过敏毒素受体(C3aR)在db/db糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达及病理意义分析 被引量：14

1

作者 郑敬民 朱小东 +4 位作者 张明超 王建平 徐丽丽 谌达程 刘志红 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第8期847-854,共8页

利用半定量RT-PCR、免疫组化和Western blotting的方法,同时从mRNA水平和蛋白质水平对过敏毒素受体(C3aR)在不同病理阶段的2型糖尿病肾病模型小鼠——db/db小鼠肾脏中的表达情况进行了较为系统的分析.结果发现:a.在糖尿病前的db/db小鼠(... 利用半定量RT-PCR、免疫组化和Western blotting的方法,同时从mRNA水平和蛋白质水平对过敏毒素受体(C3aR)在不同病理阶段的2型糖尿病肾病模型小鼠——db/db小鼠肾脏中的表达情况进行了较为系统的分析.结果发现:a.在糖尿病前的db/db小鼠(4周龄的db/db小鼠),C3aR与作为正常对照的db/m小鼠相比没有明显差异.随着肥胖的加剧,高血糖、蛋白尿的发生和发展,C3aR在db/db小鼠肾脏中的表达显著升高.b.免疫组化分析显示,C3aR广泛地表达于db/m和db/db小鼠肾脏的皮质和髓质,分布于肾脏的上皮细胞中(包括肾小管上皮细胞、肾小球中的脏层上皮细胞(足细胞)和壁层上皮细胞).从部位来看,皮髓交界处的肾小管中C3aR表达量明显要比其他部位的多.在肾小球,C3aR特异地存在于足细胞部位.在db/m小鼠,不同周龄小鼠肾脏中C3aR的表达量并没有明显变化,但在db/db小鼠,从8周龄开始,分布在db/db小鼠肾小管上皮细胞和小球足细胞中的C3aR均随小鼠周龄的增加而增加,至少在时间上,与小鼠糖尿病肾病的发生发展相关,其中尤以足细胞中和皮髓交界处肾小管上皮细胞中的变化最为明显.c.在糖尿病肾病小鼠中高表达C3aR的肾小管上皮细胞常有空泡变性的情况.上述工作印证了先前对2型糖尿病肾病患者肾小球基因表达谱的分析结果,更加明确了C3aR与糖尿病肾病的相关性,同时揭示了C3aR在正常小鼠和糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达、分布和变化规律,有利于进一步揭示C3aR的功能及其在糖尿病肾病发生、发展过程中的可能作用,探讨糖尿病肾病的分子机制。 展开更多

关键词 过敏毒素受体(c3ar) 过敏毒素 糖尿病肾病 DB/DB小鼠

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高表达C3aR的肥大细胞在糖尿病肾病患者肾组织中的分布及病理意义分析 被引量：9

2

作者 郑敬民 朱小东 +3 位作者 张明超 王建平 徐丽丽 刘志红 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第3期262-268,共7页

选取糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期、中期、晚期以及正常移植供肾各15例,分别作为DN早期组、中期组、晚期组和正常对照组,利用各个病例的肾穿刺组织标本进行C3aR免疫组化染色,分析各组中高表达C3aR浸润细胞的数量和分布特点... 选取糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期、中期、晚期以及正常移植供肾各15例,分别作为DN早期组、中期组、晚期组和正常对照组,利用各个病例的肾穿刺组织标本进行C3aR免疫组化染色,分析各组中高表达C3aR浸润细胞的数量和分布特点,及其与DN发生、发展的关系,利用连续切片、免疫荧光双套色染色、免疫电镜、及甲苯胺蓝染色等方法对DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞进行细胞类型鉴定.结果表明:a.光镜和免疫电镜的形态学分析显示DN患者肾组织中高表达C3aR的浸润细胞在形态上具有肥大细胞的特点,免疫荧光双套色染色的分析显示,C3aR浸润细胞CD45阴性、CD68和类胰蛋白酶阳性,与肥大细胞的情况一致,甲苯胺蓝特殊染色进一步证实这是一种肥大细胞.b.正常移植供肾组织中虽有肥大细胞分布,但数量很少;从DN早期组到DN中期组,再到DN晚期组,肾组织中肥大细胞的数量有一种不断增加的趋势;DN患者肾组织肥大细胞的数量与24 h尿蛋白和血肌酐水平均具有很好的线性相关性.上述工作不仅揭示了在DN发生发展过程中肥大细胞在DN患者肾组织中的数量及分布情况,提示肥大细胞很可能参与了DN的发生发展过程,同时,DN患者肾组织肥大细胞高表达过敏毒素C3a受体C3aR的发现,提示C3a/C3aR通路很可能在DN患者肥大细胞的招募和激活过程中有重要作用. 展开更多

