J亚群禽白血病病毒血液核酸筛查技术的建立

1

作者 董欣怡 李锦群 +2 位作者 陈钦玺 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1115-1126,共12页

为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood ... 为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood quantitative polymerase chain reaction, ALV-J-B-qPCR)。根据GenBank中ALV-J pol及env基因序列,设计ALV-J的特异性引物,并优化反应条件,建立了ALV-J SYBR GreenⅠqPCR检测方法。以ALV-J病毒分离为阳性的鸡抗凝血为实验材料,分别制备抗凝血DNA、血细胞DNA、外周血淋巴细胞DNA、外周血淋巴细胞cDNA和血浆cDNA 5类血液检测模板进行ALV-J的PCR检测,筛选最佳检测模板;进一步比较蒸馏水破裂红细胞法提取混合血液DNA的混样方法,血液混样总体积为200μL的混样方法,血液混样总体积为10μL的混样方法共3种混样方法的检测准确性,筛选最佳混样方法。综合上述qPCR方法、检测模板与混样方法,成功建立了ALV-J-B-qPCR。运用ALV-J-B-qPCR分别进行预期流行率为1%~2%、4%~5%场景下的模拟筛查试验,并与病毒分离法比较。qPCR方法的特异性、灵敏性和重复性试验显示,该方法仅特异性扩增ALV-J,对标准质粒的最低检测限度为1×10^(2)copies·μL^(-1),批内与批间变异系数均<1%。对90份临床送检血液样品的检测结果显示,该qPCR方法对ALV-J的检出率(15.6%)高于p27抗原ELISA和普通PCR的检出率(12.2%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA最符合检测准确度高、操作复杂度和成本低的要求,为最佳检测模板。混样方法摸索试验中,混样总体积为10μL(混样规模<12份)的混样方法检测准确性最高,为最佳混样方法。在样本数为400份,预期流行率为4%~5%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为6.25%,比病毒分离法高2.00%;在样本数为400份,预期流行率为1%~2%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为2.25%,比病毒分离法高0.75%。本研究建立的ALV-J-B-qPCR技术具有灵敏性高、检测快速和节约成本的优势,为种禽场加快ALV净化进程提供了新的思路和方法。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 实时荧光定量PCR 混样检测 筛查技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

血管瘤相关J亚群禽白血病病毒ZH-08株的分离与全基因组序列测定 被引量：10

2

作者 张小桃 史伟伟 +4 位作者 刘红波 张贺楠 廖明 辛朝安 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期193-199,共7页

本研究从临床表现为典型血管瘤型禽白血病病例的广东某肉种鸡场的病鸡中,分离到1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为ZH-08。利用ELISA抗原检测、PCR和间接免疫荧光试验对分离株进行鉴定,结果都呈阳性。依据ALV-J原型株HPRS-103前病毒全... 本研究从临床表现为典型血管瘤型禽白血病病例的广东某肉种鸡场的病鸡中,分离到1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为ZH-08。利用ELISA抗原检测、PCR和间接免疫荧光试验对分离株进行鉴定,结果都呈阳性。依据ALV-J原型株HPRS-103前病毒全基因组序列设计并合成3对引物,采用分段扩增的方法完成了分离株的全基因组序列测定。结果显示该分离株基因组序列全长7 597 bp,与已公开的全基因组序列大小比较略有差异,但符合典型的复制完全型反转录病毒的基因组结构,基因序列中不含已知致癌基因。将该分离株的亚群特异性gp85基因序列与国内外各参考株相应序列进行相似性比较,发现ZH-08与YZ9901株相似性最高(93.7%)。基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明:ZH-08株与SD07LK1株的亲缘关系最近。本研究为该毒株的生物学特性以及致病机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 血管瘤 j亚群禽白血病病毒 全基因组序列 gp85

在线阅读 下载PDF 职称材料

蛋鸡J亚群禽白血病病毒3′非编码区序列特征分析 被引量：8

3

作者 高玉龙 贠炳岭 +5 位作者 秦立廷 潘伟 王永强 高宏雷 祁小乐 王笑梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1841-1846,共6页

