N-糖蛋白去糖基化酶(PNGase)的研究进展

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作者 陈妍雯 袁舒颖 +6 位作者 刘瑞杰 张绍兴 邹琳 芦鑫荣 孔维溧 陈力 孙桂芹 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1630-1637,共8页

N-糖蛋白去糖基化酶(PNGase)是一种广泛存在于真菌、植物、哺乳动物中的去糖基化酶,可以水解N-糖蛋白或N-糖肽上天冬酰胺与寡糖链连接的化学键,并释放出完整的N-寡糖。PNGase在生物体内参与蛋白质降解、器官发育、个体生长等过程。人PNG... N-糖蛋白去糖基化酶(PNGase)是一种广泛存在于真菌、植物、哺乳动物中的去糖基化酶,可以水解N-糖蛋白或N-糖肽上天冬酰胺与寡糖链连接的化学键,并释放出完整的N-寡糖。PNGase在生物体内参与蛋白质降解、器官发育、个体生长等过程。人PNGase基因功能缺陷会导致先天性去糖基化障碍,小鼠PNGase缺陷会导致胚胎致死性,线虫PNGase缺陷使其寿命下降。本文对PNGase在不同物种的分布、蛋白质结构、酶学功能及生物学功能进行阐述,为PNGase的生理病理功能及致病机制的基础研究提供思路,为PNGase作为糖生物学工具酶或药物开发的创新应用研究奠定基础。 展开更多

关键词 n-糖蛋白去糖基化酶 分布 蛋白质结构 酶学功能 生物学功能

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基于非标记定量技术的驼乳与牛乳N-糖蛋白质组学比较分析

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作者 李丹蕾 孔夏冰 +3 位作者 于悦 胡谦 张九凯 陈颖 《食品科学》 北大核心 2025年第17期1-9,共9页

为深入对比驼乳和牛乳中N-糖蛋白的差异特征,采用非标记定量N-糖蛋白质组学技术,详细比较分析两种乳品中N-糖蛋白的组成及其N-糖基化位点的数量,并利用生物信息学分析了两种乳品N-糖蛋白潜在的生物学功能。驼乳中鉴定出137个N-糖蛋白和... 为深入对比驼乳和牛乳中N-糖蛋白的差异特征,采用非标记定量N-糖蛋白质组学技术,详细比较分析两种乳品中N-糖蛋白的组成及其N-糖基化位点的数量,并利用生物信息学分析了两种乳品N-糖蛋白潜在的生物学功能。驼乳中鉴定出137个N-糖蛋白和224个N-糖基化位点;牛乳鉴定出116个N-糖蛋白和183个N-糖基化位点。相较于牛乳,驼乳含有更丰富的N-糖蛋白和N-糖基化位点。在鉴定到的N-糖蛋白中,大多数仅具有1个N-糖基化位点,少数糖蛋白的糖基化程度较高。基因本体论富集分析表明,差异表达的N-糖蛋白主要分布在细胞外区域和细胞外间隙,包含在免疫应答中发挥着重要作用的N-糖蛋白,涉及酶活性、细胞外基质构建、结合作用和信号传导。京都基因与基因组百科全书富集分析显示,差异表达的N-糖蛋白中主要富集于补体和凝血级联反应、溶酶体等代谢通路。上述研究结果为全面解析牛乳和驼乳的糖蛋白组成及糖基化修饰差异提供了科学依据。 展开更多

关键词 驼乳 牛乳 n-糖蛋白质组学 糖蛋白 n-糖基化位点 差异比较

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N-糖基化对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中异源表达的影响 被引量：5

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作者 马清 蔡瑞 +3 位作者 姜风超 马立娟 杜丽平 肖冬光 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第16期86-91,共6页

