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单细胞测序分析BCR CDR3受体库的研究概况和进展
1
作者 朱兰伟 李俊 +1 位作者 马龙 姚新生 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期743-750,共8页
B细胞受体(BCR)是B细胞特异性识别和结合抗原的主要分子基础,其互补决定区(CDR3)呈现高度多样性和特异性。利用单细胞免疫组库测序技术可以精确地分析每个B细胞BCR CDR3序列的组成和特征,能更好地理解B细胞分化、发育、应答的过程和机... B细胞受体(BCR)是B细胞特异性识别和结合抗原的主要分子基础,其互补决定区(CDR3)呈现高度多样性和特异性。利用单细胞免疫组库测序技术可以精确地分析每个B细胞BCR CDR3序列的组成和特征,能更好地理解B细胞分化、发育、应答的过程和机制。单细胞免疫组库测序技术为B细胞免疫相关疾病的发病机制、监测、诊断与治疗提供新的思路和理论基础。本文主要对B细胞BCR CDR3受体库的常用检测方法以及检测平台进行对比分析,并重点概述单细胞测序技术在B细胞BCR CDR3受体库中的应用、研究现状和进展。 展开更多
关键词 B细胞受体 cdr3受体库 单细胞测序
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5-Aza-CdR通过Notch1通路对小鼠海马神经发生的影响 被引量：1
2
作者 王报捷 苏丽晴 +4 位作者 张志勇 闫磊 王志广 包素雅 邵国 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期34-39,共6页
目的研究5-Aza-CdR对Notch1通路影响及神经再生的影响,并通过小鼠主动回避行为实验来探讨5-Aza-CdR对小鼠学习记忆能力的影响。方法将60只6~8周龄SPF级ICR雄性小鼠分为两组,通过侧脑室注射(i.c.v)给一组小鼠注射5-Aza-CdR,另一组注射BS... 目的研究5-Aza-CdR对Notch1通路影响及神经再生的影响,并通过小鼠主动回避行为实验来探讨5-Aza-CdR对小鼠学习记忆能力的影响。方法将60只6~8周龄SPF级ICR雄性小鼠分为两组,通过侧脑室注射(i.c.v)给一组小鼠注射5-Aza-CdR,另一组注射BSA作为对照组。注射后24 h通过Real-time PCR和Western blot检测Notch1和HES1的mRNA和蛋白表达水平;通过激光共聚焦显微镜观察5-溴-2’-脱氧尿苷(BrdU)阳性细胞和海马DG中Notch1的表达;用MS-PCR检测Notch1甲基化变化;通过穿梭回避实验来评估小鼠的学习和记忆行为。结果注射5-Aza-CdR使海马Notch1通路活性增加并促进DG区神经细胞再生,降低Notch1启动子区甲基化水平,小鼠主动回避行为能力得到提升。结论5-Aza-CdR对小鼠主动回避行为的影响可能与Notch1通路影响海马神经再生有关。 展开更多
关键词 5-AZA-cdr 神经发生 NOTCH1 学习和记忆
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环状RNA CDR1-AS通过靶向miR-1277对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫因子表达的影响
3
作者 王頔 郭兆刚 +1 位作者 亢野 徐然 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期939-944,共6页
目的:探究环状RNA(circRNA)小脑变性相关蛋白1反义转录物(CDR1-AS)对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫因子表达的影响及可能机制。方法:分别以癌旁组织、支气管上皮细胞BEAS-2B为对照,qRT-PCR检测肺癌组织、肺癌细胞系(NCI-H23、H1299、NCI-H4... 目的:探究环状RNA(circRNA)小脑变性相关蛋白1反义转录物(CDR1-AS)对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫因子表达的影响及可能机制。方法:分别以癌旁组织、支气管上皮细胞BEAS-2B为对照,qRT-PCR检测肺癌组织、肺癌细胞系(NCI-H23、H1299、NCI-H446)中CDR1-AS、miR-1277表达。以肺癌H1299细胞为研究对象,分别转染CDR1-AS小干扰RNA(si-CDR1-AS)、miR-1277模拟物或共转染si-CDR1-AS与miR-1277抑制剂后,CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞活性、克隆形成数、细胞凋亡率,ELISA检测细胞培养上清液中免疫因子(TNF-α、IFN-γ)表达。