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DNA甲基化转移酶3B在脑胶质母细胞瘤中的差异表达
1
作者 白宇 陈彦 +6 位作者 国添柱 刘庆阳 杨雪 冯颖 闫卓红 王丽佳 张权庚 《首都医科大学学报》 CAS 2013年第3期380-384,共5页
目的脑胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中存在广泛的基因组低甲基化,本研究检查了DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DMNT3B)是否在这种肿瘤中的表达和突变情况,以期寻找肿瘤基因组低甲基化发生的原因。方法用RNA抽提试剂盒... 目的脑胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中存在广泛的基因组低甲基化,本研究检查了DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DMNT3B)是否在这种肿瘤中的表达和突变情况,以期寻找肿瘤基因组低甲基化发生的原因。方法用RNA抽提试剂盒从25例人脑胶质母细胞瘤组织中提取总RNA,用反转录聚合酶链反应方法扩增DNMT3B的cDNA,然后测序,所得序列经DNASTAR软件与NCBI发表的正常序列进行比对。结果从25例脑胶质母细胞瘤样本中的成功扩增了全长DNMT3B cDNA,测序分析结果显示DNMT3B基因在该肿瘤样本中差异性存在多种剪接变异体,以DNMT3B-V1、DNMT3B-V3、DNMT3B-V7为主。没有发现改变氨基酸序列的点突变。结论 DNMT3B基因在脑胶质母细胞瘤中没有点突变,但存在多种剪接变异体(以DNMT3B-V3、DNMT3B-V7为主),其是否为脑胶质母细胞瘤的广泛基因组低甲基化的原因尚有待进一步研究。 展开更多
关键词 脑胶质母细胞瘤 基因组低甲基化 dna甲基化转移酶3b
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甲基转移酶样3对巨核细胞系花生四烯酸代谢通路的影响和机制
2
作者 张嘉祺 刘雯雯 +2 位作者 王茜婷 陈夏欢 刘梅林 《中国心血管杂志》 北大核心 2025年第1期75-85,共11页
目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)对人成巨核细胞白血病细胞(MEG-01)花生四烯酸(AA)代谢通路的影响和相关机制。方法构建METTL3差异表达的MEG-01,分为正常对照(Blank)组、METTL3过表达(OE)组和过表达阴性对照(OE-NC)组、METTL3敲低(KD)组... 目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)对人成巨核细胞白血病细胞(MEG-01)花生四烯酸(AA)代谢通路的影响和相关机制。方法构建METTL3差异表达的MEG-01,分为正常对照(Blank)组、METTL3过表达(OE)组和过表达阴性对照(OE-NC)组、METTL3敲低(KD)组和敲低阴性对照(KD-NC)组。采用定量聚合酶链反应(qPCR)法和免疫印迹(Western blot)法检测各组METTL3、YTH结构域家族蛋白(YTHDF1、YTHDF2)以及参与AA代谢的关键基因前列腺素内过氧化物合酶1/环氧合酶-1(PTGS1/COX-1)、前列腺素内过氧化物合酶2/环氧合酶-2(PTGS2/COX-2)、血栓素A合酶1(TBXAS1)、前列腺素I_(2)合酶(PTGIS)和前列腺素I_(2)受体(PTGIR)的表达量变化。采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定细胞培养上清中AA代谢产物前列腺素H_(2)(PGH_(2))和血栓素B_(2)(TXB_(2))的水平。采用蛋白稳定性实验和RNA结合蛋白质免疫沉淀(RIP)实验验证YTHDF1与COX-1 mRNA的结合情况。结果qPCR和Western blot检测显示,OE组YTHDF1、PTGS1/COX-1的mRNA和蛋白水平较OE-NC组升高,KD组较KD-NC组降低(均为P<0.05)。ELISA测定显示,细胞培养上清中OE组PGH_(2)、TXB_(2)的含量高于OE-NC组,KD组TXB_(2)的含量低于KD-NC组(均为P<0.05)。蛋白稳定性实验和RIP实验证实,METTL3通过YTHDF1参与COX-1 mRNA的翻译调控。结论METTL3可能通过促进N6-甲基腺苷(m6A)修饰介导的COX-1 mRNA翻译效率,调控巨核细胞系的AA代谢通路。 展开更多
关键词 甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷甲基化 MEG-01细胞 花生四烯酸 心血管疾病
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黄曲霉毒素B1诱导性大鼠肝癌超微结构观察及DNA甲基化转移酶3表达变化 被引量：4
3
作者 张友才 陈金霞 +1 位作者 张伟伟 李骥 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期74-77,共4页
由DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）活性改变诱导的DNA甲基化模式改变是肿瘤异常表观遗传修饰的重要机制,主要表现为基因组整体的低甲基化和区域性高甲基化,通过改变癌基因、抑癌基因的表达和基因组的稳定性,诱导正常细... 由DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）活性改变诱导的DNA甲基化模式改变是肿瘤异常表观遗传修饰的重要机制,主要表现为基因组整体的低甲基化和区域性高甲基化,通过改变癌基因、抑癌基因的表达和基因组的稳定性,诱导正常细胞癌性转变[1-2]。DNMT3基因是DNMT家系重要成员, 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 超微结构 dna甲基化转移酶 黄曲霉毒素b1
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DNA甲基转移酶在表观遗传学中的应用研究进展
