D-氨基酸氧化酶/D-丙氨酸系统杀伤K562e细胞的作用机制探讨 被引量：6

1

作者 翟勇平 王健民 +1 位作者 张雨生 吕书晴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期163-165,共3页

目的 :探讨 D-氨基酸氧化酶 (DAAO) / D-丙氨酸 (D - Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法 :以 D- Ala杀伤稳定表达 DAAO和绿荧光蛋白 (GFP)的高致瘤性 K 5 6 2 e单克隆细胞 KDf Gd、KDf GC,应用 MTT法检测细胞存活率 ,并... 目的 :探讨 D-氨基酸氧化酶 (DAAO) / D-丙氨酸 (D - Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法 :以 D- Ala杀伤稳定表达 DAAO和绿荧光蛋白 (GFP)的高致瘤性 K 5 6 2 e单克隆细胞 KDf Gd、KDf GC,应用 MTT法检测细胞存活率 ,并用酚红氧化法测定培养上清 H2 O2 和 L owry法测定细胞蛋白数量 ,流式细胞仪测定细胞 GFP的荧光强度。结果 :在 2 5 m mol/ L D-Ala作用下 2 4 h即可完全杀死 KDf Gd细胞 ,当 D- Ala为 2 0 mmol/ L 时延长作用时间至 4 8h,杀伤率由 6 4 %增加至 96 .8% ,而D- Ala≤ 15 mm ol/ L 时杀伤率增加不明显。低于 2 0 m mol/ L,D- Ala对 K5 6 2 e几乎无杀伤作用。培养上清的 H2 O2 变化与杀伤转基因细胞作用相一致。 结论 :DAAO/ D- Ala系统可能是通过产生 H2 O2 发挥杀伤转基因 K5 6 2 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 d-丙氨酸 过氧化氢 白血病 K562e细胞

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过氧化氢对D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰-7-氨基头孢烯酸反应的影响 被引量：1

2

作者 于海军 陈立功 +3 位作者 李阳 闫喜龙 白国义 段学民 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期79-84,共6页

在D-氨基酸氧化酶D1AAO转化头孢菌素C(CPC)为戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(Gl-7-ACA)的反应中,所生成的过氧化氢同时与CPC和Gl-7-ACA发生的氧化副反应是造成目标产物收率损失的关键因素之一。通过联用溶氧电极和过氧化氢电极,测定了DAAO转化... 在D-氨基酸氧化酶D1AAO转化头孢菌素C(CPC)为戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(Gl-7-ACA)的反应中,所生成的过氧化氢同时与CPC和Gl-7-ACA发生的氧化副反应是造成目标产物收率损失的关键因素之一。通过联用溶氧电极和过氧化氢电极,测定了DAAO转化CPC为Gl-7-ACA的反应体系内溶氧浓度与相应的过氧化氢浓度的变化曲线,测知反应体系中过氧化氢浓度积累最高可达5mmol·L-1。模拟该反应条件下过氧化氢的氧化反应可知,在过氧化氢浓度较低时,溶液的酸性可加速该氧化反应。在中性条件下,过氧化氢浓度为5mmol·L-1时,反应1h后,CPC的氧化损失为2%,Gl-7-ACA的氧化损失为3%。通过改进氧气分布器、搅拌转速和并调控氧气流量以控制溶液中溶解氧的浓度,来适度地降低物系中过氧化氢积累浓度,使反应收率提高了2.2%。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶(daao) 头孢菌素C(CPC) 过氧化氢 戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(G1-7-ACA)

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D-氨基酸氧化酶基因多态性与精神分裂症的关联研究 被引量：5

3

作者 李悦 陈元堂 +3 位作者 胡江 魏腊梅 高海玲 许昌泰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期2142-2144,2147,共4页

目的探讨D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,收集符合美国DSM-Ⅳ精神分裂症诊断标准的112个先证者及其父母组成的核心家系,对DAAO基因的rs3741775、rs382... 目的探讨D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,收集符合美国DSM-Ⅳ精神分裂症诊断标准的112个先证者及其父母组成的核心家系,对DAAO基因的rs3741775、rs3825251、rs3918347、rs4964770多态性分型,进行精神分裂症的DAAO基因多态性的关联分析和单体型相对风险率分析。结果 rs3918347等位基因与精神分裂症相关联(P=0.014),其中等位基因A是保护因素(Z=-2.37),G为危险因素(Z=2.37),A等位基因频率为0.41,G为0.59;rs3741775、rs3825251、rs4964770与精神分裂症无关联。三种单体型rs3825251-rs3918347的C/G、rs3918347-rs4964770的G/T、rs3825251-rs3918347-rs4964770中的C/G/T与精神分裂症有关联(P值分别为0.021、0.036、0.028,基因型频率分别为0.33、0.28、0.15)。结论 DAAO基因与精神分裂症相关联。 展开更多

