猪卵透明带-3β融合蛋白在E.coli中的表达和鉴定 被引量：3

1

作者 徐万祥 邱德义 +4 位作者 王健 谢毅 顾少华 黄燕 赵寿元 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期420-423,共4页

对全长猪卵透明带－３β（ｐＺＰ３β）ｃＤＮＡ的５端重新测序分析，发现文献报道的该克隆基因５端非编码序列中漏读了两个碱基，继而选择符合ｐＺＰ３βｃＤＮＡ阅读框的ｐＷＲ４５０－２载体质粒，通过双酶切构建了β－半乳糖苷... 对全长猪卵透明带－３β（ｐＺＰ３β）ｃＤＮＡ的５端重新测序分析，发现文献报道的该克隆基因５端非编码序列中漏读了两个碱基，继而选择符合ｐＺＰ３βｃＤＮＡ阅读框的ｐＷＲ４５０－２载体质粒，通过双酶切构建了β－半乳糖苷酶／ｐＺＰ３β融合蛋白基因的细菌表达质粒。转化宿主菌后用ＩＰＴＧ诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明ｐＺＰ３β融合蛋白在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达，并在蛋白印迹鉴定中能同兔抗猪ＺＰＩｇＧ呈特异性免疫反应。 展开更多

关键词 猪卵 透明带 pZP3β 融合蛋白 基因表达

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内源性血管生成抑制因子A rresten在E.coli JM109中的表达及抗新生血管生成的药理学研究 被引量：1

2

作者 郑金平 唐海英 +1 位作者 解军 陈显久 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1229-1232,共4页

目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体，并进行表达，抑制新生血管的药理学实验中发现，该表达产物具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的功能。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA，经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PC... 目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体，并进行表达，抑制新生血管的药理学实验中发现，该表达产物具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的功能。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA，经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增出Arresten基因，构建重组质粒pBV220-Art转化E．coli JM109进行原核表达，大量表达提取Arresten蛋白，用鸡胚绒毛尿囊膜实验进行活性测定。结果成功构建的重组质粒pBV220-Arr在E．coli JM109菌株中2～8h均可获得表达，其中诱导4h表达效率最高，Arresten蛋白可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长，活性功能明显强于血管抑素。结论成功构建Arresten基因重组质粒pBV220-Arr，并可在E．coli JM109菌株中获得表达，Arresten蛋白具有明显的抑制血管生成的作用。 展开更多

关键词 ARRESTEN 原核表达载体 e.coli JM109 基因表达 活性

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人钙调素在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究 被引量：10

3

作者 李晓军 武建国 +2 位作者 郭大文 徐建平 孙海虹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期714-718,共5页

利用基因重组技术,将经PCR扩增获得的人钙调素基因(hCaMcDNA)插入质粒pBV220,构建重组表达载体hCaM/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆.阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDS-PAGE分析,可观察... 利用基因重组技术,将经PCR扩增获得的人钙调素基因(hCaMcDNA)插入质粒pBV220,构建重组表达载体hCaM/pBV220,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆.阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDS-PAGE分析,可观察到一与CaM分子量相符(约17kD)的诱导表达条带,其表达量占菌体蛋白总量20%,并主要以可溶性形式表达.Westernblot结果证实,17kD的表达条带可与标准鼠抗人CaM单克隆抗体起特异反应.用Pheny1-SepharoseCL-4B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物,每1L菌液可获CaM纯品3～4mg.重组人CaM(rhCaM)与牛脑CaM的氨基酸组成基本一致.生物活性测定结果提示,rhCaM具有激活NAD激酶的活性,其激活程度与标准人脑CaM几乎一致. 展开更多