4
作者 周文健 崔晓楠 施威扬 《生物技术通报》 北大核心 2025年第2期30-39,共10页
DNA甲基转移酶是一类在DNA甲基化过程中起到关键作用的酶。在生物体内,DNA甲基转移酶可以将甲基基团添加到核酸分子上,从而引入DNA甲基化修饰,改变遗传表现并调控基因表达。DNA甲基转移酶可以在体外进行融合重组表达,并导入细胞在染色... DNA甲基转移酶是一类在DNA甲基化过程中起到关键作用的酶。在生物体内,DNA甲基转移酶可以将甲基基团添加到核酸分子上,从而引入DNA甲基化修饰,改变遗传表现并调控基因表达。DNA甲基转移酶可以在体外进行融合重组表达,并导入细胞在染色质上引入人为的DNA甲基化修饰。利用这一特性,近年来,科研人员通过对基因组特定位置进行甲基化标记,并结合高通量测序,开发了多种基于DNA甲基转移酶的表观遗传测序技术,其应用包括染色质可及性测量、核小体定位、转录因子印迹和组蛋白修饰检测等。这些技术在获得表观遗传修饰信息的同时也可以获得基因组学信息以及内源性的DNA甲基化信息,因此成为了表观遗传学的重要检测方法。本文介绍了表观遗传修饰研究方法,综述了多种基于DNA甲基转移酶检测表观遗传修饰的测序技术的原理及应用,并对其未来的发展进行了讨论与展望,以期为表观遗传学的研究提供参考。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶 dna甲基化 染色质可及性 dna-蛋白质互作 测序技术
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子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B的表达特点与临床意义 被引量：6
5
作者 董颖 周梅 +5 位作者 巴晓军 司婧文 李文婷 王颖 李东 李挺 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期788-794,共7页
目的:探讨子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)的表达特点、与雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)的相关性及意义。方法:免疫组织化学法检测DNMT3B、ER、PR在104例子... 目的:探讨子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)的表达特点、与雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)的相关性及意义。方法:免疫组织化学法检测DNMT3B、ER、PR在104例子宫内膜癌组织中的表达并与临床病理特点及预后相对照。结果:104例子宫内膜癌组织中DNMT3B阳性率为50%,Ⅰ型内膜癌(内膜样癌)中DNMT3B过表达率(54.8%)显著高于Ⅱ型内膜癌(30.0%,P=0.028),且Ⅰ型内膜癌中,随肿瘤分化变差,DNMT3B阳性率增加(1级、2级、3级分别为43.3%、51.3%、86.7%),差异有统计学意义(P=0.019)。DNMT3B在肌层侵犯程度重、存在脉管癌栓、淋巴结转移及分期晚的病例中过表达率更高,DNMT3B过表达的患者组预后更差,但差异未见统计学意义(P>0.05)。Ⅰ型内膜癌DNMT3B与ER、PR表达呈负相关,ER、PR阴性组DNMT3B过表达率(78.9%、86.7%)高于ER、PR阳性组DNMT3B过表达率(47.7%、47.8%),差异有统计学意义(P=0.016,P=0.006);ER、PR均阴性时,DNMT3B过表达率最高(92.9%),差异有统计学意义(P=0.002)。Ⅱ型内膜癌中DNMT3B与ER、PR表达未见相关性(P>0.05)。序列分析显示,DNMT3B基因启动子区有多个ER、PR结合位点。结论:内膜样癌与非内膜样癌中DNMT3B表达特点不同,DNMT3B过表达有可能作为预后或预测因子而辅助病理诊断和生物学行为评估。Ⅰ/Ⅱ型子宫内膜癌的甲基化特点可能不同,Ⅰ型内膜癌中DNMT3B过表达与ER、PR表达呈负相关,Ⅱ型内膜癌中DNMT3B表达与ER、PR表达关系不大。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 dna甲基转移酶3b 甲基化 受体 雌激素 受体 孕激素
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中华蜜蜂DNA甲基化转移酶Dnmt3基因克隆及表达谱分析 被引量：5
6
作者 刘亭亭 刘俊峰 +4 位作者 王文祥 王欢 王子龙 曾志将 颜伟玉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期284-290,共7页
为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4... 为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4日龄蛹,1日龄蜂王和产卵蜂王)头部的Dnmt3基因mRNA的表达量。结果表明:该基因cDNA序列全长2277bp,编码758个氨基酸残基,预测的蛋白分子量为88.24kD,等电点为7.85。将中华蜜蜂与其他物种的Dnmt3基因的结构域进行比对,同时将该基因推导的氨基酸序列与其他物种的Dnmt3氨基酸序列进行同源性比对和系统发育分析,发现与西方蜜蜂的Dnmt3序列一致性高达99%。该基因在工蜂和蜂王不同发育时期均有表达,1日龄工蜂与7日龄工蜂中没有显著差异(P>0.05),30日龄工蜂中的表达量显著高于前两者(P<0.05);蜂王蛹中的表达量显著高于工蜂蛹(P<0.05);1日龄的蜂王中的表达量显著高于1日龄的工蜂(P<0.05);产卵工蜂与产卵蜂王中的表达量没有差异(P>0.05)。这种表达情况提示其可能与工蜂劳动分工及蜜蜂卵巢发育有关。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 dna甲基化 dna甲基化转移酶 基因克隆 序列分析 表达谱分析
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RNA干扰Rbl-2基因调控DNA甲基化转移酶介导心脏干细胞凋亡 被引量：2