关键词 精神分裂症 d-氨基酸氧化酶 基因多态性 关联分析

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D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化 被引量：2

4

作者 冯美卿 史训龙 +2 位作者 孙传文 周伟 周珮 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期622-625,共4页

目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受... 目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 毕赤酵母 表达 快速纯化

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中国汉族男性人群D-氨基酸氧化酶激活剂基因多态性与精神分裂症的关联研究 被引量：3

5

作者 韩燕 宁启兰 +5 位作者 张欢 王淑红 张富军 马雪红 高成阁 马捷 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期600-602,共3页

目的研究中国男性群体中D-氨基酸氧化酶激活剂(DAOA)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法采用等位基因特性PCR方法对272例男性精神分裂症患者和206例对照DAOA基因区域的3个单核苷酸多态性位点(SNP:rs778294,rs778293和rs3918342)进行... 目的研究中国男性群体中D-氨基酸氧化酶激活剂(DAOA)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法采用等位基因特性PCR方法对272例男性精神分裂症患者和206例对照DAOA基因区域的3个单核苷酸多态性位点(SNP:rs778294,rs778293和rs3918342)进行基因分型和统计分析。结果 DAOA基因区域rs778294的一个等位基因(C)与精神分裂症显著相关(P=0.03)。由3个SNP构建的单倍型分析表明,单倍型CAT在病例-对照组中表现出显著的差异。结论在中国汉族男性群体中,DAOA基因可能是精神分裂症的一个易感基因,NMDA受体途径可能是发生精神分裂症的一个重要潜在因素。 展开更多

关键词 精神分裂症 d-氨基酸氧化酶激活剂 单核苷酸多态性 连锁不平衡 关联

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基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化 被引量：2

6

作者 史训龙 冯美卿 +2 位作者 贺佳音 袁中一 周珮 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期71-74,85,共5页

目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等... 目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。 展开更多

关键词 S-100 细胞 法能 透析 分离纯化 电泳 表达 硫酸铵沉淀 基因工程酵母 d-氨基酸氧化酶

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D-氨基酸氧化酶基因重组逆转录病毒载体的构建及表达 被引量：1

7

作者 翟勇平 王健民 +1 位作者 周虹 张雨生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期52-54,共3页

目的 :构建含D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因的重组逆转录病毒载体 ,初步观察DAAO基因的功能。方法 :利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体 (pLDAAOSN)中 ,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,将... 目的 :构建含D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因的重组逆转录病毒载体 ,初步观察DAAO基因的功能。方法 :利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体 (pLDAAOSN)中 ,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,将重组逆转录病毒感染K5 6 2白血病细胞 ,G418筛选出抗性克隆 ,命名为KDAAO。PCR、原位杂交分析外源基因整合和表达 ,观察 5 0mm/LD 丙氨酸对KDAAO杀伤作用。结果 :经酶切鉴定和DNA测序证明重组逆转录病毒载体中含有完整的DAAO基因。包装细胞产生了高滴度病毒 (5 .2× 10 6CFU/ml)。PCR、原位杂交分析证明DAAO基因已整合至KDAAO基因组中 ,并在mRNA水平表达。初步观察到D 丙氨酸能明显杀伤KDAAO。结论 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 daao基因 白血病细胞系 d-氨基酸氧化酶

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D型氨基酸氧化酶活性对于D-硝基精氨酸手性转化的影响 被引量：2

