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表达2.3.4.4b分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建及其免疫保护效力的研究 被引量：1
1
作者 张小雨 刘静 +8 位作者 赵玉博 焦晨晨 麻琦 陈普泽 谢艳 陈普成 姜永萍 陈化兰 柳金雄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1049-1056,共8页
近年来,2.3.4.4b分支H5亚型禽流感病毒(AIV)引起的禽流感疫情在全球多国暴发,切断水禽作为AIV传播媒介的途径对于禽流感的防控意义重大。为研制针对当前H5亚型AIV流行株和鸭瘟病毒(DEV)感染均具有免疫保护作用的疫苗,本研究经PCR扩增2.3... 近年来,2.3.4.4b分支H5亚型禽流感病毒(AIV)引起的禽流感疫情在全球多国暴发,切断水禽作为AIV传播媒介的途径对于禽流感的防控意义重大。为研制针对当前H5亚型AIV流行株和鸭瘟病毒(DEV)感染均具有免疫保护作用的疫苗,本研究经PCR扩增2.3.4.4b分支H5亚型AIV HA基因,按照文献方法构建以DEV疫苗株为载体,表达2.3.4.4b分支H5亚型AIV代表株A/whooper swan/Shanxi/4-1/2020(H5N8)HA基因的重组DEV,命名为rDEV-14株。将rDEV-14株在CEF中连续传代后,经PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和western blot检测,并检测各培养时间rDEV-14株的TCID_(50),分析其生长特性。结果显示,在10、15代rDEV-14的PCR产物中检测到HA基因,IFA和western blot检测结果显示HA基因可在rDEV-14株各代中稳定遗传和表达。生长曲线测定结果显示rDEV-14株在CEF中的生长曲线与亲本病毒DEV疫苗株趋势一致。以不同剂量rDEV-14株免疫4月龄SPF鸭14 d后,采用DEV强毒AV1221株攻毒,结果显示,各剂量rDEV-14株均可诱导SPF鸭对DEV感染的完全免疫保护。以不同剂量rDEV-14株免疫2周龄SPF鸭后,分别利用同源和2021年~2022年分离的H5亚型异源高致病性AIV(HPAIV)(H5N6及两株H5N1 AIV)攻毒后记录各组鸭发病和死亡情况、检测排毒情况和HI抗体,结果显示,10^(4)TCID_(50)和10~5TCID_(50)免疫组鸭在攻毒后两周内无发病、无死亡、不排毒,并可诱导鸭产生良好且持久的HI抗体。上述结果表明本研究制备的重组病毒r DEV-14可对DEV强毒、同源H5亚型AIV强毒以及2021年~2022年分离的H5N1和H5N6异源HPAIV攻毒鸭产生完全的免疫保护力。本研究为我国水禽禽流感和鸭瘟的防控提供了新的候选疫苗株。 展开更多
关键词 鸭瘟 h5亚型禽流感病毒 重组鸭瘟病毒 活载体疫苗
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H5亚型禽流感病毒单抗——生物素捕获ELISA的建立 被引量：16
2
作者 王传彬 田新生 +5 位作者 曹振 遇秀玲 孙明 陈西钊 王宏伟 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期204-207,共4页
目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生... 目的建立一种单克隆抗体介导的、经生物素—亲和素系统放大的H5亚型禽流感病毒捕获ELISA检测方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法用亲和层析法纯化抗禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体,包被微量反应板,用于捕获病毒抗原,再用生物素标记的单抗和酶标亲和素来检测病毒血凝素抗原,经方阵试验优化ELISA反应体系。用该方法检测H1—H15亚型AIV标准毒株和H5、H7、H9亚型AIV分离株,并与血凝和血凝抑制试验比较,评价其敏感性和特异性。结果纯化后的单抗具有良好的反应活性,生物素标记单抗工作浓度为1∶5000;ELISA对H5亚型AIV的检出限为025个血凝单位。该ELISA反应体系能检出H5N3标准株和所有20株国内H5亚型AIV分离株,而与其他14个血凝素亚型的AIV标准株、15个H9亚型AIV分离株和2个H7亚型AIV分离株均无交叉反应。结论初步建立了检测H5亚型禽流感病毒的单抗—生物素捕获ELISA方法,为研制试剂盒和进一步应用试验提供了基础。 展开更多
关键词 单抗 ELISA 亲和素 h5亚型禽流感病毒 血凝素 单克隆抗体 AIV h9亚型 分离株 生物素标记
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H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立 被引量：7
3
作者 彭宜 谢芝勋 +6 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 范晴 罗思思 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期323-327,共5页
【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒(AIV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异... 【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒(AIV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异性引物,在反应之前向反应液中加入荧光试剂(Calcein/MnCl2混合液),然后对反应条件和体系进行优化。【结果】优化的RT-LAMP技术操作简便迅速,常规水浴锅中50min可完成,能特异性地检测出H5亚型AIV,但对其他HA亚型AIV、禽呼吸道病原体无交叉扩增反应,灵敏度是常规RT-PCR的10倍;反应结束后无需打开反应管盖,即可根据反应液的颜色变化对结果进行判定。【结论】建立的H5亚型AIVRT-LAMP可视化检测技术具有简便、快速、特异等特点,可在设备有限的基层兽医站及养殖场对H5亚型AIV进行快速初步诊断。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 RT—LAMP 可视化检测 血凝素(hA)基因 荧光试剂