7
作者 夏慧苏 余细勇 +4 位作者 林秋雄 李晓红 朱杰宁 麦丽萍 林曙光 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2306-2310,共5页
目的:视网膜母细胞瘤样蛋白2(Rbl-2)在调控DNA甲基化转移酶(DNMT)中发挥重要作用,而DNMT影响干细胞的分化。本文旨在探讨调控Rbl-2基因的表达对心脏干细胞凋亡的影响。方法:分离培养人心脏干细胞,转染Rbl-2 siRNA。采用real time RT-PC... 目的:视网膜母细胞瘤样蛋白2(Rbl-2)在调控DNA甲基化转移酶(DNMT)中发挥重要作用,而DNMT影响干细胞的分化。本文旨在探讨调控Rbl-2基因的表达对心脏干细胞凋亡的影响。方法:分离培养人心脏干细胞,转染Rbl-2 siRNA。采用real time RT-PCR检测Rbl-2和DNMT-3B mRNA表达水平,Westernblotting检测DNMT-3B蛋白表达和caspase-3活化片段,并以Annexin V-FITC/PI双染色-流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在人心脏干细胞中,转染siRNA后Rbl-2 mRNA表达水平与阴性对照组相比显著降低(P<0.01),同时DNMT-3B mRNA和蛋白表达水平与阴性对照组相比均显著升高(P<0.01),差异显著。与阴性对照组相比,转染Rbl-2 siRNA的人心脏干细胞caspase-3激活,表现为caspase-3活性片段与caspase-3前体的比值显著增高(P<0.01),annexin V阳性细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论:Rbl-2基因在心脏干细胞的生存中具有正性调控作用,抑制其表达能促进心脏干细胞的凋亡,其调控机制与表观遗传学的修饰密切相关。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤样蛋白质2 dna甲基化转移酶 心脏干细胞 细胞凋亡
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DNA甲基转移酶3a与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的分子机制
8
作者 周鑫 范昊 +4 位作者 王安 秦嘉沛 白怡冰 马志强 胡毅 《解放军医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第12期1426-1436,共11页
目的探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的潜在分子机制。方法收集2009年5月-2014年1月于空军军医大学第二附属医院胸外科行手术治疗的47例肺鳞癌患者进行回顾性分析。采用免疫组织化学染色检测DNM... 目的探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的潜在分子机制。方法收集2009年5月-2014年1月于空军军医大学第二附属医院胸外科行手术治疗的47例肺鳞癌患者进行回顾性分析。采用免疫组织化学染色检测DNMT3a在肺鳞癌组织与癌旁组织中的表达,根据肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分中位数分为DNMT3a高表达组(n=25)与DNMT3a低表达组(n=22),结合临床病理信息与公共生物信息学数据库进行预后相关性分析。为探索DNMT3a介导肺鳞癌进展的分子机制,采用慢病毒感染法构建DNMT3a过表达的肺鳞癌H1703细胞系,设置DNMT3a过表达组与对照组,采用功能表型实验检测两组细胞增殖、迁移的差异。构建DNMT3a过表达的裸鼠皮下肿瘤异种移植模型,设置DNMT3a过表达组与对照组(n=3),观察两组皮下移植瘤的生长。Western blotting检测两组细胞与两组皮下移植瘤中相关蛋白的表达。功能回复实验先采用c-Myc抑制剂(10058-F4)处理DNMT3a过表达细胞,EdU增殖染色实验检测细胞增殖;再采用RNAi-锌指E盒结合同源框1(ZEB1)慢病毒感染DNMT3a过表达细胞敲低ZEB1表达,Transwell迁移实验检测细胞迁移。采用DNMT特异性抑制剂(SGI-1027)处理DNMT3a过表达组与对照组细胞,观察抑制DNMT3a后的细胞增殖及迁移。结果免疫组化染色结果显示,肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分明显高于癌旁组织(P<0.0001)。DNMT3a高表达与N分期、TNM分期、肿瘤分化程度等密切相关(P<0.05或P<0.01),DNMT3a高表达是肺鳞癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。功能表型实验表明,DNMT3a过表达组的克隆形成数、Edu阳性细胞比例、细胞迁移率、细胞迁移数均高于对照组(P<0.05)。DNMT3a过表达组裸鼠皮下移植瘤体积与重量明显高于对照组(P<0.001)。Western blotting检测结果显示,DNMT3a过表达组细胞与皮下移植瘤的c-Myc、ZEB1蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。功能回复实验表明,10058-F4处理DNMT3a过表达组细胞EdU阳性细胞比例明显降低(P<0.05);慢病毒敲低ZEB1后,DNMT3a过表达组细胞迁移数明显减少(P<0.05),而DNMT3a蛋白的表达则无明显变化(P>0.05)。此外,SGI-1027抑制DNMT3a表达后,DNMT3a过表达组与对照组克隆形成数及细胞迁移率均明显降低(P<0.05)。结论DNMT3a高表达是肺鳞癌患者预后不良的独立危险因素;DNMT3a可能通过上调c-Myc表达增强肺鳞癌的增殖能力,上调ZEB1表达增强肺鳞癌的迁移能力。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶3a 肺鳞状细胞癌 预后 细胞增殖 细胞迁移