双荧光素酶报告基因实验验证CDR1-AS与miR-1277的调控关系。结果:与癌旁组织或BEAS-2B细胞比较,肺癌组织或细胞系(NCI-H23、H1299、NCIH446)中CDR1-AS表达升高(P<0.05),miR-1277表达降低(P<0.05)。沉默CDR1-AS或过表达miR-1277后,H1299细胞活性、克隆形成数及TNF-α分泌量降低(P<0.05),细胞凋亡率、IFN-γ分泌量升高(P<0.05)。CDR1-AS靶向结合miR-1277,且沉默CDR1-AS的H1299细胞中miR-1277表达升高(P<0.05)。下调miR-1277逆转沉默CDR1-AS对H1299细胞增殖、凋亡及免疫因子表达的影响。结论:CDR1-AS在肺癌组织和细胞系中表达上调,沉默其表达可通过靶向上调miR-1277抑制肺癌H1299细胞增殖及肿瘤细胞免疫逃逸,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 肺癌 cdr1-AS miR-1277 增殖 凋亡 免疫逃逸
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白念珠菌多药耐药蛋白Cdr1p和Cdr2p的研究进展 被引量：5
4
作者 贾鑫明 高平挥 +1 位作者 曹永兵 姜远英 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期437-439,共3页
ABC转运蛋白 (ATP- binding cassette transporter,ABCT)属于膜转运蛋白 ,存在于哺乳动物、细菌、真菌等多种细胞中 ,且与多种细胞的多药耐药 (multidrug resistance,MDR)有关。白念珠菌 (Candida albicans)含有多种 ABCT,但只有 Cdr1 p... ABC转运蛋白 (ATP- binding cassette transporter,ABCT)属于膜转运蛋白 ,存在于哺乳动物、细菌、真菌等多种细胞中 ,且与多种细胞的多药耐药 (multidrug resistance,MDR)有关。白念珠菌 (Candida albicans)含有多种 ABCT,但只有 Cdr1 p、Cdr2 p与 MDR有关 ;另外 ,Cdr1 p、Cdr2 p具有外排泵、磷脂易位等功能。 展开更多
关键词 白念珠菌 多药耐药 cdr1p cdr2p 研究进展 ABC转运蛋白
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基于关系学习的CDRS知识整合模型构建 被引量：2
5
作者 袁红军 《现代情报》 CSSCI 2013年第5期3-5,共3页
结合CDRS、关系学习与CDRS知识整合内涵的分析,构建基于关系学习的CDRS知识整合结构模型,揭示基于关系学习的CDRS知识整合机理和规律,指出关系学习通过关系满意、关系信任与关系承诺,以知识整合能力为手段,对CDRS知识整合绩效产生显著... 结合CDRS、关系学习与CDRS知识整合内涵的分析,构建基于关系学习的CDRS知识整合结构模型,揭示基于关系学习的CDRS知识整合机理和规律,指出关系学习通过关系满意、关系信任与关系承诺,以知识整合能力为手段,对CDRS知识整合绩效产生显著的正向影响作用,为提高CDRS知识创新与管理效率提供一个新方法。 展开更多
关键词 cdrS 关系学习 知识整合 cdrS知识整合模型
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基于动态能力的CDRS知识整合模型研究 被引量：1
6
作者 袁红军 《现代情报》 CSSCI 2014年第2期18-21,共4页
在大数据时代背景下,知识整合日益成为CDRS组织保持持续竞争优势亟待解决的问题。为此,结合CDRS知识整合和动态能力理论分析,构建基于动态能力的CDRS知识整合模型,详细地探讨动态能力、知识整合平台、知识整合能力和运行机制诸要素间的... 在大数据时代背景下,知识整合日益成为CDRS组织保持持续竞争优势亟待解决的问题。为此,结合CDRS知识整合和动态能力理论分析,构建基于动态能力的CDRS知识整合模型,详细地探讨动态能力、知识整合平台、知识整合能力和运行机制诸要素间的具体作用机制,对于动态能力、CDRS知识整合与服务创新绩效间的内在联系具有重要意义,也为获取动态能力和全面提升CDRS组织绩效提供可供选择的理论模式。 展开更多
关键词 cdrS cdrS知识整合 动态能力
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利用基因扫描分析TCR Vβ亚家族的CDR3长度方法检测T细胞克隆性 被引量：42
7
作者 李扬秋 汪明春 吴幼华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期48-50,共3页
