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Effects of grafting cell penetrate peptide and RGD on endocytosis and biological effects of Mg-CaPNPs-CKIP-1 siRNA carrier system in vitro 被引量:3
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作者 YI Man-fei CHEN Liang-jian +3 位作者 HE Hui-li SHI Lei SHAO Chun-sheng ZHANG Bo 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS CSCD 2021年第5期1291-1304,共14页
Calcium phosphate nanoparticles(CaPNPs)have good biocompatibility as gene carriers;however,CaPNPs typically exhibit a low transfection efficiency.Cell penetrate peptide(TAT)can increase the uptake of nanoparticles but... Calcium phosphate nanoparticles(CaPNPs)have good biocompatibility as gene carriers;however,CaPNPs typically exhibit a low transfection efficiency.Cell penetrate peptide(TAT)can increase the uptake of nanoparticles but is limited by its non-specificity.Grafting adhesion peptide adhesion peptide on carriers can enhance their targeting.The Plekho1 gene encodes casein kinase-2 interacting protein-1(CKIP-1),which can negatively regulate osteogenic differentiation.Based on the above,we produced a Mg-CaPNPs-RGD-TAT-CKIP-1 siRNA carrier system via hydrothermal synthesis,silanization and adsorption.The effects of this carrier system on cell endocytosis and biological effects were evaluated by cell culture in vitro.The results demonstrate that CaPNPs with 7%Mg(60 nm particle size,short rod shape and good dispersion)were suitable for use as gene carriers.The carrier system boosted the endocytosis of MG63 cells and was helpful for promoting the differentiation of osteoblasts,and the dual-ligand system possessed a synergistic effect.The findings of this study show the tremendous potential of the Mg-CaPNPs-RGD-TAT-CKIP-1 siRNA carrier system for efficient delivery into cells and osteogenesis inducement. 展开更多
关键词 calcium phosphate nanoparticles adhesion peptide cell penetrate peptide ENDOCYTOSIS SIRNA
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噬菌体展示技术筛选细胞穿透肽的研究进展
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作者 田宛鑫 刘思佳 +3 位作者 姜宁 赵芳芳 宋军 张爱忠 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3658-3665,共8页
细胞穿透肽(CPP)是一类由5~30个天然或人造氨基酸残基组成的短肽序列,具有增强细胞摄取抗原并促进穿越各种生物屏障的能力,因其高效、独特的跨膜运输能力成为近年来生物医药领域的研究热点。噬菌体展示技术(PDT)是一种通过对噬菌体DNA... 细胞穿透肽(CPP)是一类由5~30个天然或人造氨基酸残基组成的短肽序列,具有增强细胞摄取抗原并促进穿越各种生物屏障的能力,因其高效、独特的跨膜运输能力成为近年来生物医药领域的研究热点。噬菌体展示技术(PDT)是一种通过对噬菌体DNA进行基因改造,从而在噬菌体表面展示的分子技术,其包含的遗传序列可将表型与基因型相连,该技术允许不同的肽库在噬菌体颗粒表面表达,并能选择与靶标特异性结合的多肽,且其具有简单、高效和低成本等优点。因此,可利用其在不损伤其他正常细胞的情况下实现靶向治疗,为研发靶向递药新型载体,实现靶向药物投递奠定了基础。本文综述了细胞穿透肽以及利用噬菌体展示技术筛选细胞穿透肽的研究进展,同时也为饲用抗生素替代品的研究与开发提供更有效的思路和方法,并进一步为胞内致病菌的精准杀伤提供新的策略和研究方向。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 噬菌体展示技术 靶向 抗菌肽
