RT套式PCR检测血浆HCV RNA及与抗HCV检测的比较 被引量：12

1

作者 赵继义 刘雪梅 +3 位作者 郭薇媛 高磊 钟照华 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期37-38,共2页

应用微量血清热变性法提取核酸 ,逆转录套式聚合酶链反应 (RT nestPCR)检测血浆HCVRNA ,并与抗HCVELISA检测结果比较 ,对HCVRNA阳性标本进行HGVRNA的筛查。结果在 32例抗HCV阳性和 2 0例抗HCV阴性血浆中 ,HCVRNA分别检出 18例和 2例 ,... 应用微量血清热变性法提取核酸 ,逆转录套式聚合酶链反应 (RT nestPCR)检测血浆HCVRNA ,并与抗HCVELISA检测结果比较 ,对HCVRNA阳性标本进行HGVRNA的筛查。结果在 32例抗HCV阳性和 2 0例抗HCV阴性血浆中 ,HCVRNA分别检出 18例和 2例 ,总符合率为 70 % ,2 0例HCVRNA阳性者中有 2例合并感染HBV ,1例合并感染HGV。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 逆转录套式pcr 血浆 HCVrna 检测 抗体

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甲肝病毒减毒株(H_2)RNA的全长RT-PCR扩增

2

作者 周翔 谭德勇 +1 位作者 赖建华 昝瑞光 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期472-475,共4页

通过ＲＴＰＣＲ技术扩增了甲肝病毒减毒株（Ｈ２）全长ＲＮＡ，并对长片段ＲＴＰＣＲ扩增进行了方法学上的探讨．采用抗血清特异沉淀病毒；盐酸胍酸性酚、氯仿一步法分离纯化病毒ＲＮＡ，可得到高质量的ＲＮＡ样品；以此ＲＮＡ为... 通过ＲＴＰＣＲ技术扩增了甲肝病毒减毒株（Ｈ２）全长ＲＮＡ，并对长片段ＲＴＰＣＲ扩增进行了方法学上的探讨．采用抗血清特异沉淀病毒；盐酸胍酸性酚、氯仿一步法分离纯化病毒ＲＮＡ，可得到高质量的ＲＮＡ样品；以此ＲＮＡ为模板，在无ＲＮＡ酶的逆转录酶作用下，合成单链ｃＤＮＡ；继续以此ｃＤＮＡ为模板，利用３２ｍｅｒ寡核苷酸引物，在Ｔａｑ和ＤｅｅｐＶｅｎｔＤＮＡ多聚酶的作用下进行ＰＣＲ扩增。 展开更多

关键词 甲肝病毒 全长rna rt-pcr扩增

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肝炎患者中庚型肝炎病毒感染的PCR检测 被引量：9

3

作者 张立伐 唐永煌 +2 位作者 王磊 谢兴镛 童福易 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 1997年第4期200-202,共3页

应用逆转录套式ＰＣＲ法检测了４８例丙型肝炎、２６例乙型肝炎及１２例甲乙丙丁戊型肝炎病毒感染标志均阴性的肝炎患者血清中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ。结果表明，我国肝炎患者中存在ＨＧＶ感染；ＨＧＶ可单独感染或与其他肝炎... 应用逆转录套式ＰＣＲ法检测了４８例丙型肝炎、２６例乙型肝炎及１２例甲乙丙丁戊型肝炎病毒感染标志均阴性的肝炎患者血清中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ。结果表明，我国肝炎患者中存在ＨＧＶ感染；ＨＧＶ可单独感染或与其他肝炎病毒混合感染。丙型肝炎患者中，ＨＧＶＲＮＡ的检出率为１０．４％，乙型肝炎患者中的检出率为３．８％，而在甲乙丙丁戊型肝炎标志均阴性的肝炎患者中的检出率为３３．３％，ＨＧＶ与其他肝炎病毒的混合感染可加重肝脏的损害。在我国，ＨＧＶ感染是甲乙丙丁戊型肝炎标志均阴性肝炎的重要病因之一。 展开更多