关键词 过敏毒素 糖尿病肾病 c3ar 肥大细胞

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C3aR过度活化与糖尿病肾病肾组织损伤的关系 被引量：2

3

作者 郑敬民 陈德君 +3 位作者 尹广 赵文紧 李丽娟 王建平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第7期752-762,共11页

C3aR是补体C3裂解产物C3a的受体.最近的一些研究提示C3aR通路可能参与了糖尿病肾病(DN)的病理过程,但有关C3aR通路在DN中的确切病理作用及有关机制远未清楚.需要特别指出的是,现有的有关C3aR参与DN肾组织损伤的证据主要来自一些动物模... C3aR是补体C3裂解产物C3a的受体.最近的一些研究提示C3aR通路可能参与了糖尿病肾病(DN)的病理过程,但有关C3aR通路在DN中的确切病理作用及有关机制远未清楚.需要特别指出的是,现有的有关C3aR参与DN肾组织损伤的证据主要来自一些动物模型的研究,临床上尚缺乏较为系统全面的对DN患者肾组织C3aR通路与肾组织损伤关系的观察分析.为此,本文首次以较大的样本量分析了不同病理时期DN患者肾组织C3aR和C3a的表达变化情况及其与DN患者肾组织损伤的相关性.在此基础上,进而利用体外细胞模型,对高糖环境下C3aR活化致肾小球足细胞损伤的作用及机制进行了探讨.结果显示:a.与正常对照组相比,DN患者肾组织C3a和C3aR的表达水平随DN的进展而升高,C3aR在DN患者肾组织中的表达上调主要见于肾小管上皮细胞和肾小球足细胞;b.DN患者肾组织C3aR和C3a水平与患者肾组织损伤程度,特别是小管和小管间质损伤程度、肾小球足细胞损伤程度具有显著相关性;c.外加C3a激活C3aR可使高糖环境中的足细胞的细胞骨架发生明显改变、足细胞标记分子表达下调、足细胞通透性增加.这些结果说明:a.DN患者肾组织中确实存在C3a/C3aR轴过度活化的现象;b.C3a/C3aR轴的过度活化很可能在DN患者肾组织损伤,特别是小管和小管间质损伤、肾小球足细胞损伤中具有重要作用;c.可能通过破坏成熟足细胞特有的细胞骨架,改变足细胞标记分子表达,增加足细胞的通透性,C3a/C3aR轴过度活化参与DN足细胞损伤过程.本文不仅为C3a/C3aR通路参与DN病理过程提供了新的必不可少的临床证据,也增加了对C3a/C3aR通路过度活化致DN患者肾组织损伤机制,特别是肾小球足细胞损伤机制的了解,这对于拓展对DN病理机制的认识,发展DN防治新思路,无疑都是有益的. 展开更多

关键词 C3A c3ar 糖尿病肾病 足细胞 表达 病理意义

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过表达C3AR1基因促进HL-60细胞迁移和侵袭 被引量：3

4

作者 颜青 李争 +3 位作者 岑建农 陈苏宁 潘健 胡绍燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-7,共7页

