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鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究 被引量:1
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作者 赵雪丽 闫若潜 +8 位作者 王华俊 王淑娟 马震原 谢彩华 柴茂 杨海波 王翠 刘影 王东方 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期165-173,共9页
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性... 建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 rep基因 猪圆环病毒3型 cap基因 双重TaqMan MGB fq-pcr
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氮素胁迫下强、弱化感水稻萜类代谢途径中关键酶基因差异表达的FQ-PCR分析 被引量:19
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作者 王海斌 熊君 +4 位作者 方长旬 邱龙 吴文祥 何海斌 林文雄 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1329-1334,共6页
运用实时荧光定量PCR技术研究低氮条件下化感与非化感水稻异戊二烯代谢途径中关键酶基因的表达差异。结果表明,与正常氮条件下相比,低氮条件下化感和非化感水稻与萜类物质合成相关的12个关键酶基因表达发生了不同程度的变化,其中,化感水... 运用实时荧光定量PCR技术研究低氮条件下化感与非化感水稻异戊二烯代谢途径中关键酶基因的表达差异。结果表明,与正常氮条件下相比,低氮条件下化感和非化感水稻与萜类物质合成相关的12个关键酶基因表达发生了不同程度的变化,其中,化感水稻PI312777有6个基因表达下调,6个基因则上调;而非化感水稻Lemont有7个基因表达下调,5个基因表达上调。在供氮条件从高向低改变的过程中,两水稻中有11个基因的表达行为(上调或下调)相同,从分子水平上,证实了它们萜类代谢相关基因在响应供氮环境变化的行为生态上是相同或相似的。低氮引起两水稻催化生成与化感物质相关的单萜、倍半萜、二萜、三萜类物质的合成酶基因表达量均显著下降,从而认为营养胁迫引起水稻化感抑草作用增强与萜类物质代谢变化无关。还讨论了营养胁迫引起萜类物质代谢变化与内源激素合成和生长速率减缓的关系,认为水稻甲羟戊酸代谢途径支路中3-羟基-3-甲基戊二单酰CoA合酶、3-羟基-3-甲基戊二单酰CoA还原酶和甲羟戊酸激酶相关基因表达量不同程度的上调,维持了生长所必需的激素水平。 展开更多
关键词 水稻 异戊二烯途径 fq-pcr 氮素
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草鱼呼肠孤病毒JX-0901株FQ-PCR检测方法的建立及其在定量分析中的应用 被引量:5
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作者 刘宝芹 曾伟伟 +5 位作者 王庆 张乐生 王英英 石存斌 李华 吴淑勤 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期139-143,共5页
根据GCRV JX-0901株S7基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对GCRV JX-0901株病毒的TaqMan实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并利用FQ-PCR方法对该毒株在不同鱼类细胞中的增殖情况和不同温度条件下的稳定性进行了定量分析。... 根据GCRV JX-0901株S7基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对GCRV JX-0901株病毒的TaqMan实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并利用FQ-PCR方法对该毒株在不同鱼类细胞中的增殖情况和不同温度条件下的稳定性进行了定量分析。结果显示,建立的FQ-PCR方法的Ct值与标准品在1.0×101~1.0×108拷贝/μL浓度范围呈良好的线性关系,R2高达0.999;该方法有较好的敏感性和特异性,最低模板检出量为10个拷贝,只能特异地检测出GCRV JX-0901,不能检出其他鱼类常见病毒。该毒株能在10种常见鱼类细胞中增殖,其中在L8824细胞中的增殖量最大,含量达到4.1933×107拷贝/μL;此外,该毒株对温度敏感性较弱,病毒在48、56℃条件下放置96 h后才失去对CIK细胞感染性,而在4、15、28、37℃条件下放置32d,-20℃条件下储存2年仍具有较高的含量和较强的感染性。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 JX-0901株 fq-pcr 定量分析
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FQ-PCR检测宫颈涂片剩余细胞内HPV16、18型感染的临床意义 被引量:14