蛋用型鸡虽在试验条件下可以感染ALV-J,但自然感染时很少引起发病。然而,近年来在中国蛋鸡群中ALV-J发病严重,本研究对2008年以来ALV-J蛋鸡分离株的3′非编码区(3′UTR)进行了系统的分析。结果表明,89.5%(17/19)的ALV-J蛋鸡分离株的3′... 蛋用型鸡虽在试验条件下可以感染ALV-J,但自然感染时很少引起发病。然而,近年来在中国蛋鸡群中ALV-J发病严重,本研究对2008年以来ALV-J蛋鸡分离株的3′非编码区(3′UTR)进行了系统的分析。结果表明,89.5%(17/19)的ALV-J蛋鸡分离株的3′UTR出现了205bp的缺失,94.7%(16/17)ALV-J蛋鸡分离株保留了完整的E元件。84.2%(16/19)的ALV-J蛋鸡分离株的U3区序列与肉鸡分离株的相似性低于92.5%,所有转录调控元件高度保守。ALV-J蛋鸡分离株的E元件和U3区均出现了多个碱基的突变。这些结果表明,ALV-J蛋鸡分离株的E元件和U3区正在迅速的演化,明显不同于肉鸡分离株的序列特征。这些发现有助于更好地了解ALV-J引起蛋鸡群发病的致病机理。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 分子特征 3’非编码区 LTR蛋鸡

在线阅读 下载PDF 职称材料

三黄鸡临床血管瘤病例中分离出A亚群与J亚群禽白血病病毒 被引量：16

4

作者 王培坤 毕玉彧 +3 位作者 秦丽莉 邹广珍 彭昊 韦平 《动物医学进展》 北大核心 2015年第3期13-16,共4页

为了解禽白血病病毒在广西鸡群中流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清p27抗原检测、PCR扩增,对临床血管瘤型禽白血病的三黄鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行测序和序列比较。结果表明,从1只病鸡同时分离到了一株A亚... 为了解禽白血病病毒在广西鸡群中流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清p27抗原检测、PCR扩增,对临床血管瘤型禽白血病的三黄鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行测序和序列比较。结果表明,从1只病鸡同时分离到了一株A亚群禽白血病病毒（ALV-A）与一株J亚群禽白血病病毒（ALV-J）,分别命名为HG01-A株和HG01-J株。ALV-A gp85与7株A亚群氨基酸同源性为85.8%-87.5%,与A亚群美国株MQNCSU同源性最高为87.5%,与A亚群原型株RSA同源性为86.9%。而ALV-J gp85与7株毒株核酸序列同源性为84.0%-93.8%,与广东株XX2-08以及四川株SCSM01同源性最高为93.8%,与英国原型株HPRS103同源性为90.2%。进化分析进一步表明,HG01-A与各参考株亲缘关系较远,HG01-J与SCSM01亲缘关系最近。本研究首次从同一只广西三黄鸡中同时分离到ALV-A及ALV-J,进一步完善了我国地方品种鸡群中禽白血病的流行病学信息。 展开更多

关键词 共感染 A亚群禽白血病病毒 j亚群禽白血病病毒 gp85 聚合酶链反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

黄羽鸡J亚群禽白血病病毒的分离及gp85基因分析 被引量：8

5

作者 潘孝成 赵瑞宏 +5 位作者 胡晓苗 沈学怀 周学利 戴银 侯宏艳 张丹俊 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期51-54,共4页