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细胞穿透肽Penetratin修饰的眼用脂质体的构建与体外评价 被引量:2
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作者 徐楠 张姝月 丁雪鹰 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期595-602,共8页
目的·构建一种细胞穿透肽Penetratin修饰的眼用脂质体(Penetratin-modified liposome,Pen-Lip),并初步评价其通过滴眼给药治疗眼底新生血管疾病的适用性。方法·通过二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-N-马来酰亚胺-聚乙二醇2000(DSPE-PE... 目的·构建一种细胞穿透肽Penetratin修饰的眼用脂质体(Penetratin-modified liposome,Pen-Lip),并初步评价其通过滴眼给药治疗眼底新生血管疾病的适用性。方法·通过二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-N-马来酰亚胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG_(2000)-Mal)和Penetratin的加成反应合成共聚物DSPE-PEG_(2000)-Pen,再通过薄膜分散法制备Pen-Lip。利用细胞摄取实验确定修饰脂质体的最佳Penetratin比例。用纳米粒度电位仪测定Pen-Lip的平均粒径、Zeta电位和多分散系数(polydispersity index,PDI),用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察Pen-Lip的形态。采用离心法测定Pen-Lip装载康柏西普的包封率和载药量。将Pen-Lip在PBS或含50%胎牛血清PBS中静置48 h,通过粒径变化和TEM下形态考察Pen-Lip的稳定性。采用CCK-8法检测Pen-Lip对人源角膜上皮细胞(human corneal epithelial cell,HCEC)和人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,ARPE-19)的细胞毒性,利用激光共聚焦显微镜观察ARPE-19对Pen-Lip的摄取情况。使用扩散池装置评估Pen-Lip对离体兔角膜的渗透能力,计算表观渗透系数P_(app),通过角膜水合值评价载有康柏西普的Pen-Lip对角膜组织的毒性。结果·修饰脂质体的最佳Penetratin比例为3%。Pen-Lip的平均粒径为(148.07±3.51)nm,Zeta电位为(5.66±0.91)mV,PDI为0.227±0.045。TEM结果显示其呈外表光滑的球形结构。Pen-Lip的包封率为(44.06±3.70)%,载药量为(2.84±0.24)%。Pen-Lip在PBS和含50%胎牛血清PBS中静置48 h后粒径无明显变化,TEM显示分散均匀,表明其稳定性较好。在15~500μg/mL范围内时,Pen-Lip对HCEC、ARPE-19无明显细胞毒性。与未修饰脂质体相比,ARPE-19对Pen-Lip的摄取能力显著提高(P=0.000)。离体兔角膜渗透实验中,Pen-Lip的P_(app)显著大于未修饰脂质体(P=0.000);载药Pen-Lip处理后的离体兔角膜的水合值与未处理组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论·Pen-Lip在体外具有良好的稳定性、生物相容性、角膜透过能力,且能够被视网膜细胞摄取,是一种潜在的能够通过滴眼给药治疗眼底新生血管疾病的药物递送系统。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 脂质体 康柏西普 眼底新生血管疾病 滴眼给药
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Penetratin复合神经生长因子治疗中度创伤性颅脑损伤小鼠 被引量:1
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作者 尤丽丽 付文亮 +5 位作者 裴洁 俞昶乐 邢微微 蔡贵玲 张超 徐东刚 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期114-121,共8页
目的探讨penetratin介导神经生长因子(NGF)对中度创伤性颅脑损伤(TBI)小鼠的治疗作用。方法首先在细胞水平利用细胞免疫荧光法评估不同细胞渗透肽(CPP)复合NGF蛋白的穿膜效果,明确最佳的复合比例。随后在构建的中度TBI小鼠模型上分析给... 目的探讨penetratin介导神经生长因子(NGF)对中度创伤性颅脑损伤(TBI)小鼠的治疗作用。方法首先在细胞水平利用细胞免疫荧光法评估不同细胞渗透肽(CPP)复合NGF蛋白的穿膜效果,明确最佳的复合比例。随后在构建的中度TBI小鼠模型上分析给药后各组小鼠的行为学变化:利用Morris水迷宫实验检测小鼠的空间记忆功能,转棒实验评估小鼠的协调运动能力。采用免疫组化染色法观察脑组织GFAP、NeuN蛋白的表达情况。结果体外细胞免疫荧光实验结果显示,NGF/penetratin组细胞内NGF蛋白含量显著高于其他组,且在penetratin与NGF的摩尔比为20∶1时荧光强度最高。动物实验结果显示,NGF/penetratin治疗组小鼠的协调运动功能、空间记忆能力以及脑组织内NeuN蛋白表达水平均显著高于TBI组与NGF组小鼠,其脑组织内GFAP蛋白表达水平显著低于TBI组以及NGF组小鼠(P<0.05)。结论Penetratin作为一种药物递送载体可促进NGF通过血脑屏障(BBB)进入受损脑组织内,对中度TBI小鼠具有较好的治疗作用。 展开更多
关键词 细胞渗透肽 penetrATIN 神经生长因子 中度创伤性颅脑损伤 血脑屏障
