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葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞株中rHSA产量的影响 被引量:2
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作者 牛宇辉 李向茸 +5 位作者 吴贝 李洪珊 李殿玉 陈磊 魏锁成 冯若飞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期278-286,共9页
目前,悬浮CHO细胞作为外源蛋白的最有潜力的工程细胞株被广泛应用,探索其高密度生长和高表达外源蛋白的培养条件也成为研究的热点。葡萄糖和丁酸钠在促进CHO细胞生长和外源蛋白表达方面具有重要作用,所以研究葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA... 目前,悬浮CHO细胞作为外源蛋白的最有潜力的工程细胞株被广泛应用,探索其高密度生长和高表达外源蛋白的培养条件也成为研究的热点。葡萄糖和丁酸钠在促进CHO细胞生长和外源蛋白表达方面具有重要作用,所以研究葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的影响有重要的应用价值。首先利用单因素试验确定了葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的作用,并筛选出最优添加条件;然后利用双因素组合作用试验优选出可有效提高rHSA表达量的葡萄糖及丁酸钠的组合培养条件。细胞培养第3天开始,每48 h添加终浓度为7 g/L的葡萄糖,可使rHSA产量平均提高121.93%;细胞培养第2天添加终浓度为1.0 mmoL/L的丁酸钠,可使rHSA产量平均提高110.01%;丁酸钠和葡萄糖组合使用可使CHO-rHSA工程细胞株培养时间从7 d左右延长到14 d左右,使rHSA表达量达平均达到了85.642 mg/L,rHSA表达量与未处理组相比平均提高了212.49%,比单独使用葡萄糖平均提高了134.85%,比单独使用丁酸钠平均提高了88.35%。确定待细胞培养48 h 时添加1.0 mmol/L 丁酸钠和3.0→7.0 g/L葡萄糖为CHO工程细胞株高效表达的培养条件。丁酸钠和葡萄糖组合使用可更高效的表达外源蛋白,葡萄糖可以减弱丁酸钠对CHO细胞生长的抑制作用,为提高CHO工程细胞株外源蛋白表达提供新的理论依据。 展开更多
关键词 重组人血清白蛋白 丁酸钠 葡萄糖 cho-rhsa工程细胞株
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寄生虫病细胞工程学免疫防治研究 被引量:2
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作者 张中庸 李靓如 +7 位作者 张京 曾宪芳 易新元 言敢威 曾庆仁 马春艳 吴莲英 章洁 《天津农学院学报》 CAS 2002年第4期1-4,共4页
寄生虫病细胞工程学免疫防治研究,经历了20余a,首先在中国获得成功。在国家 九五"两项重大科技攻关项目支持下,建立了猪囊尾蚴CC-97细胞系,研制成功了猪囊尾蚴细胞疫苗;2000年以来,在国家自然科学基金等基金支持下,日本血吸虫幼虫... 寄生虫病细胞工程学免疫防治研究,经历了20余a,首先在中国获得成功。在国家 九五"两项重大科技攻关项目支持下,建立了猪囊尾蚴CC-97细胞系,研制成功了猪囊尾蚴细胞疫苗;2000年以来,在国家自然科学基金等基金支持下,日本血吸虫幼虫———毛蚴、尾蚴和成虫细胞体外培养相继获得成功,开创了血吸虫病细胞工程学免疫防治的新局面。 展开更多
关键词 免疫防治 寄生虫病 细胞工程学 猪囊尾蚴细胞系 细胞疫苗 日本血吸虫
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人源受体hGPCRc工程细胞株的建立及其应用 被引量:1
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作者 袁广胜 刘永学 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期818-822,共5页
目的建立孤儿G蛋白偶联受体(OrphanGproteincoupledreceptors,oGPCRs)配基筛选体系并应用于化合物的筛选。方法利用RTPCR从人结肠组织获得oGPCR成员hGPCRc的氨基酸编码序列,在利用相关软件对hGPCRc的结构特点进行分析的基础上,构建hGPCR... 目的建立孤儿G蛋白偶联受体(OrphanGproteincoupledreceptors,oGPCRs)配基筛选体系并应用于化合物的筛选。方法利用RTPCR从人结肠组织获得oGPCR成员hGPCRc的氨基酸编码序列,在利用相关软件对hGPCRc的结构特点进行分析的基础上,构建hGPCRc之表达载体pcDNA3.1(+)hGPCRc,转染CHOK1细胞获得CHOhGPCR工程细胞株,将不同化合物作用于细胞株,用Fluo3为分子探针检测细胞内钙离子浓度变化,以分析化合物中是否为该受体的特异性配基。结果生物信息学分析得到:hGPCR定位于人染色体13q32.2,对应的氨基酸序列组成了7个跨膜区段的结构域,在进化树上与人源P2Y1受体最亲近,应属于人类GPCR成员;成功得到CHOhGPCRc工程细胞株;所检测化合物作用于细胞株并没有引起胞内钙离子的波动,很可能没有活化hGPCRc。结论hGPCRc是一个与已知人P2Y1最近的成员,但基于CHOhGPCRc工程细胞株的第二信使筛选结果表明,hGPCRc并不被P2Y1的已知配基活化因此很可能属于不同于P2Y1的嘌呤类受体新亚型。 展开更多