8

作者 辛艳飞 周向军 王永祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期135-139,共5页

D-硝基精氨酸(D-NNA)可在大鼠体内发生手性转化生成其L型异构体,即L-NNA,后者可抑制一氧化氮合酶活性,减少一氧化氮生成,升高动脉血压.研究了D型氨基酸氧化酶(DAAO)在D-NNA手性转化中的作用及DAAO对不同(包括已报道在体内可发生手型转化... D-硝基精氨酸(D-NNA)可在大鼠体内发生手性转化生成其L型异构体,即L-NNA,后者可抑制一氧化氮合酶活性,减少一氧化氮生成,升高动脉血压.研究了D型氨基酸氧化酶(DAAO)在D-NNA手性转化中的作用及DAAO对不同(包括已报道在体内可发生手型转化的)D型氨基酸的选择活性.体内实验显示,DAAO的选择性抑制剂苯甲酸钠(400mg/kg)或肌酐(400mg/kg)均可在不同程度上抑制D-NNA升压作用,进一步研究发现,肾脏或肝脏DAAO酶液在外加DAAO后可提高D-NNA的手性转化约2倍,表明DAAO对于D-NNA在体内的手性转化是必需的.DAAO酶液对可在体内发生手性转化且转化率相似(30%～50%)的D型氨基酸(D-Phe,D-Leu和D-NNA)的选择性表现出显著差异(Kcat/Km相差可达约15倍左右),这从另一方面表明体内D-硝基精氨酸氧化是其发生手性转化的前提条件但非决定因素. 展开更多

关键词 d-硝基精氨酸 D型氨基酸氧化酶 D型氨基酸 手性转化

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IRES序列连接的D-氨基酸氧化酶与绿色荧光蛋白基因导入K562e细胞的表达 被引量：2

9

作者 翟勇平 王健民 +2 位作者 张雨生 周虹 吕书晴 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期209-211,共3页

内部核糖体进入位点 (IRES)序列来源于脑心肌炎病毒 ,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框 ,由其连接的两个基因的表达率相同。本实验应用以IRES序列连接D 氨基酸氧化酶 (DAAO)和绿色荧光 (GFP)基因构建的逆转录病毒载体 ,转染K5 6 2e细... 内部核糖体进入位点 (IRES)序列来源于脑心肌炎病毒 ,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框 ,由其连接的两个基因的表达率相同。本实验应用以IRES序列连接D 氨基酸氧化酶 (DAAO)和绿色荧光 (GFP)基因构建的逆转录病毒载体 ,转染K5 6 2e细胞获得稳定表达GFP的单克隆细胞KDfGC和KDfGd,测定转基因细胞的荧光阳性率以及荧光强度 ,用D 丙氨酸 (D Ala)作用DAAO+细胞 ,并用酚红氧化法测定培养上清H2 O2 。结果表明 ,KDfGC和KDfGd细胞的荧光阳性率分别为 94 .6 4 % ,96 .31% ;2× 10 4细胞的荧光强度分别为 2 0 2U和 174U。GFP荧光强度与H2 O2 的产量间呈指数相关。结论 :IRES序列调控的双基因可同时表达 ,GFP的荧光强度可以间接地反映DAAO基因的表达水平 ,为了解目的基因表达水平高低提供了新的方法。 展开更多

关键词 IRES序列 d-氨基酸氧化酶基因 绿色荧光蛋白基因 K562e细胞系 白血病 病理学 基因转移

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中枢神经系统D-氨基酸氧化酶的研究进展 被引量：2

10

作者 赵文娟 殷明 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期64-66,共3页

新近研究证实,哺乳动物神经系统中存在内源性D-氨基酸氧化酶,参与脑内D-氨基酸的代谢。遗传学研究发现,D-氨基酸氧化酶基因与精神分裂症的发生密切相关。分子生物学研究表明,在D-氨基酸氧化酶基因启动子区域存在一些转录因子的结合位点... 新近研究证实,哺乳动物神经系统中存在内源性D-氨基酸氧化酶,参与脑内D-氨基酸的代谢。遗传学研究发现,D-氨基酸氧化酶基因与精神分裂症的发生密切相关。分子生物学研究表明,在D-氨基酸氧化酶基因启动子区域存在一些转录因子的结合位点。这些研究结果提示,中枢神经系统的D-氨基酸氧化酶除了参与D-氨基酸的代谢以外,可能还具有其它的生理功能。本文就中枢神经系统D-氨基酸氧化酶的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 d-氨基酸 中枢神经系统 疼痛 精神分裂症

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D-氨基酸氧化酶的研究进展 被引量：3

11

作者 孙兵兵 王筱兰 杨志平 《化学与生物工程》 CAS 2007年第2期8-11,共4页

D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型的黄素蛋白酶类。DAAO可氧化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨。介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状,包括在自然界的分布、生理功能、生物学特性、催化机理、基因克隆和序列分析以及基... D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型的黄素蛋白酶类。DAAO可氧化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨。介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状,包括在自然界的分布、生理功能、生物学特性、催化机理、基因克隆和序列分析以及基因表达。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 生物学特性 分离 纯化 基因表达

