甲基N-硝基亚硝基胍和视黄酸致ICR小鼠腭裂发育模型的建立 被引量：14

1

作者 朱江波 印木泉 +2 位作者 陈蓉芳 郭苗莉 张天宝 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期58-60,共3页

目的:建立发生率较高、畸形类型明确、易于获得并可用于不同类型化学物致腭裂发生机制研究的动物模型。方法:采用致突变性化合物甲基N 硝基亚硝基胍(MNNG)和非致突变性致畸物视黄酸(RA)作用于ICR小鼠(对照组采用溶剂),观察不同剂量和不... 目的:建立发生率较高、畸形类型明确、易于获得并可用于不同类型化学物致腭裂发生机制研究的动物模型。方法:采用致突变性化合物甲基N 硝基亚硝基胍(MNNG)和非致突变性致畸物视黄酸(RA)作用于ICR小鼠(对照组采用溶剂),观察不同剂量和不同给药时间的胚鼠腭裂畸形发生率,确定诱导腭裂发生的最佳作用条件,并通过光镜、电镜等手段对其畸形特征作进一步分析。结果:孕10 d一次给予40 mg/kg MNNG所致腭裂的发生率为55.2%,一次给予80 mg/kg RA腭裂发生率几乎达100%;光镜结果显示这2种化学物诱导的腭裂均为小腭;电镜结果表明孕16 d对照组腭中嵴上皮细胞表面有大量的丝状伪足而实验组中则无。结论:成功建立了可供两类不同腭裂发生分子机制研究的动物模型,为进一步研究腭裂畸形的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 腭裂 动物模型 甲基n-硝基亚硝基胍 视黄酸 发育

在线阅读 下载PDF 职称材料

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起vero细胞基因表达改变及有关cDNA片段的初步鉴定 被引量：11

2

作者 胡文蔚 余应年 +1 位作者 张小山 董海涛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期62-66,共5页

运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，... 运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，２个属于次级反应基因．另有２个片段的差异表达仅在蛋白合成抑制剂环己亚胺（ＣＨＭ）合并ＭＮＮＧ处理时才出现．反向缝隙印迹杂交分析印证了２个片段在ＤＤ－ＰＣＲ中发现的改变，同时分析的本实验室分离的２５个片段中，８个片段的变化被验证与ＤＤ－ＰＣＲ中的改变一致．序列分析结果显示这些片段与许多基因有高同源性，其中包括一些参与信息传导的基因． 展开更多

关键词 亚硝基胍 MMnG CDnA 差异显示 MRnA 片段

在线阅读 下载PDF 职称材料

MNNG对多杀菌素产生菌的诱变效应 被引量：8

3

作者 宋炜 熊犍 +2 位作者 郭伟群 张晓琳 宋渊 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2009年第2期176-180,共5页

多杀菌素(spinosad)是刺糖多孢菌Saccharopolyspora sptnosa发酵产生的次级代谢产物,有显著杀虫活性。采用N-甲基-N'硝基-N-亚硝基胍(MNNG)作为诱变因子对刺糖多孢菌的孢子进行诱变处理,以高效液相色谱方法检测多杀菌素的发酵产量... 多杀菌素(spinosad)是刺糖多孢菌Saccharopolyspora sptnosa发酵产生的次级代谢产物,有显著杀虫活性。采用N-甲基-N'硝基-N-亚硝基胍(MNNG)作为诱变因子对刺糖多孢菌的孢子进行诱变处理,以高效液相色谱方法检测多杀菌素的发酵产量。研究结果表明:诱变剂量为2mg/ml,诱变40min时多杀菌素产量有较大幅度提高。通过诱变最终得到5株产量分别比出发菌株提高61.1%、80.3%、128.1%、69.9%和77.8%的突变株。 展开更多

