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高转移性结直肠癌细胞通过分泌KLF4诱导M2型巨噬细胞极化对结直肠癌免疫逃逸的影响 被引量:1
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作者 尚靖 路畅 +4 位作者 侯阳波 袁沁 李炜 王海静 陈进宝 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第6期1036-1042,共7页
目的探讨高转移性结直肠癌细胞HCT116诱导M2型巨噬细胞极化对结直肠癌免疫逃逸的影响及其机制。方法将结直肠癌细胞条件培养基(CM)与佛波酯(PMA)诱导的M0型巨噬细胞共培养后,通过流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和酶联免疫... 目的探讨高转移性结直肠癌细胞HCT116诱导M2型巨噬细胞极化对结直肠癌免疫逃逸的影响及其机制。方法将结直肠癌细胞条件培养基(CM)与佛波酯(PMA)诱导的M0型巨噬细胞共培养后,通过流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)观察M2型巨噬细胞极化状态;将CMM0、CMSW480-Mφ和CM_(HCT116-Mφ)与HCT116细胞共培养后,通过Western blot和qPCR检测程序性死亡受体配体1(PD-L1)的表达情况,同时将刺激后的HCT116细胞与人源T淋巴细胞共培养,检测HCT116细胞存活情况及上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)水平;用Western blot、qPCR和ELISA检测SW480和HCT116细胞中Kruüppel样因子4(KLF4)表达差异;用KFL4抑制剂肯帕罗酮(Ken)预处理HCT116细胞后,将CM_(HCT116-Mφ)和CM_((HCT116+Ken)-Mφ)与M0型巨噬细胞共培养,通过流式细胞术、qPCR、ELISA实验观察M2型巨噬细胞极化状态。将CM_(HCT116-Mφ)和CM_((HCT116+Ken)-Mφ)与HCT116细胞共培养后,通过Western blot和qPCR检测PD-L1的表达情况。结果M0型巨噬细胞在CM刺激后,HCT116-Mφ细胞中CD11b+CD206+细胞比例更高,M2型巨噬细胞标志物白细胞介素(IL)-10及转化生长因子-β(TGF-β)表达更高;相比于CMSW480-Mφ组,CM_(HCT116-Mφ)组的PD-L1蛋白表达水平更高;与T淋巴细胞共培养后,CM_(HCT116-Mφ)组细胞存活最多,同时TNF-α和IFN-γ水平最低;加入Ken后,M2型巨噬细胞极化比例及标志物均降低。与CM_(HCT116-Mφ)组相比,CM_((HCT116+Ken)-Mφ)组HCT116细胞PD-L1表达下降。结论高转移性结直肠癌细胞通过分泌KLF4诱导M2型巨噬细胞极化促进结直肠癌细胞PD-L1表达,促进肿瘤免疫逃逸。该研究有望为提高临床免疫治疗效果提供潜在靶点。 展开更多
关键词 高转移性结直肠癌细胞 klf4 肿瘤相关巨噬细胞 免疫逃逸 PD-L1
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KLF4通过抑制脂肪酸合成抑制MASLD的发生
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作者 陈雨婷 樊丽君 +3 位作者 潘紫妍 王翠喆 张婷 张君 《石河子大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期397-404,共8页
目的研究KLF4在代谢功能障碍相关脂肪变性肝病(Metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease,MASLD)发生过程中的作用,并初步探究其可能的分子机制。方法将12只C57BL/6雄性小鼠分为普通饮食组(Normal Chow Diet,ND,n=6)... 目的研究KLF4在代谢功能障碍相关脂肪变性肝病(Metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease,MASLD)发生过程中的作用,并初步探究其可能的分子机制。方法将12只C57BL/6雄性小鼠分为普通饮食组(Normal Chow Diet,ND,n=6)和高脂饮食组(High Fat Diet,HFD,n=6),监测其生理指标变化,分析肝脏组织中KLF4的蛋白和mRNA表达水平。使用游离脂肪酸(Free fatty acids,FFA)处理人肝癌细胞HepG2和小鼠肝癌细胞Hepa1-6构建脂代谢紊乱细胞模型。体外细胞实验分为过表达KLF4并用游离脂肪酸处理组(OE-KLF4-FFA)及其对照组(NC-FFA),敲低KLF4并用游离脂肪酸处理组(Si-KLF4-FFA)及其对照组(NC-FFA),通过酶法检测细胞内甘油三酯(Triglyceride,TG)和胆固醇(Cholesterol,CHO)水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测KLF4以及脂质合成相关因子脂肪酸合酶(Fatty acid synthase,FASN)、甾醇调节元件结合蛋白1(Sterol-regulatory element binding proteins,SREBP1)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的mRNA表达水平;蛋白质免疫印记法检测KLF4以及脂质合成相关因子FASN、SREBP1和PPARγ的蛋白表达水平;油红O染色观察细胞内脂滴积累情况。结果HFD组小鼠肝脏组织中KLF4的蛋白和mRNA表达水平显著低于ND组,FASN、SREBP1和PPARγ的mRNA表达水平显著高于ND组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);HepG2细胞和Hepa1-6细胞FFA处理组KLF4的mRNA和蛋白表达水平低于对照组(P<0.05,P<0.01);HepG2细胞和Hepa1-6细胞中过表达KLF4改善脂质积累,降低脂质合成相关因子的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与之相反,HepG2细胞和Hepa1-6细胞中敲低KLF4加剧脂质积累,增加脂质合成相关因子的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论KLF4通过负调控脂肪酸的合成抑制MASLD的发生。 展开更多
