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铜绿假单胞菌LasR基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响
被引量：
4
1
作者
张玲
周俊立
+1 位作者
李静铭
廖芳
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期1049-1054,共6页
PCR扩增LasR基因,用反向克隆法构建LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense并转化铜绿假单胞菌,经酶切、PCR及测序鉴定重组载体.RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达,NAD法测定外毒素A的活性,紫外分光光度计测定绿脓菌...
PCR扩增LasR基因,用反向克隆法构建LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense并转化铜绿假单胞菌,经酶切、PCR及测序鉴定重组载体.RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达,NAD法测定外毒素A的活性,紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平.用转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查.PCR扩增出约720bp片段,与GenBank(No:NC_002516)报道的基因片段大小一致,构建了LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense,并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素A和绿脓菌素表达水平均降低.与标准株感染的大鼠比较,转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻.上述结果表明,LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense可以降低铜绿假单胞菌的毒力.
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关键词
lasr基因
反义核酸
细菌转化
毒力因子
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职称材料
铜绿假单胞菌lasR基因反义肽核酸序列筛选及其抑制生物被膜形成的研究
被引量：
2
2
作者
张峰领
安琳
+9 位作者
李进
李发科
徐欢
罗杰
杨成
蒋文斌
雷国勤
汪超
周琳
鲁卫平
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期529-535,共7页
目的筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响。方法针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜...
目的筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响。方法针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜肽连接的肽-肽核酸序列。分别用不同浓度的肽-肽核酸导入铜绿假单胞菌生物被膜模式菌PAO1中,测定不同时相点细菌生长光密度[D(600)]值并进行菌落计数,观察肽-肽核酸对其生长的抑制作用。利用光学显微镜和扫描电镜观察生物被膜形成情况。q PCR方法检测lasR mRNA表达。结果斑点杂交实验结果显示:4条反义寡核苷酸序列中3条有杂交信号产生,其中第1条序列信号最强,以此为基础合成反义肽核酸。不同浓度的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌表现出不同程度的体外抗菌活性,且随着浓度增加,抗菌活性增强。结论有效筛选出高效反义核苷酸序列,经筛选出的靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸对铜绿假单胞菌的生长及生物被膜形成能力有明显抑制作用,同时抑制lasR mRNA的表达。
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关键词
铜绿假单胞菌
lasr基因
反义肽核酸
生物被膜
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职称材料
题名
铜绿假单胞菌LasR基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响
被引量：
4
1
作者
张玲
周俊立
李静铭
廖芳
机构
武汉市疾病预防控制中心
华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室
武汉市第十一医院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期1049-1054,共6页
文摘
PCR扩增LasR基因,用反向克隆法构建LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense并转化铜绿假单胞菌,经酶切、PCR及测序鉴定重组载体.RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达,NAD法测定外毒素A的活性,紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平.用转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查.PCR扩增出约720bp片段,与GenBank(No:NC_002516)报道的基因片段大小一致,构建了LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense,并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素A和绿脓菌素表达水平均降低.与标准株感染的大鼠比较,转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻.上述结果表明,LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense可以降低铜绿假单胞菌的毒力.
关键词
lasr基因
反义核酸
细菌转化
毒力因子
Keywords
lasr
gene, antisensenucleic acids, bacterial transformation, virulence factor
分类号
R378.991 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
铜绿假单胞菌lasR基因反义肽核酸序列筛选及其抑制生物被膜形成的研究
被引量：
2
2
作者
张峰领
安琳
李进
李发科
徐欢
罗杰
杨成
蒋文斌
雷国勤
汪超
周琳
鲁卫平
机构
第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科
陆军重庆军事代表局门诊部
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期529-535,共7页
基金
全军医学科研"十二五"计划面上项目(CWS13J039)~~
文摘
目的筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响。方法针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜肽连接的肽-肽核酸序列。分别用不同浓度的肽-肽核酸导入铜绿假单胞菌生物被膜模式菌PAO1中,测定不同时相点细菌生长光密度[D(600)]值并进行菌落计数,观察肽-肽核酸对其生长的抑制作用。利用光学显微镜和扫描电镜观察生物被膜形成情况。q PCR方法检测lasR mRNA表达。结果斑点杂交实验结果显示:4条反义寡核苷酸序列中3条有杂交信号产生,其中第1条序列信号最强,以此为基础合成反义肽核酸。不同浓度的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌表现出不同程度的体外抗菌活性,且随着浓度增加,抗菌活性增强。结论有效筛选出高效反义核苷酸序列,经筛选出的靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸对铜绿假单胞菌的生长及生物被膜形成能力有明显抑制作用,同时抑制lasR mRNA的表达。
关键词
铜绿假单胞菌
lasr基因
反义肽核酸
生物被膜
Keywords
Pseudomonas aeruginosa
lasr
gene
antisense peptide nucleic acids
biofilm
分类号
R379.991 [医药卫生—病原生物学]
R394-33 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
铜绿假单胞菌LasR基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响
张玲
周俊立
李静铭
廖芳
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
铜绿假单胞菌lasR基因反义肽核酸序列筛选及其抑制生物被膜形成的研究
张峰领
安琳
李进
李发科
徐欢
罗杰
杨成
蒋文斌
雷国勤
汪超
周琳
鲁卫平
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
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