为研究N-糖基化对里氏木霉β-甘露聚糖酶(β-mannanase,Man1)在毕赤酵母GS115中异源表达的影响,采用定点突变的方法,将Man1上3个N-糖基化修饰位点(N131、N158和N329)上的天冬酰胺用中性谷氨酰胺取代。结果发现,N-糖基化位点的突变对Man... 为研究N-糖基化对里氏木霉β-甘露聚糖酶(β-mannanase,Man1)在毕赤酵母GS115中异源表达的影响,采用定点突变的方法,将Man1上3个N-糖基化修饰位点(N131、N158和N329)上的天冬酰胺用中性谷氨酰胺取代。结果发现,N-糖基化位点的突变对Man1的转录水平无明显影响,突变后获得的Man1表观分子质量有轻微下降,与Man1相比,3个突变体N131、N158和N329的甘露聚糖酶活力分别降低了85.43%和79.48%和16.3%;而热稳定性分别提高了7.87%、13.5%和15.37%。由此可见,N-糖基化修饰对于β-甘露聚糖酶的高效表达是必需的,其中N131和N158糖基化位点尤为重要,但是会稍微降低β-甘露聚糖酶的热稳定性。 展开更多

关键词 Β-甘露聚糖酶 n-糖基化 定点突变 酶活力 热稳定性

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昆虫与哺乳动物蛋白质N-糖基化修饰异同的比较及其潜在的应用意义 被引量：2

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作者 韦亚东 牛淼淼 +2 位作者 刘子瑜 车凤玉 张国政 《中国蚕业》 2011年第2期8-13,共6页

基于过去多年来所积累的关于昆虫蛋白质糖基化修饰的研究成果,对昆虫与哺乳动物的蛋白质N-糖基化修饰途径与分子机制的异同进行了比较分析,同时进一步讨论如何在人们前期研究的基础上,对昆虫杆状病毒表达系统的蛋白质糖基化修饰途径做... 基于过去多年来所积累的关于昆虫蛋白质糖基化修饰的研究成果,对昆虫与哺乳动物的蛋白质N-糖基化修饰途径与分子机制的异同进行了比较分析,同时进一步讨论如何在人们前期研究的基础上,对昆虫杆状病毒表达系统的蛋白质糖基化修饰途径做些改造性工作,以期能够直接利用该昆虫杆状病毒表达系统生产人源化糖蛋白。 展开更多

关键词 昆虫 哺乳动物 杆状病毒 表达系统 n-糖基化修饰 人源化糖蛋白

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哺乳动物N-糖基化途径中关键酶唾液酸合酶和CMP-唾液酸合成酶基因在转基因家蚕中的表达

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作者 汪泰初 李瑞雪 +1 位作者 郭秋红 谭安江 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期853-858,共6页

对昆虫的N-糖基化途径进行修饰改变是扩展昆虫蛋白表达系统应用范围的重要途径。本研究利用基于piggyBac转座子的家蚕Bombyx mori转基因技术表达昆虫所缺乏的哺乳类糖基化途径中的关键基因,构建了可以同时表达小鼠Mus musculus唾液酸合... 对昆虫的N-糖基化途径进行修饰改变是扩展昆虫蛋白表达系统应用范围的重要途径。本研究利用基于piggyBac转座子的家蚕Bombyx mori转基因技术表达昆虫所缺乏的哺乳类糖基化途径中的关键基因,构建了可以同时表达小鼠Mus musculus唾液酸合酶和小鼠CMP-唾液酸合成酶两个基因的piggyBac表达载体,选用家蚕肌动蛋白A3启动子控制基因的表达,并导入3×P3启动子控制下的增强绿色荧光蛋白EGFP作为分子标记。在得到的G1代转基因家蚕中对转入的基因进行了分子水平的鉴定和分析,为在家蚕这种模式昆虫中模拟哺乳类糖基化途径奠定了基础。 展开更多

关键词 糖蛋白 n-糖基化途径 家蚕 转基因 唾液酸合酶 CMP-唾液酸合成酶

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转基因植物重组糖蛋白糖基化研究现状与植物重组糖蛋白糖结构的改造策略