关键词 钙调素 基因表达 纯化 生物学活性 大肠杆菌

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影响大肠杆菌中外源基因表达的因素 被引量：55

4

作者 隋广超 胡美浩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第2期128-132,共5页

大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因，但是，不同的外源基因在表达效率上却有很大的差异，文章综述了影响大肠杆菌中外源基因表达的因素，这将有助于认识大肠杆菌中外源基因表达的规律，以便采取有效的方法提高外源基因在大肠... 大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因，但是，不同的外源基因在表达效率上却有很大的差异，文章综述了影响大肠杆菌中外源基因表达的因素，这将有助于认识大肠杆菌中外源基因表达的规律，以便采取有效的方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率． 展开更多

关键词 大肠杆菌 外源基因 载体 基因表达

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地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其产物的分泌 被引量：15

5

作者 李金霞 蔡恒 +1 位作者 路福平 杜连祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期70-73,共4页

以耐高温α 淀粉酶生产菌地衣芽孢杆菌染色体DNA为模板 ,通过PCR扩增耐高温α 淀粉酶基因 ,将扩增产物 1 9kb的DNA片段插入到pUC1 9质粒中 ,再转化大肠杆菌JM1 0 9,通过在淀粉平板上形成透明圈等方法筛选到一株阳性克隆菌株JM1 0 9(pUA... 以耐高温α 淀粉酶生产菌地衣芽孢杆菌染色体DNA为模板 ,通过PCR扩增耐高温α 淀粉酶基因 ,将扩增产物 1 9kb的DNA片段插入到pUC1 9质粒中 ,再转化大肠杆菌JM1 0 9,通过在淀粉平板上形成透明圈等方法筛选到一株阳性克隆菌株JM1 0 9(pUAM) ,其表达产物可分泌到培养基中 ,除去菌体的发酵液中每 1 0 0mL酶活可达到 2 7个单位。将发酵上清液浓缩后用冷无水乙醇分级沉淀 ,所得样品进行SDS PAGE分析 ,得到分子质量为 60ku的目的蛋白带。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 耐高温α-淀粉酶基因 大肠杆菌 分泌机制 基因克隆

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霍乱弧菌肠毒素B亚单位基因在大肠杆菌和双歧杆菌的表达 被引量：13

6

作者 云雪霞 胡静 陈清 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期168-171,共4页

目的构建霍乱弧菌肠毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大肠杆菌表达重组质粒,并观察其在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达。方法从pBI121质粒PCR扩增获得CTB基因片断,克隆到大肠杆菌载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒,然后转化大... 目的构建霍乱弧菌肠毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大肠杆菌表达重组质粒,并观察其在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达。方法从pBI121质粒PCR扩增获得CTB基因片断,克隆到大肠杆菌载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒,然后转化大肠杆菌DH5α和双歧杆菌。转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达的重组蛋白。结果构建了重组质粒pGEX-4T-CTB,CTB基因片段分子量约为376bp;在大肠杆菌中表达出35kD的霍乱弧菌B亚单位融合蛋白,经SDS-PAGE分析,相对分子量与文献相符,表达的蛋白约占细菌总蛋白的10%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约5%。Western blotting结果确认了该条带为CTB基因的产物。结论构建的重组质粒pGEX-4T-CTB能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达。 展开更多

关键词 霍乱弧菌肠毒素B亚单位 双歧杆菌 大肠杆菌 基因克隆 表达

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猪生长激素cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：4

7

作者 白俊杰 叶星 +2 位作者 李新辉 简清 罗建仁 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期99-102,共4页

用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从猪脑垂体总RNA中扩增出编码猪生长激素 (GH)成熟肽基因序列 ,定向克隆至质粒pUC18。序列分析表明 ,克隆的猪GHcDNA长 5 73bp ,不含信号肽序列 ,并在该序列之前加入一起始密码子ATG。将猪GHcDN... 用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,从猪脑垂体总RNA中扩增出编码猪生长激素 (GH)成熟肽基因序列 ,定向克隆至质粒pUC18。序列分析表明 ,克隆的猪GHcDNA长 5 73bp ,不含信号肽序列 ,并在该序列之前加入一起始密码子ATG。将猪GHcDNA定向克隆至原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重组猪GH基因表达载体pBVpGH7。SDS PAGE和薄层扫描分析表明 :经 42℃诱导 ,pBVpGH7在大肠杆菌中可表达一分子量约 2 2 0 0 0的特异蛋白 ,表达量约占细胞总蛋白的 2 0 .5 %。 展开更多