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hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备、穿膜效应及其抗氧化、抗炎症功效 被引量:1
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作者 张洁 姚君妍 +4 位作者 杨英桂 王飞 郑清友 李欣 柳长柏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1059-1069,共11页
目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析... 目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析法、分子筛方法纯化Cu,Zn-SOD、hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白并利用Western blotting法鉴定其正确性;利用免疫荧光法、荧光共定位实验、Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD在细胞中的穿膜效应;利用Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白穿膜时间梯度和浓度梯度效应;利用SOD酶活性测定试剂盒检测hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后的SOD酶活性;利用MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。利用H2O2建立HEK293氧化应激细胞模型,通过流式细胞分析术(FCM)分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后细胞凋亡情况;并RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后凋亡相关因子的表达情况;通过ROS检测分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后抗氧化能力。TPA诱导建立小鼠耳部炎症模型(5只/组,共4组),然后RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后,NFκB,IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录情况;Western blotting检测NFκB p65、p-NFκB p65、IL-1β、TNFα基因的表达;免疫组化分析炎性因子p-NFκB p65、TNFα基因的表达。结果 成功构建了重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD,并获得Cu,Zn-SOD蛋白和hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白;免疫荧光试验结果表明5μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD转导HEK293细胞具有明显的穿膜效应;荧光共定位实验显示融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD入胞后定位在细胞膜内,部分蛋白定位在细胞核内;Western blotting实验结果表明hPP10-Cu,Zn-SOD转导Hela(P<0.05),HEK293(P<0.01)细胞具有浓度依赖性,细胞内hPP10-Cu,Zn-SOD存在可持续24 h;5μmol/L的hPP10-Cu,Zn-SOD转导细胞具有较好的抗氧化活性(P<0.01);MTT结果显示高达10μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD对于细胞活力的影响小。在氧化应激模型中,FCM结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞降低了细胞的早期凋亡(P<0.01)和晚期凋亡(P<0.05);RT-qPCR结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞使Bcl2、Mcl1、Deptor等抗凋亡因子升高(P<0.05),降低了Bad、P21、P27等促凋亡因子的表达(P<0.05);ROS结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞显著降低了细胞内的活性氧含量(P<0.01)。在炎症模型中,hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白可显著降低IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录(P<0.05);p-NFκB p65、IL-1β及TNFα的表达都呈现了抑制作用(P<0.05);hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白处理组较Cu,Zn-SOD蛋白处理组,降低了炎性因子p-NFκB p65及TNFα基因的表达(P<0.05)。结论 融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD具有明显的穿膜入胞、抗氧化、抗炎功效,且对细胞毒副作用很小。这些结果为hPP10作为新的递送载体奠定基础,也为hPP10-Cu,Zn-SOD应用于护肤品等提供了理论依据。 展开更多
关键词 人源性细胞膜穿透肽hPP10 铜锌超氧化物歧化酶Cu Zn-SOD 抗氧化 抗炎 酶活力测定
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非内吞依赖型生物大分子药物胞质递送策略研究进展 被引量:1