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作者 陈敏 刘德虎 王鹏 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期107-110,共4页

本文综述了转基因植物重组蛋白质糖基化的研究现状,并着重介绍了转基因重组蛋白N-糖链的结构以及改造植物重组糖蛋白的糖结构的两种重要策略--将蛋白表达产物滞留在细胞内质网中或改变植物的糖基化过程.最后对转基因植物重组蛋白糖链研... 本文综述了转基因植物重组蛋白质糖基化的研究现状,并着重介绍了转基因重组蛋白N-糖链的结构以及改造植物重组糖蛋白的糖结构的两种重要策略--将蛋白表达产物滞留在细胞内质网中或改变植物的糖基化过程.最后对转基因植物重组蛋白糖链研究未来的发展作了展望. 展开更多

关键词 转基因植物 研究现状 糖蛋白 糖基化 糖结构 改造策略 重组蛋白质 表达产物 n-糖链 内质网 细胞

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糖蛋白过敏原N-糖链与过敏的相关性研究

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作者 张瑜芯 刘瑞杰 +8 位作者 张绍兴 袁舒颖 陈妍雯 叶以琳 林谦阁 芦鑫荣 童永亮 陈力 孙桂芹 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1023-1033,共11页

糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质,糖链与蛋白质之间以共价键相连。N-糖蛋白为常见过敏原之一,主要来源于食物、吸入物、昆虫毒素等,能够引起过敏反应。N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构影响过敏原与IgE的结合,影响抗原提呈细胞(APC)对过敏原... 糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质,糖链与蛋白质之间以共价键相连。N-糖蛋白为常见过敏原之一,主要来源于食物、吸入物、昆虫毒素等,能够引起过敏反应。N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构影响过敏原与IgE的结合,影响抗原提呈细胞(APC)对过敏原的识别和提呈。本文在介绍与过敏相关的N-糖蛋白、常见N-糖蛋白过敏原的N-糖链结构及与过敏相关的糖基化酶的基础上,进一步分析过敏原N-糖链影响过敏的机制,为临床预防与治疗过敏性疾病提供新的思路。 展开更多

关键词 过敏反应 n-糖基化 n-糖链结构 糖基化相关酶 过敏机制

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N-糖基化蛋白质组样品富集策略的研究进展 被引量：6

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作者 邵文亚 梁玉 +2 位作者 梁振 张丽华 张玉奎 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1212-1216,共5页

蛋白质的糖基化是生物体内重要的蛋白质翻译后修饰之一,但其丰度通常较低,糖基化蛋白质酶解肽段中仅有2%~5%为糖基化肽段,因此,为实现糖基化蛋白质组的深度覆盖分析,对糖基化蛋白质/肽段进行富集是非常必要的。该文对糖基化蛋白质组样... 蛋白质的糖基化是生物体内重要的蛋白质翻译后修饰之一,但其丰度通常较低,糖基化蛋白质酶解肽段中仅有2%~5%为糖基化肽段,因此,为实现糖基化蛋白质组的深度覆盖分析,对糖基化蛋白质/肽段进行富集是非常必要的。该文对糖基化蛋白质组样品不同富集方法的原理、特点以及最新研究进展进行了综述,同时也对N-糖基化蛋白质组学富集策略的发展前景进行了展望。 展开更多

关键词 糖蛋白质组学 n-糖基化 糖肽 糖蛋白 富集

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N-糖基化改造提高Aspergillus fumigatus生淀粉糖化酶的催化效率 被引量：2

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作者 宋伟艳 佟毅 +4 位作者 李义 陶进 梁颖超 刘松 李江华 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第19期1-6,共6页

