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DNA错配修复蛋白MutS和MutL的相互作用研究(英文) 被引量:7
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作者 毕利军 张先恩 +1 位作者 周亚凤 张治平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1178-1184,共7页
MutL和MutS是DNA错配修复系统中起关键作用的修复蛋白.利用基因融合技术高效表达了MutL和MutS融合蛋白,并利用它们发展了一种研究二者相互作用的简便方法.融合蛋白MutL-GFP(Trx-His6-GFP-(Ser-Gly)6-MutL),MutL-StreptagⅡ(Trx-His6-(Se... MutL和MutS是DNA错配修复系统中起关键作用的修复蛋白.利用基因融合技术高效表达了MutL和MutS融合蛋白,并利用它们发展了一种研究二者相互作用的简便方法.融合蛋白MutL-GFP(Trx-His6-GFP-(Ser-Gly)6-MutL),MutL-StreptagⅡ(Trx-His6-(Ser-Gly)6-StreptagⅡ-(Ser-Gly)6-MutL)和MutS(Trx-His6-(Ser-Gly)6-MutS)被构建并在大肠杆菌中高效表达.收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果表明有与预期分子质量相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在.利用固定化金属离子配体亲和层析柱分别纯化融合蛋白,其纯度达到90%.通过将MutS蛋白固定的方法研究两种MutL融合蛋白分别与MutS之间的相互作用.结果表明:只有MutS蛋白与含有错配碱基DNA分子结合后才与MutL蛋白发生相互作用.通过检测MutL融合蛋白标记的绿色荧光信号或酶学显色信号来鉴定相互作用的发生.建立的融合分子系统方法也为研究其他的蛋白质或生物大分子之间的相互作用提供了一个技术平台. 展开更多
关键词 融合蛋白 绿色荧光蛋白 Strep tagⅡ muts MUTL 相互作用
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植物碱基错配修复系统中Muts蛋白家族研究进展 被引量:2
2
作者 丰安徽 王伍梅 +3 位作者 李桂娇 郭龙彪 张效忠 崔永涛 《中国稻米》 北大核心 2017年第5期5-11,共7页
DNA错配修复(mismatch repair,MMR)是DNA损伤修复的一个重要途径,主要用于细胞中DNA合成和遗传重组时发生损伤过程中出现的单个或少数碱基的缺失、插入以及错配的修复,它对维持基因组稳定性和DNA复制保真度至关重要。原核生物和真核生... DNA错配修复(mismatch repair,MMR)是DNA损伤修复的一个重要途径,主要用于细胞中DNA合成和遗传重组时发生损伤过程中出现的单个或少数碱基的缺失、插入以及错配的修复,它对维持基因组稳定性和DNA复制保真度至关重要。原核生物和真核生物中都有非常保守的MMR系统。在人体DNA修复系统的研究中,发现癌症的发生与Muts蛋白家族功能缺陷密切相关。类似的在拟南芥和水稻中功能缺陷的Muts蛋白家族(同源蛋白Muts homolog,MSH)会产生增变基因表型,这将为植物的基因功能分析和育种利用奠定基础。基于此,本文综述了近年来有关植物DNA错配修复及相关基因功能的研究进展,特别是植物MMR功能缺陷导致基因突变和微卫星不稳定造成的性状畸形进行了描述,对Muts蛋白家族各个亚基功能做了分类说明,并对植物中如何利用MSH产生的增变基因突变和如何利用突变育种研究进行了展望。 展开更多
关键词 水稻 DNA错配修复 muts蛋白家族 同源重组 突变 稳定
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噬菌体展示技术筛选DNA错配修复蛋白MutS高亲和性抗体
3
作者 刘俊 全智勇 刘建华 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期544-546,共3页
目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用。方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其活性。将MutS作为抗原,在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技... 目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用。方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其活性。将MutS作为抗原,在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技术来筛选MutS的高亲和力噬菌粒。将其转化到大肠杆菌后,诱导表达并通过亲和层析的方法来获得可溶性的抗体片段,并检测其亲和力。结果纯化后的MutS具有识别、结合错配DNA双链的活性。ELISA分析表明,利用噬菌体展示技术可获得MutS高亲和力的噬菌粒。将其转化到大肠杆菌HB2151后,诱导表达并纯化到抗体片段,其亲和力为0.9×108L/mol。结论利用噬菌体展示技术筛选到MutS高亲和力的抗体。 展开更多