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作者 瞿文珍 邹先进 +3 位作者 郑飞云 詹丽飞 胡燕 彭英 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期80-82,共3页
目的 :探讨实时荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测宫颈涂片剩余细胞内人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型感染 ,建立快速、灵敏的检测方法的临床意义。方法 :采用FQ PCR技术检测 12 4例异常宫颈细胞和组织标本HPV16、18型感染状况。结果 :细... 目的 :探讨实时荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测宫颈涂片剩余细胞内人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型感染 ,建立快速、灵敏的检测方法的临床意义。方法 :采用FQ PCR技术检测 12 4例异常宫颈细胞和组织标本HPV16、18型感染状况。结果 :细胞学诊断低度鳞状上皮内病变 (LSIL) 4 5例 ,其中FQ PCR检测宫颈细胞标本HPV16、18型DNA阳性14例 (阳性率 31.1% ) ;高度鳞状上皮内病变 (HSIL) 38例 ,HPV16、18型DNA阳性 2 6例 (6 8.4 % ) ;未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞 (ASCUS) 30例 ,HPV16、18型DNA阳性 10例 (33.3% ) ;鳞状细胞癌 9例 ,HPV16、18型DNA阳性 8例 (88.9% )。组织学检查诊断CINⅠ级 6 7例 ,其中FQ PCR检测活检组织标本HPV16、18型DNA阳性 2 8例 (阳性率 4 1.8% ) ;CINⅡ 14例 ,HPV16、18型DNA阳性 9例 (6 4 .3% ) ;CINⅢ级 11例 ,HPV16、18型DNA阳性 8例 (72 .7% ) ;鳞状细胞癌 2 3例 ,HPV16、18型DNA阳性 17例 (73.9% )。细胞和活检组织两种标本检出的HPV16、18型DNA阳性率差异无显著性 (χ2=1.5 4 ,P >0 .0 5 )。结论 :FQ PCR方法检测宫颈细胞标本HPV16、18型感染 ,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点 。 展开更多
关键词 fq-pcr 宫颈细胞涂片 临床意义 人乳头瘤病毒 细胞学诊断 宫颈癌
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肠炎沙门氏菌种特异性FQ-PCR快速检测方法的建立 被引量:4
5
作者 邓树轩 程安春 +5 位作者 汪铭书 曹平 尹念春 曹省艳 张振华 颜彬 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期537-542,共6页
根据肠炎沙门氏菌(SE)种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针,首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断方法。该法在SEDNA含量为9×10^8-9X104拷贝有较好的线性关系;检... 根据肠炎沙门氏菌(SE)种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针,首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断方法。该法在SEDNA含量为9×10^8-9X104拷贝有较好的线性关系;检测SEDNA模板的灵敏度为4拷贝/μL,检测SE细菌数的灵敏度为6CFU/mL;特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应。分别应用该技术和传统细菌分离法检测60份来自人工感染鸭、小白鼠和肉兔的心、肝、脑和直肠粪便,结果显示两种方法对心、肝、直肠粪便的阳性检测结果符合率为100%,而FQ-PCR对脑的阳性检测率极显著(P〈0.01)高于细菌分离。研究结果表明,该方法快速、灵敏、特异、重复性好且能实时定量检测,可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例检测、SE体内动态分布规律研究及其分子流行病学调查。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌(SE) 荧光定量聚合酶链式反应(fq-pcr) 种特异性
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FQ-PCR方法检测腹泻仔猪肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌试验 被引量:1
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作者 赵娟 王志宇 +5 位作者 段昌学 王志俊 刘一飞 赵敏 韩洁茹 李正莉 《养猪》 2021年第5期123-125,共3页