生淀粉糖化酶(raw starch glucoamylase,RSGA)可以直接作用于未糊化淀粉颗粒。该研究基于Aspergillus fumigatus来源RSGA氨基酸序列分析发现,Asn121、Asn422和Asn610位点均为Asn-Xaa-Ser形式的糖基化基序,具有将其突变为Asn-Xaa-Thr形... 生淀粉糖化酶(raw starch glucoamylase,RSGA)可以直接作用于未糊化淀粉颗粒。该研究基于Aspergillus fumigatus来源RSGA氨基酸序列分析发现,Asn121、Asn422和Asn610位点均为Asn-Xaa-Ser形式的糖基化基序,具有将其突变为Asn-Xaa-Thr形式糖基化基序的潜力。首先,利用NetNGlyc 1.0 Server评估突变序列N-糖基化的可能性,并获得突变体S123T(Asn121-Pro122-Thr123)、S424T(Asn422-Gly423-Thr424)和S612T(Asn610-Arg611-Thr612)。突变体在Komagataella phaffii中表达并完成糖基化,利用去糖基化酶EndoH处理进一步验证突变体均成功被糖基化。在此基础上,以生玉米淀粉为底物,在40℃,pH 4.6的条件下分析了突变体S123T、S424T和S612T的催化效率(k cat/K m),分别是RSGA的1.31、1.29和1.15倍,这主要是由于K m值降低导致突变体对底物的亲和力增加造成的。此外,蛋白浓度及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析显示突变体S123T表达量提高了9.3%,且糖基化效果显著。酶学性质分析结果显示,重组酶的最适反应温度从70℃降低到60℃。研究结果表明,N-糖基化基序改造是一种有效的提高RSGA的催化效率的策略。 展开更多

关键词 生淀粉糖化酶 生玉米淀粉 Komagataella phaffii n-糖基化 催化效率

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N-糖基化对重组木聚糖酶XynA酶学特性的影响 被引量：1

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作者 张笑雨 高思宇 +1 位作者 李秀婷 杨然 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期137-143,160,共8页

为实现木聚糖酶的高效表达,扩大实际生产应用,本实验将木聚糖酶基因xynA在毕赤酵母中进行重组表达,同时采用糖基化抑制剂衣霉素处理毕赤酵母细胞,以此来探讨N-糖基化对木聚糖酶Xyn A酶学性质的影响。结果表明,SDS-PAGE电泳图谱显示木聚... 为实现木聚糖酶的高效表达,扩大实际生产应用,本实验将木聚糖酶基因xynA在毕赤酵母中进行重组表达,同时采用糖基化抑制剂衣霉素处理毕赤酵母细胞,以此来探讨N-糖基化对木聚糖酶Xyn A酶学性质的影响。结果表明,SDS-PAGE电泳图谱显示木聚糖酶XynA发生了N-糖基化修饰,分子量约为45 k Da,酶活为406.6 U/m L,最适p H及反应温度分别为5.0和65℃;而添加不同浓度衣霉素处理后的木聚糖酶最适p H不变,最适反应温度下降5℃,随着衣霉素浓度的增加,去糖基化的木聚糖酶酶活力、分泌量及温度稳定性均有所下降,且当衣霉素添加浓度为15μg/m L时,剩余酶活为53.6%。去糖基化的木聚糖酶耐受胃蛋白酶的能力较糖基化的有所增强,Na^+、K^+、Li^+、Ca^(2+)、Al^(3+)、EDTA相对于糖基化的木聚糖酶表现出了一定的激活作用。以上结果说明N-糖基化作为一种重要的翻译后修饰对木聚糖酶Xyn A的分泌及热稳定性有促进作用。 展开更多

关键词 n-糖基化 木聚糖酶 衣霉素 酶学性质

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米糠蛋白糖基化与非酶褐变机理的研究 被引量：1

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作者 陶醉 徐丽 +2 位作者 谢岚 全珂 易翠平 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期20-25,共6页