关键词 klf4 代谢功能障碍相关脂肪变性肝病 转录因子 脂质合成
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KLF4对肿瘤干细胞自我更新和增殖潜能的影响 被引量:9
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作者 贾勇圣 张文健 +3 位作者 刘虹麟 彭亮 杨治华 娄晋宁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期368-372,共5页
目的:分析Kr櫣ppel样因子4(Krppel-like factor4,KLF4)对肿瘤干细胞T3A-A3自我更新和增殖能力的影响。方法:构建靶向干扰KLF4的慢病毒载体pLVTHM-shKLF4,利用前期实验分离与鉴定的肿瘤干细胞T3A-A3,应用RT-PCR和Western blotting分别... 目的:分析Kr櫣ppel样因子4(Krppel-like factor4,KLF4)对肿瘤干细胞T3A-A3自我更新和增殖能力的影响。方法:构建靶向干扰KLF4的慢病毒载体pLVTHM-shKLF4,利用前期实验分离与鉴定的肿瘤干细胞T3A-A3,应用RT-PCR和Western blotting分别检测pLVTHM-shKLF4感染后T3A-A3细胞中KLF4mRNA和蛋白的表达。细胞球形成实验检测pLVTHM-shKLF4感染对T3A-A3细胞自我更新的影响,平板集落形成实验检测T3A-A3细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测T3A-A3细胞周期变化。裸鼠皮下移植瘤实验观察pLVTHM-shKLF4干扰KLF4表达后对T3A-A3细胞移植瘤生长的影响。结果:与肝癌细胞BEL-7402、HepG2相比,肿瘤干细胞T3A-A3表达更高水平的KLF4;pLVTHM-shKLF4感染能够在mRNA和蛋白水平下调T3A-A3细胞中KLF4的表达。pLVTHM-shKLF4感染的T3A-A3细胞形成细胞球的直径明显小于对照病毒的pLVTHM-shNC感染的T3A-A3细胞[(104.33±16.28)vs(186.67±28.15)μm,P<0.01],pLVTHM-shKLF4感染细胞形成的细胞克隆数目明显少于对照细胞[(83.5±7.78)vs(125±9.19)个,P<0.01),pLVTHM-shKLF4感染的T3A-A3细胞G1期比例明显升高[(39.65±4.03)%vs(29.35±1.00)%,P<0.01]。pLVTHM-shKLF4感染的T3A-A3细胞的移植瘤生长速度较对照细胞移植瘤明显减慢[细胞接种33 d,(46.14±12.94)vs(228.12±94.86)mm3,P<0.01]。结论:干扰KLF4的表达可抑制肿瘤干细胞T3A-A3的自我更新及其在体内外的增殖潜能。 展开更多
关键词 Krüppel样因子4(klf4) RNA干扰 肝癌 肿瘤干细胞 T3A—A3 自我更新 增殖
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KLF4和KLF5蛋白在不同临床分期胃癌组织中的表达及意义 被引量:11
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作者 龚邵新 庄英帜 +5 位作者 赵强 贺荣芳 丁慧 胡义燕 阳帅 曾庆彪 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期756-759,共4页
背景与目的:胃癌的发生、发展及生物学行为受到多个分子信号通路的影响,转录因子是调控这些分子通路的重要因素。而转录因子KLF4(Krüppel-like factors 4)、KLF5(Krüppel-like factors 5)与胃癌相关性的报道比较罕见。因此探... 背景与目的:胃癌的发生、发展及生物学行为受到多个分子信号通路的影响,转录因子是调控这些分子通路的重要因素。而转录因子KLF4(Krüppel-like factors 4)、KLF5(Krüppel-like factors 5)与胃癌相关性的报道比较罕见。因此探讨转录因子KLF4、KLF5对胃癌生物学行为影响的分子机制具有重要的意义。方法:收集158例手术切除的胃溃疡型腺癌组织标本,同时取78例癌旁组织作为对照。应用免疫组织化学SP法检测胃腺癌组织、癌旁组织中转录因子KLF4和KLF5蛋白的表达。结果:158例胃腺癌组织中KLF4的阳性表达率为40.50%,KLF5的阳性表达率为63.93%,KLF4和KLF5的表达与患者性别、年龄及肿瘤位置之间无显著相关性(P>0.05),与肿瘤有无淋巴转移及WHO临床分期之间有显著相关性(P<0.05)。随着临床分期等级的增加,KLF4表达呈现递减趋势,而KLF5表达呈现增加趋势,其表达率与肿瘤临床分期程度显著相关(P<0.05)。结论:胃癌组织中KLF4的低表达和KLF5蛋白高表达可能是胃黏膜恶性转变以及胃癌发生浸润转移的重要生物学标志,检测KLF4和KLF5对预测胃癌浸润转移有重要意义。 展开更多
