过表达EB病毒潜伏期膜蛋白1(LMP1)的人B淋巴细胞株的建立

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作者 张令歌 赵旋 +5 位作者 辛苗苗 王丽芹 温大蔚 高岩岩 罗兵 孙明姝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期206-210,共5页

目的构建EB病毒潜伏期膜蛋白1(LMP1)基因的真核表达载体,通过电穿孔法转染人B淋巴瘤细胞株Ramos细胞,建立稳定的LMP1表达细胞株。方法扩增带有EcoRⅠ与BamHⅠ酶切位点的LMP1编码基因,克隆至pcDNA3.1-EF1a-mcs-3FLAG-CMV-EGFP真核表达载... 目的构建EB病毒潜伏期膜蛋白1(LMP1)基因的真核表达载体,通过电穿孔法转染人B淋巴瘤细胞株Ramos细胞,建立稳定的LMP1表达细胞株。方法扩增带有EcoRⅠ与BamHⅠ酶切位点的LMP1编码基因,克隆至pcDNA3.1-EF1a-mcs-3FLAG-CMV-EGFP真核表达载体,挑取阳性单克隆感受态细胞行PCR以及测序后将重组质粒通过电穿孔法转染Ramos细胞, G418筛选稳定表达LMP1的细胞株, PCR和Western blot法分别检测LMP1 mRNA和蛋白在Ramos细胞中的表达。结果 PCR与测序证实成功构建了LMP1重组质粒,建立了稳定转染的Ramos细胞,且LMP1蛋白可在细胞中成功表达。结论成功建立了稳定表达LMP1的Ramos细胞。 展开更多

关键词 eb病毒潜伏期膜蛋白1(lmp1) Ramos细胞 B细胞

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鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白1活化cyclinD1的表达 被引量：27

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作者 赵晓荣 王承兴 +7 位作者 罗非君 顾焕华 唐敏 夏林庆 邓琳 易薇 邓锡云 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期704-710,共7页

为了探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(EBV LMP1)促进细胞增殖 ,参与EBV相关疾病致瘤的分子机制 ,研究了LMP1在鼻咽癌细胞中调节cyclinD1表达 ,进而影响细胞周期行进及细胞恶性表型改变 ,并初步确定了LMP1发挥该功能的结构域 .利用已建株的... 为了探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(EBV LMP1)促进细胞增殖 ,参与EBV相关疾病致瘤的分子机制 ,研究了LMP1在鼻咽癌细胞中调节cyclinD1表达 ,进而影响细胞周期行进及细胞恶性表型改变 ,并初步确定了LMP1发挥该功能的结构域 .利用已建株的Tet on LMP1 HNE2鼻咽癌细胞系 ,蛋白质印迹实验分析LMP1诱导cyclinD1蛋白质表达的表达动力学 ,包括时间效应及剂量效应 ;利用三种LMP1功能区缺失的突变体及野生型LMP1,以载体型细胞为对照 ,确定LMP1活化cyclinD1表达的结构域 .同时结合基因诱导表达及反义寡聚核酸技术阻断基因表达的实验方法 ,进一步确定LMP1上调的cyclinD1功能 ,即对细胞周期行进及细胞恶性表型的影响 .结果表明LMP1确实可以诱导cyclinD1的表达 (2～ 4倍 ) ,且诱导具有时间依赖性及剂量依赖性 ;利用三种LMP1功能区缺失的突变体及野生型LMP1,以载体型细胞为对照 ,结合报道基因分析法 ,确定与空白载体细胞系比较 ,野生型LMP1从转录水平可反式激活cyclinD1报道基因活性约 11 2倍 ,其中CTAR1及CTAR2均可活化cyclinD1表达 ,但以CTAR2为主 ,与野生型LMP1诱导cyclinD1反式激活活性比较 ,CTAR1缺失导致cyclinD1报道基因活性下降 2 3 6 % ,CTAR2缺失导致cyclinD1活性下降约 80 7% ,C端均缺失时cyclinD1活性只? 展开更多