米糠蛋白作为一种优质蛋白因易褐变而使商业价值受限。本研究以脱脂米糠为原料,测定提取的RBP及其4种分级蛋白的色度并观察褐变现象,发现RBP的颜色随温度的升高而加深,且4种分级蛋白中清蛋白与谷蛋白的颜色显著深于醇溶蛋白与球蛋白(P&l... 米糠蛋白作为一种优质蛋白因易褐变而使商业价值受限。本研究以脱脂米糠为原料,测定提取的RBP及其4种分级蛋白的色度并观察褐变现象,发现RBP的颜色随温度的升高而加深,且4种分级蛋白中清蛋白与谷蛋白的颜色显著深于醇溶蛋白与球蛋白(P<0.05)。为探究非酶褐变机理,对分级蛋白的结构进行了分析。结果表明,FT-IR图谱在3100~3300、1156 cm^(-1)附近存在糖基化反应特征峰,推断有糖蛋白的存在;进一步采用PAS染色证实有糖蛋白的存在。LC-MS/MS分析显示,清蛋白和谷蛋白糖基化修饰的糖类比球蛋白和醇溶蛋白更多,结合的糖基主要是己糖、庚糖、岩藻糖等单糖。表明是RBP的糖基化导致非酶褐变反应的发生,并且可能与清蛋白、谷蛋白的糖基化结构相关。 展开更多

关键词 米糠蛋白 糖基化 非酶褐变 分级蛋白 糖蛋白

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糖基化改造β-葡萄糖醛酸苷酶的热稳定性 被引量：7

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作者 王小艳 樊艳爽 +2 位作者 韩蓓佳 冯旭东 李春 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第9期3669-3677,共9页

以N-糖基化提高毕赤酵母重组表达β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-P)的热稳定性为目的,在PGUS-P模拟结构分析的基础上,半理性方法设计并通过定点突变引入具有EAS(enhanced aromatic sequence)序列特征的新N-糖基化位点,经毕赤酵母重组表达后,获... 以N-糖基化提高毕赤酵母重组表达β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-P)的热稳定性为目的,在PGUS-P模拟结构分析的基础上,半理性方法设计并通过定点突变引入具有EAS(enhanced aromatic sequence)序列特征的新N-糖基化位点,经毕赤酵母重组表达后,获得了3个新糖基化的突变酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259。反应动力学分析表明,与原始PGUS-P相比,突变酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259催化甘草酸水解的Km变小,Kcat/Km增加,表明其对底物甘草酸的亲和力和催化效率均得到提高。热稳定性分析表明,PGUS-P-35和PGUS-P-259的热稳定性得到改善,在65℃下保温90 min,其热稳定性相对PGUS-P分别提高了13%和11%。研究表明在蛋白质的合适位点引入糖基修饰对提高蛋白的热稳定性具有促进作用。 展开更多

关键词 n-糖基化 Β-葡萄糖醛酸苷酶 热稳定性 分子模拟 动力学

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基于Endo-M N175Q糖链转移反应与丙酮富集糖肽的LC-MS分析糖蛋白N-糖链 被引量：2

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作者 陈奕彤 张斯然 +1 位作者 张春波 金东日 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1311-1315,共5页

基于化学酶标记和丙酮富集糖肽方法,建立了一种可靠、有效、简单的糖蛋白N-糖链分析方法。以唾液酸糖肽(SGP)为模型糖肽,比较了样品中丙酮加入量对SGP的富集效果,最终选择加入样品体积5倍量的丙酮。用丙酮富集经胰蛋白处理的核糖核酸酶B... 基于化学酶标记和丙酮富集糖肽方法,建立了一种可靠、有效、简单的糖蛋白N-糖链分析方法。以唾液酸糖肽(SGP)为模型糖肽,比较了样品中丙酮加入量对SGP的富集效果,最终选择加入样品体积5倍量的丙酮。用丙酮富集经胰蛋白处理的核糖核酸酶B(RNase B)酶解液中的糖肽,以富集分离得到的糖肽(糖基供体)和PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc(糖基受体)作为酶反应底物,进行Endo-M N175Q的转糖基反应,得到PDPZBoc-Asn-GlcNAc-N-糖链标记物。采用YMC C18色谱柱为分析柱,10 mmol/L甲酸铵-乙腈为流动相梯度洗脱,经液相色谱-串联质谱(LC-MS)检测得到5种高甘露糖型糖链。结果表明,丙酮可有效地富集大量肽和少量糖肽混合溶液中的糖肽,Endo-M N175Q可将天然糖肽的糖链转移到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc受体上。将该方法应用于胎球蛋白N-糖链分析,检测到5种复杂型N-糖链。该研究为各种糖蛋白N-糖链检测提供了新的分析方法。 展开更多