关键词 胃癌 klf4蛋白 KLF5蛋白 肿瘤转移 浸润
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卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21表达及其预后意义 被引量:5
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作者 张军 汪瑞雪 +4 位作者 樊晓妹 娄蕾 刘围娜 赵喜娃 李月红 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期22-26,共5页
目的探讨不同级别卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白表达的差异和预后意义。方法应用免疫组化EliVision法检测卵巢低级别和高级别浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白的表达,Kaplan-Meier单因素和Cox多因素生存分析其与患者预后的关系。结... 目的探讨不同级别卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白表达的差异和预后意义。方法应用免疫组化EliVision法检测卵巢低级别和高级别浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白的表达,Kaplan-Meier单因素和Cox多因素生存分析其与患者预后的关系。结果 SP1、KLF4和p21蛋白在高级别浆液性腺癌中的阳性率分别为74.5%、17.0%和11.7%,低级别浆液性腺癌中的阳性率分别为65.2%、34.8%和26.1%,与对照组相比,SP1表达均明显升高(P<0.05),而KLF4和p21表达均明显降低(P<0.05)。三者在高、低级别液性腺癌中的表达差异无显著性(P>0.05)。SP1、KLF4和p21蛋白表达与高级别液性腺癌FIGO分期密切相关,且SP1还与术后有无残留灶密切相关(P<0.05)。卵巢高级别液性腺癌中SP1表达与KLF4、p21的表达均呈显著负相关(P<0.05)。高级别液性腺癌中SP1蛋白阳性者的5年生存率明显低于阴性者,而KLF4和p21蛋白阳性者的5年生存率明显高于阴性者(P<0.05)。Cox多因素分析显示,FIGO分期和SP1高表达是影响高级别浆液性腺癌预后的独立因素。结论 SP1蛋白过表达以及KLF4和p21蛋白低表达,参与了高、低级别浆液性腺癌的发生,三者表达与高级别浆液性腺癌的预后有关,且SP1是独立预后因素。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 浆液性腺癌 SPl klf4 p21 预后
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KLF4和SPARC在非小细胞肺癌中的表达及其相关性研究 被引量:7
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作者 张志平 王洲 +5 位作者 刘相燕 史墨 陈钢 张波 李哲 宋亮 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2012年第12期720-724,共5页
背景与目的已有研究证实KLF4基因(Krüppel-like factor4)和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(se-creted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)与肿瘤的发生发展密切相关。本研究旨在检测KLF4和SPARC蛋白在非小细胞肺癌(non-small... 背景与目的已有研究证实KLF4基因(Krüppel-like factor4)和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(se-creted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)与肿瘤的发生发展密切相关。本研究旨在检测KLF4和SPARC蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,并结合临床病理特征来探讨KLF4和SPARC的临床意义及相关性。方法应用免疫组织化学方法检测89例NSCLC组织及正常肺组织中KLF4和SPARC的表达。结果 KLF4在癌旁正常肺组织阳性表达率为88.8%,NSCLC组织为42.7%(P<0.05);有、无淋巴结转移者的KLF4阳性表达率分别为31.3%和56.1%(P<0.05);KLF4的表达与肿瘤临床分期有关(P<0.05),随着临床分期等级的增加,KLF4表达呈现递减趋势。SPARC在NSCLC组织的阳性表达率为70.8%,癌旁正常肺组织为7.9%(P<0.05);低、高分化癌的SPARC阳性表达率无统计学差异(P>0.05);有、无淋巴结转移者的SPARC阳性表达率分别为81.3%和58.5%(P<0.05);其表达与肿瘤的临床分期相关(P<0.05)。KLF4和SPARC的表达均与患者的性别、年龄和肿瘤大小无关(P>0.05)。SPARC和KLF4在NSCLC中的表达呈负相关(r=-0.245,P<0.05)。结论 KLF4低表达及SPARC的过表达与NSCLC的发生及其生物学行为密切相关,可能作为NSCLC诊断及分期预后的指标。 展开更多
关键词 肺肿瘤 klf4 SPARC
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转录因子KLF4在宫颈癌中的表达及意义 被引量:8
7
作者 杨文婷 刘树艳 郑鹏生 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期22-25,共4页