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DNA甲基转移酶3B4过表达对293A细胞增殖影响及其机制的探讨
9
作者 邹明新 姜树原 +3 位作者 张姝 闫少春 邵国 刘晓光 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期99-105,共7页
背景与目的:DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)3B有近40种异构体,它们的表达有组织和疾病的特异性,细胞中这些异构体的功能尚不清楚。本研究旨在探讨外源性DNMT3B4基因过表达对人胚肾细胞株293A增殖的影响及其机制。方法:将携... 背景与目的:DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)3B有近40种异构体,它们的表达有组织和疾病的特异性,细胞中这些异构体的功能尚不清楚。本研究旨在探讨外源性DNMT3B4基因过表达对人胚肾细胞株293A增殖的影响及其机制。方法:将携带DNMT3B4基因的质粒pCMV-DNMT3B4及空质粒pCMV-2B转染293A细胞(293A-vector)并形成稳定表达细胞系,培养300 d后用MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的周期分布;real-time PCR蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中p21表达情况;甲基化特异PCR(MS-PCR)检测p21基因启动子区甲基化状态。结果:在接种于96孔板的第4天,2株过表达DNMT3B4的293A细胞(293A-DNMT3B4-1和293A-DNMT3B4-2)吸光度(A)值分别是293A-vector细胞的(58.92±3.47)%和(68.82±5.64)%,过表达DNMT3B4抑制细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05);293A-DNMT3B4-1和293A-DNMT3B4-2的S期细胞比例分别为(35.88±2.00)%和(37.00±1.79)%,293A-vector细胞比例为(40.44±0.91)%,过表达DNMT3B4降低S期细胞比例,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达DNMT3B4增加p21的表达,但不改变p21基因启动子区甲基化状态。结论:DNMT3B4基因过表达可抑制293A细胞增殖并增加p21表达。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶3b 293A细胞 细胞增殖
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DNA甲基化转移酶3A调控心肌成纤维细胞活化过程中胶原的表达
10
作者 代晨 陶辉 +1 位作者 石开虎 徐盛松 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第12期1237-1241,共5页
目的目前关于甲基化对心肌纤维化形成的作用机制仍不明确。文章旨在探讨DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化过程中胶原表达变化的调控。方法选取50只乳鼠,提取培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),进行细胞转染,根据CFs转染的试... 目的目前关于甲基化对心肌纤维化形成的作用机制仍不明确。文章旨在探讨DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化过程中胶原表达变化的调控。方法选取50只乳鼠,提取培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),进行细胞转染,根据CFs转染的试剂分为5组:DNMT3A组(CFs转染重组的DNMT3A基因过表达质粒)、空载体组(CFs转染p EGFP-C3空载体质粒)、DNMT3A siRNA组(CFs转染小干扰DNMT3A siRNA)、DNMT3A siRNA NC组(CFs转染DNMT3A siRNA NC空载体质粒)、空白对照组(CFs不作转染处理)。ELISA检测空白对照组、DNMT3A组、DNMT3A siRNA组细胞上清液胶原变化。qRT-PCR检测5组相关mRNA的表达,Western blot法检测除DNMT3A siRNA NC组外其余4组CFs中ColⅠ、ColⅢ和DNMT3a蛋白的表达及CCK8法检测4组细胞的增殖活性。结果 DNMT3A组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原明显高于空白对照组(P<0.05),DNMT3A siRNA组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量明显低于空白对照组(P<0.05)。DNMT3A组的ColⅠ、ColⅢ及DNMT3A表达量较空白对照组、空载体组明显升高(P<0.05),而DNMT3A siRNA组明显低于空白对照组及空载体组(P<0.05)。DNMT3A组细胞活力(2.087±0.317)明显高于空载体组(1.063±0.223)、空白对照组(1.082±0.207),差异有统计学意义(P<0.05); DNMT3A siRNA组(0.463±0.087)明显低于空载体组、空白对照组(P<0.05)。结论 DNMT3A可以促进CFs的活化增殖,并且能够增加胶原的表达,从而对心肌纤维化产生促进作用。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 dna甲基化转移酶3A 增殖 ColⅠ ColⅢ
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DNA甲基转移酶3B异构体研究进展
11
作者 田小莉 杨洁 +1 位作者 闫少春 邵国 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期105-108,共4页