关键词 eb病毒 潜伏膜蛋白1 周期蛋白D1 鼻咽癌细胞

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EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中通过STAT3促进VEGF表达 被引量：13

3

作者 谭运年 陶永光 +4 位作者 李力力 刘素芳 唐敏 顾焕华 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期427-431,共5页

探讨了EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)是否通过STAT3调控诱导血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达 .利用蛋白质印迹的方法对HNE2、HNE2 LMP1以及瞬时转染STAT3显性负性突变体STAT3β的HNE2 LMP1细胞中VEGF含量进行检测 ,发现LMP1可以... 探讨了EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)是否通过STAT3调控诱导血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达 .利用蛋白质印迹的方法对HNE2、HNE2 LMP1以及瞬时转染STAT3显性负性突变体STAT3β的HNE2 LMP1细胞中VEGF含量进行检测 ,发现LMP1可以上调VEGF的表达 ,而STAT3β可以抑制VEGF的上调 ;利用LMP1可控表达细胞系tet on LMP1 HNE2进行LMP1时间和剂量诱导表达研究 ,发现VEGF可以随LMP1的动态表达而表达 ;将VEGF野生型报告基因和VEGF潜在的STAT3转录因子突变体报告基因与LMP1表达载体分别共转染研究发现 ,LMP1可以激活VEGF的转录 ,这种转录通过VEGF启动子区STAT3转录因子的结合位点发挥作用 ;电泳迁移率变动分析 (EMSA)确证了STAT3的这种DNA位点的特异性活性 .结果表明 :EB病毒编码的LMP1在鼻咽癌细胞中可以增加VEGF的转录和表达 。 展开更多

关键词 eb病毒 潜伏膜蛋白1(lmp1) STAT3 血管内皮细胞生长因子(VEGF) 鼻咽癌

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EB病毒潜伏膜蛋白1通过TRAF/TRADD激活JNK信号途径 被引量：10

4

作者 胡智 曾亮 +5 位作者 陶永光 唐发清 王海 罗非君 易薇 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期562-566,共5页

为了探讨在鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活c Jun氨基端激酶 (JNK)信号途径的分子机制 ,利用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,蛋白质印迹检测 ,发现LMP1能够促进JNK的活化 ;利用稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1... 为了探讨在鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活c Jun氨基端激酶 (JNK)信号途径的分子机制 ,利用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,蛋白质印迹检测 ,发现LMP1能够促进JNK的活化 ;利用稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1及其三种突变体HNE2 LMP1ΔCTAR 1、HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR 1,2及LMP1阴性的HNE2 为材料 ,采用蛋白质印迹和报告基因法分析JNK和活化蛋白 1(AP1)活化情况 ,结果显示HNE2 LMP1和HNE2 LMP1ΔCTAR1中磷酸化JNK蛋白表达量和AP1活性都无显著差异 ,而与HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR1,2、阴性对照HNE2及空白载体转染细胞的JNK蛋白表达和AP1活性具有显著差异 ;进一步比较转染TRAF、TRADD显性负性突变体鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1中磷酸化的JNK量和AP1活性 ,结果显示 :TRAF DN和TRADD DN的导入使活化的JNK蛋白和AP 1活性显著降低 ,二者间无显著差异 ,提示TRAF和TRADD可能参与了LMP1对JNK和AP 1的活化 .以上结果提示在鼻咽癌细胞系中LMP1功能结构域CTAR2通过结合TRAF/TRADD激活JNK从而活化重要的转录因子AP1. 展开更多

关键词 eb病毒 潜伏膜蛋白1 TRAF/TRADD 激活 JNK信号途径 鼻咽癌

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EB病毒编码的潜伏膜蛋白1参与鼻咽癌恶性演进的转录调控实验研究 被引量：9

5

作者 罗非君 胡智 +4 位作者 曾亮 唐发清 顾焕华 唐敏 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期567-571,共5页