为了建立一种更有效的动物肠道微生态检测方法,试验设计了对各血清型乳酸菌和双歧杆菌引物序列进行测序。分3批次采集样本,每批分别采集健康和腹泻仔猪新鲜粪样20份。提取每个粪便样本的总DNA。并对解冻后的粪便样本进行荧光定量PCR分... 为了建立一种更有效的动物肠道微生态检测方法,试验设计了对各血清型乳酸菌和双歧杆菌引物序列进行测序。分3批次采集样本,每批分别采集健康和腹泻仔猪新鲜粪样20份。提取每个粪便样本的总DNA。并对解冻后的粪便样本进行荧光定量PCR分析发现,与健康仔猪相比,腹泻仔猪粪便样品中的乳酸杆菌和双歧杆菌mRNA数量有所减少,说明腹泻仔猪肠道中益生菌数量下降,腹泻影响仔猪肠道内环境的健康和微生态平衡。 展开更多
关键词 fq-pcr方法 腹泻仔猪 肠道微生态
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FQ-PCR检测肌注小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布
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作者 黎敏 程安春 +5 位作者 汪铭书 韩新锋 刘晓东 卢菲 车茜 陈孝跃 《四川农业大学学报》 CSCD 2007年第4期462-467,共6页
将30日龄四川白鹅分别肌肉注射接种50μg、100μg和200μg的GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3),以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用实时荧... 将30日龄四川白鹅分别肌肉注射接种50μg、100μg和200μg的GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3),以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅体内的动态分布。结果表明:①pcDNA-GPV-VP3各剂量免疫雏鹅1h即可在各组织中被检测到,其中注射部位含量最高,肝、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)含量较高;②到217d时,50μg组免疫雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1h时约少了103~104;③血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,且1h~217d各时间点的差异不显著(P≥0.05);④不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为200μg组>100μg组>50μg组,但差异不显著(P≥0.05)。因此,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217d以上。 展开更多
关键词 fq-pcr pcDNA-GPV-VP3 肌肉注射 雏鹅 动态分布
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ELISA法与FQ-PCR对HBV三种血清标志物检测结果的比较 被引量:1
8
作者 金波 黄文峰 +2 位作者 李勇 王岩旭 李树伟 《塔里木大学学报》 2009年第3期1-4,共4页
为了探讨与评价联合检测乙型肝炎HBeAg和Pre-S1 Ag、HBV-DNA等血清免疫标志物在乙型病毒性肝炎临床诊断、治疗中的意义,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光实时定量聚合酶链式反应(FQ-PCR),对619例疑似或确诊乙肝患者的血清样本分别进... 为了探讨与评价联合检测乙型肝炎HBeAg和Pre-S1 Ag、HBV-DNA等血清免疫标志物在乙型病毒性肝炎临床诊断、治疗中的意义,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光实时定量聚合酶链式反应(FQ-PCR),对619例疑似或确诊乙肝患者的血清样本分别进行乙肝免疫标志物HBeAg、Pre-S1Ag和HBV-DNA的联合检测。结果表明,血清乙肝免疫标志物HbeAg检测为阴性时,不能完全表明患者乙肝病毒复制终止或病毒血症的消失;血清Pre-S1Ag检测结果有助于乙型肝炎的早期诊断,也可以作为乙肝病毒DNA复制的指标之一;而FQ-PCR检测血清HBV DNA结果则有助于乙型肝炎病毒的抗原或抗体血清滴度较低时肝炎的诊断。 展开更多
关键词 乙肝 HBEAG PRE-S1AG HBV-DNA ELISA fq-pcr
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标准品制备方法对FQ-PCR定量基因表达水平的影响 被引量:2
9
作者 陈军 李慧玲 +3 位作者 董建一 王福金 王爱国 王靖宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1064-1068,共5页
实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致.为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本研究以脂肪酸结合蛋白5(Fabp5)、过氧化物酶体增殖... 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致.为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本研究以脂肪酸结合蛋白5(Fabp5)、过氧化物酶体增殖活化受体α(Ppar-α)及β肌动蛋白(β-Actin)的3个基因为对象,分别采用质粒纯化法、PCR产物直接纯化法、PCR产物凝胶回收法制备DNA标准品,10倍梯度稀释后用FQ-PCR制作标准曲线.并以10倍梯度稀释的样本cDNA标准曲线的参数为对照,进行比较分析.结果表明,不同方法制备的DNA标准品的扩增效率差异较大,并且与cDNA的扩增效率不一致,不能对cDNA样本进行准确定量.另外,虽然目的基因在cDNA样本中的拷贝未知,不能对基因表达水平进行绝对定量,但因不同cDNA样本的同一基因的扩增效率一致,可对基因的表达进行准确的相对定量. 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR DNA标准品 CDNA 扩增效率