关键词 庚型肝炎病毒 多聚酶链反应 感染 庚型肝炎

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戊型肝炎血清HEV-RNA的动态变化及其意义 被引量：8

4

作者 王占英 鲁学恒 +3 位作者 庄辉 李颖 乔光彦 田金荣 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期137-139,共3页

目的 :探讨戊型肝炎患者血清 HEV - RNA的动态变化及其意义。方法 :用逆转录 -巢式聚合酶链反应检测 32例戊型肝炎患者系列血清 HEV- RNA。结果 :发病后 0～ 7d,8～ 14d,15～ 2 1d,2 2～ 2 8d患者血清 HEV-RNA阳性率分别为 96 .6 % ,84.... 目的 :探讨戊型肝炎患者血清 HEV - RNA的动态变化及其意义。方法 :用逆转录 -巢式聚合酶链反应检测 32例戊型肝炎患者系列血清 HEV- RNA。结果 :发病后 0～ 7d,8～ 14d,15～ 2 1d,2 2～ 2 8d患者血清 HEV-RNA阳性率分别为 96 .6 % ,84.4% ,43.8%和 9.4%。病后 1周内 ,血清 HEV- RNA阳性率明显高于抗 - HEV Ig M(P <0 .0 5 )和抗 - HEV Ig G阳性率 (P <0 .0 1)。病后 2周后 ,抗 - HEV Ig M和抗 - HEV Ig G阳性率均明显高于血清HEV- RNA阳性率 (P <0 .0 1)。结论 :大部分戊型肝炎患者血清 HEV- RNA阳性持续至病后 2周 ,少部分持续至病后 3周以上。病后 1周内 ,检测血清 HEV- RNA作为早期诊断指标最敏感。但病后 2周由于血清 HEV- RNA部分阴转 ,抗 - HEV阳性率增加 ,作为诊断指标抗 - HEV比 HEV- RNA敏感。 展开更多

关键词 戊型肝炎 戊型肝炎病毒 RAN 聚合酶链反应

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食品中甲型肝炎病毒RNA提取方法的比较及应用 被引量：4

5

作者 冯华炜 闫平平 +3 位作者 艾海新 李思嘉 麻丽丹 刘宏生 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第6期325-330,共6页

目的:对食品中甲型肝炎病毒的3种RNA提取方法进行综合比较,以优选出最佳的核酸提取方法,为各级实验室开展食源性甲型肝炎病毒核酸检验提供技术参考。方法:分别采用ABI AM1836、QIAGEN 74104和ROCHE11858882001三种商业化核酸提取试剂盒... 目的:对食品中甲型肝炎病毒的3种RNA提取方法进行综合比较,以优选出最佳的核酸提取方法,为各级实验室开展食源性甲型肝炎病毒核酸检验提供技术参考。方法:分别采用ABI AM1836、QIAGEN 74104和ROCHE11858882001三种商业化核酸提取试剂盒对人工污染甲型肝炎病毒的食品样品进行核酸提取,根据3种核酸提取方法的提取效率、抑制剂去除效率、检测灵敏度、综合应用指标进行病毒RNA的优化,且采用优化后的提取方法进行实际样品的检测。结果:综合病毒各项评价指标显示,ROCHE 11858882001在食品中提取甲型肝炎病毒RNA效果最优,其次为QIAGEN 74104和ABI AM1836。101份样品的检测结果显示,一份蓝靛果样品为甲型肝炎病毒核酸阳性,其余样品均为阴性。结论:ROCHE 11858882001是一种快捷有效的病毒RNA提取方法,适用于食品中甲型肝炎病毒的日常检测工作。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 rna提取方法 实时荧光rt-pcr 食品样品