关键词 刺糖多孢菌 多杀菌素 n-甲基-n'硝基-n-亚硝基胍(MnnG) 诱变

在线阅读 下载PDF 职称材料

甲基硝基亚硝基胍诱发的遗传不稳定vero细胞DNA体外复制的保真度 被引量：7

4

作者 冯朝晖 余应年 陈星若 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期144-148,共5页

利用在猴肾ｖｅｒｏ细胞抽提物中建立的ＤＮＡ体外复制系统，对穿梭质粒ｐＺ１８９ＤＮＡ进行有效的复制后，将复制产物转化至Ｅ．ｃｏｌｉＭＢＭ７０７０，观察ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ中突变靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变的情况．在烷... 利用在猴肾ｖｅｒｏ细胞抽提物中建立的ＤＮＡ体外复制系统，对穿梭质粒ｐＺ１８９ＤＮＡ进行有效的复制后，将复制产物转化至Ｅ．ｃｏｌｉＭＢＭ７０７０，观察ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ中突变靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变的情况．在烷化剂甲基硝基亚硝基胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ′－ｎｉｔｒｏ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ）诱发的遗传不稳定（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ）ｖｅｒｏ细胞胞浆抽提物中进行ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ复制，发现经过体外复制的ｐＺ１８９质粒中ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变率高出对照组５－８倍（Ｐ＜０．０５）。 展开更多

关键词 MnnG 甲基 硝基亚硝基胍 VERO细胞 DnA复制

在线阅读 下载PDF 职称材料

低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱ α mRNA表达水平的影响 被引量：6

5

作者 冯朝晖 余应年 陈星若 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期217-221,共5页

利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·... 利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·Ｌ－１ＭＮＮＧ处理２．５ｈ后，ＨｅＬａ细胞ＰｏｌβｍＲＮＡ水平在６－２４ｈ内升高约１倍，而Ｐｏｌα，δ，ε及ＴｏｐＩαｍＲＮＡ水平则无明显改变．提示ＰｏｌβｍＲＮＡ水平改变可能参与ＭＮＮＧ诱发细胞遗传不稳定的发生． 展开更多

关键词 甲基硝基 亚硝基胍 DnA MnnG 聚合酶 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

Survivin反义核酸协同紫杉醇的体外及大鼠体内抗肿瘤作用 被引量：3

6

作者 朱晓东 林庚金 +3 位作者 朱腾芳 李进 程侣圳 陈立鹰 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期546-550,i0004,共6页

目的研究转染生存蛋白survivin反义寡核苷酸的抗肿瘤作用,对大鼠胃癌模型形成的干预作用、机制及是否与紫杉醇间有协同作用。方法在脂质体介导下进行survivin反义寡核苷酸的体外转染,以WesternBlot检测survivin蛋白表达,以MTT法检测转染... 目的研究转染生存蛋白survivin反义寡核苷酸的抗肿瘤作用,对大鼠胃癌模型形成的干预作用、机制及是否与紫杉醇间有协同作用。方法在脂质体介导下进行survivin反义寡核苷酸的体外转染,以WesternBlot检测survivin蛋白表达,以MTT法检测转染survivin反义寡核苷酸及联合紫杉醇对胃癌BGC823细胞生长增殖的影响;以高盐饲料和甲基硝基二硝基胍(MNNG)诱导大鼠发生胃癌,造模中期分别腹腔注射脂质体包裹的survivin反义寡核苷酸、紫杉醇或两者联用,检测造模结束时各组大鼠胃癌的发生率、肿瘤组织中Brdu标记率及凋亡指数。结果Survivin反义寡核苷酸能明显抑制survivin蛋白表达,并抑制BGC823细胞的生长,其IC50约350nmol/L;survivin反义寡核苷酸与紫杉醇联合能显著降低其IC50值,起到协同抗肿瘤作用。造模结束时对照组(C)、紫杉醇组(T)、反义寡核苷酸组(A)、反义寡核苷酸联合紫杉醇组(AT)胃腺癌发生率分别为90%、78.6%、73.3%和50%,AT组的胃癌发生率显著低于对照组(P<0.05),两个单独治疗组胃癌发生率均低于对照组,但无统计学差异(P>0.05);AT组胃癌的BrdU标记率(10.2±4.7)显著低于对照组(18.7±5.5,P<0.05)及T、A两个单独治疗组(分别为16.0±5.8和15.4±5.2,P<0.05);AT组胃癌的凋亡率(1.71±0.41)显著高于对照组(0.91±0.14,P<0.01)及T、A单独治疗组(1.19±0.42、1.29±0.43,P<0.05)。结论Survivin反义寡核苷酸能抑制BGC823细胞生长,与紫杉醇有协同抗肿瘤作用;腹腔注射survivin反义寡核苷酸与紫杉醇能协同抑制胃癌形成,与促进凋亡和抑制细胞增殖有关。Survivin是抗肿瘤基因治疗的良好靶点。 展开更多