为了解禽白血病病毒在黄羽鸡中的流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清P27抗原检测、PCR扩增,对送检疑似禽白血病的黄羽鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行了测序和序列比较.结果表明,自黄羽鸡分离到2株J亚群禽白血病... 为了解禽白血病病毒在黄羽鸡中的流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清P27抗原检测、PCR扩增,对送检疑似禽白血病的黄羽鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行了测序和序列比较.结果表明,自黄羽鸡分离到2株J亚群禽白血病病毒（ALV-J）,分别命名为AHaq01和AHaq02,它们之间的核苷酸序列同源性为93.8％,与ALV-J参考毒株序列同源性为91.1％～99.8％,其中与ALV-J原型毒株HPRS-103的序列同源性分别为93.3％和98.1％,与分离株AHaq01和AHaq02同源性最高的分别是WN100404（95.0％）和SD09TA04 （99.8％）.进化分析进一步表明,2个分离株间的亲缘关系较远,为来源不同的ALV-J毒株. 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 GP85基因 分离 黄羽鸡

在线阅读 下载PDF 职称材料

1株髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒感染性克隆的构建与病毒拯救 被引量：5

6

作者 林艳 夏静 +6 位作者 邹年莉 郭明萍 王富妍 赵扬 文心田 曹三杰 黄勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期754-759,共6页

为构建髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-J)SCGS-1株前病毒cDNA分子标记感染性克隆,根据SCGS-1全基因测序结果,分3段进行全序列PCR扩增,顺次连接至pUC19,构建SCGS-1株前病毒cDNA感染性克隆pUC-SCGS;通过重叠PCR方... 为构建髓细胞瘤型J亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-J)SCGS-1株前病毒cDNA分子标记感染性克隆,根据SCGS-1全基因测序结果,分3段进行全序列PCR扩增,顺次连接至pUC19,构建SCGS-1株前病毒cDNA感染性克隆pUC-SCGS;通过重叠PCR方法对SCGS-1基因组进行沉默突变,在4 684位点引入SalⅠ位点,构建SCGS-1株分子标记感染性克隆pUC-△SCGS;以pUC-SCGS和pUC-△SCGS重组质粒转染CEF进行病毒拯救,并通过PCR、间接免疫荧光与双抗体夹心ELISA进行拯救病毒检测。结果显示,成功构建pUC-SCGS与pUC-△SCGS重组质粒,转染后盲传第3代、第4代细胞与上清中均检测到拯救病毒;间接免疫荧光与抗原ELISA方法分别在CEF细胞和上清中检测到ALV-J抗原。成功拯救获得分子标记ALV-J。 展开更多

关键词 髓细胞瘤型 j亚群禽白血病病毒 感染性克隆 分子标记 病毒拯救

在线阅读 下载PDF 职称材料

J亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备 被引量：6

7

作者 梁艺瑜 冯少珍 +5 位作者 史伟伟 刘红波 王小芬 李育豪 廖明 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期76-81,共6页

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR... J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR方法扩增出941bp的含酶切位点的ALV-J特异性基因gp85基因序列,连接于pET32a(+)载体上,实现gp85蛋白在宿主菌BL21的表达,以切胶回收方式纯化蛋白,成功获得约52ku的重组融合蛋白,免疫新西兰兔,制备gp85单因子抗血清,Dot-ELISA检测抗体效价。结果显示,纯化所得蛋白质具有良好抗原性,制备的抗血清效价高于1.024×105。本试验通过较简便、低耗的方法获得高效单因子血清,为抗血清的制备提供参考,为ALV-J gp85蛋白的研究、ALV-J特异性检测方法的研制打下基础,对ALV-J的净化有重要意义。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 单因子血清 GP85基因 蛋白表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

J亚群禽白血病病毒安徽分离株的鉴定及其gp85基因序列分析 被引量：6

8

作者 安好峰 戴银 +5 位作者 潘孝成 侯宏艳 赵瑞宏 胡晓苗 李福宝 张丹俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期6-10,共5页

从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%～99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离... 从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%～99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离毒株与J亚群原型毒株HPRS-103同源性为97.1%,与J亚群国内毒株SD09TA04、SDYC02J同源性均为99.4%;蛋鸡分离毒株与HPRS-103的同源性为89.0%,与SD09TA04和SDYC02J同源性仅为88.6%。两分离毒株的gp85氨基酸序列出现突变和缺失,在高变区hr1、hr2变异明显。进化分析进一步表明,2个分离毒株亲缘关系较远,可能来源于不同的原始病毒株。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 安徽分离毒株 GP85基因 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