分析了健康人、Ｔ－ＡＬＬ外周血及Ｔ细胞株Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ中ＴＣＲＶβＴ细胞的表达和克隆性。应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＴＣＲＶβ２４个亚家族的ＣＤＲ３，并经基因扫描和序列分析确定Ｔ细胞克隆性。结果表明健康人表达除Ｖ... 分析了健康人、Ｔ－ＡＬＬ外周血及Ｔ细胞株Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ中ＴＣＲＶβＴ细胞的表达和克隆性。应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＴＣＲＶβ２４个亚家族的ＣＤＲ３，并经基因扫描和序列分析确定Ｔ细胞克隆性。结果表明健康人表达除Ｖβ２０外的多克隆Ｔ细胞；Ｔ－ＡＬＬ仅表达３～４个Ｖβ亚家族Ｔ细胞；部分呈寡克隆性；Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ分别表达Ｖβ２和Ｖβ８单克隆Ｔ细胞。Ｔ－ＡＬＬ中存在克隆性生长Ｔ细胞。该方法是检测Ｔ细胞克隆性的敏感和精确的方法。 展开更多
关键词 基因扫描 T细胞 cdr3长度 克隆性 白血病
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活动性肺结核患者α/βTCR基因重排及CDR3谱型分析 被引量：11
8
作者 张建波 方毅敏 +5 位作者 黄艳 江丽芳 董涛 朱晓敏 方丹云 赖小敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1136-1139,1143,共5页
目的:建立多重PCR方法扩增α/βTCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/βTCR基因重排特点及CDR3谱型。方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和βTCR扩增引物... 目的:建立多重PCR方法扩增α/βTCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/βTCR基因重排特点及CDR3谱型。方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和βTCR扩增引物,进行多重PCR扩增以获得其全长序列,构建重组质粒并测序,利用DNAstar及网上TCR资源分析序列。结果:3例患者共获得24个α链序列,13个β链序列。α链以AV1S2(54%)、AV12S3(41%)、AV12S2(5%)为主;β链以BV2(38%)、BV29S1(46%)、BV14(3%)、BV4S2(3%)为主。同一病例及不同病例之间CDR3区呈现多样性,但是标本1、标本3各有一条β链的CDR3氨基酸序列相同:SVGTGTLHQETQY;标本2和标本3的各有2条α链CDR3序列相同:AVRDWAGNMLT;标本2的一个α链和标本3的一个α链的CDR3均有:AV…DNN…RLM序列。结论:建立了TCRα和β链全长序列的多重PCR扩增方法。结核患者病变局部克隆性增殖的TCRα和β链谱型呈限制性取用,克隆增生的T淋巴细胞来自不同的亚群,但是相同的CDR3序列对于识别MTB多肽可能具有特异性。 展开更多
关键词 活动性肺结核 T细胞受体 基因重排 cdr3 多重PCR
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Jurkat细胞TCR基因重排对BV CDR3的影响 被引量：7
9
作者 邹红云 马骊 +3 位作者 姚新生 温茜 罗微 王小宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期939-943,共5页
目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖... 目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCRBVCDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCRBV8家族的单克隆细胞株Jurkat,在增殖传代过程中,以及经刺激诱导48或72h后,未监测到有TCRBV8以外的新的BV亚家族出现,BV8CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCRBVCDR3改变,因而对TCRBVCDR3区抗原识别特异性(即抗原特异性漂移)并未产生影响,但并不排除TCR发生改变的可能性。 展开更多
关键词 JURKAT细胞 基因重排 基因扫描 TCR BV cdr3
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TD-SCDMA网络Iu-PS口CDR合成方案研究 被引量：5
10