目的探讨转录因子KLF4在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法采用组织微阵列结合免疫组织化学方法研究39例宫颈鳞癌、28例宫颈原位癌、30例正常宫颈组织中KLF4蛋白的表达及其与临床病理因素间的关系。结果KLF4蛋白在正常宫颈组织与宫颈原位癌... 目的探讨转录因子KLF4在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法采用组织微阵列结合免疫组织化学方法研究39例宫颈鳞癌、28例宫颈原位癌、30例正常宫颈组织中KLF4蛋白的表达及其与临床病理因素间的关系。结果KLF4蛋白在正常宫颈组织与宫颈原位癌中的表达均为阳性,在宫颈鳞癌组织中表达显著下调(P<0.05);KLF4蛋白的表达与临床病理因素不相关。结论KLF4可能作为一个抑癌基因与宫颈鳞癌的发生有关。 展开更多
关键词 宫颈癌 klf4 免疫组织化学
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KLF4调控TGF-β通路减弱EMT抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭及转移 被引量:5
8
作者 王宝金 徐丽达 +4 位作者 赵欣欣 林少冲 李霞 杜俊鹏 王凯 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第19期2442-2446,共5页
目的探讨KLF4通过调控TGF-β通路减弱EMT对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法构建过表达KLF4及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达KLF4组卵巢癌细胞系。Western blot法测定... 目的探讨KLF4通过调控TGF-β通路减弱EMT对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法构建过表达KLF4及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达KLF4组卵巢癌细胞系。Western blot法测定各组卵巢癌细胞中TGF-β通路相关蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测KLF4过表达对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;构建原位小鼠移植瘤模型,验证KLF4过表达对肿瘤生长、转移的影响。结果MTT及Transwell实验结果显示,与空白对照组相比,过表达KLF4组可以抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);过表达KLF4能够明显抑制卵巢癌细胞的EMT过程(P<0.05);过表达KLF4能通过抑制Smad介导的TGF-β通路抑制卵巢癌细胞EMT;KLF4可以抑制原位小鼠卵巢癌移植瘤中原发性肿瘤生长和转移。结论KLF4可以通过抑制Smad介导的TGF-β通路抑制EMT,从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,KLF4/Smad/TGF-β/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 卵巢癌 klf4 SMAD TGF-Β 上皮-间质转化
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小鼠Klf4基因的克隆及原核表达分析 被引量:7
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作者 王春生 罗芳 +1 位作者 杜文敬 安铁洙 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2009年第2期103-107,共5页
目的克隆Klf4基因并对其重组蛋白进行原核表达及分析。方法提取胎鼠皮肤mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点引物,从该cDNA中扩增出Klf4基因编码区序列,将其克隆到pEasy-T3载体上。对质粒双酶切并回收其中Klf4基因片段后... 目的克隆Klf4基因并对其重组蛋白进行原核表达及分析。方法提取胎鼠皮肤mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点引物,从该cDNA中扩增出Klf4基因编码区序列,将其克隆到pEasy-T3载体上。对质粒双酶切并回收其中Klf4基因片段后,克隆入pET-52b(+)载体后转化Origmai B(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定及分析。结果对所克隆的Klf4mRNA蛋白编码区的DNA序列分析表明,klf4CDS区包括终止密码子在内为1452 bp,与参照序列对比仅有四处存在差异,不仅其同源性达到99.72%,且其氨基酸序列同源性为100%;在IPTG诱导下pET-52b(+)-Klf4重组质粒可表达与预期相符的约为57×103的蛋白质;经IPTG刺激后重组蛋白表达明显上调,其中IPTG为0.4 mol/L时效果最佳。结论从胎鼠皮肤中克隆的Klf4基因可在原核中表达。 展开更多
关键词 klf4 克隆 原核表达
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miR-25靶向抑制KLF4促进胃癌细胞增殖 被引量:6
10
作者 丁小丽 夏宇 胡蓉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期867-871,共5页