探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活激活蛋白 1(AP1) ,和核转录因子 (NF κB)在鼻咽癌细胞SUNE 1及亚细胞株恶性演进中的作用 .运用报告基因法和凝胶电泳迁移率法 (EMSA)分析AP1和NF κB反式激活活性和DNA结合活性 ,蛋白质印迹检测蛋白... 探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活激活蛋白 1(AP1) ,和核转录因子 (NF κB)在鼻咽癌细胞SUNE 1及亚细胞株恶性演进中的作用 .运用报告基因法和凝胶电泳迁移率法 (EMSA)分析AP1和NF κB反式激活活性和DNA结合活性 ,蛋白质印迹检测蛋白质表达 ;裸鼠致瘤实验结合组织制片研究瘤细胞的成瘤和转移能力 .结果显示恶性程度不同的SUNE 1亚细胞株的反式激活活性、DNA结合活性、LMP1蛋白表达及c Jun氨基端激酶 (JNK)活性均存在明显差异 ,且与细胞恶性程度正相关 .这些结果提示LMP1活化AP1和NF κB的信号通路参与了鼻咽癌细胞SUNE 1的恶性演进过程 . 展开更多

关键词 eb病毒 编码 潜伏膜蛋白1 鼻咽癌 恶性演进 转录调控 实验研究 转录因子 转移

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EB病毒潜伏膜蛋白1胞外区融合蛋白的表达及纯化 被引量：11

6

作者 张大为 朱进 +1 位作者 陈仁杰 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期420-423,共4页

目的:在大肠杆菌中表达EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并用该融合表达蛋白检测EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者血清中的特异性抗体。方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP1胞外区重组基因的质粒pMD18-LMP1双酶切... 目的:在大肠杆菌中表达EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并用该融合表达蛋白检测EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者血清中的特异性抗体。方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP1胞外区重组基因的质粒pMD18-LMP1双酶切后,克隆到pGEX-4T-2中。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经谷胱甘肽S-转移酶柱亲和层析纯化,纯化的蛋白经Westernblot法检测鉴定。结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达的重组蛋白分子质量约为32.2ku,此抗原能够与鼻咽癌患者血清中抗体特异性结合。结论:成功获得了LMP1胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的LMP1胞外肽段保持了原有的抗原性,能够与EBV相关鼻咽癌患者血清中的抗体特异性结合。 展开更多

关键词 鼻咽癌 eb病毒 lmp1 胞外区 重组基因

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EB病毒潜伏膜蛋白1通过Survivin介导细胞增殖和抑制细胞凋亡 被引量：6

7

作者 唐发清 顾焕华 +4 位作者 胡智 唐敏 翁新宪 易薇 曹亚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期646-652,共7页

利用间接免疫荧光、基因转染、抗体剔除 (Ab knock out)、细胞平板集落形成、流式细胞术以及半胱氨酸天冬酰胺酶 (caspase3)活性检测等方法 ,从survivin核移位、Rb磷酸化、细胞周期演进、细胞克隆形成和细胞凋亡等方面 ,探讨EB病毒潜伏... 利用间接免疫荧光、基因转染、抗体剔除 (Ab knock out)、细胞平板集落形成、流式细胞术以及半胱氨酸天冬酰胺酶 (caspase3)活性检测等方法 ,从survivin核移位、Rb磷酸化、细胞周期演进、细胞克隆形成和细胞凋亡等方面 ,探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)调控细胞增殖和细胞凋亡双重效应的分子机制 .结果发现 ,LMP1表达介导survivin核移位 ,促进细胞Rb磷酸化增加 ,S期细胞数显著增加 ;LMP1通过survivin促进细胞克隆形成 .用Ab knock out阻断survivin核移位和survivin反义核酸抑制survivin表达时 ,Rb磷酸化水平降低 ,S期细胞减少 ,抑制LMP1介导的细胞增殖 ,活化细胞caspase 3,诱导细胞凋亡 .结果提示 。 展开更多

关键词 eb病毒 潜伏膜蛋白1 介导 细胞增殖 细胞凋亡

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重组腺相关病毒介导RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞影响的动物试验 被引量：4

8

作者 刘雄 李刚 +3 位作者 张宝 王路 李晓华 李湘平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期611-614,618,共5页