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D-氨基酸氧化酶性质研究 被引量：1

12

作者 韩北忠 周竞扬 《中国酿造》 CAS 北大核心 2006年第3期1-3,共3页

D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的典型黄素酶。它催化D-氨基酸生成相应的-α酮酸和氨。该文介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状及其特性,包括它的生理功能、基本特性、结构特性、光学动力学特性。

关键词 d-氨基酸氧化酶 特性

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绿荧光蛋白的荧光强度在D-氨基酸氧化酶活性检测中的应用

13

作者 翟勇平 王健民 +2 位作者 张雨生 周虹 吕书晴 《医学研究生学报》 CAS 2002年第2期95-97,共3页

目的 :探讨在转基因细胞KDfGc和KDfGd,以内部核糖体进入位点 (IRES)序列连接的绿荧光蛋白 (GFP)的荧光强度为单位 ,衡量D 氨基酸氧化酶 (DAAO)活性的准确性。　方法 :白血病细胞系K5 62e经转染含IRES序列连接的GFP和DAAO基因的逆转录病... 目的 :探讨在转基因细胞KDfGc和KDfGd,以内部核糖体进入位点 (IRES)序列连接的绿荧光蛋白 (GFP)的荧光强度为单位 ,衡量D 氨基酸氧化酶 (DAAO)活性的准确性。　方法 :白血病细胞系K5 62e经转染含IRES序列连接的GFP和DAAO基因的逆转录病毒载体pLDfG ,获得稳定表达GFP和DAAO基因的单克隆细胞KDfGc和KDfGd,以流式细胞仪和Lowry测定其荧光阳性率以及平均荧光强度、蛋白量 ,用D 丙氨酸 (D Ala)作用DAAO+细胞 ,并用酚红氧化法测定培养上清H2 O2 。　结果 :KDfGc和KDfGd细胞的荧光阳性率分别为 94 .64%和 96.3 1%。 2× 10 4细胞的平均荧光强度分别为 2 0 2U和 174U。 2× 10 4细胞的蛋白量分别为 13 .17μg和 7.12 μg ,KDfGc、KDfGd细胞每微克蛋白量每小时产生的H2 O2 峰值无差异 ,而以单位荧光来衡量 ,两细胞具有明显差别。　结论 :在含IRES序列的转基因细胞 ,以GFP的平均荧光强度为度量单位 ,比以细胞蛋白量能更准确地反映DAAO的活性。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 绿荧光蛋白 基因表达 活性 检测 应用

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D-氨基酸氧化酶结构的研究进展 被引量：2

14

作者 赵冉冉 冯利伟 +2 位作者 张金秀 徐书景 鞠建松 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期27-35,共9页

D-氨基酸氧化酶氧化D-氨基酸生成相应的α-酮酸和氨,还原型黄素被氧化生成过氧化氢。D-氨基酸氧化酶在精神分裂症的病理、生理学研究和D-氨基酸检测等方面都发挥着关键的作用。主要就结构已解析的几个D-氨基酸氧化酶的序列同源性、结构... D-氨基酸氧化酶氧化D-氨基酸生成相应的α-酮酸和氨,还原型黄素被氧化生成过氧化氢。D-氨基酸氧化酶在精神分裂症的病理、生理学研究和D-氨基酸检测等方面都发挥着关键的作用。主要就结构已解析的几个D-氨基酸氧化酶的序列同源性、结构组成、活性中心、抑制剂以及与辅酶FAD结合能力等方面进行介绍。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 结构组成 活性位点 抑制剂 FAD

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三角酵母D-氨基酸氧化酶基因在毕赤酵母中的转化 被引量：1

15

作者 周竞扬 韩北忠 陈晶瑜 《中国酿造》 CAS 北大核心 2007年第1期4-6,共3页

利用跨越内含子的PCR技术,从三角酵母(Trigonopsisvariabilis)中扩增得到D-氨基酸氧化酶基因(DAAO),通过TA克隆的方法将其克隆至pBS-T载体,并转化大肠杆菌TOP10。序列测定结果表明,所得DAAO基因的5’端内含子已被删除,基因总长度为1071b... 利用跨越内含子的PCR技术,从三角酵母(Trigonopsisvariabilis)中扩增得到D-氨基酸氧化酶基因(DAAO),通过TA克隆的方法将其克隆至pBS-T载体,并转化大肠杆菌TOP10。序列测定结果表明,所得DAAO基因的5’端内含子已被删除,基因总长度为1071bp。之后将该基因与酵母表达载体pPIC3.5K连接,转化巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 克隆