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FQ-PCR与IMSA检测转基因豆奶外源基因的比较研究 被引量:6
10
作者 乐振窍 许泽仰 +2 位作者 张细玲 陈慧国 祖新 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期943-949,954,共8页
为比较实时荧光定量PCR(FQ-PCR)与等温多自配引发扩增(IMSA)技术检测转基因豆奶中外源基因(CaMV35S、NOS、EPSPS)的灵敏度和特异性。合成CaMV35S、NOS以及EPSPS基因的质粒,通过FQ-PCR与IMSA检测定量的质粒,比较质粒灵敏度;按0. 50%、0. ... 为比较实时荧光定量PCR(FQ-PCR)与等温多自配引发扩增(IMSA)技术检测转基因豆奶中外源基因(CaMV35S、NOS、EPSPS)的灵敏度和特异性。合成CaMV35S、NOS以及EPSPS基因的质粒,通过FQ-PCR与IMSA检测定量的质粒,比较质粒灵敏度;按0. 50%、0. 10%、0. 05%以及0. 01%的比例制作转基因豆奶,通过FQ-PCR与IMSA检测转基因大豆标准品制成的豆奶,比较样品灵敏度和特异性。结果表明:IMSA检测CaMV35S、NOS、EPSPS基因的质粒灵敏度分别为31. 01,31. 01,3. 10 cps·μL^(-1),FQ-PCR检测CaMV35S、NOS、EPSPS基因的质粒灵敏度皆为31. 01cps·μL^(-1); IMSA检测CaMV35S、NOS、EPSPS基因的样品灵敏度分别为0. 05%、0. 05%、0. 01%,FQ-PCR检测CaMV35S、NOS、EPSPS基因的样品灵敏度皆为0. 10%; FQ-PCR非特异性检出DP356043的NOS以及MON87701的CaMV35S与EPSPS。说明IMSA方法检测转基因豆奶外源基因(CaMV35S、NOS、EPSPS)的灵敏度与特异性优于FQ-PCR。 展开更多
关键词 fq-pcr IMSA 豆奶 外源基因 灵敏度 特异性
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鼠痘病毒FQ-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:1
11
作者 王莎莎 付瑞 +1 位作者 王吉 岳秉飞 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期101-105,共5页
目的建立鼠痘病毒(ECTV)的Taq Man探针法荧光定量PCR检测方法,并对实验室保存的裸鼹鼠组织样本、小鼠组织样本以及黄鼠组织样本进行检测。方法根据Gen Bank中鼠痘病毒的crm D基因序列设计引物探针,建立ECTV的FQ-PCR检测方法,对保存的样... 目的建立鼠痘病毒(ECTV)的Taq Man探针法荧光定量PCR检测方法,并对实验室保存的裸鼹鼠组织样本、小鼠组织样本以及黄鼠组织样本进行检测。方法根据Gen Bank中鼠痘病毒的crm D基因序列设计引物探针,建立ECTV的FQ-PCR检测方法,对保存的样本进行筛查,并对部分阳性样本进行测序鉴定。结果建立的ECTV FQ-PCR检测方法灵敏度高、特异性强,最低能检测到ECTV核酸浓度为10 copies/μL的样本,方法的标准曲线相关参数符合标准。使用该方法检测实验室63份裸鼹鼠脾组织样本和22份小鼠脾组织样本,结果全为阴性,检测4只黄鼠组织样本,结果阳性率为50%。阳性样本进行PCR检测后测序比对为ECTV核酸序列。结论经验证,建立的ECTV FQ-PCR检测方法能够灵敏特异的对样本中的ECTV进行筛查,实验室小鼠的日常监测不应忽视ECTV污染的潜在风险。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 TaqMan探针法荧光定量PCR方法 裸鼹鼠 黄鼠
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FQ-PCR在我国猪病诊断中的应用 被引量:1
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作者 余天鹏 《湖北畜牧兽医》 2017年第11期29-30,共2页
分析了FQ-PCR方法的原理、分类、与常规病原检测方法相比的优缺点及其在猪重大病毒性疫病检测上的应用等,供参考。
关键词 fq-pcr 养猪业 应用
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FQ-PCR在转基因产品检测中的应用研究进展 被引量:7
13
作者 宋勇涛 王勇 +3 位作者 刘勤 王露露 刘昌峨 魏泓 《动物医学进展》 CSCD 2008年第11期55-59,共5页