目的探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对于鼻咽癌细胞在体内增殖及转移能力的影响。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(rAAV)载体:(增强型绿色荧光蛋白,EGFP)rAAV-EGFP和rAAV-shRNA-LMP-1... 目的探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对于鼻咽癌细胞在体内增殖及转移能力的影响。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(rAAV)载体:(增强型绿色荧光蛋白,EGFP)rAAV-EGFP和rAAV-shRNA-LMP-1,以不同滴度rAAV-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞确定最佳转染复数(MOI),rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1,RT-PCR鉴定抑制效率,将体外转染RNA干扰后的C666-1细胞注入裸鼠肝脏包膜下制作鼻咽癌异位肝种植的肝肺转移模型,观察肝脏成瘤及肝内、肺转移情况,分析LMP-1基因沉默在动物水平对鼻咽癌细胞成瘤及转移能力的影响。结果rAAV-EGFP以5×104v.g(virus genome,病毒基因组数)/细胞转染C666-1细胞,转染效率大于95%,RT-PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×104v.g/细胞转染C666-1后目的基因抑制效率大于90%,动物试验结果显示rAAV-shRNA-LMP-1组肝脏成瘤体积与对照组rAAV-EGFP无显著差异,但显著减少了种植肿瘤的肝内及肺转移率。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达,可在动物水平抑制鼻咽癌细胞转移,但对鼻咽癌细胞生长无显著影响。 展开更多

关键词 鼻咽癌 重组腺相关病毒 RNA干扰 eb病毒潜伏膜蛋白1 转移

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应用RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白-1表达对鼻咽癌细胞生长的影响(英文) 被引量：5

9

作者 李刚 李湘平 +2 位作者 彭英 刘雄 李晓华 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第3期241-246,共6页

目的探讨能否通过siRNA人工诱导RNA干扰,在EB病毒阳性的鼻咽癌细胞株C611中,选择性抑制潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达,并了解LMP1抑制对鼻咽癌细胞生长的影响。方法利用脂质体转染的方法,将人工合成的双链siRNA导入鼻咽癌细胞,通过半定量RT-... 目的探讨能否通过siRNA人工诱导RNA干扰,在EB病毒阳性的鼻咽癌细胞株C611中,选择性抑制潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达,并了解LMP1抑制对鼻咽癌细胞生长的影响。方法利用脂质体转染的方法,将人工合成的双链siRNA导入鼻咽癌细胞,通过半定量RT-PCR检测LMP1 mRNA水平的变化。并采用MTT法和流式细胞仪检测LMP1表达抑制后,鼻咽癌细胞增殖和细胞周期的变化。结果C611细胞转染siRNA可使LMP1 mRNA水平下降90%以上。LMP1基因抑制后,C611细胞增殖速度下降33%;流式细胞检测显示,C611细胞周期在G0-G1期受阻。结论本研究证明,全新的人工诱导RNA干扰技术,能够有效抑制LMP1基因的表达,并降低鼻咽癌细胞的增殖能力,为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新的思路。 展开更多

关键词 PNA干扰 抑制eb病毒 膜蛋白-1 表达 鼻咽癌 细胞生长

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EB病毒潜伏膜蛋白1通过结合TRAFs调控NF-κB 被引量：3

10

作者 王承兴 李晓艳 +2 位作者 顾焕华 邓锡云 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第2期240-245,共6页

