西瓜中苹果酸代谢关键基因NADP-ME的克隆及功能分析

1

作者 董薇 杨从基 +3 位作者 许守明 张洲 吴德峰 李军华 《中国瓜菜》 北大核心 2025年第9期40-47,共8页

有机酸是影响西瓜果实风味品质的关键成分,解析苹果酸合成代谢的分子机制具有重要意义。通过同源序列比对克隆得到2个西瓜NADP-苹果酸酶基因ClaNADP-ME3和ClaNADP-ME4,荧光定量和高效液相色谱检测发现,ClaNADP-ME4的表达量与西瓜中苹果... 有机酸是影响西瓜果实风味品质的关键成分,解析苹果酸合成代谢的分子机制具有重要意义。通过同源序列比对克隆得到2个西瓜NADP-苹果酸酶基因ClaNADP-ME3和ClaNADP-ME4,荧光定量和高效液相色谱检测发现,ClaNADP-ME4的表达量与西瓜中苹果酸含量变化趋势相反,GFP融合蛋白亚细胞定位分析表明,ClaNADP-ME4基因分布于细胞质与细胞核中。通过遗传转化超表达ClaNADP-ME4基因,进一步验证ClaNADP-ME4的基因功能,发现该基因可显著降低西瓜果实中苹果酸含量。综上,ClaNADP-ME4基因具有促进苹果酸代谢的作用,研究结果为西瓜品质改良的分子育种提供了新靶点。 展开更多

关键词 西瓜 苹果酸 苹果酸酶 超表达

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NADH和NADPH代谢和功能的研究进展 被引量：21

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作者 张姗姗 王彦 +2 位作者 李德东 曹永兵 姜远英 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1239-1243,共5页

近年来的研究发现,NADH和NADPH在机体生理与病理条件下都发挥重要的功能,本文综述了NADH和NADPH的合成和降解,重点阐述了NADH、NADPH和NADPH氧化酶的功能,并按炎症、心血管疾病、肿瘤、神经退行性疾病等不同病理状况分别叙述。当前对细... 近年来的研究发现,NADH和NADPH在机体生理与病理条件下都发挥重要的功能,本文综述了NADH和NADPH的合成和降解,重点阐述了NADH、NADPH和NADPH氧化酶的功能,并按炎症、心血管疾病、肿瘤、神经退行性疾病等不同病理状况分别叙述。当前对细胞内NADH(NADPH)作用和代谢的研究已成为国际性的研究热点,其相关机制的探讨将逐步深入。 展开更多

关键词 NAD nadp 代谢 功能

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外源NADP^+和NADPH缓解番茄幼苗NaCl胁迫伤害的初步研究 被引量：1

3

作者 莘冰茹 王松 +2 位作者 周艳 张健伟 刘慧英 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期420-428,共9页

采用营养液培法,以加工番茄品种‘里格尔87-5’为材料,通过对NaCl胁迫下加工番茄幼苗叶片分别喷施5、10、15μmol·L^(-1)NADP^+和NADPH,研究外源NADP^+、NADPH对NaCl胁迫下加工番茄幼苗生长及其抗逆生理指标的影响。结果表明:外源... 采用营养液培法,以加工番茄品种‘里格尔87-5’为材料,通过对NaCl胁迫下加工番茄幼苗叶片分别喷施5、10、15μmol·L^(-1)NADP^+和NADPH,研究外源NADP^+、NADPH对NaCl胁迫下加工番茄幼苗生长及其抗逆生理指标的影响。结果表明:外源喷施NADP^+、NADPH均能改善NaCl处理下加工番茄幼苗的生长性状,增加叶片叶绿素含量,提高根系活力和叶片过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性,降低丙二醛(MDA)质量摩尔浓度。通过不同处理综合指标总加权值比较评价得出:NaCl胁迫下喷施5μmol·L^(-1) NADPH的效果最佳,其次为10μmol·L^(-1)NADP^+。可见,外源喷施NADP^+、NADPH通过增加色素含量,可提高抗氧化酶活性,降低膜脂过氧化水平,在一定程度上缓解盐胁迫对植株的伤害,从而增强对盐胁迫的适应性。 展开更多