关键词 糖蛋白 n-糖链 酶标记 液相色谱-质谱(LC-MS)

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N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶的功能与机制

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作者 芦鑫荣 童永亮 +9 位作者 孔维溧 邹琳 沈旦枫 吕绍衔 刘瑞杰 张绍兴 张瑜芯 侯琳琳 孙桂芹 陈力 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第5期985-999,共15页

N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(endo-beta-N-acetylglucosaminidase,ENGase)广泛分布于各种生物中,主要通过降解错误折叠的糖蛋白,参与细胞和生命的调控。ENGase也是糖链编辑的有效工具酶,可专一性水解游离寡糖链及糖肽或糖蛋白上核心五糖... N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(endo-beta-N-acetylglucosaminidase,ENGase)广泛分布于各种生物中,主要通过降解错误折叠的糖蛋白,参与细胞和生命的调控。ENGase也是糖链编辑的有效工具酶,可专一性水解游离寡糖链及糖肽或糖蛋白上核心五糖的N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)之间的β-14糖苷键。其水解产物是寡糖链和一个GlcNAc,或带有一个GlcNAc的糖肽或糖蛋白。本文对ENGase的发现、分布、蛋白质结构、酶学反应及生物学功能进行阐述,为ENGase的生物学研究提供思路,为糖生物学与糖组学的应用研究奠定基础。 展开更多

关键词 n-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶 n-糖基化 游离寡糖 糖链编辑 糖生物学

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中药多糖及人血清中糖蛋白N-糖链的毛细管电泳指纹图谱研究 被引量：5

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作者 李凤 管月清 +1 位作者 张艳梅 康经武 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1516-1521,共6页

该文建立了激光诱导荧光毛细管电泳(CE-LIF)检测中药多糖和人血清糖蛋白中N-糖链的分析方法。利用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸钠(APTS)为柱前荧光衍生试剂,结合CE分析,可在15 min内同时测定7种中性单糖。该方法应用于中药制剂和药物植物中单... 该文建立了激光诱导荧光毛细管电泳(CE-LIF)检测中药多糖和人血清糖蛋白中N-糖链的分析方法。利用8-氨基芘-1,3,6-三磺酸钠(APTS)为柱前荧光衍生试剂,结合CE分析,可在15 min内同时测定7种中性单糖。该方法应用于中药制剂和药物植物中单糖组成和含量的测定,加标回收率为88.0%~102%,相对标准偏差(RSD)小于3.0%。该方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适合于监控中药制剂中糖类物质的种类和含量。同时,基于毛细管凝胶电泳方法(CGE)建立了人血清中糖蛋白的N-糖链指纹图谱。利用中性涂层聚乙烯醇(PVA)有效地抑制电渗流,增加分离时间,实现了糖链异构体的有效分离。对5μL人血清进行毛细管电泳分析,共分离得到17个组分。这为进一步研究复杂生物体系血清蛋白的糖基化变化提供了可能性。 展开更多

关键词 激光诱导荧光毛细管电泳 中药多糖 n-糖基化修饰 糖蛋白

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基于质谱的N-糖蛋白分析进展

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作者 田志新 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期662-673,共12页