目的:探讨micro RNA-25(mi R-25)是否靶向抑制KLF4基因调控胃癌细胞生长,阐明mi R-25在胃癌细胞中的作用及其机制。方法:q RT-PCR技术检测35对胃癌及癌旁组织中mi R-25及KLF4的表达。运用生物信息学分析软件Targetscan预测mi R-25的靶... 目的:探讨micro RNA-25(mi R-25)是否靶向抑制KLF4基因调控胃癌细胞生长,阐明mi R-25在胃癌细胞中的作用及其机制。方法:q RT-PCR技术检测35对胃癌及癌旁组织中mi R-25及KLF4的表达。运用生物信息学分析软件Targetscan预测mi R-25的靶基因。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证mi R-25是否靶向抑制KLF4。分别下调mi R-25及干扰和过表达KLF4后采用MTT及克隆形成实验检测细胞增殖。挽救实验验证KLF4是否能减弱mi R-25的生物学功能。结果:mi R-25在胃癌组织中高表达,KLF4呈低表达。抑制mi R-25能显著降低胃癌细胞的增殖,上调mi R-25的表达结果则相反。mi R-25负调控KLF4促进胃癌细胞增殖,而过表达KLF4能明显减弱mi R-25的促增殖效应。结论:mi R-25靶向抑制KLF4促进胃癌细胞增殖。 展开更多
关键词 胃肿瘤 miR-25 klf4 ERK通路
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KLF4过表达对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响 被引量:2
11
作者 刘梅冬 刘瑛 +2 位作者 刘俊文 张华莉 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1002-1006,共5页
目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采... 目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采用热应激(42℃)处理稳定表达小鼠KLF4基因的Raw264.7巨噬细胞1h,37℃恢复12h,采用流式细胞术、Hoechest33258染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:获得了KLF4过表达的Raw264.7细胞株,流式细胞术结果显示,转空载体组和KLF4过表达组细胞凋亡百分率较热应激前均升高,但与转空载体组相比较KLF4过表达组升高更明显;荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变;KLF4过表达细胞琼脂糖凝胶电泳能检测到明显的DNA"梯状条带"。结论:KLF4可以促进热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡。 展开更多
关键词 klf4 基因转染 RAW264.7细胞 细胞凋亡 热应激
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核转录因子KLF4与VEGF启动子上游DNA序列相互作用研究 被引量:3
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作者 郑海 陈明 +3 位作者 张景辉 陈庆 张友福 蒋春舫 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期808-811,共4页
目的研究体内核转录因子KLF4是否与血管内皮生长因子(VEGF)启动子上游DNA序列相互作用。方法采用染色质免疫沉淀法鉴定人胃癌AGS细胞内KLF4与VEGF启动子上游DNA序列的相互作用,通过检索VEGF基因序列,发现在VEGF基因转录起始位点上游存在... 目的研究体内核转录因子KLF4是否与血管内皮生长因子(VEGF)启动子上游DNA序列相互作用。方法采用染色质免疫沉淀法鉴定人胃癌AGS细胞内KLF4与VEGF启动子上游DNA序列的相互作用,通过检索VEGF基因序列,发现在VEGF基因转录起始位点上游存在3个KLF4结合位点,针对这3个KLF4结合位点核心DNA序列(CACCC)设计3对PCR引物,利用KLF4抗体进行染色质免疫沉淀,PCR扩增。结果针对VEGF上游启动序列3个潜在的KLF4结合位点设计的引物,以KLF4特异性结合的DNA片段为模板,能够扩增出目的条带,与阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论体内KLF4可能与VEGF启动子上游DNA序列相互作用。 展开更多
关键词 核转录因子klf4 血管内皮生长因子启动子
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儿童神经母细胞瘤Klf4表达及其影响因素研究 被引量:2
13
作者 朱秀丽 曲凡 +3 位作者 李美楠 郑钰 陈健 张文婷 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第30期3694-3697,共4页