实时荧光定量PCR(real-time fuorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文... 实时荧光定量PCR(real-time fuorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文就实时荧光PCR技术的主要原理、分类方法以及在转基因产品检测中的应用等进行简要综述。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 转基因产品 检测
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非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 刘影 闫若潜 +10 位作者 王东方 杨海波 赵美雪 宋丹 赵雪丽 谢彩华 王淑娟 马震原 柴茂 王翠 刘梅芬 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期118-130,共13页
建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应... 建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应程序等反应条件,建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和重复性,对130份临床样品进行检测,并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10^(-1)~10^(5) copies/μL模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增,但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.53%~3.14%,重复性良好;对ASFV和HP-PRRSV的最低检测模板浓度均为10 copies/μL;利用建立的二重FQ-PCR方法对130份临床样品进行检测,检测结果与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和HPPRRSV二重FQ-PCR检测方法,为ASFV和HP-PRRSV的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重fq-pcr
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基因枪轰击不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布 被引量:6
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作者 黎敏 程安春 +5 位作者 汪铭书 韩新锋 刘晓东 卢菲 车茜 陈孝跃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1204-1210,共7页
本文开展了检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法的建立和基因枪轰击不同剂量(1、3和6μg)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)在30日龄四川白鹅体内(心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠... 本文开展了检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法的建立和基因枪轰击不同剂量(1、3和6μg)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)在30日龄四川白鹅体内(心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、血液、脑及注射部位皮肤)分布规律的研究。结果表明:①建立的FQ-PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,核酸模板数与FQ-PCR测定的Ct值相关系数达到0.999,具有很好的直线相关性;②pcDNA-GPV-VP3各剂量免疫雏鹅1 h即可在各组织中检测到,其中注射部位含量最高,肝、肾、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)含量较高;③到免疫后217 d时,1μg组免疫雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1 h时约少了4个数量级,其中免疫部位减少了7个数量级;④血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,且免疫后1 h^217 d各时间点的差异不显著(P≥0.05);⑤不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为6μg组>3μg组>1μg组,但差异不显著(P≥0.05)。因此,FQ-PCR是定量检测pcDNA-GPV-VP3在免疫雏鹅体内含量的可靠方法,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1 h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217 d以上。 展开更多
关键词 fq-pcr pcDNA-GPV-VP3 基因枪 雏鹅 动态分布