DNA甲基化是表观遗传修饰的重要组成部分,它是在DNA甲基转移酶(DNMTs)的作用下将甲基加到二核苷酸CpG岛中胞嘧啶的第五位碳原子上。DNMT3B是真核生物细胞中一种非常重要的转移酶,有近40种异构体,本文主要对DNMT3B的异构体的构成、表达... DNA甲基化是表观遗传修饰的重要组成部分,它是在DNA甲基转移酶(DNMTs)的作用下将甲基加到二核苷酸CpG岛中胞嘧啶的第五位碳原子上。DNMT3B是真核生物细胞中一种非常重要的转移酶,有近40种异构体,本文主要对DNMT3B的异构体的构成、表达及在疾病中的作用等进行综述。 展开更多
关键词 dna甲基化 DNMT3b 异构体
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甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a及DNMT3b在子宫内膜异位症中的表达 被引量：9
12
作者 杨娟 方小玲 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期94-99,共6页
目的:检测DNA甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a,DNMT3b在子宫内膜异位症(dendometriosis,EMs)异位内膜、在位内膜及正常对照子宫内膜的表达。方法:收集子宫内膜异位症巧克力囊肿20例为实验组,行输卵管吻合术者、宫颈病变行手术者20例为对照组,... 目的:检测DNA甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a,DNMT3b在子宫内膜异位症(dendometriosis,EMs)异位内膜、在位内膜及正常对照子宫内膜的表达。方法:收集子宫内膜异位症巧克力囊肿20例为实验组,行输卵管吻合术者、宫颈病变行手术者20例为对照组,抽提总RNA,反转录制备cDNA。采用real-time RT-PCR检测DNMT1,DNMT3a及DNMT3b基因的表达,并通过免疫荧光验证DNMTI在EMs异位内膜和在位内膜以及正常对照组子宫内膜中的表达。结果:Real-time RT-PCR检测表明DNMT1,DNMT3a和DNMT3b在EMs异位内膜和在位内膜的表达较正常内膜低(P<0.05)。DNMT1,DNMT3a和DNMT3b在异位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.44,0.12和0.27;三者在在位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.27,0.13和0.15;三者在异位内膜与在位内膜的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光检测结果表明DNMT1蛋白在EMs患者异位内膜及在位内膜中表达显著降低。结论:DNMT1,DNMT3a及DNMT3b在EMs中的异常低表达可能导致患者表观遗传学异常,参与EMs的发病。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶 子宫内膜异位症 表观遗传学 基因表达 甲基化
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DNA甲基化转移酶1与2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英诱导小鼠腭裂的相关性研究 被引量：1
13
作者 李勇 张伟 +5 位作者 安莉 宋红权 张兴伟 高雨蔚 臧棨光 焦晓辉 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2019年第2期129-132,共4页
目的:通过检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在四氯二苯并对二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-paradioxin,TCDD)诱导的腭裂小鼠体内的表达,探讨其与腭裂发病机制的相关性。方法:TCDD通过对腭部中嵴上皮细胞的毒性作... 目的:通过检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在四氯二苯并对二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-paradioxin,TCDD)诱导的腭裂小鼠体内的表达,探讨其与腭裂发病机制的相关性。方法:TCDD通过对腭部中嵴上皮细胞的毒性作用,导致胎鼠腭裂发生。应用TCDD(64μg/kg)处理胚胎处于第10.5天(E10.5)的C57BL/6J怀孕小鼠建模。分别获取E13.5、E14.5、E15.5和E17.5胎鼠的口腔组织,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色检测胎鼠腭裂组织。逆转录-定量聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测以上各组胎鼠DNMT1mRNA表达水平的变化,Western blot检测DNMT1蛋白表达水平的变化。结果:HE染色结果显示TCDD组腭裂发生率为98.25%,对照组无腭裂发生。RTqPCR结果显示TCDD组DNMT1mRNA水平与对照组比较显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果表明与对照组比较,TCDD组DNMT1蛋白表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在TCDD诱导胎鼠腭裂的形成过程中,DNMT1发挥重要的作用。 展开更多
关键词 非综合征型唇腭裂 甲基化 四氯二苯并对二噁英 dna甲基转移酶1
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DNA甲基转移酶3b对乳腺癌细胞微小RNA表达的影响 被引量：5
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作者 王奕丹 王一涵 +3 位作者 黄钰雯 阴迪 于运 刘丽梅 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期116-123,共8页