关键词 噬菌体展示 DNA错配修复蛋白muts 可溶性抗体片段
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DNA错配修复系统研究进展 被引量:5
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作者 毕利军 周亚凤 +2 位作者 邓教宇 张先恩 张成刚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期32-37,共6页
DNA错配修复 (mismatchrepair ,MMR)系统广泛存在于生物体中 .从原核生物大肠杆菌到真核生物及人类 ,MMR系统有不同的组成成分和修复机制 .人体内MMR基因缺陷会造成基因组的不稳定并诱发遗传性非息肉型直肠癌以及其他自发性肿瘤 .大肠杆... DNA错配修复 (mismatchrepair ,MMR)系统广泛存在于生物体中 .从原核生物大肠杆菌到真核生物及人类 ,MMR系统有不同的组成成分和修复机制 .人体内MMR基因缺陷会造成基因组的不稳定并诱发遗传性非息肉型直肠癌以及其他自发性肿瘤 .大肠杆菌MMR系统中的MutS蛋白可特异识别错配或未配对碱基 ,目前已经发展了多种基于MutS蛋白的基因突变 /多态性检测技术 . 展开更多
关键词 DNA错配 错配修复机制 muts蛋白 基因突变 多态性检测 MMR系统
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猪AKT1蛋白与APPV-YN株Mut蛋白的相互作用及对猪非典型瘟病毒复制影响的研究
5
作者 钱友俊 王雯 +4 位作者 田鑫 刘千歆 邹子恒 孙永科 杨玉艾 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期659-666,共8页
本研究室前期利用酵母双杂交技术初步筛选出导致猪非典型瘟病毒(APPV)云南株非典型化关键基因(YNMut)的互作宿主蛋白激酶B(AKT1),为进一步研究Mut与AKT1之间是否存在互作,以及互作是否影响APPV的复制,本实验构建重组质粒pCMV-tag4A-AKT... 本研究室前期利用酵母双杂交技术初步筛选出导致猪非典型瘟病毒(APPV)云南株非典型化关键基因(YNMut)的互作宿主蛋白激酶B(AKT1),为进一步研究Mut与AKT1之间是否存在互作,以及互作是否影响APPV的复制,本实验构建重组质粒pCMV-tag4A-AKT1并经双酶切和测序鉴定确定正确后转染PK15细胞诱导表达,经werstern blot鉴定ATK1可在PK15细胞中正确表达后,利用本实验室前期表达的GST-Mut蛋白,通过GST pull-down技术鉴定Mut与AKT1的体外互作;构建pBiFC-VN173-AKT1与pBiFC-VC155-Mut重组质粒,经werstern blot分别验证二者可正确表达各蛋白后共转染PK15细胞,利用双分子荧光互补(BiFC)技术鉴定Mut与AKT1在细胞内的互作。结果显示,与对照组细胞相比,pull-down试验结果显示在61 ku处出现特异性条带,BiFC试验中仅实验组细胞可观察到绿色荧光,二者在体外和细胞内均存在相互作用。针对AKT1基因序列设计并合成3条siRNA及对照siRNA(NC),分别转染PK15细胞,经qPCR和werstern blot确认siRNA 1极显著(P<0.0001、P<0.001)下调AKT1 mRNA的转录水平及蛋白表达水平。将PK15细胞分别分为转染siRNA 1和对照siRNA的干预组、NC组,以及分别转染pCMV-tag4A-AKT1和pCMV-tag4A的过表达组、空质粒对照组,转染24 h后以MOI 0.1感染APPV,继续培养至24 h、48 h时分别采用q PCR及western blot检测病毒基因转录水平和病毒蛋白的表达水平。结果显示,与NC组相比,干预组下调AKT1后细胞中APPV基因转录水平及其蛋白的表达水平均极显著降低(P<0.01);与空质粒对照组相比,AKT1过表达组病毒的转录水平及蛋白表达水平均极显著升高(P<0.01)。上述结果首次证实,AKT1与Mut在细胞内和体外均存在直接相互作用,且AKT1能够促进APPV的复制,本研究为后续深入探究APPV感染的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 病毒增殖 蛋白激酶B Mut 蛋白互作
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毕赤酵母Mut^+和Mut^s重组子表达植酸酶基因及其表达物的酶学性质比较 被引量:4