目的探讨儿童神经母细胞瘤(NB)Klf4表达情况及其影响因素。方法选取2007年1月—2013年3月于河北医科大学第四医院儿科治疗的NB患儿33例为病例组,另选取同期本院严重肾盂积水患儿10例为对照组。记录两组患儿临床资料,取病例组病理组织,... 目的探讨儿童神经母细胞瘤(NB)Klf4表达情况及其影响因素。方法选取2007年1月—2013年3月于河北医科大学第四医院儿科治疗的NB患儿33例为病例组,另选取同期本院严重肾盂积水患儿10例为对照组。记录两组患儿临床资料,取病例组病理组织,对照组残余的正常肾上腺组织,采用免疫组化SP法检测Klf4表达情况,根据染色强度和Klf4阳性细胞所占百分比评价Klf4表达强度。结果病例组Klf4表达阳性10例(30.3%),对照组Klf4表达阳性9例(9/10),病例组Klf4表达阳性率低于对照组(χ2=8.801,P=0.003)。病例组不同性别、年龄、病理分期患儿Klf4表达阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组节细胞-神经母细胞瘤患儿Klf4表达阳性率高于神经母细胞瘤患儿,术前化疗患儿Klf4表达阳性率高于术前未化疗患儿(P<0.05)。结论 NB患儿Klf4表达下降,且与NB分型有关,术前化疗药物可能对Klf4的表达产生影响。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 klf4 儿童
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KLF4在内毒素血症小鼠中的表达模式及其意义 被引量:2
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作者 周智君 张华莉 +2 位作者 刘俊文 刘瑛 肖献忠 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第3期166-171,共6页
目的探讨Kruppel样因子4(Kruppel-like factor 4,KLF4)在内毒素血症小鼠中的表达模式及意义。方法运用实时荧光PCR技术和Western blot技术,分别从mRNA水平和蛋白水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4的表达;运用生物信息学技术,对启... 目的探讨Kruppel样因子4(Kruppel-like factor 4,KLF4)在内毒素血症小鼠中的表达模式及意义。方法运用实时荧光PCR技术和Western blot技术,分别从mRNA水平和蛋白水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4的表达;运用生物信息学技术,对启动子区含有KLF4的结合位点的炎症介质基因进行了预测;运用RT-PCR技术,从mRNA水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL-1β的表达模式。结果内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4 mRNA的表达下调,KLF4蛋白的表达先下调后升高;IL-1β、IL-15I、L-12、IL-18、IL-10等炎症介质基因的启动子区均含有KLF4的结合元件,这些炎症基因的表达可能直接受到KLF4的调控;内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL-1β的表达模式与KLF4的表达模式呈相反趋势。结论内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4表达下调,KLF4在炎症介质基因表达调控中可能具有重要作用。 展开更多
关键词 klf4 内毒素血症 实时荧光PCR 炎症介质 白细胞介素1Β 小鼠
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miR-219a-5p通过下调KLF4减轻H_(2)O_(2)诱导的人心肌细胞氧化损伤 被引量:2
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作者 周云洁 宋歌 +1 位作者 路永平 韩丽华 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期723-727,共5页
目的探究miR-219a-5p对人心肌细胞(HCM)氧化应激损伤的作用和机制。方法利用H_(2)O_(2)建立HCM氧化应激模型,将HCM细胞随机分成4组:对照组、H_(2)O_(2)组(200μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h),H_(2)O_(2)+NC mimic组(H_(2)O_(2)处理前转染对... 目的探究miR-219a-5p对人心肌细胞(HCM)氧化应激损伤的作用和机制。方法利用H_(2)O_(2)建立HCM氧化应激模型,将HCM细胞随机分成4组:对照组、H_(2)O_(2)组(200μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h),H_(2)O_(2)+NC mimic组(H_(2)O_(2)处理前转染对照mimic)和H_(2)O_(2)+miR-219a-5p组(H_(2)O_(2)处理前转染miR-219a-5p mimic)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR检测miR-219a-5p和KLF4 mRNA表达,Western blot检测Bax、Bcl-2和Krüppel样因子4(KLF4)蛋白表达,试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。另外,利用荧光素酶报告基因实验确证miR-219a-5p与KLF4的相互作用关系。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)组中miR-219a-5p表达、细胞活力和SOD水平降低,细胞凋亡、Bax/Bcl-2、ROS和MDA水平以及KLF4表达升高(均P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+miR-219a-5p组中miR-219a-5p表达、细胞活力和SOD水平升高,细胞凋亡、Bax/Bcl-2、ROS和MDA水平以及KLF4表达降低(均P<0.05)。H_(2)O_(2)+NC mimic组与H_(2)O_(2)组相比上述指标变化均不大,差异均无统计学意义(均P>0.05)。荧光素酶实验结果显示,miR-219a-5p能够降低KLF4-野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05)。结论miR-219a-5p对H_(2)O_(2)诱导的HCM细胞氧化应激损伤具有缓解作用,这种作用可能是通过下调KLF4的表达发挥的。 展开更多
