中枢神经系统靶向性Mn-SOD的克隆和在大肠杆菌中的表达研究 被引量：4

1

作者 张艳红 贺华君 +2 位作者 袁勤生 杨卫东 吴祥甫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期895-899,共5页

靶向性超氧化物歧化酶 (SOD)是治疗氧自由基引起神经细胞损伤所致疾病等的有效途径 .将破伤风毒素C部分 (tetanustoxinfragmentC ,TTC)基因与编码Mn SOD的cDNA融合克隆进pET 2 2b(+)载体 ,1mmol/L异丙基 D 硫代半乳糖 (IPTG)诱导在大... 靶向性超氧化物歧化酶 (SOD)是治疗氧自由基引起神经细胞损伤所致疾病等的有效途径 .将破伤风毒素C部分 (tetanustoxinfragmentC ,TTC)基因与编码Mn SOD的cDNA融合克隆进pET 2 2b(+)载体 ,1mmol/L异丙基 D 硫代半乳糖 (IPTG)诱导在大肠杆菌中表达 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)图谱可见约 71ku有表达产物条带 ,与理论计算值相符 ;蛋白质印迹 (Westernblot)分析显示 ,表达产物与抗Mn SOD及破伤风毒素的多抗有免疫反应 ,而且表达产物用邻苯三酚自氧化法测定具有SOD活性 .融合蛋白可作为有效的试剂靶向性输送Mn SOD到神经元细胞 。 展开更多

关键词 锰超氧化物歧化酶 破伤风毒C部分 融合表达 中枢神经系统 靶向性运输 人Mn-SOD 克隆 表达

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诱导剂对重组人锰超氧化物歧化酶表达的影响 被引量：3

2

作者 张艳红 廖晓全 +1 位作者 王逢 袁勤生 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期368-371,共4页

用异丙基 -β-D-硫代半乳糖苷 (IPTG)、乳糖、巯基乙醇对重组人锰超氧化物歧化酶(rh Mn-SOD)工程菌进行诱导 ,结果表明 3种物质都可以诱导 rh Mn-SOD外源蛋白的表述。通过酶活力、比活测定及电泳的结果显示 ,以乳糖作为诱导剂的表达效... 用异丙基 -β-D-硫代半乳糖苷 (IPTG)、乳糖、巯基乙醇对重组人锰超氧化物歧化酶(rh Mn-SOD)工程菌进行诱导 ,结果表明 3种物质都可以诱导 rh Mn-SOD外源蛋白的表述。通过酶活力、比活测定及电泳的结果显示 ,以乳糖作为诱导剂的表达效果明显好于 IPTG和巯基乙醇 ,进一步的实验结果表明乳糖诱导的最佳浓度为 80 展开更多

关键词 重组人锰超氧化物歧化酶 诱导剂 外源蛋白 基因表达 酶活力 诱导浓度 乳糖 巯基乙醇

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EGCG对H_2O_2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达的影响 被引量：3

3

作者 刘国辉 谢鼎华 +2 位作者 朱纲华 伍伟景 葛圣雷 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期682-685,共4页

目的 :探讨表没食子儿茶素没食子酸盐 (EGCG)在双氧水 (H2 O2 )诱导耳蜗螺旋神经节细胞 (SGCs)氧化损伤中对线粒体抗氧化酶基因 MnSOD基因表达的影响。方法 :培养离体SGCs,采用半定量RT PCR方法检测加入不同浓度H2 O2 和 /或EGCG后螺... 目的 :探讨表没食子儿茶素没食子酸盐 (EGCG)在双氧水 (H2 O2 )诱导耳蜗螺旋神经节细胞 (SGCs)氧化损伤中对线粒体抗氧化酶基因 MnSOD基因表达的影响。方法 :培养离体SGCs,采用半定量RT PCR方法检测加入不同浓度H2 O2 和 /或EGCG后螺旋神经元MnSOD基因的表达情况。以经典抗氧化剂维生素C作对照。结果 :随着H2 O2 浓度提高 ,MnSOD基因的表达亦随之升高 ;在H2 O2 浓度大于 10 0 μmol/L时MnSOD基因表达明显上调 (P <0 .0 5 ) ,10 0 μg/mlEGCG能明显抑制H2 O2 诱导的MnSOD基因表达 (P <0 .0 5 )。结论 :EGCG可能通过清除氧自由基 ,提高MnSOD酶活性 ,抑制H2 O2 展开更多