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作者 李健 彭远义 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第3期58-62,共5页
将本实验室已成功构建的植酸酶基因表达载体pPIC9K-phyA酶切线性化后,通过原生质体法整合到巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115菌株细胞中,利用测定酶活、观察转化子在MM和MD平板上的生长情况以及PCR菌落鉴定,筛选出表型为甲醇利用缓... 将本实验室已成功构建的植酸酶基因表达载体pPIC9K-phyA酶切线性化后,通过原生质体法整合到巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115菌株细胞中,利用测定酶活、观察转化子在MM和MD平板上的生长情况以及PCR菌落鉴定,筛选出表型为甲醇利用缓慢型的重组子(His+Muts)。在相同培养条件下比较甲醇利用缓慢型的重组子和Mut+重组子在表达植酸酶方面的异同。实验结果表明,诱导表达48h后,Mut+和MutS重组子表达的产物在SDS-PAGE胶上都出现了清晰的目的带。酶学性质测定表明,酶学性质无显著差异。 展开更多
关键词 植酸酶 muts重组子 Mut^+重组子 酶学性质
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林奇综合征一例并文献复习 被引量:6
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作者 郭艳平 王春宝 +1 位作者 李扬 杨筱凤 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期432-435,共4页
通过回顾1例先后罹患结肠癌和子宫内膜癌的Ⅱ型林奇综合征患者临床诊治资料,复习林奇综合征筛查和管理指南及相关妇科肿瘤文献,简单介绍林奇综合征的发病机制、相关妇科肿瘤的临床病理特点、高危个体的筛查方案及林奇综合征患者的管理... 通过回顾1例先后罹患结肠癌和子宫内膜癌的Ⅱ型林奇综合征患者临床诊治资料,复习林奇综合征筛查和管理指南及相关妇科肿瘤文献,简单介绍林奇综合征的发病机制、相关妇科肿瘤的临床病理特点、高危个体的筛查方案及林奇综合征患者的管理方案。希望通过早筛查、早诊断、早治疗的管理手段,降低林奇综合征相关肿瘤的发生率和死亡率。 展开更多
关键词 林奇综合征 muts同系物2 子宫内膜癌 错配修复基因
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甲基丙二酸尿症合并先天性肾上腺皮质增生症1例报告 被引量:5
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作者 刘玉鹏 丁圆 +6 位作者 李溪远 宋金青 王峤 张尧 刘戈力 王立文 杨艳玲 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期208-211,共4页
目的探讨罕见的甲基丙二酸尿症合并先天性肾上腺皮质增生症患儿的诊疗方法。方法分析1例甲基丙二酸尿症变位酶缺乏合并21羟化酶缺乏症患儿的临床及实验室资料。结果患儿,男,生后3个月起病,接种疫苗及高蛋白饮食后出现喂养困难、腹泻、... 目的探讨罕见的甲基丙二酸尿症合并先天性肾上腺皮质增生症患儿的诊疗方法。方法分析1例甲基丙二酸尿症变位酶缺乏合并21羟化酶缺乏症患儿的临床及实验室资料。结果患儿,男,生后3个月起病,接种疫苗及高蛋白饮食后出现喂养困难、腹泻、代谢紊乱及智力运动发育倒退,1岁8个月时确诊为甲基丙二酸尿症,治疗后好转。5岁后出现性早熟表现,确诊为21羟化酶缺乏症男性化型。基因证实MUT基因存在c.866G?>?C和c.2179C?>?T两个突变,CYP21A2基因存在c.188A?>?T和c.518T?>?A两个已知突变。结论遗传代谢病及内分泌病临床表现复杂,鲜有病例共患多种疾病,该患儿共患甲基丙二酸尿症及21羟化酶缺乏症两种罕见疾病。 展开更多
关键词 甲基丙二酸尿症 MUT基因 先天性肾上腺皮质增生症 21羟化酶缺乏症 CYP21A2基因
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增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量:2
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作者 牛传双 方六荣 +2 位作者 肖少波 张辉 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期489-491,共3页