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作者 袁静静 郑宇钊 +1 位作者 徐晨枫 殷婷婕 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第1期1-8,共8页
生物大分子药物由于具有高效、高特异性等优点,已成为新一代治疗药物的重要组成部分,但其分子稳定性差、易被酶解、难以跨越生物膜。传统的生物大分子药物纳米递送策略的有效性主要受限于溶酶体逃逸效率低,针对性开发非内吞依赖型的胞... 生物大分子药物由于具有高效、高特异性等优点,已成为新一代治疗药物的重要组成部分,但其分子稳定性差、易被酶解、难以跨越生物膜。传统的生物大分子药物纳米递送策略的有效性主要受限于溶酶体逃逸效率低,针对性开发非内吞依赖型的胞质直接递送策略具有重要意义。本文综述细胞穿透肽、低pH插入肽、清道夫受体介导的非内吞作用、膜融合、内质网途径、硫醇介导、基于液-液相分离技术的非内体捕获型生物大分子药物胞内递送策略的效应机制和研究进展,并分析了技术转化难点。 展开更多
关键词 生物大分子药物 细胞穿透肽 巯醇 入胞 内质网途径 膜融合
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细胞穿透肽应用的研究进展 被引量:5
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作者 刘芸 李锦梅 +1 位作者 谭婷 姜勇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第8期731-738,共8页
细胞穿透肽是一类具有特殊细胞膜穿透作用的短肽,研究发现其为药物大分子物质的细胞内转运提供了有力工具,现已得到了广泛关注和大量研究.一方面,近年来发现,细胞穿透肽的应用面临着药物释放率、代谢降解、细胞系的分化状态和Rho-GTPase... 细胞穿透肽是一类具有特殊细胞膜穿透作用的短肽,研究发现其为药物大分子物质的细胞内转运提供了有力工具,现已得到了广泛关注和大量研究.一方面,近年来发现,细胞穿透肽的应用面临着药物释放率、代谢降解、细胞系的分化状态和Rho-GTPases活性的依赖性等问题,从而阻碍了其研究开发的进程.另一方面,细胞穿透肽在肿瘤治疗、抗菌和抗炎靶向药物等方面的研究却取得了显著的进展,甚至进入了临床前和临床研究阶段.本文围绕细胞穿透肽在应用开发中所面临的挑战和机遇两方面,综述了近期的研究进展,并对细胞穿透肽在新领域中的应用进行了展望. 展开更多
关键词 细胞穿透肽 应用 研究进展 挑战 机遇
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穿膜序列对MHC-Ⅰ类限制性CTL表位呈递影响的研究 被引量:3
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作者 王莉 吴玉章 +4 位作者 林治华 石统东 周伟 贾正才 邹丽云 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1106-1108,共3页
目的 :从时间依赖性抗原呈递动力学的角度研究穿膜序列 (CPP)对 MHC- 类限制性 CTL 表位呈递的影响。 方法 :应用多肽固相合成技术 ,分别合成含 CPP与 H- 2 Kb限制性 CTL 表位 OVA2 57- 2 6 4的融合多肽 ,同时合成该表位 N、C端自然延... 目的 :从时间依赖性抗原呈递动力学的角度研究穿膜序列 (CPP)对 MHC- 类限制性 CTL 表位呈递的影响。 方法 :应用多肽固相合成技术 ,分别合成含 CPP与 H- 2 Kb限制性 CTL 表位 OVA2 57- 2 6 4的融合多肽 ,同时合成该表位 N、C端自然延伸的抗原肽和无关对照肽。采用流式细胞仪 (FACS)分析技术 ,检测抗原呈递细胞 (APC)在不同时相点对上述各抗原肽进行 MHC- 类呈递的情况。结果 :与不含 CPP的抗原肽相比 ,含 CPP的抗原肽中的 CTL 表位更易进入 APC内 MHC- 类呈递途径 ,表现为呈递所需时间明显缩短 (P<0 .0 5 ) ,且同一时相点的呈递强度显著增加 (P<0 .0 5 )。 结论 :在外源性抗原肽中引入穿膜序列可明显促进其 MHC- 类限制性 CTL 表位的呈递效率 。 展开更多
关键词 穿膜序列 MHC-I类 限制性CTL 抗原呈递 动力学分析 肿瘤 免疫疗法
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Tat-GFP融合蛋白的表达纯化及其穿膜活性 被引量:6
9
作者 关新刚 苏维恒 +2 位作者 于欣 佟海滨 孙新 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期725-728,I0001,共5页
目的:获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白(GFP)标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法:应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不同异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度(0.5和1.0mmol·L-1)... 目的:获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白(GFP)标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法:应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不同异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度(0.5和1.0mmol·L-1)和不同温度(22℃和37℃)诱导融合蛋白的表达情况;利用Ni-IDA树脂亲和纯化Tat-GFP蛋白,利用GFP特异性抗体采用Western blotting法分析洗脱液中的蛋白;激光共聚焦荧光显微镜下检测Tat-GFP融合蛋白的跨膜转运活性。结果:0.5和1.0mmol·L-1 IPTG诱导出的细菌总蛋白中所含的Tat-GFP蛋白量无明显差异;低温(22℃)诱导生产的Tat-GFP蛋白量较37℃更高;Western blotting分析,GFP抗体能够特异性识别PVDF膜上的蛋白,条带灰度与Tat-GFP蛋白上样量有关联;细胞穿膜实验,绿色荧光分布于MCF-7细胞的细胞质和细胞核中。结论:低温诱导时大肠杆菌BL21菌体上清液中Tat-GFP融合蛋白量更高,所生产的Tat-GFP融合蛋白既具备穿膜活性又具有易于检测的绿色荧光。 展开更多