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D-氨基酸氧化酶的分子改造及应用研究进展 被引量：1

16

作者 居述云 吴坚平 杨立荣 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第3期1215-1225,共11页

D-氨基酸氧化酶是一类含有黄素腺嘌呤二核苷酸的氧化还原酶,能够催化D-氨基酸氧化脱氢,生成相应的α-酮酸、过氧化氢和氨。该类酶在自然界中分布广泛,主要来源于真核生物和少数原核生物。作为一种经典的生物催化剂,D-氨基酸氧化酶具有... D-氨基酸氧化酶是一类含有黄素腺嘌呤二核苷酸的氧化还原酶,能够催化D-氨基酸氧化脱氢,生成相应的α-酮酸、过氧化氢和氨。该类酶在自然界中分布广泛,主要来源于真核生物和少数原核生物。作为一种经典的生物催化剂,D-氨基酸氧化酶具有反应条件温和、底物谱广泛、对映体选择性好等特点,在合成医药、农药和精细化学品等方面具有重要的应用价值。本文综述了D-氨基酸氧化酶的基本蛋白结构特征及其催化机制,重点介绍了D-氨基酸氧化酶底物特异性和热稳定性分子改造的策略和代表性成果以及该类酶在生物催化中的应用,例如制备7-氨基头孢烷酸、手性氨基酸、胺类化合物和α-酮酸。最后探讨了D-氨基酸氧化酶目前在生物催化应用过程中存在的问题。后续的研究可围绕新酶的挖掘与改造展开工作。基于对映体选择性和底物识别的分子机制,理性设计酶的催化性能,并以挖掘或改造获得的D-氨基酸氧化酶作为新酶元件,用于构建功能化学品生物合成新途径。 展开更多

关键词 d-氨基酸氧化酶 分子改造 生物催化 手性氨基酸 手性胺

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DNP法测定D-氨基酸氧化酶活力 被引量：1

17

作者 罗晓敏 虞和慈 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第5期390-392,共3页

半合成头孢菌素由于其在临床上卓苦的疗效而愈来愈引人注目。大多数的半合成头孢菌素都以7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)作母核。长期来,7-ACA是由发酵产物头孢菌素C(CPC)经化学方法裂解制得。但由于化学裂解法存在着成本高,三废污染等问题,... 半合成头孢菌素由于其在临床上卓苦的疗效而愈来愈引人注目。大多数的半合成头孢菌素都以7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)作母核。长期来,7-ACA是由发酵产物头孢菌素C(CPC)经化学方法裂解制得。但由于化学裂解法存在着成本高,三废污染等问题,二十余年来,国内外在探索采用酶法制备7-ACA的可能性。尤其是近年来生化工程的迅速发展,酶法裂解CPC制备7-ACA,越来越为研究者所重视。由于CPC7位侧链中D-α氨基的立体障碍,由CPC通过一步酶法裂解制备7-ACA较困难,而研究较多的是利用酶法或化学法先将侧链氨基进行氧化后再通过酰化酶的水解制得7-ACA。 展开更多

关键词 DNP法 氨基酸氧化酶 daao

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丁胱亚磺酰亚胺增强DAAO/D-Ala系统杀伤K562e细胞作用的研究

18

作者 翟勇平 王健民 +1 位作者 张雨生 吕书晴 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第2期98-100,共3页

目的:研究了丁胱亚磺酰亚胺(BSO)增强D-氨基酸氧化酶(DAAO)/D-丙氨酸(D-Ala)自杀基因系统在白血病基因治疗中的作用。方法:应用逆转录病毒转染技术获得稳定表达DAAO的高致瘤性K562e单克隆细胞K_(DIGC),用PCR、原位杂交对DAAO基因修饰的K... 目的:研究了丁胱亚磺酰亚胺(BSO)增强D-氨基酸氧化酶(DAAO)/D-丙氨酸(D-Ala)自杀基因系统在白血病基因治疗中的作用。方法:应用逆转录病毒转染技术获得稳定表达DAAO的高致瘤性K562e单克隆细胞K_(DIGC),用PCR、原位杂交对DAAO基因修饰的K_(DfGC)进行鉴定。应用MTT法检测D-Ala对BSO预处理过的K_(DfGC)细胞的杀伤作用。结果:PCR和原位杂交分析证明DAAO基因已整合至细胞基因组中,并在mRNA水平上表达。D-Ala作用24h,K_(DfGC)细胞的半数抑制浓度(C_(50))为10.21mmol/L,K_(DfGC)+BSO的IC_(50)为7.92mmol/L,两者的95％可信区间不重叠。结论:BSO可增强DAAO/D-Ala系统杀伤K652e细胞作用。 展开更多