关键词 胃癌 甲基硝基二硝基胍 生存蛋白 反义寡核苷酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

用高通量实时荧光PCR技术研究低浓度MNNG诱发的细胞基因应答反应 被引量：4

7

作者 李红娟 石为 +4 位作者 卢翔云 邵敏华 周韧 卢大儒 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-6,共6页

目的:研究低浓度N-甲基-N-硝基-N-甲基亚硝基胍对人羊膜FL细胞部分基因表达的影响,以助于阐明MNNG引起细胞应答反应的基因及其调控机制。方法:用ABI公司的高通量实时荧光定量PCR方法,检测FL细胞在0.2μmol/LMNNG处理后基因表达发生的改... 目的:研究低浓度N-甲基-N-硝基-N-甲基亚硝基胍对人羊膜FL细胞部分基因表达的影响,以助于阐明MNNG引起细胞应答反应的基因及其调控机制。方法:用ABI公司的高通量实时荧光定量PCR方法,检测FL细胞在0.2μmol/LMNNG处理后基因表达发生的改变。数据用ABI公司的SDS2.1软件分析。结果:MNNG处理后,在检测的95个基因中,29个基因表达发生改变,其中14个基因下调2倍以上,15个基因下调在1.5-2倍之间;其中有4个基因与细胞周期相关,6个基因与信号转导相关,6个基因与转录调节相关。结论:在低浓度MNNG攻击后,FL细胞的基因表达发生了显著的变化。 展开更多

关键词 n-甲基-n’-硝基-n-亚硝基胍 实时荧光定量PCR 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

NO水平下降通过氧化应激引起人胎盘滋养细胞凋亡 被引量：11

8

作者 王艳华 张慧萍 +9 位作者 田珏 周龙霞 陈久凯 马文斌 孔繁琪 赵丽 刘现梅 韩学波 杨晓玲 姜怡邓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1287-1292,共6页

目的探讨一氧化氮(NO)水平下降诱导人胎盘滋养细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR-8),分别加入10、100、500、1 000μmol·L-1L-NAME,并设置对照组(0μmol·L-1L-NAME),孵育48 h;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测L... 目的探讨一氧化氮(NO)水平下降诱导人胎盘滋养细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR-8),分别加入10、100、500、1 000μmol·L-1L-NAME,并设置对照组(0μmol·L-1L-NAME),孵育48 h;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测L-NAME对细胞存活率的影响;采用硝酸还原酶法测定细胞中NO的含量;利用透射电镜、流式细胞术和Annexin-V FITC染色检测L-NAME对HTR-8细胞凋亡的影响;Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力(T-AOC)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果与对照组比较,100、500、1 000μmol·L-1L-NAME组细胞存活率及NO水平明显降低(P<0.05,P<0.01);Annexin-V FITC染色和流式分析均显示L-NAME能诱导细胞凋亡,并且呈剂量依赖性;NO水平与细胞凋亡数呈负相关(r=-0.5210);透射电镜结果显示:与对照组比较,实验组细胞核形态不规则,核膜固缩呈不规则状,染色质凝集或边集,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或溶解,甚至消失,形成空泡,尤其在100μmol·L-1L-NAME组可见凋亡小体;同时,HTR-8细胞内T-AOC、SOD水平明显降低(P<0.05),MDA的含量明显升高(P<0.05);细胞凋亡数与T-AOC(r=-0.3212)、SOD(r=-0.2779)水平均呈负相关,与MDA(r=0.2807)含量呈正相关。结论氧化应激在NO水平降低引起的人胎盘滋养细胞凋亡中起重要作用。 展开更多