N-连接糖基化是蛋白质上常见的翻译后修饰,在修饰位点上具有跟其他小分子修饰(如甲基化、乙酰化、磷酸化)同样的宏观不均一性,也就是蛋白质氨基酸序列上具有多个潜在的修饰位点。但相对于小分子修饰单一的结构,N-糖基化修饰具有来自不... N-连接糖基化是蛋白质上常见的翻译后修饰,在修饰位点上具有跟其他小分子修饰(如甲基化、乙酰化、磷酸化)同样的宏观不均一性,也就是蛋白质氨基酸序列上具有多个潜在的修饰位点。但相对于小分子修饰单一的结构,N-糖基化修饰具有来自不同单糖组成,序列结构、链接结构、异头异构,立体构象等多个结构维度的数以万计的结构。这使得N-糖基化在修饰位点上具有额外的微观不均一性,也就是说同一个N-糖基化位点可以以一定的化学计量比修饰不同的糖链。N-糖基化修饰以位点和结构特异的方式调控N-糖蛋白的结构和功能,疾病条件下差异表达的N-糖基化需通过位点和结构特异的定量分析来表征。本文主要介绍最新发展水平的基于质谱的位点和结构特异定量N-糖蛋白质组学及在生物医学中的应用。 展开更多

关键词 n-糖蛋白 糖基化位点 糖链结构 定性 定量

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糖基化修饰对新型冠状病毒刺突蛋白受体结合区(Spike RBD)与受体ACE2结合影响的非变性质谱研究 被引量：2

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作者 罗宇翔 黄静 李惠琳 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期687-696,I0003,共11页

新型冠状病毒肺炎(新冠)疫情给人类生命安全和社会发展带来巨大威胁。新冠病毒表面的刺突(spike)蛋白受体结合区域(RBD)和宿主细胞膜表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合是病毒入侵的关键步骤。表征RBD和ACE2结合时的结构基础和动态变化... 新型冠状病毒肺炎(新冠)疫情给人类生命安全和社会发展带来巨大威胁。新冠病毒表面的刺突(spike)蛋白受体结合区域(RBD)和宿主细胞膜表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合是病毒入侵的关键步骤。表征RBD和ACE2结合时的结构基础和动态变化有利于理解病毒入侵的机制,为药物研发提供思路。结构质谱是蛋白质结构表征中广泛应用的方法,本工作通过非变性质谱(native MS)研究糖蛋白RBD和ACE2样品及其复合物。首先,优化了使用PNGase F切除RBD N-糖时的条件,对切糖后RBD蛋白的异质性进行分析,并进一步考察了切糖前后RBD与ACE2形成蛋白复合物的稳定性。结果表明,RBD N-糖的切除会导致其与ACE2形成的复合物稳定性降低。本工作可为RBD的N-糖基化作用分析提供参考,并为后续实验RBD是否需要切N-糖处理提供指导建议。 展开更多

关键词 新型冠状病毒肺炎(COVID-19) 刺突蛋白 受体结合区域(RBD) 血管紧张素转化酶2(ACE2) 糖蛋白 n-糖酰胺酶F 非变性质谱

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人体线粒体N-乙酰氨基葡萄糖转移酶在酿酒酵母中的表达 被引量：3

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作者 韩宝仙 高晓冬 中西秀树 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期987-992,共6页