目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制。方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达。利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流... 目的:探讨C3AR1基因对人早幼粒细胞白血病细胞株(Human promyelocytic leukemia cells,HL-60)迁移及侵袭的作用和机制。方法:构建HL-60-C3AR1过度表达的细胞株并使其稳转表达。利用transwell小室进行迁移及侵袭实验,应用PCR array和流式细胞术探讨其可能的机制。结果:合适C3AR1的HL-60细胞在C3a和SDF-1的作用下,其细胞迁移及侵袭能力较转染空载体细胞明显增强。PCR array检测发现,包括CCL2在内的16个基因显著上调,而4个基因显著性下调,但与CXCR4基因的表达无关。结论:C3a和SDF-1促进过表达的C3AR1细胞迁移和侵袭,其机制与调控CCL2等相关基因有关。 展开更多

关键词 c3ar1基因 急性粒细胞白血病 细胞迁移 细胞侵袭

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C3aR慢病毒表达载体的构建及在肾小管上皮细胞中的转染实验 被引量：2

5

作者 郑敬民 尹广 +1 位作者 赵文紧 刘志红 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第4期355-359,共5页

目的前期研究发现C3aR在糖尿病肾病肾小管上皮细胞中表达上调,但其在糖尿病肾病中的病理意义未知,且有关肾组织C3aR的确切生理和病理意义亦仍不清楚。文中通过构建C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的肾小管上皮细胞株,为探讨C3aR在肾组... 目的前期研究发现C3aR在糖尿病肾病肾小管上皮细胞中表达上调,但其在糖尿病肾病中的病理意义未知,且有关肾组织C3aR的确切生理和病理意义亦仍不清楚。文中通过构建C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的肾小管上皮细胞株,为探讨C3aR在肾组织小管上皮细胞中的确切生理和病理意义提供细胞模型。方法根据人C3aR mRNA序列合成人C3aR基因,将其克隆到慢病毒表达载体p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3aR慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP;经测序验证正确后,用构建的慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293T细胞,包装成C3aR表达重组慢病毒;以C3aR表达重组慢病毒感染人肾小管上皮细胞系HK2,经药物筛选得到杀稻瘟菌素抗性细胞克隆;经荧光定量PCR分析和细胞免疫化学分析,鉴定出稳定过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株。结果 1对构建成的C3aR慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP进行全序列测序验证显示序列完全正确。2以构建的C3aR慢病毒表达载体和包装质粒(p LP1、p LP2和p LP/VSVG)共转染293T细胞,48 h后收集细胞培养上清,得到了滴度约为5×108个/m L的慢病毒液。3成功进行了C3aR重组慢病毒对HK2细胞的转染,得到了稳定转染了C3aR重组慢病毒的HK2细胞株HK2-C3aR;基于荧光定量PCR和细胞免疫化学染色的分析证实HK2-C3aR细胞株中C3aR表达水平较HK2非转染对照细胞高(2.33±0.45 vs 1.00±0.09,P<0.05)。结论成功构建了C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株,为进一步研究C3aR过表达在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3aR在其他细胞中的生理、病理意义创造了条件。 展开更多

关键词 c3ar 慢病毒 肾小管上皮细胞 过表达

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缺氧通过HIF-1α/NF-κB通路诱导肾小管上皮细胞C3aR表达（英文）

6

作者 赵文紧 陈德君 +1 位作者 李丽娟 郑敬民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第11期999-1006,共8页