关键词 盐胁迫 加工番茄 nadp+ nadpH

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导入外源玉米C_4型NADP-ME基因对小麦光合效能的影响 被引量：5

4

作者 王永霞 杜新华 +4 位作者 许为钢 齐学礼 李艳 王会伟 胡琳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期600-608,共9页

为研究玉米C_4型NADP-ME基因对小麦光合特性的影响,以T_3代转NADP-ME基因小麦株系10T(9)-1-1和10T(9)-225-4及其对照周麦23为试材,进行了分子特征鉴定、光合生理特性分析和单株产量性状调查,并对其作用机制进行了初步解析。结果表明,外... 为研究玉米C_4型NADP-ME基因对小麦光合特性的影响,以T_3代转NADP-ME基因小麦株系10T(9)-1-1和10T(9)-225-4及其对照周麦23为试材,进行了分子特征鉴定、光合生理特性分析和单株产量性状调查,并对其作用机制进行了初步解析。结果表明,外源基因已整合到转基因小麦的基因组中,并能正确转录和翻译;与对照周麦23相比,两个转基因株系在4个测定时期旗叶NADP-ME酶活性均明显提高,而旗叶净光合速率(P_n)则明显下降;尤其在花后第7天,两个转基因株系的酶活性较对照分别提高1.33倍和1.13倍,P_n分别较对照下降17.26%和10.35%;千粒重和籽粒产量较对照均显著下降。与对照周麦23相比,转基因株系10T(9)-225-4利用强光和同化CO_2能力下降,光合效率下降;旗叶气孔张开率和气孔导度均显著下降;苹果酸含量降低了5.6%,丙酮酸含量则提高了17.1%;外施苹果酸可恢复其光合速率。以上研究结果表明,玉米C_4型NADP-ME基因的导入降低了小麦的光合特性,苹果酸含量降低引起的气孔导度下降可能是导致转基因小麦光合效能降低的原因。 展开更多

关键词 转基因小麦 nadp苹果酸酶 净光合速率 气孔导度

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干旱、盐、温度对植物体NADP-苹果酸酶的影响与机理 被引量：12

5

作者 刘增辉 邵宏波 +1 位作者 初立业 张正斌 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期3334-3339,共6页

NADP-苹果酸酶是植物体代谢的重要酶之一,参与了多个代谢过程,在植物体内广泛存在,与各种环境胁迫关系密切。目前,胁迫条件下的植物体NADP-苹果酸酶基因的表达情况以及酶活性的变化是关注的重点,同时,NADP-苹果酸酶在抗胁迫方面的机理... NADP-苹果酸酶是植物体代谢的重要酶之一,参与了多个代谢过程,在植物体内广泛存在,与各种环境胁迫关系密切。目前,胁迫条件下的植物体NADP-苹果酸酶基因的表达情况以及酶活性的变化是关注的重点,同时,NADP-苹果酸酶在抗胁迫方面的机理研究也在逐渐的展开。综述了干旱、盐、高温和低温胁迫条件下NADP-苹果酸酶活性及该酶基因表达变化的特点,揭示了其在对植物体抵御各种胁迫带来的危害时所发挥的作用以及作用机理。 展开更多

关键词 nadp-苹果酸酶 胁迫 基因表达 生理生态机理

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植物NADP^+-依赖型异柠檬酸脱氢酶的分子进化及功能研究进展 被引量：3

6

作者 王鹏 赵旵军 +1 位作者 翟羽佳 朱国萍 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期45-48,共4页