为了探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)的致瘤机制 ,对鼻咽癌中LMP1激活重要的核转录因子NF κB机制进行了研究 .首先 ,采用免疫共沉淀 蛋白质印迹在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1中证实LMP1与TRAF1,2 ,3结合形成免疫共沉淀复合物 ... 为了探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)的致瘤机制 ,对鼻咽癌中LMP1激活重要的核转录因子NF κB机制进行了研究 .首先 ,采用免疫共沉淀 蛋白质印迹在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1中证实LMP1与TRAF1,2 ,3结合形成免疫共沉淀复合物 ,进一步以野生型LMP1及其三种突变体的鼻咽癌细胞系LMP1(野生型 ,wt)、HNE2 LMP1del187～ 35 1(CTAR1缺失型 )、HNE2 LMP1(1～ 2 31) (CTAR2缺失型 )、HNE2 LMP1(1～ 187) (羧基端胞浆区缺失型 )、HNE2 pSG5 (空白载体型 )为材料 ,结合NF κB报道基因质粒(pGL2 NF κB luc)的荧光素酶活性表达分析NF κB的活性 ,证实 :较之母细胞 ,野生型LMP1活化NF κB达13 8倍 ,LMP1(1～ 187)几乎不活化NF κB ,LMP1(1～ 2 31)活化NF κB达 4 9倍 ,LMP1(del187～ 35 1)活化NF κB达 9 1倍 ;TRAF1过表达升高LMP1(wt)及LMP1(1～ 2 31)介导的NF κB活性 ,而对LMP1(del187～ 35 1)活化NF κB无影响 ;TRAF3过表达或TRAF3负显性突变体抑制LMP1(wt)及LMP1(1～ 2 31)介导的NF κB活性 ,而不影响LMP1(del 187～ 35 1)活化NF κB ;TRAF2过表达升高LMP1(wt)、LMP1(1～2 31)及LMP1(del 187～ 35 1)介导的NF κB活性 .这些结果表明 :鼻咽癌中LMP1通过TRAF1、TRAF2或TRAF3调控NF κB 。 展开更多

关键词 鼻咽癌 潜伏膜蛋白1 肿瘤坏死因子受体相关因子 NF-ΚB eb病毒

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EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中通过ERK介导Ets-1表达 被引量：2

11

作者 曾亮 李敏 +4 位作者 宋鑫 陶永光 唐敏 李嵬 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期574-578,共5页

为了探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)对核转录因子Ets 1表达和活化的影响 ,并证实细胞外信号调节激酶 1/ 2 (ERK1/ 2 )参与了该过程 ,选用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,应用蛋白质印迹法检测Ets 1、p ERK蛋白质表达 ,免疫共沉淀 ... 为了探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)对核转录因子Ets 1表达和活化的影响 ,并证实细胞外信号调节激酶 1/ 2 (ERK1/ 2 )参与了该过程 ,选用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,应用蛋白质印迹法检测Ets 1、p ERK蛋白质表达 ,免疫共沉淀 蛋白质印迹法检测Ets 1磷酸化状态 ,使用ERK1/ 2特异性小分子阻断物PD980 5 9作用后 ,蛋白质印迹法检测 p ERK、Ets 1表达及磷酸化变化 .结果显示 :在L7细胞中诱导性LMP1可促进p ERK、Ets 1蛋白质表达及其苏氨酸残基磷酸化 ,在一定范围呈时间和剂量效应 ;通过PD980 5 9对诱导性LMP1作用的干预发现 ,p ERK大部分表达被阻断 ,而Ets 1表达及其苏氨酸磷酸化也被部分阻断 ,以上结果提示ERK部分介导了LMP1诱导Ets 展开更多

关键词 eb病毒 潜伏膜蛋白1 鼻咽癌细胞 ERK介导 胞外信号调节激酶

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EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌中结合磷酸化的TRAFs 被引量：2

12

作者 王承兴 李晓艳 +2 位作者 顾焕华 邓锡云 曹亚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期110-114,共5页

对鼻咽癌中潜伏膜蛋白 1 (LMP1 )是否结合磷酸化的肿瘤坏死因子受体相关因子 (tumornecrosis factor receptor- associated factors,TRAFs)信号分子进行探讨 .首先应用 CSA/SP双染色法在 30例鼻咽癌活检组织中发现 1 6例 (52 % ) LMP1与... 对鼻咽癌中潜伏膜蛋白 1 (LMP1 )是否结合磷酸化的肿瘤坏死因子受体相关因子 (tumornecrosis factor receptor- associated factors,TRAFs)信号分子进行探讨 .首先应用 CSA/SP双染色法在 30例鼻咽癌活检组织中发现 1 6例 (52 % ) LMP1与 TRAF1、TRAF2和 TRAF3共表达于癌细胞胞膜及胞浆同一部位 .这提示 EB病毒 LMP1在鼻咽癌中可能结合 TRAF1、TRAF2或TRAF3发挥作用 .进一步以导入载体 p SG5的鼻咽癌细胞系 HNE2 - p SG5为对照 ,建立了稳定表达 LMP1的鼻咽癌细胞系 HNE2 - LMP1 ,利用这两种细胞系 ,以免疫共沉淀 - Western印迹方法 ,证实了 LMP1可与磷酸化的 TRAF1、TRAF2或 TRAF3直接或间接作用形成免疫共沉淀复合物 . 展开更多