目的通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响。方法通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲... 目的通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与siRNA干扰改变乳腺癌细胞MCF-7中DNA甲基化水平,探讨DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)表达对乳腺癌细胞相关mRNA、微小RNA(miRNA)的影响。方法通过5-Aza-CdR抑制乳腺癌细胞整体甲基化水平,免疫荧光染色检测其抑制效果,高通量测序检测乳腺癌细胞miRNA的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞miRNA及乳腺癌相关基因的表达;通过siRNA干扰抑制乳腺癌细胞中Dnmt3b的表达,qRT-PCR和Western blotting检测siRNA干扰效率,细胞生长曲线反映细胞生长情况。结果5-Aza-CdR降低细胞整体甲基化水平,siRNA干扰后Dnmt3b的表达下降,细胞生长显著抑制;高通量测序显示5-Aza-CdR作用后67个miRNA表达有统计学差异(均P<0.05);qRT-PCR结果显示5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞中miR-200a、miR-411、miR-382、miR-409、miR-493、miR-127、miR-520a、miR-654表达显著上调(P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞中miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-203b、miR-409、miR-520a、miR-654的表达显著上调(P<0.05),而miR-200b、miR-127的表达显著下调(均P<0.05);5-Aza-CdR作用后乳腺癌细胞WWOX、MMP7的表达下调,TCF21、TIMP1的表达上调(均P<0.05);siRNA干扰Dnmt3b后乳腺癌细胞抑癌基因BRCA1、BRCA2及癌基因MMP7、survivin的表达均下调(均P<0.05)。结论Dnmt3b可影响乳腺癌细胞相关基因WWOX、TCF21、BRCA1、BRCA2、MMP7、TIMP1、PKM2、survivin及miR-29b、miR-506、miR-200a、miR-200b、miR-203b、miR-409、miR-127、miR-520a、miR-654的表达。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶3b 乳腺癌 微小RNA
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丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和甲基化转移酶的影响 被引量：16
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作者 张颖 周明学 +4 位作者 李思耐 任攀 刘卫红 尚菊菊 刘红旭 《世界中医药》 CAS 2017年第2期247-250,253,共5页
目的:研究丹红注射液对高脂喂养的ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和DNA甲基化转移酶(DNMTs)的影响。方法:将40只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周后随机分为模型组、阿托伐... 目的:研究丹红注射液对高脂喂养的ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和DNA甲基化转移酶(DNMTs)的影响。方法:将40只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周后随机分为模型组、阿托伐他汀钙片(商品名:立普妥)(阳性对照组)、丹红注射液低剂量组和高剂量组(n=10),给予药物腹腔注射6周后。检测其血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。行HE染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块面积。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠血清基因组甲基化水平,采用ELISA法检测各组小鼠血清DNMTs水平。免疫组化染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块内DNMT1的表达。结果:与模型组相比,丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清TG水平明显降低(P<0.01)、丹红注射液高剂量组LDL-C水平明显降低(P<0.01),丹红注射液低剂量组HDL-C水平明显升高(P<0.05),丹红注射液高剂量组小鼠动脉粥样硬化指数显著降低(P<0.01)。丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清基因组甲基化和DNMTs水平显著降低(P<0.01)。丹红注射液与模型组相比,丹红注射液组As小鼠的校正后主动脉As斑块面积显著降低,以及斑块内DNMT1表达显著降低(P<0.01)。结论:丹红注射液可降低As小鼠血脂水平,减少As斑块面积,其机制可能与降低As小鼠血清基因组甲基化水平和整体DNMTs水平和抑制As小鼠主动脉斑块DNMT1表达有关。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 丹红注射液 dna甲基化 血脂异常 dna甲基化转移酶1