高等植物NADP+-依赖型异柠檬酸脱氢酶(ICDHs)定位于细胞质、线粒体、叶绿体和过氧化物酶体等植物细胞的不同部位,由不同的基因编码,属于一个高度保守的多同工酶蛋白家族。对近年来关于植物NADP+-依赖型异柠檬酸脱氢酶的分子进化及功能... 高等植物NADP+-依赖型异柠檬酸脱氢酶(ICDHs)定位于细胞质、线粒体、叶绿体和过氧化物酶体等植物细胞的不同部位,由不同的基因编码,属于一个高度保守的多同工酶蛋白家族。对近年来关于植物NADP+-依赖型异柠檬酸脱氢酶的分子进化及功能研究进行综述,同时提出了未来植物ICDHs的研究重点和方向。最新的分子系统学分析显示,植物中不同细胞定位的ICDH同工酶聚在各自相应的进化枝上,动物或植物中不同细胞器的ICDH同工酶均来源于各自祖先ICDH基因的独立倍增。最新的功能研究表明,ICDHs催化合成的α-酮戊二酸可为植物细胞对氨的吸收同化提供碳骨架,而NADPH可以维系细胞内的氧化还原平衡,帮助植物抵御氧化胁迫。 展开更多

关键词 高等植物 异柠檬酸脱氢酶 nadp 分子进化 功能

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CAM植物NADP─苹果酸的环境调节 被引量：4

7

作者 王晨 苏小记 吴丽园 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期47-50,共4页

专─ＣＡＭ植物瓦松（Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ）．兼性ＣＡＭ植物长药景天（Ｓｅｄｕｍｓｐｅｃｔａｂｉｌｅ、露花（Ｍｅｓｅｍｂｒｙａｎｔｈｅｍｕｍｃｏｒｄｉｆｏｌｉｕｍ）的ＮＡＤＰ─苹果酸酶活性在２５─５... 专─ＣＡＭ植物瓦松（Ｏｒｏｓｔａｃｈｙｓｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ）．兼性ＣＡＭ植物长药景天（Ｓｅｄｕｍｓｐｅｃｔａｂｉｌｅ、露花（Ｍｅｓｅｍｂｒｙａｎｔｈｅｍｕｍｃｏｒｄｉｆｏｌｉｕｍ）的ＮＡＤＰ─苹果酸酶活性在２５─５５℃的温度范围内，随着温度的升高而增强，高于５５℃后，活性下降；在ｐＨ６─９的范围内，反应系统ｐＨ７．５时，表现出最大活性。苹果酸是该酶反应底物，苹果酸浓度在１─５μｍｏｌ／Ｌ范围内，随着苹果酸浓度增加，酶活性上升，浓度高于５μｍｏｌ／Ｌ，对ＮＡＤＰ─苹果酸酶有抑制作用。光对该酶活性影响不大，在１３５０μｍｏｌ／ｍ２ｓ光照和黑暗条件下，处理４ｈ后，光下酶活性比黑暗下略有提高。看来，ＮＡＤＰ─苹果酸酶活性昼高夜低的变化规律并不是光／暗变化所致。 展开更多

关键词 CAM植物 脱羧酶 nadp─苹果酸酶

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NADP-苹果酸酶活性变化及其在CAM运行中的调节 被引量：6

8

作者 王晨 尉亚辉 吴丽园 《西北植物学报》 CAS CSCD 1997年第2期200-204,共5页

NADP-苹果酸酶是CAM植物一种重要脱羧酶。实验结果表明，专一CAM植物瓦松（Orostachysfimbriatus）和兼性CAM植物长药景天（Sedumspectabile）及露花（Mesembranthemumcordifolium）其NADP-苹果酸酶活性昼高夜低；5－8月，兼性CAM植物... NADP-苹果酸酶是CAM植物一种重要脱羧酶。实验结果表明，专一CAM植物瓦松（Orostachysfimbriatus）和兼性CAM植物长药景天（Sedumspectabile）及露花（Mesembranthemumcordifolium）其NADP-苹果酸酶活性昼高夜低；5－8月，兼性CAM植物长药景天和露花随着C3光合型向CAM型转化，其NADP-苹果酸酶活性逐渐升高，7月底和8月初达到最大值；两种兼性CAM植物经干旱胁迫诱导CAM，NADP-苹果酸酶活性均比C3型增加3倍左右，表明NADP-苹果酸酶在CAM活性调节中起着重要的调节作用。 展开更多

