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外源脱水应答转录因子CBF4基因转化玉米的获得 被引量:13
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作者 杨东歌 杨凤萍 +2 位作者 陈绪清 张立全 张晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1759-1763,共5页
用PCR方法克隆了拟南芥脱水应答转录因子CBF4基因,以逆境诱导表达基因rd29A的启动子为驱动,构建了逆境诱导表达载体pBAC146。用基因枪转化法转化玉米优良自交系的幼胚和胚性愈伤组织,轰击后的愈伤组织经过筛选、分化和植株再生过程,共获... 用PCR方法克隆了拟南芥脱水应答转录因子CBF4基因,以逆境诱导表达基因rd29A的启动子为驱动,构建了逆境诱导表达载体pBAC146。用基因枪转化法转化玉米优良自交系的幼胚和胚性愈伤组织,轰击后的愈伤组织经过筛选、分化和植株再生过程,共获得36棵转基因植株。经PCR、PCR-Southern和Southern检测表明,外源目的基因已成功整合到部分转基因玉米株系的基因组中。人工干旱处理下,抗旱生理指标测定显示,一个转基因株系的脯氨酸含量和叶绿素含量比野生型对照提高一倍,间接表明转基因株系的抗旱能力在某种程度上有所提高。 展开更多
关键词 玉米 转基因 cbf4基因 抗旱
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含有拟南芥转录因子CBF4基因植物表达载体的构建 被引量:4
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作者 徐春波 王勇 +1 位作者 李兴酉 赵海霞 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期88-92,共5页
用SalI和EcoRI酶将CBF4基因切下,连接到Bluescript M13(SK)上,构建成中间载体SK-CBF4,再用BamHI和KpnI双酶切SK-CBF4和HpBPC26-CBF4,用T4DNA连接酶将这2个片段连到一起,构建成植物表达载体HpBPC-CBF4。PCR和酶切鉴定结果表明植物表达载... 用SalI和EcoRI酶将CBF4基因切下,连接到Bluescript M13(SK)上,构建成中间载体SK-CBF4,再用BamHI和KpnI双酶切SK-CBF4和HpBPC26-CBF4,用T4DNA连接酶将这2个片段连到一起,构建成植物表达载体HpBPC-CBF4。PCR和酶切鉴定结果表明植物表达载体HpBPC26-CBF4构建正确,可用于今后单子叶植物遗传转化。 展开更多
关键词 cbf4 表达载体 构建
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基因枪法获得转CBF4基因蒙农杂种冰草的研究 被引量:3
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作者 徐春波 王勇 +2 位作者 赵来喜 赵海霞 米福贵 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期24-28,共5页
为快速培育出优良的冰草品种,以蒙农杂种冰草(Agropyron cristatum×A.desertorumcv.Mengnong)幼穗为材料,以拟南芥外源脱水应答转录因子CBF4基因为目的基因,利用基因枪轰击蒙农杂种冰草幼穗诱导愈伤组织,经筛选后获得了抗性转化植... 为快速培育出优良的冰草品种,以蒙农杂种冰草(Agropyron cristatum×A.desertorumcv.Mengnong)幼穗为材料,以拟南芥外源脱水应答转录因子CBF4基因为目的基因,利用基因枪轰击蒙农杂种冰草幼穗诱导愈伤组织,经筛选后获得了抗性转化植株,进一步经PCR和RT-PCR检测得到了670bp左右的电泳条带,表明CBF4基因已在蒙农杂种冰草中得到表达。 展开更多
关键词 蒙农杂种冰草 cbf4基因 遗传转化 抗旱性
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大白菜CBF4基因的克隆和遗传进化分析 被引量:5
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作者 李利斌 刘立锋 +2 位作者 王殿峰 刘国明 高建伟 《山东农业科学》 2009年第4期1-4,共4页
采用RT-PCR法,从大白菜(Brassica rapasubsp.pekinensis)河头早中克隆了拟南芥CBF4的同源基因BrCBF4,并对它的序列特征、蛋白结构和遗传进化进行了分析。结果表明,BrCBF4全长663 bp,编码一个包含220个氨基酸残基和具有典型AP2结构域的蛋... 采用RT-PCR法,从大白菜(Brassica rapasubsp.pekinensis)河头早中克隆了拟南芥CBF4的同源基因BrCBF4,并对它的序列特征、蛋白结构和遗传进化进行了分析。结果表明,BrCBF4全长663 bp,编码一个包含220个氨基酸残基和具有典型AP2结构域的蛋白,并且含有两个潜在的豆蔻酰化位点。遗传进化分析表明,BrCBF4与BjDREB1-2的关系最近,与拟南芥AtCBF4同属一个类群,而AtCBF1,2,3与大白菜的BrCBF1,2,3及其它芸薹属植物相关基因分属另一个类群。推测BrCBF4与BjDREB1-2、AtCBF4为直系同源基因,在功能上相似,而与BrCBF1,2,3存在功能上的分化。本研究为进一步研究BrCBF4在大白菜非生物逆境响应中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大白菜 cbf4 克隆 蛋白结构分析 遗传进化
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转录因子CBF4基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:2
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作者 徐春波 王勇 +1 位作者 赵海霞 李兴酉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期53-56,共4页