关键词 一氧化氮 n-硝基-L-精氨酸甲酯 人胎盘滋养细胞 凋亡 氧化应激 妊娠期高血压疾病

在线阅读 下载PDF 职称材料

低浓度MNNG激活转录因子 被引量：4

9

作者 王谷亮 王政 +1 位作者 杨军 余应年 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第5期390-392,共3页

目的 :为了进一步研究 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)引起的非定标性突变的发生机制 ,观察了低浓度 MNNG对转录因子 NF- κB、CREB、AP- 1和 c- Myc的影响。方法 :采用分泌型碱性磷酸酶报告基因和瞬时转染实验检测转录因子活... 目的 :为了进一步研究 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)引起的非定标性突变的发生机制 ,观察了低浓度 MNNG对转录因子 NF- κB、CREB、AP- 1和 c- Myc的影响。方法 :采用分泌型碱性磷酸酶报告基因和瞬时转染实验检测转录因子活性。结果 :经 0 .2 μmol/L MNNG处理后 ,转录因子 CREB活性是溶剂对照组的 1.4倍 (P<0 .0 5 ) ,AP- 1和 NF- κB活性均为溶剂对照组的 1.3倍 (P<0 .0 5 ) ;而 c- Myc的活性在对照组和 MNNG处理组都较低。结论 :低浓度 MNNG可以激活转录因子 AP- 1、CREB和 NF- κB,对 c- Myc则无明显激活作用 ,提示一些转录因子的激活可能参与了 MNNG引起的非定标性突变发生过程。 展开更多

关键词 n-甲基-n'-硝基-n-亚硝基胍 转录因子 信号传递

在线阅读 下载PDF 职称材料

内质网应激参与低浓度DNA加成性损伤剂诱发的细胞应答反应 被引量：2

10

作者 刘更 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-6,共6页

目的:研究内质网应激在DNA损伤剂/致癌物诱发的细胞应答反应中的作用。方法:选择3种引起不同DNA损伤类型的DNA损伤剂/致癌物,烷化性DNA损伤剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),大块加成性DNA损伤剂苯并[a]芘-7,8-9-二氢二醇-9,10-环氧... 目的:研究内质网应激在DNA损伤剂/致癌物诱发的细胞应答反应中的作用。方法:选择3种引起不同DNA损伤类型的DNA损伤剂/致癌物,烷化性DNA损伤剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),大块加成性DNA损伤剂苯并[a]芘-7,8-9-二氢二醇-9,10-环氧化物(BPDE,环境致癌物苯并[a]芘在体内代谢形成的终致癌物)以及交联性DNA损伤剂丝裂霉素C(MMC)对人羊膜细胞FL系内质网应激反应的影响。采用SDS-PAGE和免疫印迹法检测内质网应激蛋白GRP78/BiP,GADD153/CHOP的表达改变和定位于内质网的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)的激活。结果:低浓度MNNG(0.25μmol/L和1μmol/L)和BPDE(5nmol/L和50nmol/L)均能引起FL细胞中GRP78/BiP和GADD153/CHOP的上调和caspase-12的激活;3种浓度的MMC(5μmol/L、50μmol/L和500μmol/L)均引起GRP78/BiP的下调,不伴有GADD153/CHOP水平的改变和caspase-12的激活,更低浓度的MMC(5nmol/L和50nmol/L)对此并无影响。结论:低浓度MNNG和BPDE可诱发暴露细胞的内质网应激,而MMC则导致在内质网应激反应诱发过程中起介导作用的GRP78/BiP蛋白的下调,从而可能改变细胞对内质网应激原的反应性。内质网应激在DNA损伤剂/致癌剂诱发的细胞应答反应中有一定作用。 展开更多