关键词 景天植物酸代谢 CAM植物 nadp-苹果酸酶

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血管紧张素Ⅱ刺激高草酸尿症大鼠肾脏NADPH氧化酶的表达 被引量：3

9

作者 邓耀良 黎承杨 孙丙华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2131-2135,共5页

目的:观察肾素-血管紧张素系统(RAS)和NADPH氧化酶在高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激(OS)形成中的相互作用。方法:采用0.8%乙二醇饮水法诱导建立高草酸尿症大鼠模型。动物分6个组(n=8),A组:空白组;B组:高草酸尿症组;C组:高草酸尿症+apocyni... 目的:观察肾素-血管紧张素系统(RAS)和NADPH氧化酶在高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激(OS)形成中的相互作用。方法:采用0.8%乙二醇饮水法诱导建立高草酸尿症大鼠模型。动物分6个组(n=8),A组:空白组;B组:高草酸尿症组;C组:高草酸尿症+apocynin治疗组;D组:单纯apocynin治疗组;E组:高草酸尿症+losartan治疗组;F组:单纯losartan治疗组。后4组分别灌胃给予apocynin(0.2g·kg-1.d-1)或losartan(30mg·kg-1.d-1)。4周后检测大鼠尿液、肾组织中的OS指标(尿8-IP和肾组织SOD活性),放免法检测肾组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量,免疫组化法观察NADPH氧化酶亚单位P47phox蛋白在肾脏中的表达位置,RT-PCR法检测肾组织p47phox mRNA的表达水平。结果:p47phox在各组大鼠肾脏中都有广泛表达,表达部位包括肾皮质、内髓、外髓。与A组比较,B组尿液8-IP明显增多,肾组织SOD活性降低,肾组织AngⅡ含量增多,p47phox mRNA在肾组织中的表达水平也明显增多。使用apocynin(C组)和losartan(E组)均可抑制肾组织p47phox mRNA的表达,同时肾脏的OS程度减轻。结论:在高草酸尿症大鼠模型中,肾脏p47phox mRNA表达增多,导致肾脏OS;同时肾脏RAS也被激活,后者可通过刺激p47phox mRNA的表达而促进肾脏OS程度增加。 展开更多

关键词 高草酸尿症 氧化性应激 nadp氧化酶 APOCYNIN 洛沙坦 肾

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玉米C_4型NADP-ME的生物信息学分析 被引量：1

10

作者 李振华 张立军 +4 位作者 崔震海 朱延姝 樊金娟 阮燕晔 汪澈 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期61-64,共4页

利用生物信息学软件对GeneBank上注册的玉米C4型NADP-ME进行氨基酸组成、功能域、二级结构、疏水性、导肽、亚细胞定位、蛋白质功能及系统进化分析和预测。结果表明,NADP-ME蛋白是等电点为6.09的亲水性不稳定蛋白,包含一个结合NAD(P)的... 利用生物信息学软件对GeneBank上注册的玉米C4型NADP-ME进行氨基酸组成、功能域、二级结构、疏水性、导肽、亚细胞定位、蛋白质功能及系统进化分析和预测。结果表明,NADP-ME蛋白是等电点为6.09的亲水性不稳定蛋白,包含一个结合NAD(P)的结构域和一个N-末端区域,属于裂解酶类,具有能量代谢的功能,定位于叶绿体中;α螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,β折叠和伸展链散布其中;玉米C4型NADP-ME与高粱、水稻等植物的NADP-ME基因有较高的同源性。 展开更多

关键词 玉米 nadp—ME 结构与功能预测 进化树

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巴西橡胶树中2个NADP-苹果酸酶基因的克隆和表达特性分析 被引量：1