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INS、GLN和LP对体外培养牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度的影响 被引量:5
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作者 夏成 王哲 +2 位作者 张才 牛淑玲 徐闯 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1312-1318,共7页
为了阐明胰岛素(INS)、胰高血糖素(GLN)和瘦蛋白(LP)对牛脂肪细胞内激素敏感酯酶(HSL)、LP的mRNA表达的调控作用,本试验采用体外原代培养牛脂肪细胞的培养液中添加不同浓度的胰岛素(0、5、10、20、50、100 mmol/L)、胰高血糖素(0、25、... 为了阐明胰岛素(INS)、胰高血糖素(GLN)和瘦蛋白(LP)对牛脂肪细胞内激素敏感酯酶(HSL)、LP的mRNA表达的调控作用,本试验采用体外原代培养牛脂肪细胞的培养液中添加不同浓度的胰岛素(0、5、10、20、50、100 mmol/L)、胰高血糖素(0、25、100、200、5001、000pg/mL)和瘦蛋白(0、2.5、5、10、501、00 ng/mL),培养12 h后,应用建立的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度。结果表明:胰岛素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用,对LP的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用。胰高血糖素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用,对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达无作用。瘦蛋白对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达先呈现剂量依赖性促进作用,后呈现抑制作用。但对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用。 展开更多
关键词 内分泌因子 体外培养 新生牛脂肪细胞 fq-pcr HSL MRNA丰度 LP MRNA丰度
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乙肝病毒血清标记物与血清HBV-DNA的关系 被引量:13
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作者 李伟 李峰生 +1 位作者 陈舒 江其生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期818-818,821,共2页
目的:探讨不同乙肝感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行对比分析。方法:采用ELISA方法检测乙肝病毒血清标记物,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA,比较二者之间的关系。结果:HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组和HBsAg、HBeAg阳性组HBV-DNA检出... 目的:探讨不同乙肝感染模式的患者与HBV-DNA定量结果进行对比分析。方法:采用ELISA方法检测乙肝病毒血清标记物,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA,比较二者之间的关系。结果:HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组和HBsAg、HBeAg阳性组HBV-DNA检出率较高,分别为96.61%和100%。HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组HBV-DNA含量平均水平为3.86×108,HBsAg、HBeAg阳性组HBV-DNA含量平均水平为1.73×108;HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组和HBsAg、HBcAb阳性组检出率也较高,达45%以上,HBV-DNA含量平均水平分别为1.30×107和1.31×106。结论:FQ-PCR检测HBVDNA能准确地反映体内的HBV真实感染和复制情况,在乙肝的诊断和治疗中,不能单凭两对半的检测,同时应做HBV-DNA的定量测定。 展开更多
关键词 HBV-DNA ELISA fq-pcr
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不同化感潜力水稻品种对低钾的生理与分子响应 被引量:6
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作者 何海斌 王海斌 +5 位作者 曾聪明 蔡志祥 熊君 邱龙 方长旬 林文雄 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2008年第4期878-882,共5页