关键词 n-甲基-n'-硝基-n'-亚硝基胍 7 8-二氢二醇-9 10-环氧化物 内质网 应激 丝裂霉素 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12

在线阅读 下载PDF 职称材料

POLΗ基因反义阻断细胞系的建立及POLΗ在MNNG引起的非定标性突变中的作用 被引量：1

11

作者 罗月球 杨军 余应年 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第5期398-402,共5页

目的 :通过建立 POLΗ反义阻断细胞系 FL - POLΗ-,研究 POLΗ的功能。方法 :将 POLΗ基因的 14 73～ 2 131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,将重组表达质粒转染 FL细胞 ,G4 18筛选 ,获得 POLΗ基因被表达阻断的... 目的 :通过建立 POLΗ反义阻断细胞系 FL - POLΗ-,研究 POLΗ的功能。方法 :将 POLΗ基因的 14 73～ 2 131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,将重组表达质粒转染 FL细胞 ,G4 18筛选 ,获得 POLΗ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系 FL - POLΗ-。采用穿梭质粒 p Z189介导的突变实验 ,观察在 POLΗ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率和 MNNG引起的诱发突变频率。结果 :成功建立细胞系 FL -POLΗ-。穿梭质粒 p Z189在 FL- POLΗ-细胞中复制后 ,其 Sup F t RNA基因的自发突变频率为 13.5× 10 -4,而对照细胞 FL和 FL- M分别为 4 .9× 10 -4和 3.7× 10 -4。同时 ,质粒在接触过 MNNG的 FL- POLΗ-细胞中复制 ,其 Sup Ft RNA基因的非定标性突变频率不发生。结论 :POLΗ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用 ,且参与哺乳动物细胞中 MNNG引起的非定标性突变。 展开更多

关键词 POLH基因 n-甲基-n'-硝基-n-亚硝基胍 非定标性突变 DnA突变分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析 被引量：2

12

作者 刘天婵 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1953-1960,共8页

目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的... 目的 :分析甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导的共表达蛋白的编码基因启动子区的转录因子结合部位。方法 :用进化足迹法 ,结合转录因子数据库的搜索 ,预测共表达蛋白编码基因启动子区共有的转录因子结合部位。凝胶阻滞试验验证对于预测出的转录因子结合部位 ,在MNNG处理细胞中是否确实有相关转录因子的反应。结果 :预测出 11个共同存在于这些蛋白编码基因启动子区的转录因子结合部位 ,其中除已知转录因子激活蛋白 1(activatorprotein 1,AP1)在MNNG处理后被激活外 ,用凝胶阻滞试验又发现在MNNG处理细胞的核提取液中有 2个转录因子—核因子Y(nuclearfactor,NFY)和GATA结合因子 (GATAbindingfactor,GATA)的活性升高。结论 :进化足迹法可以有效地降低转录因子结合部位预测结果中的假阳性率。NFY和GATA转录因子结合部位可能参与对MNNG诱导的共表达蛋白的共调控。 展开更多

关键词 进化足迹法 转录因子结合部位 凝胶阻滞试验 甲基硝基亚硝基胍

在线阅读 下载PDF 职称材料

ASPP2调控GRP78在L-NAME诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用 被引量：4

13

作者 谢琳 张辉 +7 位作者 丁宁 王艳华 吴凯 曹军 王青青 刘昆 张慧萍 姜怡邓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期765-770,共6页