关键词 miR-219a-5p klf4 人心肌细胞 氧化应激损伤
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转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义 被引量:1
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作者 董红梅 黄岚 +3 位作者 邓梦杨 李佳蓓 周云飞 郭文昀 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期185-188,共4页
目的探讨转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义。方法以Ficoll密度梯度离心法从SD大鼠骨髓分离单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,以DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色和FITC标记的CD133、CD34进行鉴定。细胞... 目的探讨转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义。方法以Ficoll密度梯度离心法从SD大鼠骨髓分离单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,以DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色和FITC标记的CD133、CD34进行鉴定。细胞免疫化学法检测原代培养7d内皮祖细胞KLF4的表达,RT-PCR法检测原代培养5、10、15d后细胞内KLF4及一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果经DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色鉴定证实获得的细胞为内皮祖细胞。细胞免疫化学检测发现KLF4表达于细胞核内;RT-PCR检测结果显示,5、10、15d大鼠内皮祖细胞的KLF4mRNA表达(分别为0.830±0.017,0.980±0.014,1.090±0.014)逐渐增强(P<0.01),eNOSmRNA表达(分别为0.310±0.008,0.500±0.011,0.650±0.010)也逐渐增强(P<0.01)。结论在内皮祖细胞分化为内皮细胞的过程中,KLF4的表达逐渐增强,并与成熟内皮功能相关。 展开更多
关键词 成体干细胞 内皮细胞 转录因子klf4 细胞分化
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苦参碱通过上调KLF4/Nrf2通路减轻H_(2)O_(2)诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤 被引量:2
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作者 王杏 乔莉 +2 位作者 马欢 王超 张会欣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1570-1577,共8页
目的:基于KLF4/Nrf2途径探讨苦参碱对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化损伤的作用及机制。方法:培养HUVECs,采用CCK-8方法筛选苦参碱实验浓度。将HUV... 目的:基于KLF4/Nrf2途径探讨苦参碱对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化损伤的作用及机制。方法:培养HUVECs,采用CCK-8方法筛选苦参碱实验浓度。将HUVECs分为对照组、模型组和低、中、高浓度(0.5、1和2 mmol/L)苦参碱组,以H_(2)O_(2)(0.5 mmol/L)诱导建立HUVECs氧化损伤模型,检测细胞活力、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(gluta-thione peroxidase,GPX)活性;RT-qPCR和Western blot方法检测细胞中Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS)的mRNA和蛋白表达水平。进一步采用siRNA技术敲减KLF4基因表达,与苦参碱共同作用,观察上述指标的变化。结果:与模型组比较,苦参碱组细胞活力上升(P<0.05),ROS水平和MDA含量降低(P<0.05),SOD和GPX活性上升(P<0.05),KLF4、Nrf2、HO-1、NOQ1及γ-GCS表达水平升高(P<0.05)。抑制KLF4的表达后,苦参碱逆转H_(2)O_(2)引起的细胞活力降低、ROS升高及抗氧化应激分子表达的作用均显著减弱(P<0.05)。结论:苦参碱能够通过激活KLF4/Nrf2通路、抑制氧化应激来减轻H_(2)O_(2)诱导的HUVECs氧化损伤。 展开更多
关键词 苦参碱 人脐静脉内皮细胞 氧化应激 klf4/Nrf2信号通路
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KLF4转录水平负调控miR-106a表达对人胃癌细胞BGC-823侵袭能力的影响 被引量:2