11

作者 曹冰 龙翔宇 +1 位作者 肖小虎 唐朝荣 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期872-881,共10页

从橡胶树中克隆2个NADP-ME(苹果酸酶)基因的全长cDNA,分别命名为HbNADP-ME1和HbNADP-ME2。HbNADP-ME1和HbNADP-ME2 cDNA全长分别为2 428、2 139 bp,分别编码643、593个氨基酸组成的蛋白,二者的氨基酸序列一致性高达87.25%,且分别与蓖麻... 从橡胶树中克隆2个NADP-ME(苹果酸酶)基因的全长cDNA,分别命名为HbNADP-ME1和HbNADP-ME2。HbNADP-ME1和HbNADP-ME2 cDNA全长分别为2 428、2 139 bp,分别编码643、593个氨基酸组成的蛋白,二者的氨基酸序列一致性高达87.25%,且分别与蓖麻和杨树的一个NADP-ME序列具有较高的序列一致性。2个HbNADP-ME蛋白都含有典型的植物NADP-ME蛋白的保守结构域,均富含亮氨酸(Leu),同属于非分泌型稳定蛋白。2个HbNADP-ME基因在橡胶树不同组织中的表达存在明显差异,在根中的表达量最高,种子和花中的表达量次之;另外,HbNADP-ME1基因在胶乳中受机械伤害有下调表达趋势,HbNADP-ME2基因在胶乳中受割胶处理也表现出下调表达趋势,而低温胁迫则显著诱导2个基因在叶片和根中的表达。结果说明,HbNADP-ME基因可能参与橡胶树的抗逆应答及代谢调控(包括胶乳代谢调控)。此结果为深入揭示橡胶树中NADP-ME基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 nadp-ME 基因克隆 表达分析 胁迫 代谢

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有氧运动中NADPH氧化酶介导产生的活性氧对大鼠神经胶质细胞活力的影响 被引量：2

12

作者 董静梅 郭层城 《中国体育科技》 CSSCI 北大核心 2007年第6期118-121,共4页

建立大鼠有氧运动模型,原代培养了有氧运动后大鼠神经胶质细胞,阐明有氧运动后类NADPH氧化酶介导产生的活性氧(ROS)对细胞正常生理功能的影响。通过实验发现,有氧运动后大鼠神经胶质细胞中O2.-和H2O2生成均明显增加,而人工饲喂NADPH氧... 建立大鼠有氧运动模型,原代培养了有氧运动后大鼠神经胶质细胞,阐明有氧运动后类NADPH氧化酶介导产生的活性氧(ROS)对细胞正常生理功能的影响。通过实验发现,有氧运动后大鼠神经胶质细胞中O2.-和H2O2生成均明显增加,而人工饲喂NADPH氧化酶的抑制剂二联苯碘(diphenylene iodonium,DPI)或夹竹桃麻素(apocynin,APO)后,均明显地降低由运动引起的大鼠神经胶质细胞O2.-和H2O2生成量;细胞活性的测定显示,DPI、APO、超氧化物歧化酶+过氧化氢酶均能明显降低运动后大鼠神经胶质细胞活性。表明有氧运动中类NADPH氧化酶介导产生的ROS是大鼠神经胶质细胞生存所必需,过度进补抗氧化剂将干扰细胞的正常生理活动甚至导致细胞死亡。 展开更多