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miR-101靶向甲基化转移酶3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭 被引量：5
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作者 胡可可 邓赫男 +2 位作者 谭琛 彭丽秀 肖斌梅 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期791-795,共5页
背景与目的:mi R-101在胃癌、结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,有类似抑癌基因样作用,然而,其在卵巢癌中的作用尚未明确。该研究旨在探讨mi R-101是否通过靶向调控甲基化转移酶3A(DNMT3A)抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭,从而进一步揭... 背景与目的:mi R-101在胃癌、结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,有类似抑癌基因样作用,然而,其在卵巢癌中的作用尚未明确。该研究旨在探讨mi R-101是否通过靶向调控甲基化转移酶3A(DNMT3A)抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭,从而进一步揭示mi R-101的抑瘤机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测22例卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织中mi R-101的表达改变;将mi R-101 mimics转染于卵巢癌SKOV3细胞,以DNMT3A si RNA为阳性对照,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测外源过表达mi R-101对DNMT3A蛋白表达水平的影响;采用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)和Transwell侵袭实验检测外源高表达mi R-101对人卵巢癌细胞生长与侵袭能力的影响。结果:q RT-PCR检测结果显示,mi R-101在22例卵巢癌组织中的表达水平较癌旁正常组织明显下调;Western blot检测结果显示,外源过表达mi R-101或沉默DNMT3A能下调SKOV3细胞DNMT3A蛋白的表达水平;MTT检测结果显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 48、72和96 h后D值与对照组比较明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(105±7)个和(107±13)个,与对照组(213±11)个比较能明显减缓SKOV3细胞的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mi R-101通过靶向调控DNMT3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭。 展开更多
关键词 miR-101 卵巢癌 甲基化转移酶3A 生长和侵袭
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肾透明细胞癌中谷胱甘肽S-转移酶M3基因的表达及其启动子区CpG岛的甲基化水平 被引量：2
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作者 武旗 侯建国 +5 位作者 杜稳斌 常文军 翟羽佳 林丽萍 谭晓洁 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1273-1278,共6页
目的:检测肾透明细胞癌(ccRCC)中谷胱甘肽S-转移酶M3(GSTM3)基因表达水平,观察其启动子区CpG岛的甲基化水平,探讨GSTM3基因甲基化与ccRCC发生和转移的关系。方法:半定量RT-PCR检测ccRCC高转移潜能细胞系(RCC05-TXJ)、低转移潜能细胞系(R... 目的:检测肾透明细胞癌(ccRCC)中谷胱甘肽S-转移酶M3(GSTM3)基因表达水平,观察其启动子区CpG岛的甲基化水平,探讨GSTM3基因甲基化与ccRCC发生和转移的关系。方法:半定量RT-PCR检测ccRCC高转移潜能细胞系(RCC05-TXJ)、低转移潜能细胞系(RCC05-ZYJ)、24例原位ccRCC及其癌旁肾组织和14例ccRCC转移组织的GSTM3基因的表达水平。用去甲基化剂5-Aza-CdR干预RCC05-ZYJ,RT-PCR检测处理前后GSTM3基因的表达变化。用巢式BSP(nested bisulfite sequencing PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织的GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点。采用巢式MSP(nested methylation specific PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织、8例ccRCC转移组织甲基化情况。结果:RCC05-TXJ中GSTM3基因表达强度低于RCC05-ZYJ。5-Aza-CdR处理RCC05-ZYJ后,GSTM3基因表达强度高于处理前。24例原位ccRCC中17例GSTM3基因的表达强度低于其在癌旁肾组织中的表达强度,其余7例原位ccRCC中GSTM3基因的表达强度不低于其在癌旁肾组织中的表达。10例原位ccRCC及其癌旁和8例转移组织中,癌组织GSTM3基因启动子甲基化阳性为4例,癌旁组织2例(P=0.628),转移组织1例(P=0.314),差异无统计学意义。结论:GSTM3基因表达与ccRCC的发生、转移密切相关,其启动子区CpG岛甲基化会降低该基因的表达;初步筛选出ccRCC中GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肾脏肿瘤 肿瘤转移 谷胱甘肽转移酶 dna甲基化