增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP(EGFP/V16 3A/S175G)是一种发光能力更强、更稳定的新型绿色荧光蛋白。为了获得大量高纯度的蛋白 ,将mut4EGFP基因插入原核表达载体 pTWIN1中 ,使之与几丁质结合域 (CBD) 内含肽 (intein)融合 ,获得原... 增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP(EGFP/V16 3A/S175G)是一种发光能力更强、更稳定的新型绿色荧光蛋白。为了获得大量高纯度的蛋白 ,将mut4EGFP基因插入原核表达载体 pTWIN1中 ,使之与几丁质结合域 (CBD) 内含肽 (intein)融合 ,获得原核表达质粒 pTWIN M 4。将 pTWIN M 4转化大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS ,IPTG诱导后进行SDS PAGE电泳分析 ,结果显示 ,CBD intein mut4EGFP融合蛋白在BL2 1(DE3) plysS中获得高效表达并以可溶性蛋白的形式存在。进一步采用几丁质柱纯化系统对表达产物进行纯化 ,得到了高纯度的mut4EGFP。 展开更多
关键词 绿荧光蛋白 突变体mut4EGFP 表达 纯化
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DNA修复相关基因启动子甲基化和肿瘤化疗耐药的进展 被引量:5
10
作者 韩婧 李江 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期95-98,共4页
肿瘤细胞DNA修复能力与化疗药物敏感性密切相关,而DNA启动子甲基化可导致DNA修复相关基因转录失活、基因沉默、蛋白表达量改变等影响DNA的修复能力,继而导致肿瘤对化疗药物的固有性或获得性耐药。该文着重阐述DNA修复相关基因O6-甲基鸟... 肿瘤细胞DNA修复能力与化疗药物敏感性密切相关,而DNA启动子甲基化可导致DNA修复相关基因转录失活、基因沉默、蛋白表达量改变等影响DNA的修复能力,继而导致肿瘤对化疗药物的固有性或获得性耐药。该文着重阐述DNA修复相关基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、人类mut1同源物(hMLH1)和范科尼贫血互补基团F(FANCF)启动子甲基化与肿瘤化疗耐药之间的关系。 展开更多
关键词 启动子甲基化 DNA修复 耐药 烷化剂 O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 人类mut1同源物 范科尼贫血互补基团F
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抑制Polo样激酶1表达靶向DNA错配修复相关通路并抑制卵巢癌的相关研究 被引量:2
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作者 李娟 何苗 +3 位作者 袁春兰 李红梅 邓小梅 肖雪 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期871-878,共8页
目的:观察Polo样激酶1(PLK1)在卵巢癌(OC)细胞和组织中的表达情况,以及抑制PLK1表达对耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的OC细胞活力和凋亡的影响。方法:在2011年4月~2018年12月的126名OC患者纳入本研究。采用免疫组化法检测PLK1在OC组织及邻近正常... 目的:观察Polo样激酶1(PLK1)在卵巢癌(OC)细胞和组织中的表达情况,以及抑制PLK1表达对耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的OC细胞活力和凋亡的影响。方法:在2011年4月~2018年12月的126名OC患者纳入本研究。采用免疫组化法检测PLK1在OC组织及邻近正常卵巢组织中的表达水平。体外构建耐5-FU的OC细胞系(OVCAR3-5FU_(res)和SKOV3-FU_(res))。将PLK1重组质粒和PLK1-sh RNA慢病毒载体(sh-PLK1)分别转染到OVCAR3、SKOV3、OVCAR3-5FU_(res)和SKOV3-5FU_(res)细胞中。采用CCK-8法检测细胞活力;通过串联亲和纯化和质谱分析确定PLK1在OC细胞中的结合蛋白;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:在OC细胞系中,PLK1水平显著上调(P<0.05);并且在大多数OC组织中,PLK1表达较癌旁组织显著上调(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,PLK1高表达OC患者的平均存活时间显著短于PLK1低表达OC患者(P<0.001)。OC中PLK1水平的升高与FIGO分期、肿瘤分级和错配修复缺陷等临床病理特征显著相关(P<0.05)。与阴性对照细胞相比,转染sh-PLK1的细胞活力显著降低(P<0.05);而转染PLK1重组质粒的OVCAR3和SKOV3细胞的活力显著高于对照细胞。通过串联亲和纯化和质谱分析确定人Mut S蛋白同系物2(hMSH2)是PLK1在OC细胞中的结合蛋白,并且h MSH2基因敲除使sh-PLK1转染的OVCAR3-5FU_(res)细胞的凋亡率降低(P<0.01)。结论:抑制PLK1表达通过靶向h MSH2提高了OC细胞对5-FU的敏感性。 展开更多