关键词 猪 生长激素CDNA 基因克隆 大肠杆菌表达 鱼用饲料添加剂 促生长作用 RT-PCR

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致病性鳗弧菌W-1外膜蛋白ompU基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：6

8

作者 杨慧 陈吉祥 +3 位作者 公衍军 李彩风 李筠 杨官品 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期105-108,14,共5页

从致病性鳗弧菌W-1基因组DNA扩增并克隆了1 156bp的特异性片段,含有完整的外膜蛋白ompU基因阅读框,由993个核苷酸组成,编码330个氨基酸残基的蛋白质。与国外已发表的鳗弧菌外膜蛋白基因的序列同源性为100%,与创伤弧菌(Vibrio vulnificus... 从致病性鳗弧菌W-1基因组DNA扩增并克隆了1 156bp的特异性片段,含有完整的外膜蛋白ompU基因阅读框,由993个核苷酸组成,编码330个氨基酸残基的蛋白质。与国外已发表的鳗弧菌外膜蛋白基因的序列同源性为100%,与创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、费氏弧菌(Vibrio fischeri)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的序列同源性分别为72%,69%,68%和64%。将该外膜蛋白基因克隆于pBV220表达质粒,在大肠杆菌中得到了表达,SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子量约38kDa,Western blot分析发现表达蛋白能与鳗弧菌外膜蛋白抗体很好的反应。 展开更多

关键词 鳗弧菌 外膜蛋白 ompU基因 克隆 表达

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微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23融合蛋白在大肠杆菌的表达 被引量：6

9

作者 何宏轩 张西臣 +4 位作者 欧阳红生 尹继刚 李吉平 李建华 杨举 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期52-54,共3页

目的　构建微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP2 3的原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。方法　用HindⅢ和EcoRⅠ酶分别从 pET - 2 8a(+)和 pMD18-T - 2 3质粒中酶切得到线性片段和CP2 3基因片段 ,然后用T4酶连接 ,构建重组的CP2 3的原核... 目的　构建微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP2 3的原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。方法　用HindⅢ和EcoRⅠ酶分别从 pET - 2 8a(+)和 pMD18-T - 2 3质粒中酶切得到线性片段和CP2 3基因片段 ,然后用T4酶连接 ,构建重组的CP2 3的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,并用SDS -PAGE、ELISA和Westernblotting进行鉴定。结果　构建了CP2 3的原核表达载体 ,得到了一分子量约为 14kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 36 %。结论　CP2 展开更多

关键词 微小隐孢子虫子孢子 表面抗原 CP23 融合蛋白 大肠杆菌

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新型高抗草甘膦N-乙酰转移酶基因的分离及其在大肠杆菌中的表达 被引量：5

10

作者 顿宝庆 陆伟 +6 位作者 平淑珍 张维 陈明 徐玉泉 金丹 赵仲麟 林敏 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期943-947,共5页

利用草甘膦极端污染土壤总DNA,构建了元基因组文库,筛选到一个高抗草甘膦的N-乙酰转移酶（N-acetyltransferase,GAT）基因,并利用原核表达系统对该基因进行了功能鉴定,发现其在大肠杆菌BL21中能耐受高达300 mM的草甘膦.研究结果为进行N... 利用草甘膦极端污染土壤总DNA,构建了元基因组文库,筛选到一个高抗草甘膦的N-乙酰转移酶（N-acetyltransferase,GAT）基因,并利用原核表达系统对该基因进行了功能鉴定,发现其在大肠杆菌BL21中能耐受高达300 mM的草甘膦.研究结果为进行N-乙酰化途径高抗草甘膦机理研究和新型高抗草甘膦转基因作物的开发提供了理论基础. 展开更多