J亚群禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：8

9

作者 廖亚琳 梁艺瑜 +3 位作者 王秀珑 冯敏 谭利强 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期15-18,共4页

本研究利用J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)gp85单因子血清纯化后的抗体成功建立了检测ALV-J抗原的双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)。结果表明,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,对ALV-J抗原的最小检... 本研究利用J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)gp85单因子血清纯化后的抗体成功建立了检测ALV-J抗原的双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)。结果表明,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,对ALV-J抗原的最小检出量为0.165μg/mL。用该法对48份临床血浆样品进行检测,结果与PCR方法的符合率达到85.2%。 展开更多

关键词 禽白血病 j亚群禽白血病病毒 双抗体夹心ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

J亚群禽白血病病毒引发蛋鸡多种肿瘤类型的病理分析 被引量：5

10

作者 顾玉芳 杨玉莹 +1 位作者 梁雄燕 吴岳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期194-197,共4页

本试验对J亚群禽白血病病毒引发商品蛋鸡发生多种肿瘤进行了详细的病理学观察。尸检10只病死鸡,其中髓细胞性白血病占8/10,表现肝脾明显肿大,被膜下可见弥散的灰白色结节,组织学观察发现几乎所有组织均见典型髓细胞样瘤细胞增生。其中5... 本试验对J亚群禽白血病病毒引发商品蛋鸡发生多种肿瘤进行了详细的病理学观察。尸检10只病死鸡,其中髓细胞性白血病占8/10,表现肝脾明显肿大,被膜下可见弥散的灰白色结节,组织学观察发现几乎所有组织均见典型髓细胞样瘤细胞增生。其中5/10病例表现有其他类型肿瘤,包括血管瘤、纤维瘤、脂肪肉瘤。用ALV-J特异性引物H5/H7进行PCR确诊该鸡群感染了ALV-J。 展开更多

关键词 肿瘤 病理学 j亚群禽白血病病毒 商品蛋鸡

在线阅读 下载PDF 职称材料

东北地区J亚群禽白血病病毒的分子生物学特性分析 被引量：2

11

作者 刘超男 高玉龙 +4 位作者 景龙 高宏雷 祁小乐 潘伟 王笑梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期915-921,共7页

为了解近两年在中国东北地区出现的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的分子生物学特性,作者从东北地区不同养禽场先后分离鉴定12株ALV-J,并对其env基因、3′UTR和3′LTR区序列进行测定和比较分析。结果显示,12株ALV-J分别位于env基因遗传进化的... 为了解近两年在中国东北地区出现的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的分子生物学特性,作者从东北地区不同养禽场先后分离鉴定12株ALV-J,并对其env基因、3′UTR和3′LTR区序列进行测定和比较分析。结果显示,12株ALV-J分别位于env基因遗传进化的3个不同分支(group),其中group2和group3中毒株在env基因分别出现大片段氨基酸缺失和与其他亚群毒株重组现象;12株ALV-J在3′UTR区仍存在较大差异,具有完整E组件的ALV-J占主导地位;12株ALV-J在3′LTR区的变异主要集中于U3区,但是位于U3区的C/EBP、CArGbox、Y box、PRE box和TATA box等转录调控元件却高度保守。以上结果表明,目前中国ALV-J的基因变异仍主要集中在env基因和3′UTR区,且env基因已出现缺失或重组等新的变异趋势,并可能是ALV-J流行范围扩大、组织嗜性和致肿瘤作用明显改变的重要遗传基础。 展开更多

关键词 东北地区 j亚群禽白血病病毒 3′非编码区 转录调控元件

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡J亚群禽白血病病毒与七种常见病毒混合感染的调查 被引量：3

12

作者 王林山 尹燕博 +4 位作者 徐守振 郭妍妍 吴珊珊 胡永新 张本清 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第11期111-116,共6页