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SYBR GreenⅠ定量RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒方法的建立 被引量：6
4
作者 马莉 汤承 +3 位作者 李明义 岳华 张彬 张兆敏 《中国家禽》 北大核心 2008年第20期18-21,共4页
针对H5亚型禽流感H基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为2.1×102拷贝质粒DNA,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm=(79.5±0.3)... 针对H5亚型禽流感H基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为2.1×102拷贝质粒DNA,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm=(79.5±0.3)℃,对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阳性扩增,对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其它家禽常见病原RNA无扩增,可重复性好,批内变异系数及批间变异系数分别为2.99%和5.12%;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需5h。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 SYBR Green I 荧光定量反转录聚合酶链式反应
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荧光定量RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒方法的建立与验证 被引量：5
5
作者 曹军平 陆桂平 +5 位作者 徐向明 顾敏 徐全刚 刘武杰 彭大新 刘秀梵 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期169-174,共6页
根据H5亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以H5亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品绘制标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关... 根据H5亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以H5亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品绘制标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.995,灵敏度约为8拷贝/μL,相当于8个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为H5亚型禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速、低成本、高通量、生物安全性好的定量检测方法。对178份临床泄殖腔棉拭子样品的检测,该方法结果与经典病毒分离方法符合率大于90.0%,在禽流感病毒临床样品快速筛检、流行病学监测等方面显示了良好的应用前景。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 荧光定量RT-PCR 建立 验证
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含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究 被引量：3
6
作者 姜永萍 李呈军 +5 位作者 张洪波 步志高 张芳芳 邓国华 于康震 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期441-444,449,共5页
不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白... 不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24～48h293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westemblot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA5体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础. 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 hA基因 DNA疫苗 鸡体偏嗜性密码子 偏嗜性 寡核苷酸
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H5亚型禽流感病毒LAMP快速检测方法的建立 被引量：2
7
作者 包红梅 李一经 +1 位作者 王秀荣 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期107-110,共4页
为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法... 为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法对H5 AIV RNA的最小检测限为0.1 pfu,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 10倍;扩增反应可以在30 min内完成;在反应体系中添加钙黄绿素(FD)荧光染料后,可以通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验表明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H5亚型AIV的病原学快速检测方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 LAMP方法 h5亚型禽流感病毒