O-GlcNAc是一种广泛存在于蛋白质丝/苏氨酸残基上的动态可逆的蛋白质翻译后修饰方式,广泛分布在细胞浆和细胞核中,参与调节多种细胞途径。蛋白质的O-GlcNAc糖基化与许多疾病密切相关,如糖尿病、神经退行性疾病和癌症等。在体内,O-GlcNA... O-GlcNAc是一种广泛存在于蛋白质丝/苏氨酸残基上的动态可逆的蛋白质翻译后修饰方式,广泛分布在细胞浆和细胞核中,参与调节多种细胞途径。蛋白质的O-GlcNAc糖基化与许多疾病密切相关,如糖尿病、神经退行性疾病和癌症等。在体内,O-GlcNAc动态修饰由N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(OGA)协同完成。OGT具有3种异构体,分别是ncOGT、mOGT和sOGT。目前对于mOGT的功能和调节机制尚未清楚。作者在酿酒酵母细胞中表达了人源的mOGT,发现mOGT抑制酵母细胞的生长。在酿酒酵母细胞中mOGT具有O-GlcNAc糖基化活性,当其活性位点突变后,O-GlcNAc糖基化活性明显降低,但其同样能抑制酵母细胞生长。作者在酿酒酵母细胞中构建了研究mOGT的系统。可以利用该人源化的酵母筛选和mOGT相互作用的蛋白质和基因,也可以用来筛选抑制mOGT活性的药物,进而研究mOGT的功能与调节机制。 展开更多

关键词 O-GlcNAc糖基化 人源化 酿酒酵母 线粒体n-乙酰氨基葡萄糖转移酶(mOGT)

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GnT-IVa对京尼平苷调节胰腺β细胞GLUT2糖基化及葡萄糖摄取的影响 被引量：1

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作者 李维钊 申甚莉 +3 位作者 边阳萍 赵婉均 汪夏 殷菲 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2023年第5期324-330,共7页

N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-4a(N-acetylglucosamine transferase-4a,GnT-IVa)是胰岛β细胞中葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,GLUT2)形成N-糖链分支复合物、使其驻留在细胞膜表面完成正常生理功能所必需的糖基转移酶。课题组前期... N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-4a(N-acetylglucosamine transferase-4a,GnT-IVa)是胰岛β细胞中葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,GLUT2)形成N-糖链分支复合物、使其驻留在细胞膜表面完成正常生理功能所必需的糖基转移酶。课题组前期研究发现,京尼平苷可快速调节胰腺β细胞中GLUT2糖基化和葡萄糖摄取,但GnT-IVa是否与其有直接的联系,还有待研究。首先利用siRNA干扰INS-1细胞GnT-IVa表达,随后分析京尼平苷对GLUT2糖基化、葡萄糖摄取、代谢以及葡萄糖诱导胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响。结果证实,在GnT-IVa干扰的INS-1细胞中,京尼平苷对GLUT2糖基化的影响、葡萄糖吸收、ATP生成以及GSIS被明显抑制。研究结果提示,GnT-IVa可能在京尼平苷调节胰岛β细胞GLUT2糖基化、葡萄糖摄取、代谢和GSIS过程中有重要作用。 展开更多

关键词 京尼平苷 n-乙酰氨基葡萄糖转移酶-4a 糖基化 葡萄糖摄取

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酵母糖蛋白工程的研究进展

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作者 李婉情 张蕾 《湖北农业科学》 2022年第13期173-178,184,共7页

以酵母作为宿主生产的蛋白在生活和医疗中有着广泛应用,但其特有的对蛋白进行高甘露糖基化修饰会造成蛋白免疫原性改变、半衰期缩短等负面影响。通过工程改造,能够减弱酵母中蛋白的甘露糖基化修饰程度,且在毕赤酵母(Pichia pastoris)中... 以酵母作为宿主生产的蛋白在生活和医疗中有着广泛应用,但其特有的对蛋白进行高甘露糖基化修饰会造成蛋白免疫原性改变、半衰期缩短等负面影响。通过工程改造,能够减弱酵母中蛋白的甘露糖基化修饰程度,且在毕赤酵母(Pichia pastoris)中已经能够产生唾液酸化糖蛋白。介绍酵母系统在生产药物蛋白方面的应用,简述酵母N-糖基化修饰过程以及目前酵母人源化研究进展。 展开更多

关键词 酵母 n-糖基化 人源化 糖蛋白

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