关键词 Tat-GFP 细胞穿膜肽 融合蛋白 穿膜活性
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Tat-LK15运载siRNA沉默RGC-5神经细胞nNOS基因的实验研究 被引量:2
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作者 彭捷 饶云 +3 位作者 陆建华 吴昊澎 杨秀环 屠伟峰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期278-283,共6页
目的探讨离体条件下细胞穿透肽Tat-LK15运载小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默RGC-5视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,n NOS)基因的可行性,为在体条件... 目的探讨离体条件下细胞穿透肽Tat-LK15运载小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默RGC-5视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,n NOS)基因的可行性,为在体条件下研究Tat-LK15运载siRNA沉默n NOS表达治疗神经病理性疼痛提供理论依据。方法 1通过凝胶阻滞分析测定Tat-LK15与siRNA的最佳交联比。流式细胞术检测Tat-LK15/FAM-siRNA以最佳交联比转染RGC-5细胞的转染效率;不同剂量Tat-LK15(1、2.5、5、10和20μg)孵育RGC-5细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率。2制备n NOS高表达的RGC-5细胞模型。3将RGC-5细胞随机分为5组:对照组、模型组、Tat-S组(Tat-LK15运载n NOS/siRNA转染模型细胞)、Lipo-S组(LipofectamineTMRNAi MAX运载n NOS/siRNA转染模型细胞)及Tat-N组(Tat-LK15运载NCsiRNA转染模型细胞),通过Q-PCR及Western blot检测各组nN OS表达水平。结果 Tat-LK15与siRNA质量比为2∶1时可完全包裹siRNA,达到最佳交联,此时其转染效率为(84.4±3.9)%。当Tat-LK15剂量为20μg(6.1μmol·L-1)时才出现一定细胞毒性,细胞凋亡率高于对照组[(10.3±1.1)%vs(7.4±0.9)%,P<0.05]。造模后RGC-5细胞nN OS表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,Tat-S组nN OS mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Tat-S组与Lipo-S组相比无差异(P>0.05)。结论Tat-LK15能高效转染siRNA,细胞毒性低,离体条件下可有效运载siRNA沉默nN OS的基因表达。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 TAT SIRNA 基因治疗 神经型一氧化氮合酶 神经病理性疼痛
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人乳头瘤病毒16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的穿膜肽疫苗设计及体外免疫学研究 被引量:6
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作者 尹锐 郝飞 +1 位作者 郝进 杨希川 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期807-809,共3页
目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49~57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分... 目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49~57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分别合成含HIVTat49-57和人类白细胞抗原(HLA)-A2.1限制性CTL优势表位HPV16E749-57的18肽,和该CTL表位的9肽,并用一无关肽作对照,在体外用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA-A2阳性健康者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导的表位E749-57的特异性CTL活性。结果:经质谱分析,上述多肽成功合成,纯度均在95%以上。与9肽相比,18肽能在体外诱导出明显增强的特异性CTL活性(P<0.05)。结论:在HPV16E7HLA-A2.1限制性CTL表位(49~57)的N-末端加上HIV-Tat49-57序列,不会影响表位的提呈效率,而且在体外能有效激发针对E749-57特异性的CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供了新思路。 展开更多