C3aR是补体C3a的受体.在肾脏,已发现C3aR表达于包括肾小管上皮细胞在内的多种细胞.在特定的病理情况下,C3aR表达上调并参与多种肾脏疾病的病理过程,但有关C3aR在肾脏细胞中的表达调控机制仍不清楚.小管间质缺氧是肾脏疾病中的一种常见现... C3aR是补体C3a的受体.在肾脏,已发现C3aR表达于包括肾小管上皮细胞在内的多种细胞.在特定的病理情况下,C3aR表达上调并参与多种肾脏疾病的病理过程,但有关C3aR在肾脏细胞中的表达调控机制仍不清楚.小管间质缺氧是肾脏疾病中的一种常见现象,也是一种重要致病因素.为了探讨缺氧对C3aR的表达调控作用,本文利用体外缺氧模型,对模型条件下C3aR在肾小管上皮细胞中的表达变化情况进行了分析,同时检测了HIF-1α和NF-κB的表达变化及活化情况,以及HIF-1α和NF-κB抑制剂对C3aR的表达影响情况.结果发现缺氧可诱导C3aR mRNA及蛋白质水平的表达上调、HIF-1α和NF-κB的核转移.HIF-1α和NF-κB抑制剂可阻断缺氧对C3aR的诱导作用,且HIF-1α抑制剂可抑制NF-κB的核转移.这些结果说明缺氧可通过HIF-1α/NF-κB通路诱导肾小管上皮细胞C3aR的表达.考虑到C3aR活化可促进肾小管的损伤,我们推测C3aR通路可能参与了缺氧和NF-κB诱导的肾小管损伤过程,可能是防治缺氧和NF-κB诱导肾组织损伤的一个新靶标. 展开更多

关键词 缺氧 c3ar HIF-1Α NF-ΚB 表达

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低表达C3aR人肾足细胞的构建及鉴定

7

作者 赵文紧 张志诚 郑敬民 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1167-1170,共4页

目的前期的研究中发现过敏性毒素C3a受体(C3aR)在糖尿病肾病病中表达增加,但在糖尿病肾中的病理意义及其在肾组织足细胞中的生理作用尚不清楚,文中通过建立C3aR低表达的肾足细胞系(HPC-C3aRsiRNA),为研究C3aR在肾足细胞中的生理功能提... 目的前期的研究中发现过敏性毒素C3a受体(C3aR)在糖尿病肾病病中表达增加,但在糖尿病肾中的病理意义及其在肾组织足细胞中的生理作用尚不清楚,文中通过建立C3aR低表达的肾足细胞系(HPC-C3aRsiRNA),为研究C3aR在肾足细胞中的生理功能提供细胞模型。方法设计合成人C3aR小干扰RNA(C3aRsiRNA),将其克隆到慢病毒表达载体中,通过与包装质粒共转染293T细胞,包装成C3aRsiRNA慢病毒,利用C3aRsiRNA慢病毒感染人肾足细胞HPC,根据C3aRsiRNA慢病毒具有嘌呤霉素抗性基因的特点筛选稳定转染的人肾足细胞。通过荧光定量PCR分析稳定转染的足细胞C3aR的mRNA表达水平,Western blot和免疫组化染色分析稳定转染的肾足细胞C3aR蛋白水平,鉴定稳定转染C3aR低表达的肾足细胞系。结果荧光定量PCR结果显示,与HPC-C3aRsiRNA细胞C3aR的mRNA水平(0.26±0.04)比较,非转染HPC细胞(1.00±0.13)和阴性对照(1.07±0.16)显著升高(P<0.05)。免疫组化染色显示HPC-C3aRsiRNA细胞的C3aR蛋白水平显著降低。Western blot结果显示,与HPC-C3aRsiRNA C3aR蛋白表达(0.62±0.09)比较,正常HPC、阴性转染的HPC表达(1.00±0.08、1.00±0.22)显著升高(P<0.05)。结论成功构建了C3aR低表达的肾足细胞系,可为进一步了解C3aR在肾中的生理作用提供细胞模型。 展开更多

关键词 低表达 c3ar 转染 人肾足细胞

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C3AR1基因对K562细胞增殖及侵袭影响的机制研究

8

作者 李娟 封忠昕 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2017年第A01期81-83,共3页

