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敲低DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)抑制Bel7402/5-Fu耐药肝癌细胞的细胞周期及机制 被引量:2
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作者 李大玉 刘云 +2 位作者 余春波 刘喜平 范芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1647-1651,共5页
目的研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对Bel7402/5-氟尿嘧啶(5-Fu)肝癌耐药细胞的细胞周期及机制的影响,探讨DNA-PKcs影响化疗敏感性的相关机制。方法采用MTT法检测Bel7402/5-Fu细胞转染siDNA-PKcs后,对5-Fu、阿霉素(A... 目的研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对Bel7402/5-氟尿嘧啶(5-Fu)肝癌耐药细胞的细胞周期及机制的影响,探讨DNA-PKcs影响化疗敏感性的相关机制。方法采用MTT法检测Bel7402/5-Fu细胞转染siDNA-PKcs后,对5-Fu、阿霉素(ADM)的敏感性;采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs寡核苷酸片段转染Bel7402/5-Fu细胞;流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测细胞P21、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞分裂周期蛋白2(CDC2)的蛋白表达情况;实时定量PCR检测细胞毛细血管扩张共济失调突变基因(ATM)、p53的mRNA水平,Western blot法检测细胞ATM、P53蛋白水平。结果敲低细胞DNA-PKcs水平后,siDNA-PKcs组5-Fu、ADM的半数抑制浓度(IC50)明显降低,S期细胞减少、G2/M期细胞增多,细胞周期抑制因子P21蛋白水平增加,cyclin B1、CDC2蛋白水平降低,ATM、p53的mRNA及蛋白水平增加。结论敲低DNA-PKcs水平,增加P21蛋白水平,同时抑制cyclin B1、CDC2蛋白水平,诱导Bel7402/5-Fu细胞G2/M期阻滞,其机制可能与ATM-p53信号途径有关。 展开更多
关键词 dna依赖性蛋白激酶催化亚基 耐药肝癌细胞 细胞周期 机制
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慢性髓系白血病DNA依赖蛋白激酶催化亚基基因的研究 被引量:2
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作者 罗军 彭志刚 +3 位作者 陈燕 赖永榕 卢玉英 宋善俊 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期248-252,共5页
本研究旨在探讨髓系粒细胞白血病(CML)的DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因表达水平、调控机制及其在CML急性变中的作用。用半定量RT-PCR、Western blot方法分别检测62例CML患者及K562细胞的DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达,并与2... 本研究旨在探讨髓系粒细胞白血病(CML)的DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因表达水平、调控机制及其在CML急性变中的作用。用半定量RT-PCR、Western blot方法分别检测62例CML患者及K562细胞的DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达,并与23例正常人作对照;对26例接受同种异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)及4例使用伊马替尼治疗的CML患者用RT-PCR、Western blot方法分别动态检测bcr-abl mRNA和DNA-PKcs蛋白表达水平;用伊马替尼体外作用CML患者的单个核细胞(MNC)及K562细胞后,用RT-PCR、Western blot方法分别检测DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达及bcr-abl融合蛋白的酪氨酸磷酸化水平。结果表明:与正常人比较,CML患者及K562细胞的DNA-PKcs蛋白表达量明显降低(P<0.05);26例allo-PBSCT及4例使用伊马替尼治疗的CML患者,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl mRNA表达量的降低而升高;伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而升高。结论:bcr-abl融合基因通过转录后机制下调DNA-PKcs蛋白的表达;DNA-PKcs蛋白表达下降可能是CML急性变的机制之一。 展开更多
关键词 慢性髓系白血病 dna依赖蛋白激酶催化亚基 伊马替尼 BCR-ABL融合基因
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DNA依赖蛋白激酶催化亚基与细胞周期蛋白T2相互结合的鉴定 被引量:1
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作者 孙敬芬 隋建丽 +1 位作者 周平坤 吴德昌 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期373-377,共5页