目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)调控葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-nitroarginine methyl ester,L-NAME)诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用,为... 目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)调控葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-nitroarginine methyl ester,L-NAME)诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用,为临床研究妊娠期高血压疾病提供理论依据。方法体外培养HTR-8/SVneo人胎盘滋养细胞,分为对照组(0μmol·L^(-1)L-NAME)和L-NAME组(100μmol·L^(-1)LNAME),干预48 h后,分别采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭染色,检测胎盘滋养细胞凋亡水平的变化;运用Western blot检测caspase-12、GRP78和ASPP2的蛋白变化; ASPP2干扰腺病毒感染人胎盘滋养细胞后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASPP2的mRNA表达水平,Western blot检测GRP78的蛋白表达水平;给予100μmol·L^(-1) L-NAME干预48 h后,Western blot和免疫荧光分别检测caspase-12和GRP78的蛋白表达。结果与对照组相比,L-NAME组胎盘滋养细胞凋亡水平明显增加(P <0. 05);吖啶橙染色显示,与对照组相比,L-NAME组细胞多数呈现鲜亮的橙色,晚期凋亡细胞数明显增加;同时caspase-12、GRP78和ASPP2蛋白的表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01);干扰ASPP2后,caspase-12和GRP78蛋白表达明显降低(P <0. 05)。结论下调ASPP2可降低GRP78的表达,进而抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞凋亡。 展开更多

关键词 p53凋亡刺激蛋白2 葡萄糖调节蛋白78 n-硝基-L-精氨酸甲酯 胎盘滋养细胞 细胞凋亡 妊娠期高血压疾病

在线阅读 下载PDF 职称材料

L-NAME对人脐静脉内皮细胞VE-cadherin表达的影响 被引量：2

14

作者 杨宝林 伍校琼 +5 位作者 罗明英 朱武 叶峰 刘丽华 关莹露 蔡维君 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第4期412-416,共5页

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的eNOS、VE-cadherin蛋白表达的影响。方法 HUVEC传代培养并用CD31特异性抗体进行鉴定,实验分为对照组、0.1 mmol/L L-NAME组、1.0 mmol/L L-NAME... 目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的eNOS、VE-cadherin蛋白表达的影响。方法 HUVEC传代培养并用CD31特异性抗体进行鉴定,实验分为对照组、0.1 mmol/L L-NAME组、1.0 mmol/L L-NAME组,运用MTT比色法检测L-NAME对HUVEC细胞活性的影响,并采用免疫荧光细胞化学法或Western blot检测实验各组HUVEC细胞的eNOS、VE-cadherin等蛋白的表达,以观察L-NAME对HUVEC的eNOS蛋白、VE-cadherin蛋白的影响。结果 95%以上传代后的细胞为CD31免疫阳性细胞。MTT比色法结果显示,随着L-NAME的浓度增加,HUVEC的细胞活力值逐渐减弱。免疫荧光细胞化学或Western blot结果显示,与对照组比较,0.1 mmol/L L-NAME组和1.0 mmol/L L-NAME组HUVEC中eNOS的表达减弱(P<0.01),并呈剂量依赖性降低;与对照组比较,0.1 mmol/L L-NAME组和1.0 mmol/L L-NAME组HUVEC中VE-cadherin的表达增强(P<0.01),呈剂量依赖性增加。结论 L-NAME能抑制HUVEC的eNOS表达和细胞活性,并影响细胞粘附连接的主要蛋白—VE-cadherin的表达。 展开更多

关键词 n-硝基-L-精氨酸甲酯 人脐静脉内皮细胞 血管内皮钙粘蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

MNNG对细胞DNA合成及其分布的影响

15

作者 曹恩华 辛淑敏 +3 位作者 吴维 曹绍棨 张幼苓 林波海 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1990年第2期135-138,共4页