应用PCR方法对2009年6月到2009年9月来自不同地区、不同品种、不同日龄的45个疑似感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的病鸡病料进行检测,同时对ALV-J与新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、H9N2亚型禽流... 应用PCR方法对2009年6月到2009年9月来自不同地区、不同品种、不同日龄的45个疑似感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的病鸡病料进行检测,同时对ALV-J与新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、包涵体肝炎病毒(IB-HV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)和呼肠病毒(REOV)等病毒的混合感染情况进行了调查。结果表明,采用ALV-J的特异性引物H5/H7,在45份送检病料中,有3份检出ALV-J,阳性率为6.67%。绝大多数病例检测出内源性禽白血病病毒,部分病例检测有其他7种病毒中的一种或几种。混合感染病例中以IBHV和IBV混合感染的比率较高,其中ALV-J与H9N2亚型AIV混合感染多见。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 PCR 混合感染 调查

在线阅读 下载PDF 职称材料

J亚群禽白血病病毒的分子生物学研究进展 被引量：2

13

作者 尹念春 《中国动物检疫》 CAS 2012年第4期75-77,共3页

J亚群禽白血病病毒主要引起禽骨髓细胞白血病(ML),且该病毒存在较大的变异现象,因此对整个养禽业造成了巨大的影响。文章从病毒的结构,致瘤机制,分子进化等几个方面对现有研究进展做一综述。

关键词 j亚群禽白血病病毒 分子生物学 致瘤机制

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡J亚群禽白血病病毒AH-J11株的全基因组感染性克隆构建

14

作者 王蓓 刘芳 +4 位作者 王汉清 李宁 魏建忠 刘光清 王桂军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1976-1981,共6页

为探究鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,采用PCR方法分4段分别扩增出J亚群禽白血病病毒安徽分离株AH-J11的前病毒cDNA,PCR产物经克隆鉴定,酶切后顺次连接,获得含有完整ALV-J AH-J11株前病毒cDNA的重组质粒,命名为pSK-AH-J11。将AH... 为探究鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,采用PCR方法分4段分别扩增出J亚群禽白血病病毒安徽分离株AH-J11的前病毒cDNA,PCR产物经克隆鉴定,酶切后顺次连接,获得含有完整ALV-J AH-J11株前病毒cDNA的重组质粒,命名为pSK-AH-J11。将AH-J11株全基因序列克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中,得到重组质粒pBl-AH-J11,并将其转染鸡胚成纤维细胞(CEF)。通过间接免疫荧光试验,RT-PCR和Western blot检测,并经测序验证比对拯救前后病毒的gp85基因序列,结果均表明拯救出了1株重组J亚群禽白血病病毒(rALV-J)。本研究成功构建了鸡ALV-J的感染性克隆并救获了其重组病毒,为研究禽白血病的致病机理提供了良好的反向遗传操作技术平台。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 AH—j11株 全基因组 感染性克隆 病毒拯救

在线阅读 下载PDF 职称材料

env基因对J亚群禽白血病病毒体外感染和复制能力的影响

15

作者 吴晓婵 李娇 +1 位作者 曹伟胜 廖明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期143-146,共4页

为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成功... 为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成功构建了重组质粒pNX-HNenv。重组毒株能在DF-1细胞上稳定增殖,并能被JE9特异性单抗识别,证明获得了具有感染性的重组病毒NX-HNenv株。结果显示,同一亚群内env基因的替换对病毒的体外感染和复制能力无明显影响。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 ENV基因 反向遗传技术 复制能力

在线阅读 下载PDF 职称材料

黄羽肉鸡J亚群禽白血病病毒分离鉴定与全基因组序列分析 被引量：5

16

作者 李昕键 严一铭 +5 位作者 李广伟 刘洋 戴振凯 陈伟国 陈峰 谢青梅 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期27-31,共5页