关键词 元基因组 功能筛选 N-乙酰转移酶基因 大肠杆菌表达

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人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化 被引量：3

11

作者 邵敏 王新颖 +4 位作者 张青峰 牛宪立 王燕 周鹤峰 葛正龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1629-1632,共4页

目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对... 目的构建人蔗糖酶(h SUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白。方法采用反转录PCR法扩增得到h SUC基因片段,并将其克隆到表达载体p ET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实h SUC基因片段成功插入到p ET-28a(+)表达载体。表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Western blot结果显示融合蛋白可以与h SUC抗体特异性结合。结论成功在大肠杆菌中表达和纯化h SUC融合蛋白。 展开更多

关键词 蔗糖酶 Α-葡萄糖苷酶 大肠杆菌 基因表达 蛋白纯化

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肠出血性大肠杆菌O157:H7溶血素保护性片段(HlyAN436)克隆、表达、初步纯化与生物学活性研究 被引量：2

12

作者 程建平 邹全明 +4 位作者 易勇 毛旭虎 马颖 王庆旭 丁红雷 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期407-410,414,共5页

目的获取重组表达肠出血性大肠杆菌O157的溶血素(Ehx)保护性片段,并研究其基本的生物学及免疫学特性。方法PCR法从EHECO157-SMR2菌株克隆O157:H7的HlyA亚单位的N端片段(436个氨基酸),T-A克隆后构建表达载体pET-28a(+)-HlyAN436,测序鉴... 目的获取重组表达肠出血性大肠杆菌O157的溶血素(Ehx)保护性片段,并研究其基本的生物学及免疫学特性。方法PCR法从EHECO157-SMR2菌株克隆O157:H7的HlyA亚单位的N端片段(436个氨基酸),T-A克隆后构建表达载体pET-28a(+)-HlyAN436,测序鉴定后转化到E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,初步纯化后免疫动物。结果Hly-AN436成功地在大肠杆菌表达系统表达,动物实验证实其具有良好的免疫原性和反应性以及一定的免疫保护性。结论Hly-AN436蛋白有可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌 溶血素 基因克隆 表达 纯化 免疫保护

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人血管生成抑制素基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量：5

13

作者 卢文菊 罗进贤 李文清 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期88-91,共4页

将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的ＢａｍＨⅠ位点，构建重组质粒ｐＥＴＡ２，转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）．在ＩＰＴＧ诱导下，血管生成抑制素基因在重组转化株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＥＴＡ... 将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的ＢａｍＨⅠ位点，构建重组质粒ｐＥＴＡ２，转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）．在ＩＰＴＧ诱导下，血管生成抑制素基因在重组转化株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＥＴＡ２）中获得高效表达．表达产物以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的３７．２％．利用羊抗人纤溶酶原抗血清作为第一抗体。 展开更多

关键词 血管生成抑制素 基因表达 肿瘤 免疫疗法

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草鱼MyoD基因原核表达研究 被引量：2

14

作者 王立新 白俊杰 +4 位作者 叶星 罗建仁 陈宏 简清 劳海华 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第10期6-10,共5页

采用PCR方法对草鱼MyoD基因开放阅读框进行了改造扩增,构建了草鱼MyoD基因的原核表达载体pBV 220-M yoD,并进行了初步的原核表达研究。结果表明,构建的原核表达载体pBV 220-M yoD含有草鱼My-oD基因完整的开放阅读框;该原核表达载体表达... 采用PCR方法对草鱼MyoD基因开放阅读框进行了改造扩增,构建了草鱼MyoD基因的原核表达载体pBV 220-M yoD,并进行了初步的原核表达研究。结果表明,构建的原核表达载体pBV 220-M yoD含有草鱼My-oD基因完整的开放阅读框;该原核表达载体表达产物的相对分子质量为34 ku,其表达产物占全菌蛋白的10.8%,表达量较低。 展开更多