作者 陈玉花 张治中 +1 位作者 左书川 杜西亚 《电信科学》 北大核心 2009年第11期50-54,共5页
本文对TD-SCDMA网络的Iu-PS口信令信息及业务流程进行了深入分析研究,提出了一个在Iu-PS口上实现呼叫追踪与业务分析相分离的主从CDR合成方案,介绍了CDR合成的原理及算法,采用hash动态合成的方法,解决了Iu-PS口CDR合成效率低的问题。该... 本文对TD-SCDMA网络的Iu-PS口信令信息及业务流程进行了深入分析研究,提出了一个在Iu-PS口上实现呼叫追踪与业务分析相分离的主从CDR合成方案,介绍了CDR合成的原理及算法,采用hash动态合成的方法,解决了Iu-PS口CDR合成效率低的问题。该方案已经应用到TD-SCDMA集中监测系统中,通过现网测试,效果良好。 展开更多
关键词 TD-SCDMA Iu-PS cdr合成 哈希索引
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5-Aza-CdR对胶质瘤细胞生长及LRRC4基因异常甲基化的影响 被引量：8
11
作者 张祖萍 武明花 +4 位作者 唐海林 王蓉 李丹 李小玲 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期904-909,共6页
LRRC4是一个新发现的胶质瘤抑瘤基因,它在多种胶质瘤细胞系和胶质瘤组织表达缺失或下调,前期研究结果表明胶质瘤细胞和组织中LRRC4的编码区未发生突变、缺失或重排.为了获得LRRC4作为胶质瘤抑瘤基因的进一步证据,采用去甲基化制剂5-Aza-... LRRC4是一个新发现的胶质瘤抑瘤基因,它在多种胶质瘤细胞系和胶质瘤组织表达缺失或下调,前期研究结果表明胶质瘤细胞和组织中LRRC4的编码区未发生突变、缺失或重排.为了获得LRRC4作为胶质瘤抑瘤基因的进一步证据,采用去甲基化制剂5-Aza-CdR处理LRRC4表达缺失的SF126和SF767胶质瘤细胞,MSP和RT-PCR检测表明,LRRC4的启动子在表达缺失的SF126和SF767细胞存在完全的甲基化,而5-Aza-CdR能逆转LRRC4启动子的甲基化状态,恢复LRRC4的表达.MTT法测定显示,5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量的依赖性.同时流式细胞仪检测显示,5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞周期阻滞于G0/G1期.因此,5-Aza-CdR能抑制胶质瘤细胞SF126和SF767增殖并干扰其细胞周期,LRRC4启动子异常甲基化是其在胶质瘤细胞中表达缺失的重要机制,5-Aza-CdR能逆转LRRC4基因的甲基化,恢复LRRC4的表达,为LRRC4作为胶质瘤去甲基化治疗的靶标提供了科学依据. 展开更多
关键词 5-AZA-cdr 胶质瘤细胞 LRRC4基因 DNA甲基化
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5-Aza-CdR对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响 被引量：6
12
作者 马腾飞 韦达 +2 位作者 钟山亮 张晓慧 赵建华 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期152-155,共4页
目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7细胞12-96h,四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法和流式细胞仪分别检测药物处理前后细胞的增殖活性和凋亡率;... 目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7细胞12-96h,四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法和流式细胞仪分别检测药物处理前后细胞的增殖活性和凋亡率;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各阶段RASSF2A mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR（MSP）观察该基因甲基化的改变。结果用1、5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理MCF-7细胞24、48、72和96h后,细胞生长均受到抑制,呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,3种药物浓度处理细胞72h后凋亡率增加,5和10μmol/L组凋亡率分别为（25.5±3.5）%和（58.2±3.2）%,与对照组（13.4±2.0）%相比差异有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR检测显示,不同浓度药物处理MCF-7细胞后,RASSF2A mRNA表达水平随着药物浓度的增加而逐步上调;进一步MSP检测发现这些癌细胞中RASSF2A甲基化状态得到了不同程度的逆转。结论 5-Aza-CdR可通过逆转RASSF2A基因异常甲基化导致该基因表达上调来抑制MCF-7细胞增殖,RASSF2A是一个乳腺癌相关抑癌基因。 展开更多