本文用流式细胞光度术(FCM)等方法研究了MNNG,ENNG和DMS对HeLa细胞DNA含量分布的影响。经MNNG(6.8μmol/L)处理后,细胞分裂减少,DNA合成速率下降,S期细胞的比例随处理时间的延长而增加。DMS显示有类似的现象而ENNG的效应则较小。

关键词 DnA 合成 分布 MnnG

在线阅读 下载PDF 职称材料

低浓度MNNG诱发FL细胞应答反应的蛋白质组学研究

16

作者 金静华 高志华 +1 位作者 杨军 余应年 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第5期375-379,共5页

目的 :研究低浓度甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对人羊膜 FL细胞蛋白质表达谱的影响 ,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制。方法 :FL细胞分别用 MNNG和 DMSO(溶剂对照 )处理后 ,提取细胞总蛋白 ,用双向凝胶电泳分离蛋白质... 目的 :研究低浓度甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对人羊膜 FL细胞蛋白质表达谱的影响 ,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制。方法 :FL细胞分别用 MNNG和 DMSO(溶剂对照 )处理后 ,提取细胞总蛋白 ,用双向凝胶电泳分离蛋白质组成分 ,银染染色后用相应的分析软件分析数字化的凝胶图像 ,找出在 MN-NG处理后表达有差异的蛋白斑点 ,用基质辅助的激光解吸 -飞行时间质谱 (MAL DI- TOF)鉴定。结果 :在 MNNG处理后有 6 0多个蛋白斑点出现质和量的变化 ,其中 18个蛋白斑点只能在 MNNG处理的细胞中检测到 ,13个蛋白斑点则在 MNNG处理后消失 ;同时检测到 30个蛋白斑点在表达量上有显著变化 ,其中 16个点表达升高 ,14个点则表达降低。通过数据库的检索 ,初步的鉴定了一批结构和功能各异的蛋白。结论 :在低浓度烷化剂攻击后 ,FL细胞中的蛋白表达谱发生了显著的变化。 展开更多

关键词 FL细胞/遗传学 n-甲基-n'-硝基-n-亚硝基胍 蛋白质组学 凝胶 电泳 双向

在线阅读 下载PDF 职称材料

亚硒酸钠对MNNG所致胃粘膜上皮细胞损伤的预防作用

17

作者 刘卫 房殿春 +1 位作者 梁后杰 刘为纹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期489-491,共3页

对亚硒酸钠预防甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）所致胃粘膜细胞损伤的作用进行研究。结果发现，胃粘膜细胞先用１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ或１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠预处理４ｈ，再给ＭＮＮＧ组细胞的增殖速率、软琼脂集落形... 对亚硒酸钠预防甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）所致胃粘膜细胞损伤的作用进行研究。结果发现，胃粘膜细胞先用１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ或１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠预处理４ｈ，再给ＭＮＮＧ组细胞的增殖速率、软琼脂集落形成能力、非程序ＤＮＡ合成水平、质脂过氧化物和ｒａｓｐ２１蛋白含量均显著低于ＭＮＮＧ组（Ｐ＜０．０５～０．０１）。结果提示。 展开更多

关键词 胃粘膜 上皮细胞 亚硒酸钠 MnnG

在线阅读 下载PDF 职称材料

N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍致大鼠气管上皮细胞体外转化及细胞遗传学改变

18

作者 赵永良 项晓琼 +2 位作者 胡迎春 金璀珍 吴德昌 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期58-61,共4页