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云南某农村猪戊型肝炎病毒分子流行病学调查 被引量：8

6

作者 黄芬 禹文海 +2 位作者 马天武 井申荣 曾韦锟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期274-277,共4页

目的了解云南农村散养猪群HEV感染情况,为HEV防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术,对所采集云南猪群78份粪便样品进行HEV ORF2基因部分片段扩增,经琼脂糖凝胶电泳后对目的条带进行回收纯化及克隆测序... 目的了解云南农村散养猪群HEV感染情况,为HEV防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术,对所采集云南猪群78份粪便样品进行HEV ORF2基因部分片段扩增,经琼脂糖凝胶电泳后对目的条带进行回收纯化及克隆测序。序列利用DNAStar和MEGA4.0软件进行同源性比较和系统进化树构建。结果 RT-nested PCR方法扩增出了350bp目的基因序列,该序列与GenBank中HEV各型的同源性在77.4%～97.4%之间,与基因4型同源性最高(97.4%),与3型同源性最低(77.4%)。系统进化树显示测定的序列与基因4型聚为一支,表明该序列属于基因4型。本次实验共检测了78份猪粪便样品,其中8份为阳性,阳性率为10.26%。结论云南农村人群存在感染HEV的风险,应该加以防控以免HEV暴发流行。 展开更多

关键词 猪戊型肝炎病毒 逆转录巢式pcr 分子流行病学 调查

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套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸 被引量：3

7

作者 张东华 金根娣 +1 位作者 陈竺 陆志檬 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1994年第3期195-198,共4页

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８... 对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 丙型肝炎病毒 核酸 丙型肝炎 诊断

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丙型肝炎诊断试剂的研究 被引量：4

8

作者 陶其敏 孟勤 +1 位作者 杜绍财 郭建平 《北京医科大学学报》 CSCD 1992年第4期317-321,共5页

本文用分子生物学方法根据中国人HCV基因特点进行多肽合成,研究丙型肝炎C区、E区酶标试剂的临床应用以及与抗C 100-3试剂的比较,并以 RT双 PCR的方法建立了HCV RNA的检测试剂及临床应用。结果发现抗-CP试剂敏感性、特异性均优于抗C100-3... 本文用分子生物学方法根据中国人HCV基因特点进行多肽合成,研究丙型肝炎C区、E区酶标试剂的临床应用以及与抗C 100-3试剂的比较,并以 RT双 PCR的方法建立了HCV RNA的检测试剂及临床应用。结果发现抗-CP试剂敏感性、特异性均优于抗C100-3,从临床检测结果看,在自然人群中感染率抗-CP为2.8％,抗C100-3为2.1％,特别在输血后肝炎中,抗 CP阳性率高达 71.7％～75.9％。因此提出对HCV的诊断确立与愈后判断各类试剂有各自的作用,不能只根据某一试剂的某一次结果而简单地否定 HCV感染。HCV RNA测定,建立了5’末端非编码区及非结构区(NS 1),采用双PCR观察结果抗-CP阳性者绝大多数为RNA阳性,并提示将有助于抗病毒药物疗效的观察指标。 展开更多

关键词 丙型肝炎 氨基酸序列

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一株新型散发型戊型肝炎病毒部分核苷酸序列测定与分析

9

作者 刘子玲 迟宝荣 +4 位作者 姚程 杨波 张静 韩西瑶 王秀丽 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期647-650,共4页