关键词 POLO样激酶1 卵巢癌 DNA错配修复 muts蛋白同系物2 5-氟尿嘧啶
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膜蛋白配体hMSH2在肺癌中的可溶性表达及影响因素
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作者 代玉梅 张昭勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第23期2897-2901,共5页
目的:探讨Vγ9Vδ2 T细胞识别的肿瘤相关内源性膜蛋白配体人MutS同源蛋白2(hMSH2)在肺癌血清中的可溶性表达及影响因素。方法:ELISA定量检测肺癌、肺结节及健康人群血清hMSH2的可溶(s)形式,分析其表达与肺癌类型、转移、吸烟史/家族史... 目的:探讨Vγ9Vδ2 T细胞识别的肿瘤相关内源性膜蛋白配体人MutS同源蛋白2(hMSH2)在肺癌血清中的可溶性表达及影响因素。方法:ELISA定量检测肺癌、肺结节及健康人群血清hMSH2的可溶(s)形式,分析其表达与肺癌类型、转移、吸烟史/家族史及常用血清标志物的相关性。结果:三组血清均首次发现hMSH2的可溶形式,肺癌组shMSH2表达低于肺结节组和健康对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),且与肺癌类型、转移、吸烟/家族史及常用血清标志物无明显相关性(P>0.05)。结论:shMSH2可能并非适宜的肺癌血清诊断标志物。 展开更多
关键词 muts同源蛋白2 可溶性表达 肺癌 影响因素
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婴儿期起病的甲基丙二酸血症41例病例系列报告 被引量:3
13
作者 邓冬立 肖非凡 +4 位作者 吴冰冰 孙卫华 杨琳 陆炜 周文浩 《中国循证儿科杂志》 CSCD 北大核心 2020年第6期459-462,共4页
目的总结婴儿期起病的甲基丙二酸血症(MMA)患儿的首发临床特征和基因突变情况,分析表型与基因型的关联性。方法纳入2016年6月至2019年6月经复旦大学附属儿科医院分子医学中心基因检测发现携带MMA已知致病基因的致病或可疑致病变异的婴儿... 目的总结婴儿期起病的甲基丙二酸血症(MMA)患儿的首发临床特征和基因突变情况,分析表型与基因型的关联性。方法纳入2016年6月至2019年6月经复旦大学附属儿科医院分子医学中心基因检测发现携带MMA已知致病基因的致病或可疑致病变异的婴儿,截取患儿就诊的主要原因、临床信息和基因检测结果,按照不同致病基因分组比较患儿的临床表型。结果41例中男26例,中位起病时间为21日龄,新生儿期就诊25例,28 d至6个月就诊12例,~12个月就诊4例;主要就诊原因为生后反应差(24例)和遗传代谢病串联质谱筛查疑似MMA(8例)。共检出MUT基因和MMACHC基因的47种致病/可疑致病变异。MUT基因热点致病变异为c.729_730insTT、c.323G>A和c.1677-1G>A;MMACHC基因热点致病变异为c.609G>A、c.567dupT和c.80A>G。33例有临床表现的患儿中,22例携带MUT基因变异(MUT组),11例携带MMACHC变异(MMACHC组);2组最常见的表型均为肌张力异常、呼吸系统异常和喂养困难,差异均无统计学意义。MUT组更易出现酸中毒(50.0%vs 9.1%,P=0.027),MMACHC组更易出现心肌受累(36.4%vs 4.5%,P=0.037)。5例患儿放弃治疗后死亡。结论婴儿期出现反应差、肌张力异常、呼吸系统异常及喂养困难的患儿,应警惕甲基丙二酸血症的可能性。MMA患儿携带MUT基因突变更易出现酸中毒症状,携带MMACHC基因突变更易合并心肌受累。 展开更多
关键词 甲基丙二酸血症 早期临床特征 MUT基因 MMACHC基因
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中国人结直肠癌患者碱基切割修复基因胚系突变及与腺瘤样息肉基因体细胞突变的关系研究
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作者 顾昕 朱明 +2 位作者 周司徒 陈慧梅 王亚平 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期537-544,共8页