为了解J亚群禽白血病在黄羽肉鸡中的流行状况,采用病料研磨液接种DF-1细胞、ELISA p27抗原检测、PCR扩增等方法,从广东某鸡场送检疑似禽白血病的黄羽肉鸡病料中分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,命名为GDLZ0715。为进一步了解该病毒分子... 为了解J亚群禽白血病在黄羽肉鸡中的流行状况,采用病料研磨液接种DF-1细胞、ELISA p27抗原检测、PCR扩增等方法,从广东某鸡场送检疑似禽白血病的黄羽肉鸡病料中分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,命名为GDLZ0715。为进一步了解该病毒分子学特性,对其进行全基因组测序,并与其他ALV-J毒株进行比较。结果表明,GDLZ0715分离株整个基因组中gag、pol、env基因和LTR相对保守,与各参考ALV-J毒株序列同源性分别达93.5%～95.9%、96.8%～97.3%、89.6%～94.6%和90.8%～95.1%;3′UTR变异较大,与各ALV-J参考毒株序列同源性仅为80.5%～93.4%,其中rTM和E元件大量碱基缺失;进一步分析表明3′UTR中rTM区和E元件大量碱基缺失正成为我国肉鸡ALV-J毒株的变异趋势。 展开更多

关键词 黄羽肉鸡 j亚群禽白血病病毒 分离鉴定 全基因组序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

J亚群禽白血病病毒受体基因NHE1的遗传多态性分析 被引量：1

17

作者 陈伟国 李广伟 +1 位作者 严专强 谢青梅 《广东农业科学》 CAS 2016年第7期145-150,共6页

为发掘J亚群禽白血病病毒（ALV-J）受体基因NHE1潜在的遗传抗性位点,采用PCR技术分段扩增NHE1受体基因序列,并分析其遗传多态性。结果显示,在黄羽肉鸡NHE1基因外显子区域发现了16个SNP突变,分别为c.309G〉C,c.11653C〉T,c.11689G〉A,c.1... 为发掘J亚群禽白血病病毒（ALV-J）受体基因NHE1潜在的遗传抗性位点,采用PCR技术分段扩增NHE1受体基因序列,并分析其遗传多态性。结果显示,在黄羽肉鸡NHE1基因外显子区域发现了16个SNP突变,分别为c.309G〉C,c.11653C〉T,c.11689G〉A,c.11917C〉T,c.11946C〉T,c.13405C〉A,c.13429T〉C,c.13438T〉C,c.14108A〉C,c.14516A〉G,c.14522G〉A,c.14654C〉T,c.15834G〉A,c.15873G〉A,c.17560C〉Gandc.17770G〉A。进一步分析表明这些SNP突变均为同义c SNP,未引起氨基酸发生改变;在黄羽肉鸡NHE1基因内含子区域发现了SNP和插入/缺失突变,NHE1基因内含子2c.12239~12240和c.13114~13115分别存在AGGGCTGC和TGAAGCC插入突变,内含子11c.17073~17091存在TGTCCTGTGTCCTCCCTGC缺失突变;在ALV-J攻毒后阴性鸡和阳性鸡的NHE1基因外显子区域均发现c.309G〉C、c.11653C〉T、c.13405C〉A、c.13438T〉C、c.14108A〉C和c.14516A〉G6个SNP突变,内含子区域也均发现与黄羽肉鸡相同的插入/缺失突变。研究结果表明,发现的NHE1受体基因遗传变异位点不能作为ALV-J潜在的遗传抗性位点。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 NHE1受体基因 序列分析 遗传多态性

在线阅读 下载PDF 职称材料

混养乌鸡和麻鸡J亚群禽白血病病毒感染及变异分析

18

作者 魏戎蓉 蔡黎明 +2 位作者 申艳玮 王言明 成子强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期107-115,共9页