关键词 有氧运动 nadpH氧化酶 活性氧 星形神经胶质细胞 细胞活性 鼠 动物实验

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甜菜NADP-ME基因家族的生物信息学分析

13

作者 李思琪 迪娜尔·叶尔兰 +5 位作者 周婉婷 汪曼 李佳佳 刘大丽 兴旺 常广玉 《中国糖料》 2021年第4期17-25,共9页

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-苹果酸酶(NADP-malic enzyme,NADP-ME)由小基因家族编码,在植物生长发育和应对逆境胁迫中发挥重要作用。为了进一步筛选甜菜NADP-ME基因并分析其功能,本研究对该家族成员进行了详细的生物信息学分析。结果显示... 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-苹果酸酶(NADP-malic enzyme,NADP-ME)由小基因家族编码,在植物生长发育和应对逆境胁迫中发挥重要作用。为了进一步筛选甜菜NADP-ME基因并分析其功能,本研究对该家族成员进行了详细的生物信息学分析。结果显示,甜菜基因组共有5个NADPME基因,基因长度介于6537 bp~19759 bp,并且所有BvNADP-ME均为亲水性蛋白,主要定位于线粒体、质膜、内质网和细胞核上,无信号肽,不存在跨膜结构域,不属于跨膜蛋白。除BvNADP-ME5外,其它家族成员均为酸性蛋白质;其中BvNADP-ME2、3、4皆为不稳定蛋白;导肽分析表明BvNADP-ME3含有叶绿体转运肽,BvNADP-ME4、5均含有线粒体靶向肽。染色体定位分析发现,BvNADP-ME5、2、1主要分布在1、2、8号染色体上。蛋白二三级结构预测具有相似的特征,α-螺旋和无规则卷曲为BvNADP-MEs的主要结构元件。系统进化分析表明BvNADP-MEs可分为6个亚组(I~VI),其中甜菜与菠菜NADP-ME亲缘关系最近,其次是藜麦,最远是拟南芥。蛋白质保守基序分析表明甜菜NADP-ME家族蛋白包含14个基序,其中Motif4、Motif6、7、8和Motif11、12可能与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的结合有关。分析BvNADP-ME基因家族启动子区域的顺式作用元件,结果显示各成员启动子均含有植物激素响应元件和非生物胁迫响应元件。本研究对5个BvNADP-ME基因家族成员的生物信息学进行分析,为深入研究甜菜NADP-ME基因功能提供参考依据,也为分子抗性育种以及提高甜菜的品质和产量提供新思路。 展开更多

关键词 甜菜 nadp-ME基因家族 生物信息学 逆境防御

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松叶猪毛菜NADP-苹果酸酶基因家族及启动子克隆分析 被引量：3

14

作者 张玉慧 王玉兰 +1 位作者 夏春兰 闻志彬 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期760-769,共10页

NADP-苹果酸酶(NADP-ME)是C_(4)植物的关键光合酶,在生物和非生物胁迫中发挥了重要的作用。为了进一步研究该酶编码基因的功能,该研究以典型荒漠C_(3)-C_(4)中间型植物松叶猪毛菜为研究对象,在克隆得到NADP-ME家族基因序列的基础上,研... NADP-苹果酸酶(NADP-ME)是C_(4)植物的关键光合酶,在生物和非生物胁迫中发挥了重要的作用。为了进一步研究该酶编码基因的功能,该研究以典型荒漠C_(3)-C_(4)中间型植物松叶猪毛菜为研究对象,在克隆得到NADP-ME家族基因序列的基础上,研究其表达部位及在非生物胁迫下的表达模式,并克隆其启动子序列分析响应非生物胁迫的元件差异。结果表明:(1)成功获得松叶猪毛菜3个NADP-MEs,命名为SaNADP-ME1、SaNADP-ME2和SaNADP-ME4,CDS序列长度分别为1755、1758和1941 bp。(2)SaNADP-ME1主要在根中表达,SaNADP-ME2和SaNADP-ME4主要在叶中表达;在ABA、NaCl、NAHCO_(3)和PEG_(6000)胁迫下松叶猪毛菜幼苗中3个NADP-MEs均可被诱导表达,且SaNADP-ME2和SaNADP-ME4的响应表达模式相似。(3)成功克隆得到SaNADP-ME1、SaNADP-ME2和SaNADP-ME4启动子区域2351、1655和2887 bp。生物信息学分析发现它们都含有基本启动子元件以及响应外界刺激的元件。 展开更多