关键词 草鱼 MyoD基因 原核表达

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家蚕抗菌肽CM4和人可溶性BAFF融合基因的克隆、表达及活性鉴定 被引量：2

15

作者 刘海峰 刘平 +1 位作者 李楠楠 张双全 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期87-91,共5页

采用PCR法从含有人可溶性BAFF基因的pET30a(+)扩增得到人sBAFF基因,通过rPCR将抗菌肽Cecropin CM4基因的2条单核苷酸链进行扩增得到CM4基因,再采用over-lap PCR法通过linker将hsBAFF与Cecropin CM4融合基因相连接.经纯化和鉴定后,定向... 采用PCR法从含有人可溶性BAFF基因的pET30a(+)扩增得到人sBAFF基因,通过rPCR将抗菌肽Cecropin CM4基因的2条单核苷酸链进行扩增得到CM4基因,再采用over-lap PCR法通过linker将hsBAFF与Cecropin CM4融合基因相连接.经纯化和鉴定后,定向插入到原核表达载体pET30a(+)中,然后转化E.coliBL21(DE3),通过实验确定了表达该融合基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为1.0mmol/L,诱导时间为5h,温度为30℃,其表达量占全菌蛋白的40%.表达产物经SDS-PAGE分析,得到相对分子质量约为22000的重组蛋白并且存在超声裂解后的上清中.重组蛋白经Western blot检测,结果显示重组蛋白可被鼠抗人可溶性BAFF的抗体识别.采用分子筛Sephadex G-75对重组融合蛋白进行纯化,并经SDS-PAGE对其鉴定.通过对其生物学功能的检测得知,纯化后的重组融合蛋白对大肠杆菌K12D31和真菌有明显的抑菌能力. 展开更多

关键词 抗菌肽CM4 人的可溶性BAFF 抗菌活性 融合基因 大肠杆菌 表达

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α-淀粉酶基因启动子-35区的诱变及其对大肠杆菌内表达量的影响 被引量：3

16

作者 黄春晓 崔锦 马向东 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第5期24-27,共4页

对来自野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因(Gene Bank的序列号为AY167892)的启动子进行定点诱变,研究启动子的碱基改变对该基因在大肠杆菌中表达量的影响,在基因工程中有重要的意义。以α-淀粉酶基因连接到pBluescript KS+形成的重组质粒PHN... 对来自野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因(Gene Bank的序列号为AY167892)的启动子进行定点诱变,研究启动子的碱基改变对该基因在大肠杆菌中表达量的影响,在基因工程中有重要的意义。以α-淀粉酶基因连接到pBluescript KS+形成的重组质粒PHNH003为模板,通过PCR得到该α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列截短141bp的基因,并通过定点诱变改变该截短基因启动子-35区第2位和第3位的碱基(即TGCACA→TTGACA),分别把这2个基因克隆至pBlue-script KS+并转化大肠杆菌DH5α。并把PHNH003转化至大肠杆菌DH5α,作为对照菌株。结果表明,含截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照菌株提高24%;含点突变的截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照提高100%。并分析了α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列及-35区2个碱基的突变对基因在大肠杆菌中表达量的影响。 展开更多

关键词 Α-淀粉酶基因 启动子 定点诱变 大肠杆菌 表达

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拟南芥肌醇-1-磷酸合酶类蛋白基因的克隆表达 被引量：5

17

作者 宋颖琦 杨谦 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1641-1643,1657,共4页

以野生型拟南芥总RNA为模板,逆转录PCR反应获得拟南芥肌醇-1-磷酸合酶类蛋白基因cDNA(AtMIPS1),开放读码框为1533 bp,编码510个氨基酸.与已报道物种MIPS基因氨基酸序列比较分析表明,AtMIPS1与植物MIPS基因的氨基酸同源性和相似性较高达... 以野生型拟南芥总RNA为模板,逆转录PCR反应获得拟南芥肌醇-1-磷酸合酶类蛋白基因cDNA(AtMIPS1),开放读码框为1533 bp,编码510个氨基酸.与已报道物种MIPS基因氨基酸序列比较分析表明,AtMIPS1与植物MIPS基因的氨基酸同源性和相似性较高达86%～90%与95%～96%,并含有MIPS基因的保守区域'334SYNHLGNNDG'.将该cDNA序列不改变阅读框架克隆到pET28a(+)原核表达载体上,SDS-PAGE结果表明:在0.12g/L IPTG诱导2 h的条件下得到最佳的蛋白表达效果,AtMIPS1的成功表达为其功能研究打下基础. 展开更多