2011年6月4日,山东淄博某鸡场送检病例,该养殖场养殖规模8万羽,主要品种为乌鸡、麻鸡和海兰褐。乌鸡和麻鸡饲养在同一鸡舍,各4000只。患病乌鸡与麻鸡在360日龄时,表现为消瘦、嗜睡、鸡冠稍苍白,死亡率达10%左右,另一鸡舍的海兰褐鸡并无... 2011年6月4日,山东淄博某鸡场送检病例,该养殖场养殖规模8万羽,主要品种为乌鸡、麻鸡和海兰褐。乌鸡和麻鸡饲养在同一鸡舍,各4000只。患病乌鸡与麻鸡在360日龄时,表现为消瘦、嗜睡、鸡冠稍苍白,死亡率达10%左右,另一鸡舍的海兰褐鸡并无发病状况。通过大体剖检、组织病理学观察病变、血涂片观察血象,并利用PCR技术鉴定病鸡病毒感染情况,分离病毒,对其进行测序,分析病毒与参考毒株的同源性及变异情况。大体剖检可见肝、肾肿大,胸肌出现纤维肉瘤,肠管萎缩液化,胰出现黄豆大小的肿瘤结节;病理组织学观察发现乌鸡肝出现髓细胞瘤,腿部形成动脉血管瘤,肠管及胰腺间出现髓细胞瘤及血管瘤等,麻鸡肝出现成红细胞瘤,肺出现海绵状血管瘤。血涂片观察发现,血液中出现髓细胞样瘤细胞,中性粒细胞的数量和比例明显升高。病原学检测发现,ALV p27抗原和抗体检测均为阳性,PCR技术鉴定2种鸡均为ALV-J感染。分别从乌鸡和麻鸡中分离出1株和2株病毒,与各参考毒株比较显示,gp85区氨基酸的相似性为82.3%~91.1%,基因变异性较大,说明混养鸡群感染ALV-J后,不同宿主交叉感染,可能会促使ALV-J进化。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒(ALV-j) 乌鸡 麻鸡 病毒分离 同源性分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用荧光定量RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒 被引量：4

19

作者 屈素洁 邹联斌 +6 位作者 陈芳芳 张步娴 胡杰 莫胜兰 施开创 李军 尹彦文 《中国动物检疫》 CAS 2015年第6期56-59,63,共5页

针对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒作为阳性标准品,建立了检测ALV-J核酸的荧光定量PCR方法。优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验。结果显示... 针对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒作为阳性标准品,建立了检测ALV-J核酸的荧光定量PCR方法。优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验。结果显示,该检测方法特异性强,与其它禽源病毒如A亚群禽白血病病毒(ALV-A)、B亚群禽白血病病毒(ALV-B)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)和马立克病病毒(MDV)均不发生交叉反应;该方法可检测到3.2×102拷贝/μL的病毒核酸,与常规RT-PCR相比,敏感性高100倍;重复性试验的变异系数小于2%。研究结果表明,建立的Real-time RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、可重复性好,可用于ALV-J的定量检测。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 TAQMAN探针

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽白血病病毒J亚群感染鸡组织中细胞受体chNHE 1的表达分析

20

作者 张莉 于蒙蒙 +7 位作者 王颖 王素艳 许壮壮 刘鹏 陈运通 祁小乐 李留安 高玉龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3631-3639,共9页

旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究... 旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究利用qPCR技术,检测了商品肉鸡、商品蛋鸡和SPF鸡脏器内的chNHE1转录量,ALV-J感染鸡后各组织的病毒载量及组织chNHE1的转录量的变化。结果显示,chNHE1在3种类型鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、胸腺和法氏囊中均能检测到,但转录量高低存在较大差异,其中,免疫器官内的chNHE1转录量相对较高;SPF鸡接种ALV-J后,心、脾、肾和盲肠扁桃体中的病毒载量相对较高,而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒载量相对较低;ALV-J感染后,脾、肾和盲肠扁桃体中的chNHE1转录量明显上调,但心中的转录量与空白对照相比无明显变化。本研究分析了3种类型鸡chNHE1的组织转录特点及ALV-J感染对组织内chNHE1转录的影响,该研究结果为探究受体chNHE1的转录与ALV-J的组织嗜性的关系提供重要的理论依据。 展开更多

关键词 j亚群禽白血病病毒 鸡钠氢交换蛋白1 组织表达 转录量变化

在线阅读 下载PDF 职称材料