为应用转录因子CBF4基因对苜蓿进行抗逆性改良,试验利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabi-dopsis thaliana)植株中克隆了CBF4基因,与GenBank中基因序列同源性可达99.41%,并将该基因连接到植物表达载体PBI121中,成功构建了适于苜... 为应用转录因子CBF4基因对苜蓿进行抗逆性改良,试验利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabi-dopsis thaliana)植株中克隆了CBF4基因,与GenBank中基因序列同源性可达99.41%,并将该基因连接到植物表达载体PBI121中,成功构建了适于苜蓿农杆菌遗传转化的植物表达载体,为下一步利用CBF4基因快速培育耐逆性强的苜蓿新品种奠定了基础。 展开更多
关键词 cbf4 拟南芥 克隆 表达载体构建
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拟南芥转录因子CBF1和CBF4基因的克隆与序列分析
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作者 徐春波 王勇 +2 位作者 杨志如 赵海霞 李兴酉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期85-89,共5页
利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株中扩增出CBF1和CBF4基因,并将其连接到pGEM-Tvector载体上。PCR和酶切鉴定后进行基因测序,结果表明所克隆的CBF1和CBF4基因序列与GenBank中基因序列同源性分别可达99.84%... 利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株中扩增出CBF1和CBF4基因,并将其连接到pGEM-Tvector载体上。PCR和酶切鉴定后进行基因测序,结果表明所克隆的CBF1和CBF4基因序列与GenBank中基因序列同源性分别可达99.84%和99.41%,说明这两个片段确为拟南芥CBF1和CBF4基因。 展开更多
关键词 CBF1 cbf4 拟南芥 PCR 克隆
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葡萄CBF4基因生物信息学及其对低温和硅酸钾响应分析 被引量:1
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作者 张红梅 王旺田 +3 位作者 张芮 杨科 王宝强 王翠玲 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1433-1440,共8页
为探究葡萄CBF4基因的结构和表达特征,该研究以葡萄为材料,对葡萄CBF4基因进行生物信息学及低温和硅酸钾响应分析。结果表明:(1)CBF4蛋白定位在细胞核,有5个磷酸化位点和14个糖基化位点,无信号肽,是一个亲水的、脂溶性较差的膜外蛋白。... 为探究葡萄CBF4基因的结构和表达特征,该研究以葡萄为材料,对葡萄CBF4基因进行生物信息学及低温和硅酸钾响应分析。结果表明:(1)CBF4蛋白定位在细胞核,有5个磷酸化位点和14个糖基化位点,无信号肽,是一个亲水的、脂溶性较差的膜外蛋白。二级结构以无规则卷曲为主,比例为56.88%。该蛋白包含一个AP2/EREBP结构域。(2)CBF4蛋白的多序列和系统进化分析表明酿酒葡萄与美洲葡萄的同源性最高、亲缘关系最近。(3)荧光定量PCR分析显示,低温胁迫后CBF4基因在葡萄叶片中表达水平上调,说明CBF4基因可能参与了葡萄叶片低温胁迫的响应。低温条件下,施加硅酸钾CBF4基因表达具有差异性,说明该基因在不同的葡萄组织中对硅酸钾的响应机制可能不同。以上结果为进一步研究葡萄CBF4基因的功能和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄 cbf4基因 低温胁迫 生物信息学 QRT-PCR
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冰草组织培养再生体系建立及耐旱转基因研究 被引量:5
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作者 霍秀文 云锦凤 +1 位作者 米福贵 魏建华 《草地学报》 CAS CSCD 2005年第2期172-173,共2页
本研究以冰草属植物中的4个品种——蒙古冰草新品系(A.mongolicumKeng)、航道冰草(A.cristatumcv.Fairway)、诺丹冰草(A.desertorumcv.Nordan)和一个种间杂种冰草——蒙农杂种冰草(A.cristatum×A.desertorumcv.Hycrest-Mengnong)... 本研究以冰草属植物中的4个品种——蒙古冰草新品系(A.mongolicumKeng)、航道冰草(A.cristatumcv.Fairway)、诺丹冰草(A.desertorumcv.Nordan)和一个种间杂种冰草——蒙农杂种冰草(A.cristatum×A.desertorumcv.Hycrest-Mengnong)为材料,分别以幼穗为外植体建立了冰草组织培养再生体系。在此基础上,以调控脯氨酸生物合成最后一步的关键酶的突变体基因P5CS为目标基因,bar基因为筛选标记基因,用基因枪法轰击幼穗诱导的愈伤组织,获得转基因植株。利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsisthaliana)基因组DNA中分离得到了CBF4及其启动子,并对CBF4启动子进行了序列分析和初步的功能分析。结果表明:1.冰草幼穗的取样时期为孕穗期,长度介于1.0~3.0cm的幼穗为最适宜的外植体;诱导愈伤组织的最适培养基为改良MS+2,4-D2.0mg/L,诱导率83.5%;分化培养基为MS+KT0.2mg/L,分化率74.5%;生根培养基为1/2MS,生根率100%。2.以幼穗诱导的愈伤组织为受体,采用基因枪轰击法转化冰草获得转基因植株;PCR和Southern检测表明外源基因P5CS已整合到冰草属植物基因组DNA中;RT-PCR检测表明目的基因已在冰草转基因植株的转录水平表达;P5CS基因的遗传转化率为0.09%~0.11%。3.采用PCR方法从拟南芥中分离了CBF4基因及其启动子序列。 展开更多
关键词 组织培养 转基因研究 体系建立 耐旱 冰草属植物 外植体建立 蒙古冰草 航道冰草 诺丹冰草 种间杂种 再生体系 新品系 cv 幼穗
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