关键词 表达 EGCG 螺旋神经节细胞 诱导 SOD基因 H2O2 半定量RT-PcR方法 线粒体 酶基因 抗氧化酶

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锰超氧化物歧化酶在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义 被引量：3

4

作者 张默函 周宪春 +1 位作者 李良昌 金东洙 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期956-958,962,共4页

目的检测锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)在乳腺浸润性导管癌组织及癌旁正常组织中的表达,探讨MnSOD在肿瘤的发生及肿瘤侵袭过程中的作用。方法采用RT-PCR和Western blot法分别对20例乳腺浸润性导管癌组织样本... 目的检测锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)在乳腺浸润性导管癌组织及癌旁正常组织中的表达,探讨MnSOD在肿瘤的发生及肿瘤侵袭过程中的作用。方法采用RT-PCR和Western blot法分别对20例乳腺浸润性导管癌组织样本和20例癌旁正常组织样本的MnSOD mRNA及蛋白表达进行检测,以β-actin作为定量参考物,比较其在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达差异,并结合临床特征淋巴结转移和TNM分期,分析MnSOD在肿瘤不同阶段表达的差异。结果乳腺浸润性导管癌组织MnSOD mRNA的表达值为0.61±0.15,癌旁组织为1.24±0.14,两者比较差异具有统计学意义(P<0.01);MnSOD蛋白在癌组织中表达值为0.40±0.04,癌旁组织为0.75±0.06,两者比较差异具有统计学意义(P<0.01)。乳腺浸润性导管癌中淋巴结转移与非淋巴结转移MnSOD mRNA及蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。TNM分期:Ⅰ期4例MnSOD mRNA表达值为0.45±0.15,Ⅱ期9例MnSOD mRNA表达值为0.44±0.15,Ⅲ期7例MnSOD mRNA表达值为0.36±0.07,Ⅱ期与Ⅲ期及Ⅰ期与Ⅲ期的比较差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ期与Ⅱ期比较差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ～Ⅲ期MnSOD蛋白表达三者相互间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺浸润性导管癌组织中Mn-SOD mRNA和蛋白表达明显下降,检测MnSOD的表达可作为临床诊治及判定乳腺浸润性导管癌预后的指标。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 乳腺浸润性导管癌 锰超氧化物歧化酶 表达

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草菇锰超氧化物歧化酶基因异源表达条件优化及其耐胁迫功能分析 被引量：3

5

作者 杨焕玲 游华芳 +4 位作者 赵妍 KAKUMYAN Pattana 常婷婷 余昌霞 陈明杰 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期51-58,共8页

根据草菇(Volvariella volvacea)的锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因序列,构建重组质粒pBAR GPE1/Mn-SOD,转化大肠杆菌(Escherichia coli)Stbl3菌株,采用单因素实验对诱导剂IPTG浓度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)、诱导培... 根据草菇(Volvariella volvacea)的锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因序列,构建重组质粒pBAR GPE1/Mn-SOD,转化大肠杆菌(Escherichia coli)Stbl3菌株,采用单因素实验对诱导剂IPTG浓度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)、诱导培养时间(0、2、4、6、8、10 h)及MnCl2浓度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)进行优化,以获得最优表达条件。在最优条件下分别进行耐热性、耐冷性及耐盐性分析,测定重组菌pBAR GPE1/Mn-SOD和对照菌pBAR GPE1的SOD酶活力及生长情况。结果表明:最优表达条件为IPTG浓度1 mmol·L^-1,诱导培养时间6 h,不需要添加MnCl2;在最优条件下,与对照菌相比,发现重组菌的SOD酶活力显著提高,生长情况较好,提高了转化菌株的耐热性、耐冷性和耐盐性。 展开更多

关键词 草菇 锰超氧化物歧化酶 异源表达 耐胁迫

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小鼠锰超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达和纯化 被引量：2