关键词 拟南芥 肌醇-1-磷酸合酶类蛋白基因 克隆 原核表达

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丙型肝炎病毒C区截短型基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量：1

18

作者 胡刚 董晓慧 +3 位作者 薛小平 楚雍烈 尹文 雷迎峰 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期320-322,326,共4页

目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVI... 目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-Ct,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达截短型C蛋白。结果扩增得到目的基因长度为462bp,构建pBVIL1-Ct表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的24%。Western-Blot及ELISA检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论羧基端部分缺失的HCV C区基因片段可在大肠杆菌中稳定表达并具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 核心蛋白 基因表达 大肠杆菌

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vMIP-II肽在大肠杆菌中的双辅助子高效表达 被引量：1

19

作者 孙晗笑 利奕成 +2 位作者 朱彦彦 钟瑛 冯丽霞 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2002年第3期107-110,共4页

目的 :构建病毒趋化因子 (vMIP -II)基因表达载体并在大肠杆菌中以辅助折叠和辅助阻遏方式高效表达vMIP -II重组肽 .方法 :用PCR法获得vMIP -II基因片断 ,将其插入表达载体pQE ,构建重组表达载体pEh -vMIP .表达载体、辅助折叠子和辅助... 目的 :构建病毒趋化因子 (vMIP -II)基因表达载体并在大肠杆菌中以辅助折叠和辅助阻遏方式高效表达vMIP -II重组肽 .方法 :用PCR法获得vMIP -II基因片断 ,将其插入表达载体pQE ,构建重组表达载体pEh -vMIP .表达载体、辅助折叠子和辅助阻遏子载体共转染大肠杆菌DH5α ,用酶切、DNA测序、PCR扩增鉴定阳性克隆 .结果 :阳性重组子在大肠杆菌细胞中经IPTG诱导可高效表达vMIP -II重组肽 ,蛋白电泳分析可观察到一相对分子质量与理论值相符 (约 8× 10 3)的诱导表达条带 ,其表达量约占菌体总蛋白的 2 0 % .分析表明 ,vMIP -II重组肽主要以可溶性形式表达 .结论 :用双辅助技术在大肠杆菌中高效表达较小相对分子质量vMIP -II的成功 ,为进一步研究vMIP -II的功能及应用奠定基础 ,也为同类小分子。 展开更多

关键词 VMIP-Ⅱ 病毒趋化因子 重组肽 辅助子 基因表达 大肠杆菌 基因工程 表达载体

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GST-NP1融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：2

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作者 徐文生 许杨 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期68-70,共3页

通过选用大肠杆菌偏好密码子对兔抗御素基因进行改造 ,人工合成兔防御素基因构建大肠杆菌GST -NP1融合基因在大肠杆菌中表达。研究表明 :蛋白质经过亲和层析洗脱纯化 ,SDS -PAGE电泳分析 ,只在目的分子量处出现单一条带。灰度扫描分析表... 通过选用大肠杆菌偏好密码子对兔抗御素基因进行改造 ,人工合成兔防御素基因构建大肠杆菌GST -NP1融合基因在大肠杆菌中表达。研究表明 :蛋白质经过亲和层析洗脱纯化 ,SDS -PAGE电泳分析 ,只在目的分子量处出现单一条带。灰度扫描分析表明 ,表达量最高可达总蛋白的 2 7 7%。 展开更多

关键词 GST-NPl 融合蛋白 大肠杆菌 表达 纯化 亲和层析

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