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作者 朱萌 张宁 +2 位作者 和水祥 张丹 张志勇 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期356-361,共6页
目的探讨转录因子kruppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)对微小RNA-106a(miR-106a)表达的调控及其相互作用对人胃癌细胞侵袭能力的影响。方法通过转录因子结合位点数据库JASPAR检索与miR-106a启动子区结合的转录因子KLF4。... 目的探讨转录因子kruppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)对微小RNA-106a(miR-106a)表达的调控及其相互作用对人胃癌细胞侵袭能力的影响。方法通过转录因子结合位点数据库JASPAR检索与miR-106a启动子区结合的转录因子KLF4。构建KLF4过表达载体(KLF4-pcDNA)和miR-106a报告基因(pmiR-106a-WT/MUT-luc),双荧光素酶报告基因检测KLF4对miR-106a启动子活性的影响。收集人胃癌和癌旁石蜡包埋-甲醛固定(formalin-fixed paraffin-embedded, FFPE)标本各40例,实时定量PCR和免疫组织化学法检测KLF4表达。人胃癌细胞株BGC-823培养并按miR-106a mimic组、mimic NC组、KLF4+pcDNA组、pcDNA basic组分别进行处理,Transwell法检测各组胃癌细胞侵袭能力变化。结果双荧光素酶报告基因检测显示KLF4-pcDNA具有拮抗miR-106a启动子活性的作用,表现为pmiR-106a-WT-luc荧光素酶活性被抑制(pmiR-106a-WT+pcDNA-basic与pmiR-106a-WT+pcDNA-KLF4比较,P<0.001),但对pmiR-106a-MUT-luc荧光素酶活性影响不明显(pmiR-106a-MUT+pcDNA-basic与pmiR-106a-MUT+pcDNA-KLF4比较,P>0.05)。FFPE样本显示KLF4在胃癌组织中的相对表达量为0.69±0.59,与癌旁组织相比,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌的细胞分化程度、淋巴转移和浸润深度相关(P<0.05);KLF4阳性表达主要位于胃黏膜上皮细胞核及胞质。Transwell实验表明各处理组胃癌细胞的穿膜数量不全相同(P<0.001),miR-106a mimic组为89.00±14.85,mimic NC组为50.90±17.94,KLF4+pcDNA组为37.70±12.60,pcDNA basic组为66.20±3.19。结论转录因子KLF4与miR-106a启动子区至少存在体外的直接结合,可能通过在上游转录水平负调控miR-106a表达而参与影响胃癌细胞的侵袭转移进程。 展开更多
关键词 胃癌 Krüppel样因子4(klf4) 微小RNA-106a(miR-106a) 转录因子 启动子 侵袭
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山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化 被引量:1
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作者 辛桂瑜 王丽霞 +7 位作者 叶新慧 申魁魁 符欣蕙 李恭贺 张明 卢晟盛 卢克焕 郑喜邦 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期80-85,共6页
旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的c... 旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体,构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测确认,镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合蛋白。结果表明:(1)从山羊生殖脊中克隆了Klf4基因,其开放阅读框由1 434个核苷酸组成,编码478个氨基酸,而且该序列与绵羊的同源性最高,达到98.5%;(2)经过SignalP 4.0在线分析,Klf4的编码蛋白不存在信号肽;(3)经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组质粒pET30a-Klf4在大肠杆菌中得以表达;在变性条件下纯化,获得了His-Klf4融合蛋白。 展开更多
关键词 klf4 分子克隆 原核表达 蛋白纯化 山羊
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牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立 被引量:1
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作者 辛晓玲 吕长荣 +1 位作者 陈冬梅 窦忠英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1636-1641,共6页
为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo... 为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 klf4基因 IPS细胞 反转录病毒载体
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