利用原代大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞研究Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）的致转化作用，并对转化细胞进行细胞遗传学研究．结果表明：增殖旺盛细胞（ＥＧＶ）集落是ＲＴＥ细胞体外转化最早期的特征，ＥＧＶ转化频率与... 利用原代大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞研究Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）的致转化作用，并对转化细胞进行细胞遗传学研究．结果表明：增殖旺盛细胞（ＥＧＶ）集落是ＲＴＥ细胞体外转化最早期的特征，ＥＧＶ转化频率与ＭＮＮＧ剂量呈明显的剂量反应关系．从０．３ｍｇＬ－１ＭＮＮＧ剂量组分离到２个ＥＧＶ集落，经消化，传代形成了永生化的细胞系（ＲＴＥＳ１，ＲＴＥＳ２），ＲＴＥＳ１为多倍体核型，２号和７号染色体数目增加至４个且呈高频发生（１００％）；ＲＴＥＳ２呈二倍体核型．电镜结果证实转化细胞来自大鼠气管上皮组织．以上结果提示，原代ＲＴＥ细胞体外培养模型是研究致癌物定量及致癌机理的理想模型系统． 展开更多

关键词 细胞遗传学 亚硝基胍 转化 体外 上皮细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

丁酸钠对甲基硝基亚硝基胍所致胃粘膜上皮细胞非程序DNA合成、脂质过氧化和rasp21表达的影响

19

作者 刘卫 朱斌 房殿春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期2057-2059,共3页

目的观察丁酸钠(sodiumbutyrate,SB)对甲基硝基亚硝基胍(NmethylN′nitroNnitrocoguanidine,MNNG)所致胃粘膜上皮细胞非程序DNA合成、脂质过氧化和rasp21表达的影响。方法分4组:MNNG、10-5mol/LSB+MNNG、10-6mol/LSB+MNNG、10-7mol/LSB+... 目的观察丁酸钠(sodiumbutyrate,SB)对甲基硝基亚硝基胍(NmethylN′nitroNnitrocoguanidine,MNNG)所致胃粘膜上皮细胞非程序DNA合成、脂质过氧化和rasp21表达的影响。方法分4组:MNNG、10-5mol/LSB+MNNG、10-6mol/LSB+MNNG、10-7mol/LSB+MNNG,各组测定UDS、LPO和rasp21蛋白。结果胃粘膜细胞先用10-5mol/L、10-6mol/L丁酸钠预处理4h,再给MNNG,细胞非程序DNA合成水平、脂质过氧化和rasp21蛋白含量均显著低于MNNG组(P<0.05,P<0.01)。结论一定剂量丁酸钠对MNNG诱导的胃粘膜细胞损伤有保护作用。 展开更多

关键词 胃粘膜上皮细胞 甲基硝基亚硝基胍 丁酸钠

在线阅读 下载PDF 职称材料

GSH减少可加强MNNG对P38 MAPK磷酸化

20

作者 竺可青 朱建伟 章锁江 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1495-1497,共3页

目的:了解低浓度N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对P38 MAPK的影响,以及谷胱甘肽(GSH)在该信号通路中的调节作用。方法:用L-丁硫氨酸-S,R-磺基(L-buthionine-S,R-sulfoximine)减少细胞谷胱甘肽含量后,采用Western印迹法比较MNNG处理... 目的:了解低浓度N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对P38 MAPK的影响,以及谷胱甘肽(GSH)在该信号通路中的调节作用。方法:用L-丁硫氨酸-S,R-磺基(L-buthionine-S,R-sulfoximine)减少细胞谷胱甘肽含量后,采用Western印迹法比较MNNG处理组和对照组P38MAPK磷酸化状态,观察MNNG对P38磷酸化状态的影响。用光密度扫描仪测定各蛋白质条带吸光值。“P”为磷酸化P38MAPK的吸收值,“T”为总P38MAPK吸收值。在各时点以对照组磷酸化率P/T为1·0,计算MNNG组的相对磷酸化率。结果:BSO预处理24h后,MNNG处理2·5h的相对磷酸化率为0·84,2·5h处理后换DMEM全培养基3h的相对磷酸化率2·19。结论:细胞内GSH含量降低可促进P38MAPK的活性。 展开更多

关键词 P38MAP激酶 谷胱甘肽 n-甲基-n’-硝基-n-亚硝基胍

在线阅读 下载PDF 职称材料