目的鉴定与DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNAPKcs)相互结合的蛋白,以深入探讨其生理功能。方法通过免疫共沉淀获得DNAPKcs的相互结合蛋白复合物,SDSPAGE电泳分离蛋白,肽质指纹分析和Western印迹鉴定蛋白。结果以DNAPKcs抗体进行免疫共沉淀从... 目的鉴定与DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNAPKcs)相互结合的蛋白,以深入探讨其生理功能。方法通过免疫共沉淀获得DNAPKcs的相互结合蛋白复合物,SDSPAGE电泳分离蛋白,肽质指纹分析和Western印迹鉴定蛋白。结果以DNAPKcs抗体进行免疫共沉淀从HeLa细胞中获得DNAPKcs的相互结合蛋白,对部分结合蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,发现转录延伸因子PTEFb的亚基细胞周期蛋白(cyclin)T2是其中之一。其后,通过Western印迹检测,进一步证实DNAPKcs与cyclinT2相互结合作用。结论首次发现DNAPKcs与cyclinT2的相互结合,提示DNAPKcs参与基因转录调控或转录偶联修复反应的生物学功能。 展开更多
关键词 dna依赖蛋白激酶催化亚基 细胞周期蛋白T2 免疫共沉淀 dna修复 基因 转录
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胃癌组织中DNA依赖性蛋白激酶KIP2表达及意义
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作者 傅春燕 冯德云 金中元 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期383-383,共1页
关键词 依赖性蛋白激酶 胃癌组织 protein 表达及 dna损伤修复 全长Cdna cdna文库 相互作用蛋白 细胞激酶 连接蛋白 PKcs 生化分析 人胎脑 激活
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NSCLC中DNA-PKcs的表达及其与凋亡相关蛋白关系的研究 被引量:6
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作者 余少平 熊永炎 田素芳 《中国肺癌杂志》 CAS 2003年第5期356-359,共4页
目的 检测非小细胞肺癌 (NSCLC)中DNA依赖蛋白激酶催化亚基 (DNA PKcs)的表达 ,探讨其与凋亡相关蛋白表达之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测 113例NSCLC患者肿瘤组织中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的表达。 结果 NSCLC中DNA PKcs、p5 ... 目的 检测非小细胞肺癌 (NSCLC)中DNA依赖蛋白激酶催化亚基 (DNA PKcs)的表达 ,探讨其与凋亡相关蛋白表达之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测 113例NSCLC患者肿瘤组织中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的表达。 结果 NSCLC中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的检出率分别为 89.3 8%、61.95 %及5 9.2 9% ;DNA PKcs的表达顺序依次为细支气管肺泡癌 >腺癌 >腺鳞癌 >鳞癌 ,而且DNA PKcs表达水平随肿瘤分化程度的增高亦逐渐增高 ,差异均具有高度显著性 (P <0 .0 5 ) ,但其表达与淋巴结转移无明显关系 ;p5 3在不同临床病理类型NSCLC中的表达无明显差别 ;bcl 2在不同组织学类型NSCLC中的表达顺序依次为鳞癌 >腺鳞癌 >腺癌 >细支气管肺泡癌 ,差异具有高度显著性 (P <0 .0 1) ,但其表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移无关 ;DNA PKcs与 p5 3 (P <0 .0 1)、p5 3和bcl 2 (P <0 .0 5 )的表达之间有显著相关性。 结论 DNA PKcs高表达导致的DNA损伤修复系统活性增高以及突变型p5 3和bcl 2过表达导致的凋亡抑制相互影响、共同作用 。 展开更多
关键词 NSCLC dna-PKCS 非小细胞肺癌 dna依赖蛋白激酶催化亚基 免疫组化
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中晚期宫颈癌DNA-PKcs表达与放化疗敏感性的相关性研究 被引量:2
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作者 祝英杰 卢玉波 +2 位作者 杨宏英 刘双玥 阮友琴 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期827-829,共3页