关键词 nadp-ME家族 C_(4)基因表达 C_(3)-C_(4)中间型植物 松叶猪毛菜

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铽-依诺沙星络合物与辅酶Ⅱ(NADP)的相互作用研究及其分析应用

15

作者 苗延虹 侯法菊 《分析科学学报》 CAS CSCD 2008年第3期315-318,共4页

实验发现，在pH=7．80最佳酸度下，辅酶Ⅱ（NADP）能使依诺沙星-Tb^3＋位于545nm处的特征荧光强度显著增强。根据这一性质，以依诺沙星-Tb^3＋作为荧光探针，建立了一种利用荧光光谱测量NADP的新方法，线性范围为6．66×10^-7～3．3... 实验发现，在pH=7．80最佳酸度下，辅酶Ⅱ（NADP）能使依诺沙星-Tb^3＋位于545nm处的特征荧光强度显著增强。根据这一性质，以依诺沙星-Tb^3＋作为荧光探针，建立了一种利用荧光光谱测量NADP的新方法，线性范围为6．66×10^-7～3．33×10^-5 mol·L^-1，检出限为5．60×10^-8 mol·L^-1。该法灵敏度高，选择性好，干扰少，操作简单，用于合成样中NADP的测定，结果满意。 展开更多

关键词 依诺沙星 TB^3+ 荧光光度法 辅酶Ⅱ

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超高效液相色谱-质谱联用法同时快速测定细胞中的4种吡啶核苷酸辅酶 被引量：1

16

作者 霍颖异 谢木西丁·买热帕提 吴敏 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期332-339,共8页

建立了超高效液相色谱-质谱联用法同时测定细胞内4种吡啶核苷酸辅酶(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP^(+))以及它们的还原态(NADH和NADPH))的方法。样品经甲醇低温快速提取后,在新型混合模式Atlantis PRE... 建立了超高效液相色谱-质谱联用法同时测定细胞内4种吡啶核苷酸辅酶(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP^(+))以及它们的还原态(NADH和NADPH))的方法。样品经甲醇低温快速提取后,在新型混合模式Atlantis PREMIER BEH C_(18)AX色谱柱上分离,10 mmol/L甲酸铵-乙腈作为流动相在8 min内完成梯度洗脱分离,采用质谱多反应检测(MRM)模式,负离子[M-H]^(-)扫描检测。对于4种吡啶核苷酸辅酶,本方法均在较宽浓度范围内呈良好线性关系,检出限和定量限分别在0.03~0.30 pmol和0.06~1.20 pmol范围内;检测准确度在92.7%~107.6%之间,相对标准偏差在1.98%~7.57%之间。该方法操作简便、分析快速、准确度高、灵敏度好,适用于人和微生物等多种细胞样品中吡啶核苷酸辅酶的快速定量测定,为细胞生理代谢研究提供可靠的技术支持。 展开更多

关键词 超高效液相色谱 质谱 吡啶核苷酸辅酶 nadpH nadp^(+) NADH NAD^(+) 细胞

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苹果酸脱氢酶的结构及功能 被引量：42

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作者 汪新颖 王波 +1 位作者 侯松涛 朱国萍 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期69-72,共4页

苹果酸脱氢酶(MDH)可以催化苹果酸与草酰乙酸间的可逆转换,主要参与TCA循环、光合作用、C4循环等代谢途径。苹果酸脱氢酶可分为NAD-依赖性的MDH(NAD-MDH)和NADP-依赖性的MDH(NADP-MDH)。在所有真核生物和大部分细菌中,MDH通常形成同源... 苹果酸脱氢酶(MDH)可以催化苹果酸与草酰乙酸间的可逆转换,主要参与TCA循环、光合作用、C4循环等代谢途径。苹果酸脱氢酶可分为NAD-依赖性的MDH(NAD-MDH)和NADP-依赖性的MDH(NADP-MDH)。在所有真核生物和大部分细菌中,MDH通常形成同源二聚体,在少数细菌中为四聚体。不同来源的MDH催化机制和它们的动力学性质十分类似,显示了它们具有高度的结构相似性。MDH的功能多样,包括线粒体中的能量提供和植物的活性氧代谢等。回顾了苹果酸脱氢酶在生理学、医学、农学领域的研究进展,并针对其生化特性、空间结构特点、催化机理等生物学功能的分子生物学进展进行了综述。 展开更多