关键词 穿膜肽 人免疫缺陷病毒-Tat49-57 细胞毒性T淋巴细胞表位 人乳头瘤病毒16 肽疫苗
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细胞穿膜肽的穿膜活性与序列特征的关系 被引量:2
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作者 曹赞霞 董川 +1 位作者 赵立岭 王吉华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2016年第1期75-82,共8页
细胞穿膜肽(cell penetrating peptides,CPPs)是一种小分子多肽,能够容易地穿过细胞膜.这类分子,尤其是具有靶向功能的CPPs为高效率投送药物到靶细胞带来希望.因此,对其展开研究对于生物医学有着一定的意义.本工作主要从序列水平对具有... 细胞穿膜肽(cell penetrating peptides,CPPs)是一种小分子多肽,能够容易地穿过细胞膜.这类分子,尤其是具有靶向功能的CPPs为高效率投送药物到靶细胞带来希望.因此,对其展开研究对于生物医学有着一定的意义.本工作主要从序列水平对具有不同穿膜活性的CPPs进行研究,试图找出影响CPPs穿膜活性的因素,以及不同活性CPPs与非穿膜肽(Non CPPs)序列上的差异,并引入一种分析生物序列的方法.我们基于CPPsite数据库和不同的文献获取CPPs和Non CPPs序列,并进一步从CPPs序列中提取具有高、中、低穿膜活性的穿膜肽(HCPPs、MCPPs、LCPPs)用于构建数据集.基于这些数据集,开展了以下研究:首先,利用方差分析的方法,对不同活性的CPPs以及Non CPPs的氨基酸及二级结构组成进行分析,发现氨基酸的静电与疏水相互作用对CPPs的穿膜活性起到了重要影响,同时螺旋结构和无规卷曲也会影响CPPs的穿膜活性;其次,使用理化性质与长度将不同活性的CPPs展示在二维平面上,发现在某些特殊的性质下不同活性的CPPs与Non CPPs可以产生聚簇现象,HCPPs、MCPPs以及LCPPs和Non CPPs被分成了三簇,这种现象显示了它们之间的差异;最后,本文引入了生物序列理化质心的概念,将组成序列的残基看作质点,进而把序列抽象成质点系进行研究,并将此方法应用到CPPs的分析中,通过PCA方法将不同活性的CPPs投射到三维平面上,结果发现绝大部分CPPs聚在一起,部分LCPPs与Non CPPs聚在一起.此工作对于CPPs的设计,以及理解不同活性CPPs序列上的差异具有一定的意义.另外,本文引入的生物序列理化质心的分析方法也可以用于其他生物问题的分析,同时它们可以作为某些生物分类问题的输入参数,在模式识别中起到一定的作用. 展开更多
关键词 细胞穿膜肽(cpps) 穿膜活性 序列差异 理化质心
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RDP多肽修饰的姜黄素隐形脂质体脑靶向作用的研究 被引量:10
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作者 项松涛 赵明 +1 位作者 史现勋 付爱玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1136-1141,共6页
目的以源于狂犬病毒糖蛋白的新型衍生肽(RVGderived peptide,RDP)为靶向载体,研究其修饰的姜黄素隐形纳米脂质体的特征和脑靶向作用。方法薄膜分散法制备出脂质体。体外释放实验考察释药情况。小鼠经尾静脉注射姜黄素混悬液(CUR)、姜黄... 目的以源于狂犬病毒糖蛋白的新型衍生肽(RVGderived peptide,RDP)为靶向载体,研究其修饰的姜黄素隐形纳米脂质体的特征和脑靶向作用。方法薄膜分散法制备出脂质体。体外释放实验考察释药情况。小鼠经尾静脉注射姜黄素混悬液(CUR)、姜黄素脂质体(CUR-L)、RDP修饰的姜黄素隐形脂质体(RDP-CUR-L),分别在不同时间点取小鼠组织器官,HPLC法检测姜黄素在各组织的分布。结果制备的隐形纳米脂质体粒径在100 nm左右,分散性良好,包封率大于85%,制备重现性较好。小鼠经尾静脉分别注射CUR、CUR-L和RDP-CUR-L后,CUR组并未在脑中检测到姜黄素,CUR-L组仅在脑中检测到少量姜黄素,而RDP-CUR-L组小鼠脑内检测到了较高浓度的姜黄素。结论RDP能够引导脂质体入脑,这将为治疗脑部疾病提供新的方法。 展开更多
关键词 姜黄素 RDP 脂质体 体内分布 细胞穿膜肽 脑靶向
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肿瘤靶向性细胞穿膜肽的固相合成及体外活性研究 被引量:6
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作者 何吉文 李华 +4 位作者 姜楠 台艳 张琪 杨扬 陈规划 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期201-204,共4页
目的采用固相合成法合成以基质金属蛋白酶为靶点的肿瘤靶向性细胞穿膜肽,用5-羧基四甲基罗丹明对其进行荧光标记,并对合成的产物进行生物活性和细胞毒性评估。方法采用N-芴甲氧羰基(Fmoc)作为α-氨基酸的保护基,以逐个延伸的固相合成法... 目的采用固相合成法合成以基质金属蛋白酶为靶点的肿瘤靶向性细胞穿膜肽,用5-羧基四甲基罗丹明对其进行荧光标记,并对合成的产物进行生物活性和细胞毒性评估。方法采用N-芴甲氧羰基(Fmoc)作为α-氨基酸的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成肿瘤靶向性细胞穿膜肽,并在有耦合剂HATU和DMF的情况下,加入5-羧基四甲基罗丹明进行荧光标记,应用高效液相色谱分析仪和质谱仪测定其纯度和分子量;荧光显微镜观察穿膜肽对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721和正常肝脏细胞株LO2的穿膜效果,以评价穿膜肽的生物学活性;MTT比色法检测穿膜肽对SMMC-7721细胞活性的影响。结果所合成的细胞穿膜肽经高效液相色谱法鉴定纯度为96.05%,经质谱鉴定相对分子量为3504.9。这种穿膜肽对正常肝脏细胞株LO2无明显穿膜作用,但对肝癌细胞株SMMC-7721有较强的穿膜作用,并且对细胞活性无明显影响。结论采用Fmoc固相肽合成法成功合成细胞穿膜肽;所合成的细胞穿膜肽具有肿瘤靶向性。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肿瘤靶向性 细胞穿膜肽 N-芴甲氧羰基 固相合成 基质金属蛋白酶2