关键词 鼻咽癌 潜伏膜蛋白1 肿瘤坏死因子受体相关因子 信号转导 eb病毒 TRAFs

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JAK3蛋白在鼻咽癌细胞中参与STAT活化并受EB病毒潜伏膜蛋白1调控 被引量：1

13

作者 谭运年 陶永光 +3 位作者 宋鑫 唐敏 艾米丹 曹亚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期560-565,共6页

为了探讨在鼻咽癌细胞 (NPC)中是否存在EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1) /JAK3/STAT信号传导途径 ,首先采用RT PCR方法对NPCJAK家族 4种成员检测 ,发现在两株鼻咽癌细胞株CNE1和HNE2中该家族 4种成员均有表达 .选择最有可能与LMP1相互作用的JA... 为了探讨在鼻咽癌细胞 (NPC)中是否存在EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1) /JAK3/STAT信号传导途径 ,首先采用RT PCR方法对NPCJAK家族 4种成员检测 ,发现在两株鼻咽癌细胞株CNE1和HNE2中该家族 4种成员均有表达 .选择最有可能与LMP1相互作用的JAK家族成员JAK3作为我们的研究对象 .利用已建立的一株受四环素衍生物强力霉素 (doxycycline ,Dox)调控的LMP1表达的鼻咽癌细胞系 (Tet on LMP1HNE2 ) ,诱导Tet on LMP1HNE2细胞LMP1动态表达 ,蛋白质印迹发现JAK3的表达方式呈剂量和时间依赖性 .采用瞬间转染方法将STAT报告基因质粒 (GRR Luc)转染入pTet on LMP1HNE2细胞中 ,不同剂量的Dox促使LMP1的表达可以激活STAT报告基因活性 ,在 0 0 6mg/LDox诱导 36h时 ,STAT活性最高 .在该条件下 ,加入 3μmol/LJAK3特异性抑制剂WHI P131时 ,可抑制STAT的活性 .结果表明 :JAK3的表达在NPC细胞中受LMP1的调控 ,LMP1可以通过调控JAK3的表达参与STAT的活化 . 展开更多

关键词 JAK3蛋白 鼻咽癌 STAT活化 eb病毒潜伏膜蛋白1

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儿童狼疮性肾炎患者中EB病毒潜伏膜蛋白1的表达 被引量：1

14

作者 丁艳 廖旺 +4 位作者 向伟 杨慧兰 何小解 党西强 易著文 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第5期676-679,共4页

目的通过实时定量逆转录PCR(RT-PCR)、肾脏免疫组化和ELISA 3种方法研究儿童狼疮性肾炎(LN)中EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)的表达,试图探讨LMP-1在儿童LN中的致病机制。方法 41例LN患儿和12例健康对照组,分别用RT-PCR法、免疫组化法、... 目的通过实时定量逆转录PCR(RT-PCR)、肾脏免疫组化和ELISA 3种方法研究儿童狼疮性肾炎(LN)中EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)的表达,试图探讨LMP-1在儿童LN中的致病机制。方法 41例LN患儿和12例健康对照组,分别用RT-PCR法、免疫组化法、ELISA法检测两组外周血单核细胞(PBMCs)、肾脏组织及血清中LMP-1的表达。结果 1 RT-PCR法、免疫组化法、ELISA法检测LN患儿和健康对照者的阳性率分别为65.9%vs 8.3%,95.1%vs 16.7%,22.0%vs 8.3%,差异有统计学意义(P<0.05);2 3种方法检测LMP-1的表达,免疫组化法检测阳性率高于其他两种方法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童LN中存在EBV潜伏期基因LMP-1表达异常,其中肾脏组织中表达阳性率最高,提示LMP-1可能参与了儿童LN的发病。 展开更多

