鲂NOS2基因的克隆和组织表达分析
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作者 王玉青 邬长松 +2 位作者 马洁乐 陈会杰 刘小玲 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第5期16-21,30,共7页
为了探究诱导型一氧化氮合酶(NOS2)在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染团头鲂(Megalobrama amblycephala)时发挥的作用,克隆并分析了团头鲂NOS2基因。结果显示,NOS2基因的cDNA序列全长4 215 bp,编码1 080个氨基酸。氨基酸序列同... 为了探究诱导型一氧化氮合酶(NOS2)在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染团头鲂(Megalobrama amblycephala)时发挥的作用,克隆并分析了团头鲂NOS2基因。结果显示,NOS2基因的cDNA序列全长4 215 bp,编码1 080个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,团头鲂NOS2基因与草鱼NOS2基因的相似性最高,达95%。进化关系分析表明,团头鲂NOS2基因与鲤科鱼类NOS2基因聚在一支。实时荧光定量PCR检测的结果表明,在嗜水气单胞菌感染团头鲂后,NOS2基因在肝脏和头肾中被诱导表达;在脾脏中NOS2基因在3 h被诱导表达,其余时间点表达量显著下调;在肠道组织中NOS2基因在3 h下调表达,在6 h有微弱的上调,之后趋于稳定。研究结果为进一步探索NOS2基因在嗜水气单胞菌感染团头鲂后免疫应答中发挥的作用打下基础。 展开更多
关键词 诱导型一氧化氮合酶(nos2) 团头鲂(Megalobrama amblycephala) 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) 组织表达
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VEGF、b-FGF、NOS_2和NOS_3在非小细胞肺癌的表达及其临床意义 被引量:13
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作者 李桂圆 陈龙邦 +1 位作者 王靖华 周晓军 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第2期131-134,137,共5页
目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b -FGF)、一氧化氮合酶 2 (诱生型 ,NOS2 )、一氧化氮合酶 3(内皮型 ,NOS3)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成和淋巴结转移的关系。方法 :用免疫组化 (S -... 目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b -FGF)、一氧化氮合酶 2 (诱生型 ,NOS2 )、一氧化氮合酶 3(内皮型 ,NOS3)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成和淋巴结转移的关系。方法 :用免疫组化 (S -P法 )染色技术对 95例NSCLC石腊组织标本的VEGF、b -FGF、NOS2 和NOS3及肿瘤内微血管密度 (IMVD)进行检测和分析。结果 :VEGF、b FGF表达与TNM分期、IMVD及淋巴结转移有关 (P<0 .0 5) ,两者共表达与IMVD有关 (P <0 .0 1 )。NOS3与组织学分型、IMVD和淋巴结转移有关 (P <0 .0 5) ;NOS2与IMVD有关 (P <0 .0 5)。相关分析显示促血管形成因子 (VEGF、b FGF)与一氧化氮合酶 (NOS2 、NOS3)的表达呈正相关 (r=0 .30 1 8,P <0 .0 5)。结论 :VEGF和b FGF在促进血管形成和促进肿瘤转移方面可能起到协同作用 ,并且有NO的参与 ;VEGF、b FGF、NOS2 展开更多
关键词 VEGF B-FGF nos2 NOS3 非小细胞肺癌 表达
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胃肠道间质瘤P13K/Akt信号转导通路的检测及其意义
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作者 聂胜利 王蓓蓓 +1 位作者 张庆芳 吴军辉 《世界中医药》 CAS 2016年第B03期752-753,共2页
目的探讨胃肠道间质瘤P13K/Akt信号转导通路的检测及意义。方法:采用Western印迹法检测P13K、Akt和PTEN在胃肠道间质瘤患者中的表达,同时采用免疫组织化学法检测HIF-1、NOS2和VEGF在胃肠道间质瘤患者中的表达。结果:在胃肠道间质瘤... 目的探讨胃肠道间质瘤P13K/Akt信号转导通路的检测及意义。方法:采用Western印迹法检测P13K、Akt和PTEN在胃肠道间质瘤患者中的表达,同时采用免疫组织化学法检测HIF-1、NOS2和VEGF在胃肠道间质瘤患者中的表达。结果:在胃肠道间质瘤患者中,P13K、Akt表达水平随着NIH分级增高而上调(P〈0.05);PTEN表达水平随着NIH分级增高而下调(P〈0.05)。而HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系(P〈0.05):(1)I、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的HIF-1阳性率分别为43.6%和69.7%,NOS2阳性率分别为44.3%和72.5%.VEGF阳性率分别为47.5%和62.8%;(2)黏膜受侵与无受侵组患者的HIF-1阳性率分别为89.4%和52.1%,NOS2阳性率分别为87.3%和56.2%,VEGF阳性率分别为78.7%和51.8%;(3)有侵袭转移组患者相比于无侵袭转移组阳性率明显升高。此外,HIF-1与NOS2二者阳性表达之间呈正相关;HIF-1与VEGF二者阳性表达之间呈正相关:NOS2与VEGF二者阳性表达之间亦呈正相关。结论:在胃肠道间质瘤患者中。P13K/Akt信号可能通过调控PTEN从而调节HIF-1表达.HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系。 展开更多
关键词 胃肠道间质瘤 P13K/AKT PTEN HIF-1 nos2 VEGF
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一氧化氮合酶2、3在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
9
作者 王靖华 陈龙邦 +1 位作者 马恒辉 孟奎 《医学研究生学报》 CAS 2004年第2期109-110,113,F002,共4页
目的 :研究一氧化氮合酶 2 (NOS2 )、一氧化氮合酶 3(NOS3)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成、淋巴结转移的关系。 方法 :用免疫组化 (S P法 )染色技术对 95例NSCLC石蜡组织标本的NOS2、NOS3和肿瘤内微血管密度 (IMVD... 目的 :研究一氧化氮合酶 2 (NOS2 )、一氧化氮合酶 3(NOS3)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成、淋巴结转移的关系。 方法 :用免疫组化 (S P法 )染色技术对 95例NSCLC石蜡组织标本的NOS2、NOS3和肿瘤内微血管密度 (IMVD)进行检测和分析。 结果 :NOS3与组织学分型、IMVD和淋巴结转移有关 (P<0 .0 5 ) ;NOS2与IMVD有关 (P <0 .0 5 )。 结论 :NOS2。 展开更多
关键词 一氧化氮合酶2 一氧化氨合酶3 非小细胞肺癌 淋巴结转移
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