关键词 RASSF2A 甲基化 5-AZA-cdr 乳腺癌
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CML细胞抗原相关TCR Vα13/Vβ21和Vα18/Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点 被引量：3
13
作者 查显丰 李扬秋 +3 位作者 陈少华 杨力建 卢育洪 张涛 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期538-542,共5页
目的:分析慢性粒细胞白血病(CML)病人的克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点。方法:利用RT-PCR和基因扫描分析1例CML患者外周血单个核细胞中的TCR Vα和Vβ基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα和Vβ亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增... 目的:分析慢性粒细胞白血病(CML)病人的克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点。方法:利用RT-PCR和基因扫描分析1例CML患者外周血单个核细胞中的TCR Vα和Vβ基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα和Vβ亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增殖特点,寡克隆的PCR产物再进行序列分析。结果:该病人外周血T细胞表达18个TCR Vα和12个TCR Vβ亚家族,其中Vα13、Vα18、Vβ1和Vβ21亚家族呈寡克隆性。CDR3序列分析获得3个TCR克隆基因序列,分别为Vα13NJα49、Vα18NJα50和Vβ21NDβNJβ2.7。结论:获得1例CML病人外周血克隆性增殖αβ+T细胞的3个TCR基因CDR3序列,提示病人可能存在与CML细胞抗原相关的Vα13/Vβ21或Vα18/Vβ21T细胞克隆。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 T细胞受体 基因扫描 cdr3 克隆性
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基于CDR的典型大跨梁桥施工全过程抗震安全评价 被引量：7
14
作者 郑玉国 袁万城 《中国安全科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期73-78,共6页
为减小施工桥梁的地震损失,基于桥梁在施工过程中发生地震损伤和破坏的现实,以3座典型大跨悬臂施工连续梁桥为对象,在分析地震需求和抗震能力的基础上,采用能力需求比(CDR)法,研究大跨梁桥施工全过程的抗震性能和抗震安全性。研究结果表... 为减小施工桥梁的地震损失,基于桥梁在施工过程中发生地震损伤和破坏的现实,以3座典型大跨悬臂施工连续梁桥为对象,在分析地震需求和抗震能力的基础上,采用能力需求比(CDR)法,研究大跨梁桥施工全过程的抗震性能和抗震安全性。研究结果表明,在悬臂施工全过程中各构件各部位的能力需求比均大于2.5,悬臂施工全过程结构抗震安全;抗震易损的部位分别位于墩底、桩顶和1号-GPZ(KZ)3SX支座;最小能力需求比集中于8号梁段、9号梁段、边跨合龙、中跨合龙和桥面施工等阶段;抗震设计应在施工的维度上,重点关注地震风险相对较大的施工阶段,确保抗震安全。 展开更多
关键词 典型大跨连续梁桥 悬臂施工全过程 能力需求比(cdr) 抗震性能 抗震安全评价
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TD-SCDMA网络Iu-PS口CDR合成方案 被引量：2
15
作者 陈玉花 张治中 +1 位作者 左书川 杜西亚 《电讯技术》 北大核心 2009年第11期53-57,共5页
对TD—SCDMA网络的Iu—PS口信令信息及业务流程进行了分析研究，提出一个在Iu—PS口上实现呼叫追踪与业务分析相分离的主从CDR合成方案。阐述了该CDR合成的原理及算法，开辟了一种采用Hash动态合成的实现方法，解决了Iu—PS口CDR的合成... 对TD—SCDMA网络的Iu—PS口信令信息及业务流程进行了分析研究，提出一个在Iu—PS口上实现呼叫追踪与业务分析相分离的主从CDR合成方案。阐述了该CDR合成的原理及算法，开辟了一种采用Hash动态合成的实现方法，解决了Iu—PS口CDR的合成效率低下问题。该方案已经应用到TD—SCDMA集中监测系统中，通过现网测试，效果良好。 展开更多