6

作者 王峰 黄璐圆 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期85-89,共5页

为构建小鼠锰超氧化物歧化酶(SOD)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测,以小鼠肝脏cDNA为模板,利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因,PCR扩增了1个长600bp左右的基因片段,该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋... 为构建小鼠锰超氧化物歧化酶(SOD)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测,以小鼠肝脏cDNA为模板,利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因,PCR扩增了1个长600bp左右的基因片段,该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋白.将其插入pET15b载体中,经测序鉴定正确后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami.含有pET15b-mMn-SOD质粒的工程菌经过IPTG诱导能表达出相对分子质量约25000的目的蛋白,超声破碎菌体,经Ni-NTA纯化后得到纯度约为95%的重组mMn-SOD蛋白.SOD活性检测表明经过诱导表达的mMn-SOD比活力为531.7U/mg. 展开更多

关键词 锰超氧化物歧化酶 表达 纯化 SOD活性

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非病毒载体介导Mn-SOD基因在小鼠肝脏的高表达 被引量：2

7

作者 金晓凌 郑树森 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期2067-2071,共5页

目的 :研究非病毒载体介导Mn -SOD基因在小鼠肝脏的转染效率。方法 :构建Mn -SOD真核表达质粒gWiz/Mn -SOD ,通过肠系膜上静脉分支注射阳离子脂质体 /质粒混合物 ,采用RT -PCR、Westernblot、SOD活力测定以及免疫组织化学染色等方法 ,... 目的 :研究非病毒载体介导Mn -SOD基因在小鼠肝脏的转染效率。方法 :构建Mn -SOD真核表达质粒gWiz/Mn -SOD ,通过肠系膜上静脉分支注射阳离子脂质体 /质粒混合物 ,采用RT -PCR、Westernblot、SOD活力测定以及免疫组织化学染色等方法 ,观察小鼠肝脏Mn -SOD基因表达情况。结果 :经肠系膜上静脉分支注射质粒 /脂质体混合物几乎不对肝脏造成损伤 ,注射后 8h即可检测到小鼠肝脏有明显的外源性Mn -SODmRNA和蛋白表达 ;转染前及转染后 72h肝细胞线粒体SOD活性分别是 (2 9± 17)U/g和 (2 72± 5 6 )U/g(P <0 0 1) ;免疫组化显示小鼠肝细胞转染率达 70 %。结论 :阳离子脂质体可介导非病毒载体gWiz/Mn 展开更多

关键词 肝锰-超氧化物歧化梅 基因表达 脂质体

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猕猴桃AdMSD1和AdMSD2的克隆及其在果实后熟软化中的表达

8

作者 冯新 赖瑞联 +2 位作者 高敏霞 吴如健 陈义挺 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期895-906,共12页

锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在植物生长发育与衰老及应对逆境胁迫中发挥重要作用。为探究MnSOD基因在猕猴桃果实后熟软化及采后贮藏过程的作用,本研究以米良1号猕猴桃为试材,克隆了2个MnSOD基因,分别命名为AdMSD1和AdMSD2。AdMSD1包含675 b... 锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在植物生长发育与衰老及应对逆境胁迫中发挥重要作用。为探究MnSOD基因在猕猴桃果实后熟软化及采后贮藏过程的作用,本研究以米良1号猕猴桃为试材,克隆了2个MnSOD基因,分别命名为AdMSD1和AdMSD2。AdMSD1包含675 bp的开放阅读框(ORF),编码224个氨基酸,登录号为KY471358;AdMSD2包含690 bp的ORF,编码229个氨基酸,登录号为KY471359。生物信息学分析结果表明,AdMSD1和AdMSD2均编码稳定的碱性亲水蛋白,包含保守金属结合域DVWEHAYY、Mn^(2+)金属结合位点和特征氨基酸。AdMSD1和AdMSD2均由6个外显子和5个内含子组成。进化树结果显示,2个蛋白聚在双子叶植物组的不同分支,属于MnSOD家族的不同成员。定量分析结果表明,AdMSD1在叶片的转录水平最高,在花中的转录水平最低;AdMSD2在花中的转录水平最高,在成熟果中的转录水平最低。2个基因在果实后熟软化过程的转录呈动态变化,但均在软化初期上调,软化Ⅰ期和Ⅱ期下调,进入软化Ⅲ期后再次回升。果实中AdMSD1和AdMSD2的转录水平均在低温贮藏过程中下降。AdMSD1在脱落酸处理的第1和第5天表达上调,而AdMSD2在脱落酸处理后表达下调;AdMSD1在赤霉素处理后表达下调,而AdMSD2在赤霉素处理的第1天表达上调,之后下调。研究结果表明,AdMSDs基因参与猕猴桃果实的后熟软化和采后贮藏过程,为进一步研究SOD在猕猴桃果实采后品质调控中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 猕猴桃 锰超氧化物歧化酶基因 贮藏温度 激素处理 表达模式