关键词 孤儿G蛋白偶联受体 hGPCRc CHO—K1细胞系 工程细胞株
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稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞可明显改善帕金森病模型大鼠的旋转行为 被引量:1
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作者 经兴军 马端端 +2 位作者 高红 王晓民 韩济生 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第3期212-215,共4页
目的:观察稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞对6羟基多巴胺损毁所致帕金森病(Parkinsondisease,PD)模型大鼠旋转行为有无治疗作用。方法:用6羟基多巴胺损毁大鼠单侧中脑黑质多巴胺能神经元、... 目的:观察稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞对6羟基多巴胺损毁所致帕金森病(Parkinsondisease,PD)模型大鼠旋转行为有无治疗作用。方法:用6羟基多巴胺损毁大鼠单侧中脑黑质多巴胺能神经元、2周后腹腔注射阿朴吗啡诱导大鼠出现偏侧旋转行为的方法制备PD模型大鼠。通过脑立体定位技术,将稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞注入模型鼠损毁侧纹状体,1周后观察阿朴吗啡诱导的旋转行为有无改善。结果:稳定表达GDNF的MN9D/GDNF工程细胞可明显降低PD模型大鼠的异常旋转行为,治疗作用达10周之久。结论:运用exvivo方法和防治兼顾的策略对于PD基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。 展开更多
关键词 震颤性麻痹 GDNF MN9D/GDNF 工程细胞
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模式籼稻品种Kasalath转基因胚性悬浮细胞系的建立 被引量:1
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作者 龙起樟 黄永兰 +5 位作者 唐秀英 王会民 芦明 袁林峰 蔡耀辉 万建林 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期13-18,共6页
Kasalath是一种公认的组培再生性优异的模式籼稻品种。为建立具有G418抗性的Kasalath悬浮细胞系,通过农杆菌转化法获得转入G418抗性基因和GUS报告基因的Kasalath愈伤组织,然后利用获得的胚性转基因愈伤在NBL培养基中进行初步悬浮培养,... Kasalath是一种公认的组培再生性优异的模式籼稻品种。为建立具有G418抗性的Kasalath悬浮细胞系,通过农杆菌转化法获得转入G418抗性基因和GUS报告基因的Kasalath愈伤组织,然后利用获得的胚性转基因愈伤在NBL培养基中进行初步悬浮培养,后转至AA培养基进行终培养,在继代过程中通过持续的小颗粒愈伤筛选最终建立了Kasalath转基因悬浮细胞系;本研究获得的悬浮细胞系分散性良好,增值快(10 d可增殖约3.8倍),而且可从悬浮细胞中分离到高活性的原生质体,分离效率可达6.3×107个原生质体每毫升自然沉降细胞。本研究展示了Kasalath是一种建立悬浮细胞系的优良材料,为进一步进行栽培稻和野生稻的原生质体融合提供依据,建立的悬浮细胞系亦可用于生理生化研究或供分离原生质体以进行蛋白质亚细胞定位等试验。 展开更多
关键词 籼稻 悬浮细胞系 原生质体 细胞培养 转基因
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胃肠胰神经内分泌肿瘤临床前模型的研究进展
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作者 崔灵珺 田超 +3 位作者 程梓轩 郑佳彬 苏菲 谭煌英 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期779-785,共7页
胃肠胰神经内分泌肿瘤(gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm,GEP-NEN)是一种近年来发病率逐年升高的罕见异质性肿瘤,根据其分化程度,可分为神经内分泌瘤(neuroendocrine tumor,NET)和神经内分泌癌(neuroendocrine carcinoma... 胃肠胰神经内分泌肿瘤(gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm,GEP-NEN)是一种近年来发病率逐年升高的罕见异质性肿瘤,根据其分化程度,可分为神经内分泌瘤(neuroendocrine tumor,NET)和神经内分泌癌(neuroendocrine carcinoma,NEC)。随着对其发病机制和治疗手段的探索逐渐加深,临床前模型的重要性日渐凸显。本文就目前已发表的细胞系、类器官模型、人源肿瘤异种移植物模型及基因工程小鼠模型等临床前模型进行综述,并探讨这些模型目前的实际应用情况及其优缺点,旨在为未来研究提供新的思路和方向。 展开更多
关键词 胃肠胰神经内分泌肿瘤 细胞系 类器官模型 人源肿瘤异种移植模型 基因工程小鼠模型
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