关键词 儿童 狼疮性肾炎 潜伏膜蛋白1 eb病毒

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人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性 被引量：1

15

作者 毛圆 张大为 +5 位作者 曹清 唐小军 林红 陈仁杰 徐凛峰 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1646-1651,共6页

目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行... 目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行差减筛选及固相筛选,经过5轮细胞筛选和3轮固相筛选,随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法鉴定,阳性克隆进行可溶性表达,用LMP1阳性表达的人鼻咽癌细胞株HNE2/LMP1鉴定抗LMP1抗体Fab的结合活性。结果:Western blot、免疫荧光结果显示,从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗LMP1抗体Fab,细胞ELISA、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析、免疫组化检测结果显示Fab与人鼻咽癌细胞表面LMP1分子有较好的结合活性。结论:从人源Fab抗体库中筛选的Fab抗体能够与鼻咽癌细胞表面LMP1分子特异性结合,为研制用于EBV相关肿瘤如鼻咽癌生物治疗的靶向药物,提供了候选分子。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 eb病毒 潜伏膜蛋白1 抗原结合片段 靶向治疗

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EB病毒潜伏膜蛋白1和基质金属蛋白酶9的表达与鼻咽癌浸润转移关系的研究进展 被引量：4

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作者 梁玉莹 黎静 《实用医学杂志》 CAS 2007年第4期596-598,共3页

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是华南地区高发的恶性肿瘤之一，高转移性为其生物特征之一。从原位增殖性的肿瘤发展为侵袭转移癌的演进过程中，肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质的能力．在这个过程中基质金属蛋白酶（matrix m... 鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是华南地区高发的恶性肿瘤之一，高转移性为其生物特征之一。从原位增殖性的肿瘤发展为侵袭转移癌的演进过程中，肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质的能力．在这个过程中基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases．MMPs）发挥重要的作用。 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶9 潜伏膜蛋白1 鼻咽癌 癌浸润转移 eb病毒 细胞外基质 恶性肿瘤

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经典性霍奇金淋巴瘤中EB病毒潜伏膜蛋白1的表达

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作者 吴自勍 赵彤 +1 位作者 贺海容 张进华 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第6期438-439,F002,共3页

目的探讨经典性霍奇金淋巴瘤（ｃＨＬ）肿瘤性Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞埃泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）的表 达情况及其意义。方法　采用免疫组化ＳＡＢＣ法对３２例ｃＨＬ进行ＬＭＰ１蛋白表达的检测。结果２０／３２（... 目的探讨经典性霍奇金淋巴瘤（ｃＨＬ）肿瘤性Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞埃泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）的表 达情况及其意义。方法　采用免疫组化ＳＡＢＣ法对３２例ｃＨＬ进行ＬＭＰ１蛋白表达的检测。结果２０／３２（６２．５％）例ＬＭＰ１ 蛋白表达阳性，在各亚型之间没有显著性差异（Ｘ２＝０．８０９， Ｐ＝０．８４７）。结论ＬＭＰ１蛋白表达有地区差异，在ｃＨＬ亚型间可 展开更多

关键词 霍奇金淋巴瘤 疱疹病毒4型 病毒基质蛋白质类 eb病毒 lmp1

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鼻咽癌中EB病毒潜伏膜蛋白1启动子的突变

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作者 王凤伟 刘文举 +4 位作者 廖奕佶 邓海霞 陈诗萍 买世娟 谢丹 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期182-185,共4页