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穿膜肽HIV-Tat_(49-57)和CTL表位融合多肽疫苗的初步免疫学效应研究 被引量:3
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作者 王莉 吴玉章 +3 位作者 石统东 贾正才 周伟 邹丽云 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1159-1161,共3页
目的 探讨穿膜肽HIV Tat4 9- 57将CTL表位带入活细胞胞质并将其投入MHC Ⅰ类抗原提呈途径的可能性。方法 应用多肽固相合成技术 ,分别合成含HIVTat4 9- 57和HLA A2 1限制性CTL优势表位MART 12 7- 35的 18肽和该CTL表位 9肽。采用间... 目的 探讨穿膜肽HIV Tat4 9- 57将CTL表位带入活细胞胞质并将其投入MHC Ⅰ类抗原提呈途径的可能性。方法 应用多肽固相合成技术 ,分别合成含HIVTat4 9- 57和HLA A2 1限制性CTL优势表位MART 12 7- 35的 18肽和该CTL表位 9肽。采用间接免疫荧光与激光共聚焦显微镜技术 ,分别对上述 18肽和 9肽的穿膜能力进行了动态观察。进一步用标准51 Gr释放试验分别检测了上述 18肽和 9肽在HLA A2 1阳性健康者外周血单个核细胞 (PBMC)中诱导的表位MART 12 7- 35特异性CTL活性。结果  18肽能够穿过活哺乳动物细胞质膜进入胞质 ,并呈现出时间、剂量依赖关系 ;而 9肽则无此效应。与 9肽相比 ,18肽在体外诱导出了明显增强的特异性CTL活性 (P <0 0 5 )。结论 穿膜肽HIVTat4 9- 57可有效携带CTL表位穿过细胞膜进入胞质 ,并有效激发出针对该表位的特异性CTL应答 。 展开更多
关键词 免疫学效应 穿膜肽 Tat49-57 CTL表位 MHC-I类抗原提呈途径 多肽疫苗 肿瘤免疫治疗
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新型穿膜肽作为基因运输载体的实验研究 被引量:4
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作者 田菊 王志刚 +1 位作者 任建丽 张清凤 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期2562-2566,共5页
目的人工设计合成穿膜肽新序列(CGRLWMRWYSPWARRYGC),并于体外考察其作为基因载体的潜力。方法采用Na-芴甲氧羰基(Fmoc)法固相合成穿膜肽新序列,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记N端。高效液相色谱及质谱仪检测其纯度及相对分子质量,流式... 目的人工设计合成穿膜肽新序列(CGRLWMRWYSPWARRYGC),并于体外考察其作为基因载体的潜力。方法采用Na-芴甲氧羰基(Fmoc)法固相合成穿膜肽新序列,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记N端。高效液相色谱及质谱仪检测其纯度及相对分子质量,流式细胞仪及共聚焦显微镜观察其穿膜能力,荧光显微镜和流式细胞仪观察其携带增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)进入细胞表达情况,MTT评价穿膜肽与质粒复合物的细胞毒性,琼脂糖凝胶电泳检测穿膜肽与质粒的亲和力及对质粒的保护作用。结果合成的穿膜肽纯度为96.13%,相对分子质量为2 348.42,流式细胞仪检测显示荧光阳性细胞平均约占98.81%,共聚焦显微镜可见荧光标记的穿膜肽分布于细胞内;穿膜肽携带质粒在人脐静脉内皮细胞中的表达率平均约为11.44%;不同电荷比的复合物对细胞的活性没有明显影响(P>0.05);琼脂糖凝胶电泳显示当穿膜肽与质粒的电荷比大于2∶1时,质粒不能迁移出来,电荷比为4∶1、8∶1和16∶1的复合物能够抵抗DNA酶Ⅰ的消化作用,以8∶1最为明显。结论人工设计合成的新型穿膜肽能够作为一种潜在的基因运输载体。 展开更多
关键词 固相合成 穿膜肽 基因载体
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人宫颈癌Hela细胞穿透肽的噬菌体展示技术筛选 被引量:2
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作者 刘芸 吴向玲 +3 位作者 江力玮 姚琦 邓鹏 姜勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期755-758,共4页
目的细胞穿透肽是近年来发现的具有穿透哺乳动物生物膜功能,并能介导大分子物质跨膜转导的一类小分子肽段。该肽段以其转导效率高,速度快,生物活性好,对细胞损害小等特点,成为药物导向治疗方法研究领域的热点。本研究目的在于利用噬菌... 目的细胞穿透肽是近年来发现的具有穿透哺乳动物生物膜功能,并能介导大分子物质跨膜转导的一类小分子肽段。该肽段以其转导效率高,速度快,生物活性好,对细胞损害小等特点,成为药物导向治疗方法研究领域的热点。本研究目的在于利用噬菌体展示技术高通量、系统地筛选人宫颈癌Hela细胞的穿透多肽。方法以Hela细胞作为对象,利用噬菌体随机肽库,采用细胞筛选的方法,筛选具有细胞膜穿透作用的多肽。将筛选得到的穿透多肽与增强型绿色荧光(EGFP)融合表达,通过荧光显微观察技术快速对多肽的穿透功能进行验证。结果通过4轮的噬菌体文库筛选,目的多肽得到了有效而快速地富集。初步的测序和验证得到了3条具有明显介导融合蛋白内化的短肽序列。结论成功建立起基于噬菌体随机肽库的细胞穿透肽筛选技术,为肿瘤导向药物载体的研究开发奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 噬菌体展示 筛选 功能验证