目的:探讨中晚期宫颈癌组织DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PKcs)的表达与放化疗敏感性的关系,寻找预测宫颈癌放化疗敏感性的指标。方法:用免疫组化法对42例ⅡB期~ⅢB期宫颈癌患者治疗前及治疗开始21天宫颈癌活检标本进行DNA-PKcs表达检测,分析... 目的:探讨中晚期宫颈癌组织DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PKcs)的表达与放化疗敏感性的关系,寻找预测宫颈癌放化疗敏感性的指标。方法:用免疫组化法对42例ⅡB期~ⅢB期宫颈癌患者治疗前及治疗开始21天宫颈癌活检标本进行DNA-PKcs表达检测,分析DNA-PKcs在放化疗前后的表达及变化情况与病理缓解、肿瘤消退时间的相关性。结果:高度病理缓解组患者放化疗前DNA-PKcs的表达强度明显低于低度病理缓解组,放化疗敏感性与DNA-PKcs的表达强度呈负相关(Z=-5.583,r=-0.513,P=0.000,)。放化疗后DNA-PKcs表达下降的程度与肿瘤消退一半的时间呈负相关(r=-0.924,P=0.01)。结论:DNA-PKcs的表达能够预测宫颈癌放化疗敏感性;放化疗早期宫颈癌组织DNA-PKcs的表达下降,提示治疗效果好。 展开更多
关键词 宫颈癌 放疗 化疗 dna依赖性蛋白激酶 免疫组化
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非同源末端连接修复相关因子对DNA损伤修复调控及肿瘤治疗作用的研究进展 被引量:3
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作者 李蔚蔚 孔金昕 +1 位作者 漆永梅 黄德军 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期607-613,共7页
细胞在内源性或外源性因子的胁迫作用下会产生各种损伤,包括遗传物质DNA的双链断裂(DSB)。非同源末端连接(NHEJ)是哺乳动物细胞中DSB损伤修复的一种主要机制。NHEJ过程中一些主要因子如DNA依赖性蛋白激酶、DNA交联修复蛋白1C、X射线修... 细胞在内源性或外源性因子的胁迫作用下会产生各种损伤,包括遗传物质DNA的双链断裂(DSB)。非同源末端连接(NHEJ)是哺乳动物细胞中DSB损伤修复的一种主要机制。NHEJ过程中一些主要因子如DNA依赖性蛋白激酶、DNA交联修复蛋白1C、X射线修复交叉互补蛋白4/DNA连接酶Ⅳ和X射线修复交叉互补蛋白4类似因子对DNA损伤修复(DDR)具有重要的调控作用,其中任何一种因子的改变都会影响DDR的效率。此外,NHEJ相关因子与肿瘤发生息息相关。本文针对NHEJ相关因子调控DSB修复方面的研究作一简要综述,并对NHEJ修复相关因子在肿瘤治疗中的研究进行总结。 展开更多
关键词 dna依赖性蛋白激酶 dna双链断裂 dna断端接合修复 dna损伤修复
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细胞周期监控点蛋白Rad9与非同源末端连接修复蛋白Ku70的相互作用研究(英文) 被引量:2
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作者 范英俊 刘宇恒 +5 位作者 王玉兰 孔冰洁 赵云 叶琛 安莉莉 杭海英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1054-1067,共14页
Rad9是一种重要的细胞周期监控点调控蛋白.越来越多的证据显示,Rad9也可与多种DNA损伤修复通路中的蛋白质相互作用,并调节其功能,在DNA损伤修复中发挥重要作用.非同源末端连接修复是DNA双链断裂的一条重要修复途径.Ku70、Ku80和DNA依赖... Rad9是一种重要的细胞周期监控点调控蛋白.越来越多的证据显示,Rad9也可与多种DNA损伤修复通路中的蛋白质相互作用,并调节其功能,在DNA损伤修复中发挥重要作用.非同源末端连接修复是DNA双链断裂的一条重要修复途径.Ku70、Ku80和DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)共同组成DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PK),在非同源末端修复连接中起重要作用.本研究中,检测到Rad9与Ku70有直接的物理相互作用和功能相互作用.我们在不同的细胞模型中发现,Rad9基因敲除、Rad9蛋白去除或Rad9表达降低会导致非同源末端连接效率明显下降.已有的研究表明,DNA损伤可导致细胞中Ku70与染色质结合增加及DNA-PKcs激酶活性增强.我们的结果显示,与野生小鼠细胞相比,Rad9基因敲除的小鼠细胞中, DNA损伤诱导的上述效应均减弱.综上所述,我们的研究首次报道了Rad9与非同源末端连接修复蛋白Ku70间有相互作用,并提示Rad9可通过调节Ku70/Ku80/DNA-PKcs复合物功能参与非同源末端连接修复. 展开更多
关键词 Rad9 非同源末端连接修复 KU70 dna依赖蛋白激酶催化亚基
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PIKK调控DNA双链断裂修复的研究进展 被引量:2
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作者 姚德山 张振刚 龚开政 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期741-746,共6页
生物体细胞基因组完整性受到诸多因素的威胁,包括DNA复制过程中DNA碱基错配、化学物质产生的碱基加合物(adduct formation)和交叉链(cross-links)、紫外线诱导的碱基损伤、电离辐射导致的DNA单链或双链断裂等。DNA双链断裂(DNAdouble-st... 生物体细胞基因组完整性受到诸多因素的威胁,包括DNA复制过程中DNA碱基错配、化学物质产生的碱基加合物(adduct formation)和交叉链(cross-links)、紫外线诱导的碱基损伤、电离辐射导致的DNA单链或双链断裂等。DNA双链断裂(DNAdouble-strand break,DSB)被认为是细胞毒性最强的DNA损伤。 展开更多
关键词 dna损伤反应 dna双链断裂 dna依赖性蛋白激酶 ATM蛋白 ATR蛋白
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