选择国际公认的化感水稻品种"PI312777"和非化感水稻品种"Lemont"为材料,在K元素为5mg.L-1(低K)和40mg.L-1(正常K)2个水平的营养液中培养,通过水稻形态学指标(根长、株高、根冠比和生物量)、生理生化指标(SOD、POD... 选择国际公认的化感水稻品种"PI312777"和非化感水稻品种"Lemont"为材料,在K元素为5mg.L-1(低K)和40mg.L-1(正常K)2个水平的营养液中培养,通过水稻形态学指标(根长、株高、根冠比和生物量)、生理生化指标(SOD、POD、CAT、根系活力及植株中N、P、K含量),评价不同化感潜力水稻品种对低K胁迫的生理响应,并采用实时荧光定量PCR(Real time Fluorescent Quantitative PCR,FQ-PCR),分析了低K胁迫下水稻根和叶中与N、P、K吸收利用相关的12个关键酶的基因表达差异。结果表明,低K促进了化感水稻"PI312777"根的生长,根冠比加大,生物量增加,但对株高的影响不显著;而该条件下非化感水稻"Lemont"的上述指标均受到不同程度的抑制。低K对两种水稻的保护酶系(SOD、POD、CAT)和根系活力均有一定程度的抑制作用,植株中N、P、K含量降低,但非化感水稻"Lemont"受抑制的程度远大于化感水稻"PI312777"。FQ-PCR检测结果表明,低K胁迫下两种水稻根、叶中的12个关键酶的基因均呈现上调表达,而化感水稻"PI312777"的基因表达上调倍数均明显大于非化感水稻"Lemont"。低K胁迫下两种水稻品种的形态学差异、生理与分子响应均表明,化感水稻"PI312777"比非化感水稻"Lemont"具有更强的适应K匮乏的能力。 展开更多
关键词 水稻 低K胁迫 化感作用 实时荧光定量PCR(fq-pcr)
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高危型人乳头瘤病毒PCR检测与液基薄层细胞学检测在宫颈病变中的对比性研究 被引量:8
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作者 陈舒 宋秀军 +2 位作者 李伟 于慧杰 江其生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期399-400,共2页
目的:探讨在宫颈病变中液基薄层细胞学检验(TCT)与13种高危型人乳头瘤病毒荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测的相关性。方法:采用TCT法检验就诊患者的宫颈脱落细胞,用FQ-PCR法检测HPV-DNA,比较两者之间的关系。结果:515例样本中,HPV... 目的:探讨在宫颈病变中液基薄层细胞学检验(TCT)与13种高危型人乳头瘤病毒荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测的相关性。方法:采用TCT法检验就诊患者的宫颈脱落细胞,用FQ-PCR法检测HPV-DNA,比较两者之间的关系。结果:515例样本中,HPV检测阳性者175例,占全样本的34%。在HPV阳性者中,TCT法检测出非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)组61例;上皮内低、中高度病变(CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ)组22例;良性反应性改变(重度、萎缩性炎症)组11例;良性反应性改变(中度炎症)组29例;良性反应性改变(轻度炎症)组50例;正常组2例,分别占175例HPV阳性标本的34.8%、12.6%、6.3%、16.6%、28.6%和1.1%。结论:在HPV检测阳性的标本中,其TCT检测结果显示宫颈均有不同程度的病理改变。因此高危型人乳头瘤病毒是导致宫颈病变的主要原因。在妇科的宫颈病变筛查中应将HPV、TCT、宫颈刮片以及阴道镜检查联合起来才更便于早期病变的检出。 展开更多
关键词 HPV-DNA TCT fq-pcr
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荧光定量PCR方法检测母乳中人类巨细胞病毒 被引量:7
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作者 何蓉 阮强 +3 位作者 刘兰青 吕绳敏 刘庆 吉耀华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期483-484,共2页
目的 :比较荧光定量PCR(FQ PCR)方法与定性PCR方法的敏感性 ,同时通过应用FQ PCR方法了解HCMV感染患儿母乳中HCMV感染情况。方法 :用FQ PCR方法与普通定性PCR方法共同检测 94份尿液中HCMVDNA ,将两种方法进行比较。用FQ PCR方法检测 76... 目的 :比较荧光定量PCR(FQ PCR)方法与定性PCR方法的敏感性 ,同时通过应用FQ PCR方法了解HCMV感染患儿母乳中HCMV感染情况。方法 :用FQ PCR方法与普通定性PCR方法共同检测 94份尿液中HCMVDNA ,将两种方法进行比较。用FQ PCR方法检测 76例HCMV感染患儿母乳中HCMVDNA。结果 :FQ PCR方法检测阳性率为 6 0 .6 % ,定性PCR方法检测阳性率 33.3% ,FQ PCR方法优于定性PCR方法。应用FQ PCR方法检测HCMV感染患儿母乳的HCMV阳性率为 72 .37%。结论 :FQ PCR方法优于PCR方法 ,应用FQ PCR检测母乳中HCMV是一种方便、快捷的方法。HCMV感染患儿母乳HCMV阳性率高 。 展开更多
关键词 fq-pcr 母乳 巨细胞病毒感染
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