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PEP-1-EGFP融合蛋白的表达和纯化及其转导入人脐静脉内皮细胞 被引量:5
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作者 董晓 王家宁 +1 位作者 黄永章 郭凌郧 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1114-1117,共4页
目的表达并纯化融合蛋白PEP-1-EGFP以对其穿透细胞膜的能力进行研究。方法用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-pep-1-EGFP,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达融合蛋白PEP-1-EGFP并进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化以进行融合蛋白穿透人脐... 目的表达并纯化融合蛋白PEP-1-EGFP以对其穿透细胞膜的能力进行研究。方法用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-pep-1-EGFP,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达融合蛋白PEP-1-EGFP并进行Ni2+-树脂柱亲和层析纯化以进行融合蛋白穿透人脐静脉内皮细胞的实验。结果经测序证实成功构建了表达型载体pET15b-pep-1-EGFP,PEP-1-EGFP融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,纯化后的蛋白浓度为6.18mg/ml,蛋白产量为14.15mg/100ml菌液,SDS-PAGE和Westernblotting显示纯化蛋白为融合蛋白PEP-1-EGFP,细胞膜穿透实验证实PEP-1-EGFP融合蛋白能进入人脐静脉内皮细胞。结论PEP-1-EGFP融合蛋白的表达和纯化及其穿膜能力的研究为PEP-1携带有生物活性的大分子物质进行蛋白治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 增强型绿色荧光蛋白 原核表达 蛋白转导 人脐静脉内皮细胞
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穿膜肽的内化机制及其应用 被引量:8
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作者 张兰馨 张书祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1092-1096,共5页
穿膜肽是一类具有特殊穿膜功能的多肽分子,能携带其它分子甚至超分子颗粒穿膜进入细胞内部.早期研究认为,其进胞是一种无需受体、也不存在饱和状态的非经典胞吞行为.近年研究表明,其穿膜机制可能与其含有的氨基酸种类有很大关系.现在,... 穿膜肽是一类具有特殊穿膜功能的多肽分子,能携带其它分子甚至超分子颗粒穿膜进入细胞内部.早期研究认为,其进胞是一种无需受体、也不存在饱和状态的非经典胞吞行为.近年研究表明,其穿膜机制可能与其含有的氨基酸种类有很大关系.现在,穿膜肽的穿膜过程称为巨型胞饮行为,它与传统的胞吞形式很相似.当然,还可能存在着其它的进胞方式而没有被证明或发现.关于穿膜肽的应用也是人们最感兴趣的,在很多领域的研究都在进行并不断取得进展.不论是生物界还是医学界,穿膜肽都被认为将是一类非常有发展潜力的多肽分子. 展开更多
关键词 穿膜肽 穿膜机制 应用
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一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选 被引量:2
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作者 刘瑜 刘亚伟 +3 位作者 李海玉 刘靖华 邓鹏 姜勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期491-497,共7页
以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide... 以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide,CPP).采用点突变技术,首先在pET-14b载体多克隆位点NdeⅠ和XhoⅠ之间加入4个限制性内切酶位点,随后在BamHⅠ位点后加入三联终止密码子,接着再利用亚克隆的方法在KpnⅠ和XhoⅠ之间插入EGFP,形成一个新的用于原核表达示踪蛋白的载体pET-14bMCStop/EGFP.最后再利用点突变技术在上述构建的示踪载体的多克隆位点XhoⅠ和BamHⅠ之间插入36个随机碱基序列.以His-Tat-EGFP作为工具建立有效的筛选方法,利用这种方法对文库进行筛选.酶切和测序表明,示踪载体的构建是正确的,且在大肠杆菌中可有效地表达出His标记的EGFP.在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库至少包含了105个独立克隆,其中90%以上的克隆插入的随机片段都是36个碱基.建立的筛选方法是可行的,并用此方法进行了初步的筛选. 展开更多
关键词 细胞穿透多肽 随机多肽文库 跨膜转运 内化
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