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人锰超氧化物歧化酶基因剪接异构体的表达分析

9

作者 王峰 黄璐圆 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期164-167,172,共5页

对人锰超氧化物歧化酶(human manganese superoxide dismutase,hMn-SOD)基因剪接异构体进行分析,并检测异构体的表达情况。在GenBank库中检索人锰超氧化物歧化酶基因异构体及编码基因组序列,利用Vector NTI9生物软件进行核酸及蛋白序列... 对人锰超氧化物歧化酶(human manganese superoxide dismutase,hMn-SOD)基因剪接异构体进行分析,并检测异构体的表达情况。在GenBank库中检索人锰超氧化物歧化酶基因异构体及编码基因组序列,利用Vector NTI9生物软件进行核酸及蛋白序列比对;利用RT-PCR方法分析锰超氧化物歧化酶基因异构体的表达。结果显示,在GenBank库检索发现有3种人锰超氧化物歧化酶基因异构体,剪接异构的类型为可变的5′剪接位点和外显子盒,各异构体基因内含子均符合"GT-AG"规则。3种基因异构体编码两种异构体蛋白,即222个氨基酸的人锰超氧化物歧化酶蛋白以及中部缺少39个氨基酸的截短型异构蛋白。RT-PCR检测结果表明,剪接异构体hMn-SODb在HEK293T和HSC细胞中的表达比在HepG2细胞中高,未见异构体hMn-SODc的表达。 展开更多

关键词 锰超氧化物歧化酶 剪接异构 表达

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非洲菊 GjMnSOD 基因的克隆及表达分析 被引量：3

10

作者 武欢 卢珍红 +4 位作者 郝向阳 王斌 焦元辰 杨春梅 程春振 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期17-25,共9页

以非洲菊品种‘玲珑’为材料,利用RT-PCR技术克隆获得一条CDS长为519 bp的SOD基因(GenBank ID:MH708534.1)。利用生物信息学手段分析了该基因及其编码蛋白的序列特征,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了该基因在3种激素(100µ... 以非洲菊品种‘玲珑’为材料,利用RT-PCR技术克隆获得一条CDS长为519 bp的SOD基因(GenBank ID:MH708534.1)。利用生物信息学手段分析了该基因及其编码蛋白的序列特征,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了该基因在3种激素(100µmol/L IAA、SA和GA_(3))和3种非生物胁迫(200 mmol/L NaCl盐胁迫、30%PEG模拟干旱和4℃低温处理)下的表达模式。结果显示:该基因可编码分子量为19203.85、等电点(pI)为7.93、无信号肽及跨膜结构的稳定亲水蛋白。该蛋白含有典型Sod-Fe-C保守结构域,在141-148位氨基酸之间含有一个MnSOD特征序列(DVWEHAYY),因此命名为GjMnSOD。Wolf Psort预测结果显示GjMnSOD定位于线粒体。GjMnSOD与刺苞菜蓟MnSOD相似性最高(为93.86%)且在进化上亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示:GjMnSOD的表达受IAA、GA3、SA、盐胁迫和低温显著抑制;在干旱胁迫下,GjMnSOD的表达呈“先降后升”的表达趋势,于处理4 h后显著高于对照。研究结果表明GjMnSOD参与非洲菊对多种逆境胁迫的响应,尤其在非洲菊应答干旱胁迫过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 非洲菊 锰超氧化物歧化酶 基因克隆 表达分析 逆境胁迫响应

