目的探讨沉默受体CD46、桥粒芯蛋白(DSG2)对人3型腺病毒(HAdV-3)和7型腺病毒(HAdV-7)的侵入及炎症因子释放的影响。方法通过RNA干扰技术沉默A549细胞中CD46、DSG2的表达。实验分为HAdV-3组、HAdV-3+siRNA-NC组(siRNA无关序列对照组)、HA...目的探讨沉默受体CD46、桥粒芯蛋白(DSG2)对人3型腺病毒(HAdV-3)和7型腺病毒(HAdV-7)的侵入及炎症因子释放的影响。方法通过RNA干扰技术沉默A549细胞中CD46、DSG2的表达。实验分为HAdV-3组、HAdV-3+siRNA-NC组(siRNA无关序列对照组)、HAdV-3+siRNA-CD46组(转染siRNA-CD46)、HAdV-3+siRNA-DSG2组(转染siRNA-DSG2);HAdV-7组、HAdV-7+siRNA-NC组(siRNA无关序列对照组)、HAdV-7+siRNA-CD46组(转染siRNA-CD46)、HAdV-7+siRNA-DSG2组(转染siRNA-DSG2)。HAdV-3、7感染A549细胞后0.5、2 h,通过激光共聚焦显微镜观察两种腺病毒与受体CD46、DSG2结合水平;体外转染siRNA-CD46、siRNA-DSG2后不同时间点,qRT-PCR技术检测HAdV-3、7拷贝数,ELISA检测转染后IL-8表达情况。结果腺病毒感染A549细胞后0.5、2 h,HAdV-3、7与其受体CD46、DSG2结合共定位;腺病毒入胞后,随时间延长,病毒拷贝数增加,转染siRNA-CD46后2、6、12、24 h,HAdV+siRNA-CD46组的病毒拷贝数较HAdV组降低(HAdV-3+siRNA-CD46 vs HAdV-3:6 h,P<0.05;12、24 h,P<0.0001;2 h,降低趋势无统计学差异;HAdV-7+siRNA-CD46 vs HAdV-7:2 h,P<0.01;6 h,P<0.001;12、24 h,P<0.0001)。转染siRNA-DSG2后2、6、12、24 h,同样明显降低了病毒载量(HAdV-3+siRNA-DSG2 vs HAdV-3,HAdV-7+siRNA-DSG2 vs HAdV-7,P<0.0001)。HAdV-3、7感染A549细胞后,炎症因子IL-8释放增多(P<0.0001),沉默CD46和DSG2的表达后2、6 h,炎症因子IL-8水平降低(P<0.0001)。结论HAdV-3、7与其受体CD46、DSG2结合后入胞,病毒拷贝数随时间延长而增加,沉默CD46、DSG2后,抑制HAdV-3、7型腺病毒的侵入及IL-8释放。展开更多
文摘目的探讨沉默受体CD46、桥粒芯蛋白(DSG2)对人3型腺病毒(HAdV-3)和7型腺病毒(HAdV-7)的侵入及炎症因子释放的影响。方法通过RNA干扰技术沉默A549细胞中CD46、DSG2的表达。实验分为HAdV-3组、HAdV-3+siRNA-NC组(siRNA无关序列对照组)、HAdV-3+siRNA-CD46组(转染siRNA-CD46)、HAdV-3+siRNA-DSG2组(转染siRNA-DSG2);HAdV-7组、HAdV-7+siRNA-NC组(siRNA无关序列对照组)、HAdV-7+siRNA-CD46组(转染siRNA-CD46)、HAdV-7+siRNA-DSG2组(转染siRNA-DSG2)。HAdV-3、7感染A549细胞后0.5、2 h,通过激光共聚焦显微镜观察两种腺病毒与受体CD46、DSG2结合水平;体外转染siRNA-CD46、siRNA-DSG2后不同时间点,qRT-PCR技术检测HAdV-3、7拷贝数,ELISA检测转染后IL-8表达情况。结果腺病毒感染A549细胞后0.5、2 h,HAdV-3、7与其受体CD46、DSG2结合共定位;腺病毒入胞后,随时间延长,病毒拷贝数增加,转染siRNA-CD46后2、6、12、24 h,HAdV+siRNA-CD46组的病毒拷贝数较HAdV组降低(HAdV-3+siRNA-CD46 vs HAdV-3:6 h,P<0.05;12、24 h,P<0.0001;2 h,降低趋势无统计学差异;HAdV-7+siRNA-CD46 vs HAdV-7:2 h,P<0.01;6 h,P<0.001;12、24 h,P<0.0001)。转染siRNA-DSG2后2、6、12、24 h,同样明显降低了病毒载量(HAdV-3+siRNA-DSG2 vs HAdV-3,HAdV-7+siRNA-DSG2 vs HAdV-7,P<0.0001)。HAdV-3、7感染A549细胞后,炎症因子IL-8释放增多(P<0.0001),沉默CD46和DSG2的表达后2、6 h,炎症因子IL-8水平降低(P<0.0001)。结论HAdV-3、7与其受体CD46、DSG2结合后入胞,病毒拷贝数随时间延长而增加,沉默CD46、DSG2后,抑制HAdV-3、7型腺病毒的侵入及IL-8释放。