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表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒的构建 被引量：3
8
作者 焦同路 王靖飞 +7 位作者 赵双成 王世达 常晓飞 田石 柳金雄 李雁冰 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期341-344,共4页
为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚... 为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚成纤维细胞中经过多轮筛选,得到纯化的重组禽痘病毒(rFPV-gfp-gpt-AHHA)。通过PCR、序列测定和western blot的方法对rFPV-gfp-gpt-AHHA进行鉴定和抗原活性分析。结果表明AH/06的HA基因稳定的重组到rFPV-gfp-gpt-AHHA中,其表达的HA蛋白能够与AH/06的阳性血清反应,显示出了良好的抗原性。同时病毒的生长曲线也显示外源HA基因的插入并没有影响亲本病毒的复制。这些结果为进一步的免疫效力研究奠定了基础。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 重组禽痘病毒 hA基因
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华南农业大学教授廖明:目前国内流行H5亚型禽流感病毒,其重组疫苗的构建应在抗原性方面实现全覆盖
9
作者 廖明 《北方牧业》 2017年第9期16-16,共1页
H5亚型禽流感的流行特征 多血清亚型 当前H5N1、H5N2和H5N6等多个血清亚型的毒株同时在禽群中出现，其中H5N6亚型成为优势亚型，而H5N8亚型病毒柱家禽中已鲜见报道。
关键词 h5亚型禽流感病毒 华南农业大学 重组疫苗 全覆盖 抗原性 内流 血清亚型 流行特征
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H5亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备 被引量：1
10
作者 崔淑娟 郭鑫 +2 位作者 杨汉春 盖新娜 陈艳红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第7期17-19,共3页
关键词 h5亚型禽流感病毒 单克隆抗体 高致病性禽流感 抗体检测 制备 表面抗原 病毒检测 神经氨酸酶 PCR方法 囊膜蛋白
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H5亚型禽流感病毒荧光检测试纸条的研制 被引量：3
11
作者 孙洁 陈雨 +8 位作者 吴峰 王津津 陈兵 郑晓聪 陶虹 刘建利 陈书琨 林庆燕 秦智锋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期32-35,I0004,共5页
为了对引起家禽重大经济损失和具有公共卫生意义的 H5 亚型禽流感病毒(AIV)进行快速超敏检测,本研究研制了针对HA蛋白的4株单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞株,通过MAb的两两配对试验,以荧光量子点作为抗体标记生物材料,基于夹心法原理建立了... 为了对引起家禽重大经济损失和具有公共卫生意义的 H5 亚型禽流感病毒(AIV)进行快速超敏检测,本研究研制了针对HA蛋白的4株单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞株,通过MAb的两两配对试验,以荧光量子点作为抗体标记生物材料,基于夹心法原理建立了H5 亚型AIV荧光免疫层析检测试纸条。结果显示,该方法能够特异性检测出 H5N1、H5N2等H5亚型AIV,而与H1N1、H3N2、H7N9、H9N2、NDV等其他病原无交叉反应;对标准检测抗原 H5N1(Re-6)的最低检测量为1ng/Ml,比市售H5亚型AIV胶体金检测试纸条灵敏度高100倍;该方法的变异系数(CV)值在10%以内,与商品化的试剂盒检测结果符合率达99.8%。本文建立的H5亚型AIV荧光检测试纸条快速、敏感,检测结果准确可靠,为 H5 亚型禽流感的流行病学调查和快速诊断提供了基础。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 荧光量子点 检测试纸条 快速检测
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不同MDCK单克隆细胞株对H5亚型禽流感病毒增殖条件和放大工艺的研究 被引量：1
12
作者 方琳 朱辉 +3 位作者 黄皓源 彭思力 覃海康 梁昭平 《动物医学进展》 北大核心 2020年第4期38-41,共4页
为了解H5亚型禽流感病毒rFJ56株在MDCK全悬浮细胞上的增殖规律,确定100 L生物反应器工艺的最适接毒量和收获时间,对H5亚型禽流感病毒rFJ56株敏感的MDCK全悬浮细胞进行单克隆筛选和全悬浮驯化,筛选出对该毒株最敏感的MDCK单克隆细胞株;... 为了解H5亚型禽流感病毒rFJ56株在MDCK全悬浮细胞上的增殖规律,确定100 L生物反应器工艺的最适接毒量和收获时间,对H5亚型禽流感病毒rFJ56株敏感的MDCK全悬浮细胞进行单克隆筛选和全悬浮驯化,筛选出对该毒株最敏感的MDCK单克隆细胞株;在摇瓶工艺的基础上,将该细胞在100 L生物反应器中接种H5亚型禽流感病毒rFJ56株,检测接种后不同时间病毒HA效价和病毒滴度(EID 50),确定最适接毒量和收获时间。共筛选出22株MDCK全悬浮细胞单克隆细胞株,其中5株对H5亚型禽流感病毒rFJ56株最敏感,接种后病毒HA效价均可达到9 log2;对MDCK单克隆细胞株按0.01%体积比接种H5亚型禽流感病毒rFJ56株,在100 L生物反应器中培养60 h,HA效价可达10 log2,病毒含量可达108.17 EID 50/0.1 mL,可为H5亚型禽流感病毒无血清全悬浮培养放大工艺提供参考。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 MDCK单克隆细胞株 无血清全悬浮培养 接毒量 收获时间