目的 :了解长春地区戊型肝炎病毒 ( HEV)株的变异程度。方法 :用逆转录 -套式 -聚合酶链反应方法从患者血清中获取病毒 ,用双脱氧终止法进行核苷酸序列分析。结果 :China Changchun-2 2 0 MC与日本株、猪的 HEV分离株 ( AF0 82 843)、... 目的 :了解长春地区戊型肝炎病毒 ( HEV)株的变异程度。方法 :用逆转录 -套式 -聚合酶链反应方法从患者血清中获取病毒 ,用双脱氧终止法进行核苷酸序列分析。结果 :China Changchun-2 2 0 MC与日本株、猪的 HEV分离株 ( AF0 82 843)、美国株 - 1 ( AF0 60 669)、墨西哥株 ( M745 0 6)、第四基因型 ( AJ2 72 1 0 8)、缅甸株 ( M732 1 8)、中国株 ( M941 77、D1 1 0 93、D1 1 0 92 )、尼泊尔株 ( AF0 5 1 830 )、巴基斯坦株 ( M80 5 81、AF1 85 82 2 )核苷酸同源性为 72 %～ 88% ,氨基酸同源性为 93%～ 97%。结论 :China Changchun- 2 2 0 MC株与其它 HEV株相比有较高的基因异质性 ,可能是一新型的 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 碱基序列 逆转录聚合酶链反应 双脱氧终止法 核苷酸序列分析

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上海地区宠物犬中戊型肝炎病毒流行病学调查 被引量：7

10

作者 刘俊峰 华修国 +3 位作者 张文 李培锋 杨志彪 沈权 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第14期5895-5896,5941,共3页

[目的]为探讨宠物犬在戊型肝炎病毒(HEV)流行环节中的作用提供依据。[方法]以散养宠物犬为研究对象,从上海地区及其周边地区随机采集70份血清样品,通过双抗原夹心ELISA试验检测抗HEV抗体,分析不同品种和不同性别宠物犬中血清抗HEV抗体... [目的]为探讨宠物犬在戊型肝炎病毒(HEV)流行环节中的作用提供依据。[方法]以散养宠物犬为研究对象,从上海地区及其周边地区随机采集70份血清样品,通过双抗原夹心ELISA试验检测抗HEV抗体,分析不同品种和不同性别宠物犬中血清抗HEV抗体阳性率。利用反转录巢式PCR检测血清中病毒核酸。[结果]在70份宠物犬血清样品中,15份样品中抗HEV抗体呈阳性,阳性率为21.4%。上海地区宠物犬阳性率为27.5%,高于上海周边地区。在供试的宠物犬品种中,杜宾犬的HEV抗体阳性率较高(33.3%),其他品种宠物犬为11.1%～25.0%。雌性宠物犬中HEV阳性率为34.4%,显著高于雄性宠物犬。在各种宠物犬中未检测到HEV核酸颗粒。[结论]宠物犬对HEV敏感,在HE流行环节中具有不容忽视的作用。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 反转录巢式pcr 双抗原夹心酶联免疫试验

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陕西杨凌某蛋鸡场禽戊型肝炎病毒的检测 被引量：4

11

作者 拓晓玲 刘宝元 +3 位作者 陈宜阳 孙亚妮 赵钦 周恩民 《动物医学进展》 北大核心 2017年第7期120-123,共4页

2014年-2015年陕西杨凌地区部分商品蛋鸡场产蛋量下降了10%~40%,剖检部分鸡只发现肝脏肿大出血。为确诊该疫情的病因,从发病的6个蛋鸡场采集了337份血清和268份粪便,利用间接ELISA和套式RT-PCR分别对血清中的禽戊型肝炎病毒(HEV)抗体和... 2014年-2015年陕西杨凌地区部分商品蛋鸡场产蛋量下降了10%~40%,剖检部分鸡只发现肝脏肿大出血。为确诊该疫情的病因,从发病的6个蛋鸡场采集了337份血清和268份粪便,利用间接ELISA和套式RT-PCR分别对血清中的禽戊型肝炎病毒(HEV)抗体和粪便中的禽HEV RNA进行了实验室检测。ELISA检测结果发现,168份血清为禽HEV抗体阳性,阳性率为49.85%;套式RT-PCR检测结果发现,63份粪便为禽HEV RNA基因片段阳性,阳性率为23.51%。基因片段的序列同源性分析发现,杨凌地区的禽HEV分离株与国内的同源性为93.0%~99.2%;进化树分析表明,其与国内其他地区的分离株在同一进化分支上,同属禽HEV基因3型。 展开更多