取42例经过病理确认的结直肠癌患者癌组织及癌旁正常组织,抽提基因组DNA,应用单链构象多态性分析(SSCP)、变性高效液相色谱(DHPLC)分析,结合DNA直接测序,在全基因分析humanmutY homologue(MYH)基因胚系突变的同时,探讨其对结直肠癌细胞a... 取42例经过病理确认的结直肠癌患者癌组织及癌旁正常组织,抽提基因组DNA,应用单链构象多态性分析(SSCP)、变性高效液相色谱(DHPLC)分析,结合DNA直接测序,在全基因分析humanmutY homologue(MYH)基因胚系突变的同时,探讨其对结直肠癌细胞adenomatous polyposis coli(APC)基因体细胞突变的影响.结果42例患者中检出6例(14.29%)携带MYH基因的胚系突变,其中3例(7.14%)为MYH基因第2外显子单体型突变c.53C>T/c.74G>A(p.Pro18Leu/p.Gly25 Asp),3例(7.14%)为第12外显子的单碱基替换导致的错义突变c.972G>C(p.Gln324His).初步分析显示,这两种突变在正常对照组的检出较低,仅为3/213(1.41%)和0/59(0%).另一方面4/6例携带MYH基因胚系突变患者的癌组织样本中检出5个APC基因体细胞突变.本文结果提示,散发性结直肠癌患者中频繁检出MYH基因的胚系突变,其存在可能导致细胞DNA氧化损伤修复功能减弱,并使机体细胞APC基因发生突变的风险增高,从而可能参与部分结直肠癌的发生. 展开更多
关键词 结直肠癌 HUMAN mut Yhomologue adenomatous polyposiscoli 突变
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Multidisciplinary design optimization on production scale of underground metal mine 被引量:4
15
作者 左红艳 罗周全 +1 位作者 管佳林 王益伟 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS 2013年第5期1332-1340,共9页
In order to ensure overall optimization of the underground metal mine production scale, multidisciplinary design optimization model of production scale which covers the subsystem objective function of income of produc... In order to ensure overall optimization of the underground metal mine production scale, multidisciplinary design optimization model of production scale which covers the subsystem objective function of income of production, safety and environmental impact in the underground metal mine was established by using multidisciplinary design optimization method. The coupling effects from various disciplines were fully considered, and adaptive mutative scale chaos immunization optimization algorithm was adopted to solve multidisciplinary design optimization model of underground metal mine production scale. Practical results show that multidisciplinary design optimization on production scale of an underground lead and zinc mine reflect the actual operating conditions more realistically, the production scale is about 1.25 Mt/a (Lead and zinc metal content of 160 000 t/a), the economic life is approximately 14 a, corresponding coefficient of production profits can be increased to 15.13%, safety factor can be increased to 5.4% and environmental impact coefficient can be reduced by 9.52%. 展开更多