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H5亚型禽流感病毒HA蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达与纯化
13
作者 刘郁夫 陈晓洁 +3 位作者 区炳明 容芳 郝文茜 陈瑞爱 《动物医学进展》 北大核心 2023年第10期19-24,共6页
为表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白研制亚单位疫苗,构建了pFastBAC-HA重组质粒,转化至DH10Bac感受态细胞,获得重组HA基因的杆状病毒质粒,再将重组杆状病毒质粒转染至Sf9细胞,拯救重组病毒,通过间接免疫荧光和Western blot试验对Sf9细胞中表... 为表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白研制亚单位疫苗,构建了pFastBAC-HA重组质粒,转化至DH10Bac感受态细胞,获得重组HA基因的杆状病毒质粒,再将重组杆状病毒质粒转染至Sf9细胞,拯救重组病毒,通过间接免疫荧光和Western blot试验对Sf9细胞中表达的HA蛋白进行鉴定。结果表明表达的重组HA蛋白均能与抗Strep标签抗体、H5亚型禽流感病毒阳性血清(Re-11株)特异性结合,且HA重组蛋白在昆虫细胞中以细胞分泌上清的形式表达,红细胞凝集效价为1∶64,利用链霉素亲和层析的方法,纯化重组HA蛋白,纯化后HA蛋白浓度为0.364 mg/mL。试验结果可为禽流感病毒亚单位疫苗研制、HA蛋白单克隆抗体制备提供前期基础。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 hA蛋白 杆状病毒 蛋白表达
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应用荧光定量RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒
14
作者 梁建波 韩喜连 《动物医学进展》 CSCD 2007年第6期114-115,共2页
为了解青岛市饲养的家禽是否感染H5亚型禽流感病毒，以制定切合实际的防控措施，2005年1月～2006年9月，对139个养禽场和211个养禽户饲养的家禽采集棉拭子和组织样品，共采集活禽样品27835份，病死禽样品573份，应用荧光定量RT—PCR技... 为了解青岛市饲养的家禽是否感染H5亚型禽流感病毒，以制定切合实际的防控措施，2005年1月～2006年9月，对139个养禽场和211个养禽户饲养的家禽采集棉拭子和组织样品，共采集活禽样品27835份，病死禽样品573份，应用荧光定量RT—PCR技术，进行H5亚型禽流感病毒检测，结果全部为阴性，在分子水平上证明了青岛市无禽流感病毒感染。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 荧光定量RT-PCR 检测
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H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
15
作者 屈小天 王雅楠 +4 位作者 许倩茹 李雪洋 张申立 张二芹 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第3期125-132,共8页
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将... 为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。 展开更多
关键词 h5N1亚型禽流感病毒 hA蛋白 水稻胚乳表达 蛋白质纯化
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H5N8亚型禽流感病毒的流行与演变
16
作者 王梦静 张虹 +2 位作者 王艳文 郭晶 李旭勇 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期187-193,共7页
禽流感是由禽流感病毒(AIV)引起的一种禽类的感染和疾病综合征。H5N8亚型禽流感病毒属于高致病性禽流感病毒,它具有传播范围广、传染性强的特点,至今已经蔓延到亚洲、非洲、欧洲、美洲等许多国家和地区,导致许多地区家禽和野生鸟类的大... 禽流感是由禽流感病毒(AIV)引起的一种禽类的感染和疾病综合征。H5N8亚型禽流感病毒属于高致病性禽流感病毒,它具有传播范围广、传染性强的特点,至今已经蔓延到亚洲、非洲、欧洲、美洲等许多国家和地区,导致许多地区家禽和野生鸟类的大量死亡。由H5N8亚型禽流感病毒引起的疫情不仅对家禽养殖业等造成巨大的经济损失,而且严重威胁着人类的健康和生命安全。因此,本文针对H5N8亚型禽流感病毒的遗传进化、在全球中的流行演变及在野鸟和家禽中的流行情况等方面进行简要综述,并且讨论了H5N8亚型禽流感病毒对公共卫生造成的威胁,以及积极监测H5N8病毒的传播和预防措施的重要性。 展开更多
关键词 h5N8亚型禽流感病毒 遗传变异 流行与演变 防控措施
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H5、H9亚型禽流感病毒及鸭坦布苏病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：4
17
作者 李海琴 傅光华 +2 位作者 黄瑜 韦启鹏 唐维国 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第8期727-730,共4页
为建立一种能同时快速检测H5、H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)的多重PCR检测方法,根据GenBank发表的H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因和DTMUV的NS5基因序列,分别设计了3对特异... 为建立一种能同时快速检测H5、H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)的多重PCR检测方法,根据GenBank发表的H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因和DTMUV的NS5基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了同时检测H5亚型AIV、H9亚型AIV和DTMUV的多重PCR检测方法,对其特异性及敏感性进行检验,并在临床中进行初步应用。结果表明,该多重PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可同时扩增出大小分别为732bp(H9亚型AIV)、380bp(H5亚型AIV)、250bp(DTMUV)的特异片段,利用本试验建立的多重PCR对其他鸭病病原体进行扩增结果均为阴性,利用这3对引物对H5、H9亚型AIV和DTMUV进行敏感性检测,结果显示最低检测极限分别为533pg·μL-1、56pg·μL-1和6.6ng·μL-1。对临床200份样品的检测结果表明该多重PCR检测方法具有快速、敏感、特异性强等优点,适用于临床检测应用。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 h9亚型禽流感病毒 鸭坦布苏病毒 多重PCR