关键词 禽戊型肝炎病毒 酶联免疫吸附试验 套式rt—pcr 序列分析

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非甲—戊型病毒性肝炎患者血清庚型肝炎病毒感染的研究 被引量：1

12

作者 何令 石理兰 +2 位作者 马力 赵桂珍 王兆荃 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期612-614,共3页

采用ＥＬＩＳＡ法及逆转录—ＰＣＲ（简称ＲＴ—ＰＣＲ）法检测３６例非甲—戊型肝炎患者血清庚型肝炎病毒抗体（简称抗ＨＧＶ）和庚型肝炎病毒（简称ＨＧＶＲＮＡ）。结果：７例（１９．４％）抗ＨＧＶ阳性，２例（５．４％）同时ＨＧ... 采用ＥＬＩＳＡ法及逆转录—ＰＣＲ（简称ＲＴ—ＰＣＲ）法检测３６例非甲—戊型肝炎患者血清庚型肝炎病毒抗体（简称抗ＨＧＶ）和庚型肝炎病毒（简称ＨＧＶＲＮＡ）。结果：７例（１９．４％）抗ＨＧＶ阳性，２例（５．４％）同时ＨＧＶＲＮＡ阳性；急性肝炎抗ＨＧＶ阳性者临床表现与抗ＨＧＶ阴性者无显著差异，慢性肝炎抗ＨＧＶ阳性者较抗ＨＧＶ阴性者轻。提示：ＨＧＶ可引起急、慢性肝炎，在非甲—戊型肝炎中占有一定比例，但不是主要原因。 展开更多

关键词 庚型肝炎病毒 庚型肝炎 rt-pcr

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陕西西安蛋鸡禽肝炎脾大综合征HEV基因3型病毒分离与鉴定 被引量：3

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作者 张靖飞 张园 +3 位作者 张靖维 冯鹏 石龙飞 王新 《畜牧兽医杂志》 2021年第5期1-4,9,共5页

2019年9月,陕西西安市某海兰褐蛋鸡场场出现产蛋率下降,死淘率升高,剖检部分死亡鸡只表现肝脾肿大且易脆破裂,为弄清该鸡场疫情的病因。我们采集了鸡血清32份,胆汁13份,粪便、肝脏和脾脏各11份,然后利用间接ELISA检测血清中是否存在禽HE... 2019年9月,陕西西安市某海兰褐蛋鸡场场出现产蛋率下降,死淘率升高,剖检部分死亡鸡只表现肝脾肿大且易脆破裂,为弄清该鸡场疫情的病因。我们采集了鸡血清32份,胆汁13份,粪便、肝脏和脾脏各11份,然后利用间接ELISA检测血清中是否存在禽HEV抗体,巢式RT-PCR检测粪便、肝脏、脾脏和胆汁样品中是否存在禽HEV核酸。间接ELISA检测结果发现,28份鸡血清禽HEV抗体阳性,阳性率为87.5;巢式RT-PCR检测结果发现,6份胆汁,5份粪便,3份肝脏和脾脏样品为禽HEV RNA阳性。阳性PCR产物测序后基因序列同源性分析发现,获得的禽HEV ORF2部分基因序列相互之间同源性为99~100,与GenBank已知的禽HEV序列同源性在78~99,进化树分析表明分离的禽HEV与国内多数禽HEV分离株以及欧洲部分分离株在同一分支上,属于基因3型。上述临床剖检病变和实验室检测技术说明,该鸡场存在禽HEV的感染,此次疫情可能主要是由该病毒感染引起的。 展开更多

关键词 禽戊型肝炎病毒 酶联免疫吸附试验 反转录巢式聚合酶联反应 防控措施

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