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人锰超氧化物歧化酶hSOD2-Q46K突变体的表达与功能分析 被引量：1

11

作者 谢珺 牛得伟 +5 位作者 李艳冰 高可 高辉 李帅广 沈良华 王峰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期205-213,共9页

目的:构建人锰超氧化物歧化酶(hSOD2)-Q46K突变体,简化获得hSOD2突变体的步骤,探讨hSOD2结构与功能的关系.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)体外定点突变技术将hSOD2的46位Q氨基酸突变为K氨基酸,经测序鉴定正确后将p ET15b-hSOD2-Q46K突变... 目的:构建人锰超氧化物歧化酶(hSOD2)-Q46K突变体,简化获得hSOD2突变体的步骤,探讨hSOD2结构与功能的关系.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)体外定点突变技术将hSOD2的46位Q氨基酸突变为K氨基酸,经测序鉴定正确后将p ET15b-hSOD2-Q46K突变体重组质粒转化Rosetta-gami大肠杆菌,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达.利用SWISS-MODEL Workspace对hSOD2-Q46K突变体进行同源建模,利用Swiss-Pdb-Viewer软件对建模结果进行分析.利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白后用超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测目的蛋白的SOD活力.利用浓度为0.1 mmol/L百草枯(PQ)压力下生长情况测定表达hSOD2-Q46K和hSOD2蛋白的Rosetta-gami大肠杆菌的抗氧化能力.结果:测序结果表明46位密码子已由CAG突变为AAG.经过IPTG诱导后野生型和突变体均能表达出大小约为25 k Da的蛋白.SOD活性检测表明hSOD2-Q46K突变体的活力为899 U/mg,比野生型蛋白活性下降了65.4%.三维结构分析显示,突变点周围氨基酸间氢键被部分打破.结论:成功构建hSOD2-Q46K突变体并成功得到了纯化的突变体蛋白,hSOD2-Q46K的SOD活力比野生型降低了65.4%,且百草枯压力下表达hSOD2-Q46K蛋白的大肠杆菌A600达到0.84,而野生型蛋白的大肠杆菌A600达到1.14.这可能是因为突变点与周围氨基酸间氢键打破,突变点周围失去了原来的稳定结构,底物通道入口处氨基酸排列疏散,影响电子在氨基酸间的传递,影响静电导向机制,从而阻碍氧自由基在底物通道的通行,使hSOD2的催化活力下降. 展开更多

关键词 锰超氧化物歧化酶 表达 超氧化物歧化酶活性 突变体

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红曲菌Mn-SOD基因克隆、表达及序列分析 被引量：1

12

作者 何雨峰 韦胜 +5 位作者 岳硕豪 徐泽 秦松 黄莹琪 邓颖 王伟平 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第18期81-86,共6页

为得到产Mn-SOD工程菌及表达产物,通过设计出红曲菌H4000 Mn-SOD简并引物得到目的基因片段,再设计全长引物利用PCR技术扩增红曲霉Mn-SOD基因的全长序列。经EcoRⅠ和HindⅢ酶切后连接至相同酶切的表达载体pET28a,并转化至E.coli BL21进... 为得到产Mn-SOD工程菌及表达产物,通过设计出红曲菌H4000 Mn-SOD简并引物得到目的基因片段,再设计全长引物利用PCR技术扩增红曲霉Mn-SOD基因的全长序列。经EcoRⅠ和HindⅢ酶切后连接至相同酶切的表达载体pET28a,并转化至E.coli BL21进行诱导表达。克隆得到的基因预测编码152个氨基酸,预测相对分子量为17 kDa。同时,将克隆得到的Mn-SOD基因与NCBI数据库进行比对,发现该序列与橙色红曲霉超氧化物歧化酶(SOD)基因相似度达到99%,与炭疽菌、米曲霉、黄曲霉的Mn-SOD基因也有较高的相似度。通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况,目标蛋白相对分子质量约为19 kDa,与预测分子量基本相符。该表达蛋白在pH2.0保温处理1 h,仍具有较高的Mn-SOD酶活。 展开更多

关键词 红曲菌 锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD) 基因克隆 序列分析 诱导表达

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