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家蚕DNA甲基转移酶功能预测及其在BmNPV感染下的表达特征 被引量：1
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作者 张一川 张永红 +1 位作者 邵榆岚 白兴荣 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2665-2673,共9页
【目的】明确家蚕DNA甲基转移酶基因(BmDNMT)生物信息学基本特征及其在家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染前后的表达情况,揭示DNA甲基化在家蚕抗病毒免疫方面的作用机制,为挖掘家蚕抗病毒标志基因和药物靶标蛋白等提供理论依据。【方法】通... 【目的】明确家蚕DNA甲基转移酶基因(BmDNMT)生物信息学基本特征及其在家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染前后的表达情况,揭示DNA甲基化在家蚕抗病毒免疫方面的作用机制,为挖掘家蚕抗病毒标志基因和药物靶标蛋白等提供理论依据。【方法】通过OrthoDB、MultiLoc2、SherLoc2、PSORTII、SMART、SWISS-MODEL及Schr?dinger等在线生物信息学分析软件进行BmDNMT蛋白氨基酸同源比对、系统进化分析、亚细胞定位、功能结构域预测、三级结构同源建模及小分子配体对接口袋预测,并采用实时荧光定量PCR分析BmDNMT基因在家蚕感染BmNPV后不同时间不同组织中的时空表达特征。【结果】BmDNMT基因包含BmDNMT1和BmDNMT2,分别位于家蚕8号染色体和11号染色体上,其推导BmDNMT氨基酸序列均与烟草天蛾DNMT氨基酸序列的亲缘关系最近。BmDNMT1蛋白大量存在于细胞核,少量分布在细胞质;而BmDNMT2蛋白大量存在于细胞质,少量分布在细胞核及线粒体。BmDNMT1蛋白的功能结构域多于BmDNMT2蛋白,二者均含有DNA甲基化酶功能结构域,且具有潜在药物结合口袋。BmNPV感染会影响BmDNMT1和BmDNMT2基因在家蚕不同组织中表达差异,BmNPV感染4 h后这2个基因在家蚕中肠的表达差异已非常明显,说明家蚕DNA甲基化可能在病毒感染早期已发生,且中肠可能是最早响应的组织。BmNPV感染后,BmDNMT1和BmDNMT2基因的相对表达量和表达趋势并不一致。【结论】BmDNMT1和BmDNMT2基因的染色体位置、亚细胞定位及功能结构域等存在差异,BmNPV感染后二者在家蚕不同组组织中的相对表达量和表达趋势也不一致,推测BmDNMT1和BmDNMT2基因在家蚕DNA甲基化过程中行使不同的功能。BmDNMT1和BmDNMT2蛋白三维结构具有潜在的药物结合口袋,可能是直接影响DNA甲基化状态的药物靶标。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒(bmNPV) dna甲基转移酶(DNMT) dna甲基化 药物靶标
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DNA甲基转移酶在缺氧/缺血预处理DNA中的神经保护作用研究
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作者 李瑞学 谢雅彬 邵国 《中国比较医学杂志》 北大核心 2024年第12期111-116,共6页
低氧/缺血预适应(hypoxic/ischemic preconditioning,H/IPC)可诱导内源性保护机制使神经细胞增加对低氧/缺血的耐受,这种保护机制是细胞在生死抉择时基因表达的变化。DNA甲基化作为基因表达调控的重要机制,在低氧/缺血耐受中发挥着至关... 低氧/缺血预适应(hypoxic/ischemic preconditioning,H/IPC)可诱导内源性保护机制使神经细胞增加对低氧/缺血的耐受,这种保护机制是细胞在生死抉择时基因表达的变化。DNA甲基化作为基因表达调控的重要机制,在低氧/缺血耐受中发挥着至关重要的作用。DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)通过调控DNA甲基化水平影响基因表达,从而对神经保护产生重要作用。因此,DNMTs在低氧/缺血预适应诱导的神经保护中具有重要功能。本文对DNMTs在此过程中的作用进行了综述,为以DNMTs为靶点的神经保护研究提供了一定思路。 展开更多
关键词 神经保护 低氧/缺血预适应 dna甲基化转移酶
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DNA甲基化转移酶hsdM基因对维氏气单胞菌运动性的影响
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作者 陈婷 李宏 +4 位作者 王丹 唐燕琼 唐鸿倩 马香 刘柱 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期28-32,共5页
为探究I型RM系统甲基转移酶基因hsdM对维氏气单胞菌运动性的影响,研究构建hsdM基因敲除的维氏气单胞菌突变株ΔhsdM,并探究该基因敲除对维氏气单胞菌生长、运动能力及鞭毛基因表达的影响。生长曲线测定结果表明:ΔhsdM菌株的生长速率在... 为探究I型RM系统甲基转移酶基因hsdM对维氏气单胞菌运动性的影响,研究构建hsdM基因敲除的维氏气单胞菌突变株ΔhsdM,并探究该基因敲除对维氏气单胞菌生长、运动能力及鞭毛基因表达的影响。生长曲线测定结果表明:ΔhsdM菌株的生长速率在对数期生长后期开始缓慢降低,但总体生长水平与野生型基本一致;平板运动实验结果显示,hsdM基因敲除后,维氏气单胞菌运动性极显著下降;RT-qPCR结果表明,ΔhsdM菌株部分鞭毛基因表达显著下调。探究hsdM基因敲除对细菌表观性状的调节作用,为进一步探究N6-甲基腺嘌呤(6mA)甲基化调节基因表达的机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 dna甲基化 甲基转移酶 维氏气单胞菌 细菌运动性
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