关键词 underground metal mines production scale multidisciplinary design optimization adaptive mutative scale chaosoptimization algorithm immunization
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猪静脉血管内皮细胞cDNA文库构建及与猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因互作蛋白的筛选 被引量:1
16
作者 姜光飞 何维琪 +3 位作者 余蕊 梁龙舟 孙永科 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2023年第7期1-9,共9页
近几年,猪非典型瘟病毒(APPV)在世界多个养猪国家相继报道,临床症状呈不典型性,给养猪业造成了较大的经济损失。为了解猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因(APPV-YN Mut)与宿主可能存在相互作用的蛋白,深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其... 近几年,猪非典型瘟病毒(APPV)在世界多个养猪国家相继报道,临床症状呈不典型性,给养猪业造成了较大的经济损失。为了解猪非典型瘟病毒云南株关键变异基因(APPV-YN Mut)与宿主可能存在相互作用的蛋白,深入研究APPV-YN Mut基因的功能及其非典型化机制,利用酵母双杂交技术,构建了猪静脉血管内皮细胞(SVEC)cDNA文库,并进一步采用建立的SVEC cDNA文库与诱饵质粒pGBKT7-Mut共转Y2H Gold酵母菌,筛选与Mut蛋白相互作用的蛋白,对筛选出的蛋白进行测序和生物信息学分析。结果表明,构建的诱饵载体在酵母细胞中成功表达,且无毒无自激活;构建的SVEC cDNA文库容量大于1×106 CFU/mL,文库滴度6.2×106 CFU/mL,PCR显示文库插入片段大小在250~3000 bp,条带大小不一,符合文库大小要求;与SVEC cDNA文库筛选发现14种与Mut蛋白存在潜在互作的宿主蛋白,通过蛋白功能分析发现这些蛋白主要与病毒复制、细胞凋亡、钙离子结合、蛋白代谢和降解有关。研究结果有助于进一步探索14种潜在互作蛋白中到底哪些与Mut发生密切互作,且与病毒感染宿主密切相关,为研究APPV-YN Mut基因功能及其致非典型化作用机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 关键变异基因Mut 酵母双杂交 CDNA文库 蛋白互作
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猪非典型瘟病毒云南株Mut蛋白的特征分析及其对宿主细胞NF-κB转录活化的影响
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作者 何维琪 姜光飞 +3 位作者 高艺 梁龙舟 杨玉艾 孙永科 《动物医学进展》 北大核心 2023年第6期7-14,共8页
猪非典型瘟病毒(APPV)是近年来新发现的猪病毒性病原,给养猪业健康发展带来了严重的威胁。课题组前期研究发现了APPV云南株(APPV-YN)导致感染猪临床症状非典型化的关键基因Mut,为探讨APPV-YN Mut的生物学特征及其对宿主细胞NF-κB信号... 猪非典型瘟病毒(APPV)是近年来新发现的猪病毒性病原,给养猪业健康发展带来了严重的威胁。课题组前期研究发现了APPV云南株(APPV-YN)导致感染猪临床症状非典型化的关键基因Mut,为探讨APPV-YN Mut的生物学特征及其对宿主细胞NF-κB信号通路转录活化的影响,揭示APPV非典型化的机制。利用SnapGene、ProtParam、PredictProtein、TMHMM、SignaIP 4、ProtScale等在线软件对APPV-YN Mut基因表达蛋白的理化性质、亚细胞定位、磷酸化位点等进行分析预测;将重组载体pCMV-Mut转染至HEK-293细胞,确定蛋白稳定表达后利用TNF-α刺激NF-κB信号通路使其活化,分析APPV-YN Mut对NF-κB转录活性及其对NF-κB P65核质转运的影响。生物信息学分析结果显示,Mut蛋白为亲水性的稳定蛋白,无跨膜结构和信号肽,可能主要定位于细胞质,二级结构主要以无规则卷曲为主,三级结构稳定,可能作用于PKC、P38MAPK、PKA、EGFR、CDK5等相关激酶及蛋白受体;Mut蛋白在HEK-293细胞成功表达,大小约为15 ku;Mut对TNF-α激活的NF-кB转录活化有明显抑制作用,干扰NF-κB P65的入核,抑制核质穿梭过程。研究结果为后续进一步在分子水平上探究Mut在APPV非典型化中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪非典型瘟病毒 生物信息学 Mut蛋白 NF-κB转录活性 P65
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