【目的】检测EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)远端启动子L1-TR在鼻咽癌(NPC)组织中的突变情况并探讨突变对启动子活性的影响。【方法】用聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增出B95.8细胞和新鲜鼻咽癌组织细胞中EB病毒(EBV)的L1-TR片段,并测序比较其... 【目的】检测EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)远端启动子L1-TR在鼻咽癌(NPC)组织中的突变情况并探讨突变对启动子活性的影响。【方法】用聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增出B95.8细胞和新鲜鼻咽癌组织细胞中EB病毒(EBV)的L1-TR片段,并测序比较其核苷酸序列的差异。构建含原型和突变型L1-TR启动子的荧光素酶报告质粒并分别转染HaCat细胞、B95.8细胞和C666-1细胞,比较两种启动子的活性。【结果】和B95.8原型比较,鼻咽癌组织中的EB病毒L1-TR启动子区域有多处缺失、插入和点突变,且启动子活性明显降低(P<0.05)。【结论】鼻咽癌组织中LMP1启动子L1-TR的活性与B95.8原型相比明显降低,这在EB病毒的免疫逃避机制中可能有一定的意义。 展开更多

关键词 eb病毒潜伏膜蛋白1 启动子 突变

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EB病毒LMP1-CTAR3对NP69细胞增殖和蛋白质表达的影响 被引量：14

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作者 张志伟 张琼 +2 位作者 余艳辉 欧阳咏梅 贺智敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期580-586,共7页

为了探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)第三个功能活性区域(CTAR3)在鼻咽上皮细胞NP69中的转化作用机制,采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-LMP1和RV-LMP1△232～351分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351稳... 为了探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)第三个功能活性区域(CTAR3)在鼻咽上皮细胞NP69中的转化作用机制,采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-LMP1和RV-LMP1△232～351分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351稳定表达细胞系.通过绘制生长曲线、平皿克隆形成试验和软琼脂集落形成试验比较野生型和突变型LMP1对NP69细胞增殖的影响,运用蛋白质组学方法鉴定NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351细胞间的差异表达蛋白,选用实时荧光定量RT-PCR与Western blot对其中部分蛋白质点差异表达进行验证.结果发现:a.突变型LMP1△232～351促NP69细胞增殖的能力较野生型LMP1明显降低(n=3,P<0.05);b.鉴定了LMP1-CTAR3在NP69细胞中参与调节的16个蛋白质(表达上调的蛋白质8个,下调的8个).c.实时荧光定量RT-PCR和Westernblot证实了部分上述蛋白质的差异表达.以上结果说明,LMP1-CTAR3是其发挥促细胞增殖的重要活性部位,可能通过参与调节G蛋白和异柠檬酸脱氢酶等蛋白质的表达而起作用. 展开更多

关键词 eb病毒 潜伏性膜蛋白1 羧基端功能活性区域3 差异表达蛋白

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EB病毒LMP1促鼻咽上皮细胞增殖的蛋白分子鉴定 被引量：9

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作者 张志伟 张琼 +2 位作者 刘洁琼 余艳辉 贺智敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期287-292,共6页

目的:探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促鼻咽上皮细胞增殖的分子机制。方法:采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-pLNSX(空载体)和RV-LMP1分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-pLN-SX与NP69-LMP1稳定表达细胞系,通过绘制细胞生长曲线... 目的:探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促鼻咽上皮细胞增殖的分子机制。方法:采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-pLNSX(空载体)和RV-LMP1分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-pLN-SX与NP69-LMP1稳定表达细胞系,通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测LMP1对NP69细胞增殖的影响;运用比较蛋白质组学方法鉴定LMP1在NP69细胞中参与调节的蛋白,并对部分蛋白表达进行验证。结果:(1)LMP1具有促鼻咽上皮细胞NP69增殖的作用(n=3,P<0.05)。(2)鉴定了22个LMP1参与调节NP69细胞的蛋白(表达上调的蛋白9个,下调的13个),实时荧光定量RT-PCR和Western blotting证实了部分上述蛋白的差异表达。结论:LMP1可能通过参与调节keratin19和vimentin等蛋白的表达促鼻咽上皮细胞NP69增殖。 展开更多

关键词 eb病毒 潜伏性膜蛋白1 细胞增殖 差异蛋白表达

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