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抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2
18
作者 曹振 秦亚曼 +4 位作者 王传彬 王宏伟 陈西钊 苏敬良 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第4期197-199,共3页
目的建立稳定分泌抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为进一步研究禽流感诊断技术奠定基础。方法以纯化的H5亚型禽流感病毒按常规方法免疫BALBc小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP20细胞在聚乙二醇作用下融合,... 目的建立稳定分泌抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为进一步研究禽流感诊断技术奠定基础。方法以纯化的H5亚型禽流感病毒按常规方法免疫BALBc小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP20细胞在聚乙二醇作用下融合,用选择性培养、有限稀释法克隆和血凝抑制试验进行筛选,对获得阳性克隆株用ELISA方法进行亚型鉴定,并用37株H5、H7、H9亚型AIV测定其特异性、覆盖性。结果最后获得了3株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1E5、4A4、4B1,经长期体外培养和冻存后复苏能稳定地分泌抗体。经鉴定,其亚型均为IgG1、kappa链。腹水HI效价1∶210～1∶216,细胞培养上清HI效价1∶26～1∶28。3株杂交瘤所分泌的单克隆抗体均能与本中心保存的全部20株H5亚型禽流感病毒分离株发生反应,而与15株H9亚型禽流感病毒分离株、2株H7亚型禽流感病毒分离株以及H1H4、H6H15亚型禽流感病毒标准毒株均不反应,与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综合征病毒等均无交叉反应。结论所获3株单克隆抗体可用于禽流感病毒特异性诊断试剂的研制。 展开更多
关键词 h5N1亚型 单克隆抗体 分泌 血凝素 鉴定 免疫后 有限稀释法 h5亚型禽流感病毒 hI效价 分离株
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鉴别H5亚型两种分支禽流感病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用 被引量：2
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作者 彭程 刘朔 +7 位作者 张琳 李金平 于晓慧 侯广宇 王静静 李阳 蒋文明 刘华雷 《中国动物检疫》 CAS 2021年第1期100-105,共6页
为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时... 为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化,同时开展了特异性和敏感性试验,以及临床应用检测。结果显示:该方法具有良好的特异性,与其他亚型禽流感病毒及常见禽病病毒无交叉反应;对H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支毒株的检测灵敏度分别为495.0 copies/μL和22.3 copies/μL;100份临床家禽拭子禽流感病毒检测结果与常规RT-PCR和病毒分离检测结果一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异、敏感、准确、耗时少,同时还可区分不同分支,可应用于H5亚型禽流感病毒的准确、快速检测。 展开更多
关键词 h5亚型禽流感病毒 分支 双重实时荧光RT-PCR 敏感性 特异性
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蛋鸭重组禽流感病毒(H5N1亚型)灭活疫苗免疫试验 被引量：3
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作者 封宜民 沈欣悦 +5 位作者 程旭 刘梅 李建梅 尤素兰 姜逸 戴亚斌 《中国家禽》 北大核心 2015年第21期68-70,共3页
采用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型，Re-6株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株＋Re-4株）进行蛋鸭免疫试验，监测免疫鸭的抗体消长动态，旨在为鸭禽流感免疫程序的制定提供理论依据。基于试验结果，提出鸭禽流感免疫程... 采用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型，Re-6株）和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-6株＋Re-4株）进行蛋鸭免疫试验，监测免疫鸭的抗体消长动态，旨在为鸭禽流感免疫程序的制定提供理论依据。基于试验结果，提出鸭禽流感免疫程序：2周龄首免，4～5周龄二免，开产前2～3周三免，此后每隔4～5个月加强免疫一次。 展开更多
关键词 蛋鸭 h5亚型禽流感病毒灭活疫苗 免疫抗体 消长动态 免疫程序
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