关键词 TD—SCDMA网络 Iu—PS口 cdr合成 哈希索引 合成算法
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B细胞BCR CDR3受体库的高通量测序分析概况 被引量：3
16
作者 王小妹 王鹏 姚新生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期947-950,954,共5页
B细胞是介导机体体液免疫应答的主要细胞群,其识别、结合抗原主要依赖互补决定区（CDR）,它决定着抗体的特异性,而互补决定区3（CDR3）比CDR1、CDR2更具多样性,通过观察机体B细胞BCR CDR3受体库的多样性、重叠率的大小、
关键词 cdr3 B细胞 BCR 受体库 测序分析 高通量 互补决定区 体液免疫应答
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特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞的构建及生物学功能鉴定 被引量：2
17
作者 郗雪艳 曹伟 +1 位作者 崔莲仙 何维 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期879-882,885,共5页
目的:建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法:利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,... 目的:建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法:利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,共转染J.RT3-T3.5细胞,双压力抗生素筛选获得表达特异性γδTCR的转染细胞,通过ELISA和Re-altime PCR检测该转染细胞在接受抗原刺激后IL-2的分泌情况。结果:ELISA和Realtime PCR结果显示表达DBS4.3特异性γδTCR的转染细胞在DBS4.3特异性抗原仲丁胺和抗γδTCR抗体刺激作用下,活化分泌IL-2。结论:构建了特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台,为研究γδTCR识别抗原的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 cdr3取代型γδTCR 抗原识别
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APL相关TCR Vα6、Vα10和Vβ23寡克隆T细胞CDR3序列分析 被引量：1
18
作者 陈少华 李扬秋 +4 位作者 杨力建 周羽竝 李萡 张学利 罗更新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期136-138,共3页
目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR... 目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析。结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219)。结论:APL患者外周血T细胞出现的TCRVα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料。 展开更多
关键词 APL TCR cdr3 T细胞克隆
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DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对AID基因修饰的牛胎儿成纤维细胞的作用 被引量：1
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作者 奥旭东 萨如拉 +2 位作者 王杰 王会敏 于海泉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期103-112,共10页