关键词 daao基因 丁胱亚磺酰亚胺 基因表达 白血病细胞 d-氨基酸氧化酶 d-丙氨酸 白血病 基因治疗

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β-内酰胺类抗生素、D-Ser、DAAO抑制剂三药联用抗MRSA作用 被引量：1

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作者 于洁 胡辛欣 +4 位作者 聂彤颖 王秀坤 李雪 游雪甫 李聪然 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期661-667,共7页

目的研究β-内酰胺类抗生素、D-Ser及D-氨基酸氧化酶(DAAO)抑制剂三药联用抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的疗效。方法体外利用肉汤微稀释法和结晶紫染色法评价DAAO抑制剂5-氯苯并[d]异恶唑-3-醇(CBIO)对细菌生长和生物被膜的影... 目的研究β-内酰胺类抗生素、D-Ser及D-氨基酸氧化酶(DAAO)抑制剂三药联用抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的疗效。方法体外利用肉汤微稀释法和结晶紫染色法评价DAAO抑制剂5-氯苯并[d]异恶唑-3-醇(CBIO)对细菌生长和生物被膜的影响;建立小鼠全身感染模型和大鼠腿部感染模型,以生存率和组织匀浆细菌计数为指标评价三药联用疗效;小鼠皮下给药评价CBIO的安全性。结果在体外MIC测定时CBIO没有抑菌作用,但分别与苯唑西林和美罗培南联用时可对两种抗菌药物的抗菌活性产生明显的拮抗作用。D-Ser和CBIO单用对于MRSA N315所产生物被膜的抑制和清除作用较弱,当与抗生素联用时可显著提升生物被膜的抑制率和清除率;皮下单独给予健康小鼠30mg/kg CBIO后5d内,小鼠生存状况良好(n=5);三药(β-内酰胺类抗生素、D-Ser和CBIO)联用相比单用抗生素以及抗生素和D-Ser两药联用,可一定程度上提高小鼠存活率、降低大鼠腿部肌肉组织持菌量。结论β-内酰胺类抗生素、D-Ser及CBIO联用在体内具有良好的抗MRSA感染作用,且CBIO体内安全性良好,但CBIO会与抗生素产生一定程度的拮抗作用。一定浓度的CBIO与β-内酰胺类抗生素、D-Ser联用或许能为MRSA感染的临床用药提供新的选择。 展开更多

关键词 联合用药 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 D型丝氨酸 d-氨基酸氧化酶抑制剂

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固定化D-氨基酸氧化酶催化DL-氨基酸去消旋化制备非天然L-氨基酸 被引量：6

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作者 徐红梅 夏仕文 何从林 《分子催化》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期192-196,共5页

在过氧化氢酶和氧气存在下,固定化D-氨基酸氧化酶(D-AAO)对映选择性催化DL-氨基酸中的D-对映体氧化脱氨为相应酮酸,L-对映体保留.研究了D-AAO的底物特异性并对反应条件进行了优化.结果表明:D-AAO具有较宽的底物谱,能够催化疏水性α-氨... 在过氧化氢酶和氧气存在下,固定化D-氨基酸氧化酶(D-AAO)对映选择性催化DL-氨基酸中的D-对映体氧化脱氨为相应酮酸,L-对映体保留.研究了D-AAO的底物特异性并对反应条件进行了优化.结果表明:D-AAO具有较宽的底物谱,能够催化疏水性α-氨基酸的D-对映体氧化脱氨.在最优反应条件下,D-AAO催化DL-2-氨基丁酸、DL-2-氨基戊酸去消旋化,L-2-氨基丁酸、L-2-氨基戊酸的收率分别为48%和47%,ee分别为99.5%和99.8%.进一步地利用Pd-C/HCOONH4催化氧化脱氨过程中产生的亚氨基酸原位还原,有效提高了L-2-氨基丁酸、L-2-氨基戊酸的收率并保持高的光学纯度. 展开更多

关键词 固定化d-氨基酸氧化酶 过氧化氢酶 氧化脱氨 DL-氨基酸 非天然L-氨基酸

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