关键词 苹果酸脱氢酶 NAD nadp 催化机制 功能

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猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定 被引量：17

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作者 赵华梅 潘秀珍 +3 位作者 王长军 郭恒彬 李先富 唐家琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期22-25,共4页

目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层... 目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 谷氨酸脱氢酶 GDH家族I nadp(H)一特异性GDH

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超高效液相色谱-质谱法测定细胞中嘌呤核苷酸的方法探究 被引量：7

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作者 姜丹丹 李伟 +4 位作者 周怀彬 张婷 许芳 武佳 吕建新 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1202-1206,共5页

建立了检测细胞中嘌呤核苷酸（ATP、ADP、AMP、NAD＋和NADP＋）的超高效液相色谱-质谱（UP-LC-MS）分析方法.采用KinetexTM HILIC柱（50 mm ×4.6 mm,2.1 μm）进行分离,对细胞样品的萃取方法、流动相组成及质谱参数进行优化.方法... 建立了检测细胞中嘌呤核苷酸（ATP、ADP、AMP、NAD＋和NADP＋）的超高效液相色谱-质谱（UP-LC-MS）分析方法.采用KinetexTM HILIC柱（50 mm ×4.6 mm,2.1 μm）进行分离,对细胞样品的萃取方法、流动相组成及质谱参数进行优化.方法学确证表明：各待测物在1.0 ～ 100 μmol/L范围内线性关系良好,相关系数（r）均大于0.99,平均回收率为95.7％～101.1％,相对标准偏差为1.2％～6.1％.本方法的灵敏度高、简便快速、重复性好,可用于细胞中能量代谢的研究. 展开更多

关键词 超高效液相色谱-质谱法 细胞 ATP ADP AMP NAD+ nadp+

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夹竹桃麻素对兔心房电重构时氧化应激损伤保护作用的研究 被引量：5

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作者 张德贤 任凯 +3 位作者 官媛 张晔 王玉堂 单兆亮 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期919-921,共3页

目的研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(APO)对兔心房电重构引起氧化应激损伤的保护作用。方法选择18只新西兰白兔,随机分为对照组、心房快速起搏(RAP)组和APO+RAP组,每组6只。术前3 d,APO+RAP组给予APO... 目的研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(APO)对兔心房电重构引起氧化应激损伤的保护作用。方法选择18只新西兰白兔,随机分为对照组、心房快速起搏(RAP)组和APO+RAP组,每组6只。术前3 d,APO+RAP组给予APO 30 mg/(kg·d)灌胃,对照组和RAP组术前生理盐水等体积灌胃。对照组术中未给予RAP,RAP组和APO+RAP组术中以最快能维持心房1:1起搏频率(500～600/min)给予快速刺激3 h。在完成电生理检查后,立即取出心脏并分离左、右心房和肺静脉,分别检测各组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性和钙含量。结果与对照组比较,RAP组左、右心房、肺静脉SOD活性明显降低(P<0.05),LDH活性和钙含量明显升高(P<0.05),APO+RAP组左、右心房、肺静脉SOD活性、LDH活性和钙含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与RAP组比较,APO+RAP组左、右心房、肺静脉SOD活性明显升高,左、右心房LDH活性明显降低(P<0.05)。对照组肺静脉钙含量明显高于左、右心房(P<0.05)。结论心房颤动能够引起氧化应激损伤,APO能部分预防氧化应激损伤发生。 展开更多

关键词 夹竹桃科 nadp 氧化性应激 心房 超氧化物歧化酶 乳酸脱氢酶类

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