以转AID基因细胞和AID基因敲减细胞为研究对象,旨在探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对其细胞形态、细胞周期、相关基因表达及其基因启动子区甲基化状态变化的影响。此外,还分析了整体基因组去甲基化和... 以转AID基因细胞和AID基因敲减细胞为研究对象,旨在探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对其细胞形态、细胞周期、相关基因表达及其基因启动子区甲基化状态变化的影响。此外,还分析了整体基因组去甲基化和位点特异性去甲基化之间存在的差别,探讨提高体细胞重编程效率的方法及其作用机制。通过Real-time PCR、BSP(Bisulfite Sequencing PCR)、Western blotting和流式细胞术等技术分析了5-Aza-CdR对转AID基因细胞和AID基因敲减细胞的影响。结果表明,5-Aza-CdR对转AID基因细胞的影响存在明显的剂量效应,浓度为4μmol/L时,具有明显的细胞毒性,大量细胞死亡(P<0.05)。当使用处理浓度为1-3μmol/L时,细胞形态发生改变,细胞增殖被抑制。核型分析显示,3μmol/L浓度组处理就可以导致转AID基因细胞出现异常核型。使用1μmol/L浓度处理细胞,明显增加了表达报告基因细胞的数量,细胞AID和SOX2的表达量都有所提高,并且SOX2基因启动子区的DNA甲基化水平也有所下降。5-Aza-CdR处理AID基因敲减细胞后,OCT4和SOX2的表达量较对照组明显升高,而NANOG却没有发生变化。结果显示,5-Aza-CdR处理转AID基因细胞可改变细胞形态、细胞周期和报告基因的表达,5-Aza-CdR处理后基因组整体去甲基化和AID基因的位点特异性去甲基化协同作用于体细胞重编程。 展开更多
关键词 5-AZA-cdr AID基因 DNA去甲基化 体细胞核移植
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5-Aza-CdR对德保黑猪手工克隆重构胚胎体外发育效果的影响 被引量：2
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作者 吕玲燕 陆杏蓉 +5 位作者 孙俊铭 陈宝剑 吴永绍 孙如玉 汪燕玲 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3144-3152,共9页
为了探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对德保黑猪手工克隆(HMC)重构胚胎体外发育效果的影响,本研究分别从供体细胞和重构胚入手,比较了5个不同处理浓度(0、5、10、20和40nmol/L)5-Aza-CdR处理HMC重构胚的体外发育效果,筛选最佳处理浓... 为了探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对德保黑猪手工克隆(HMC)重构胚胎体外发育效果的影响,本研究分别从供体细胞和重构胚入手,比较了5个不同处理浓度(0、5、10、20和40nmol/L)5-Aza-CdR处理HMC重构胚的体外发育效果,筛选最佳处理浓度;在最佳浓度下比较5个不同处理时间(0、24、48、72和96h)对HMC重构胚的体外发育效果,筛选最佳处理时间;用4个不同浓度(0、0.25、0.5和1μmol/L)5-Aza-CdR结合最佳浓度和最佳时间处理供体和重构胚,比较其体外发育潜能。结果显示,与空白对照组相比,5、10、20和40nmol/L5-Aza-CdR处理72h对重构胚卵裂率均无显著差异(P>0.05),20nmol/L 5-Aza-CdR处理能显著提高重构胚的囊胚率(P<0.05),10和20nmol/L 5-Aza-CdR处理均能显著提高囊胚细胞数(P<0.05),其中以20nmol/L 5-AzaCdR效果最佳;与空白对照组相比,利用20nmol/L 5-Aza-CdR处理HMC重构胚72h能显著提高重构胚的囊胚率和囊胚细胞数(P<0.05),其余处理时间对重构胚卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数均无显著影响(P>0.05);在囊胚的最佳处理浓度(20nmol/L)和最佳处理时间(72h)下,结合供体的4个处理浓度(0、0.25、0.5和1μmol/L),同时处理重构胚和供体,各处理组HMC重构胚的发育潜能均有提高,但效果均不显著(P>0.05),其中0.25～0.5μmol/L 5-Aza-CdR处理效果较佳。综上表明,适宜浓度(0.25～0.5μmol/L)的DNA甲基化酶抑制剂5-AzaCdR处理供体细胞72h并结合20nmol/L 5-Aza-CdR处理重构胚72h均能有效提高德保黑猪HMC重构胚胎的体外发育潜能,该结果可为今后研究德保黑猪HMC胚胎DNA甲基化调控机制提供参考。 展开更多
关键词 5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-cdr) 德保黑猪 手工克隆(HMC) 发育效果
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