目的探讨C3AR1基因对慢性髓性白血病细胞株K562细胞增殖及侵袭的影响和作用机制。方法构建HL-60-C3AR1过表达的K562细胞株并使其稳转表达,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting检测C3AR1的mRNA和蛋白表达水平,采用CCK8... 目的探讨C3AR1基因对慢性髓性白血病细胞株K562细胞增殖及侵袭的影响和作用机制。方法构建HL-60-C3AR1过表达的K562细胞株并使其稳转表达,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting检测C3AR1的mRNA和蛋白表达水平,采用CCK8法检测转染后细胞的增殖,通过trans well实验评估其侵袭性,通过PCR芯片表达对比分析其可能的机制。结果 K562-C3AR1的C3AR1 mRNA表达和C3AR1蛋白表达量均显著高于K562和K562-Scramble组(P<0.05),过表达C3AR1的细胞增殖性和细胞侵袭性显著高于K562和K562-Scramble组(P<0.05),PCR芯片检测显示共有7个基因表达增高和4个基因表达下调可能参与K562-C3AR1相对K562发生增殖及侵袭的相关基因。结论本研究表明了C3AR1基因对K562细胞具有重要的调控作用,过表达C3AR1基因能促进K562细胞增殖及侵袭,其具体机制可能与DBH和EPS8等基因有关。 展开更多

关键词 白血病 髓样 c3ar1基因 细胞增殖 肿瘤侵润

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糖尿病肾病患者肾脏组织中C3aR、C5aR的表达 被引量：2

9

作者 张朝甲 张颖 +4 位作者 刘璐 杜路 周雅丽 权松霞 邢国兰 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2014年第2期162-165,共4页

目的:探讨C3aR、C5aR在糖尿病肾病(DN)患者肾脏组织中的表达情况及其在DN发病中的作用。方法:选取DN患者的肾脏组织标本45例作为病例组,其中肾脏病理分级为Ⅰ+Ⅱ级13例、Ⅲ级21例、Ⅳ级11例;同时选取肾脏肿瘤患者手术切除的正常肾脏组... 目的:探讨C3aR、C5aR在糖尿病肾病(DN)患者肾脏组织中的表达情况及其在DN发病中的作用。方法:选取DN患者的肾脏组织标本45例作为病例组,其中肾脏病理分级为Ⅰ+Ⅱ级13例、Ⅲ级21例、Ⅳ级11例;同时选取肾脏肿瘤患者手术切除的正常肾脏组织标本10例作为对照组。常规方法检测24 h尿蛋白定量、红细胞沉降率(ESR)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、C-反应蛋白(CRP)等指标。采用免疫组化方法检测C3aR、C5aR在各组肾脏组织中的表达。分析DN患者肾脏病理损伤级别与临床指标、肾组织中C3aR和C5aR阳性细胞百分比与临床指标的相关性。结果:C3aR和C5aR在各级DN患者肾脏组织中的表达均高于对照组,且随着DN肾脏病理损伤的加重,其表达逐渐增强(F=45.987,40.426,P均<0.001)。DN患者肾脏病理损伤级别与24 h尿蛋白定量、Scr、BUN、CRP等呈正相关(rS分别为0.529、0.595、0.516和0.425,P均<0.05);C3aR在肾脏组织中的阳性细胞百分比与24 h尿蛋白定量、Scr、BUN、CRP及ESR呈正相关(rS分别为0.342、0.613、0.489、0.315和0.321,P均<0.05)。C5aR在肾脏组织中的阳性细胞百分比也与以上指标呈正相关(rS分别为0.403、0.441、0.315、0.456和0.389,P均<0.05)。结论:C3aR、C5aR参与DN的发生与发展,在DN的病理损伤过程中起重要作用。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 c3ar C5AR

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C3aR激动剂对小鼠原代肾小管上皮细胞表型的影响 被引量：1

10

作者 张志诚 赵文紧 郑敬民 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第1期14-20,共7页

目的细胞转分化(EMT)过程中的关键事件包括上皮细胞蛋白(E-钙黏蛋白)的表达下调,细胞活动性增加,细胞基质生成的增多等。文中构建鼠原代肾小管上皮细胞培养及鉴定的方法,探究C3aR活化是否能够引起小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化... 目的细胞转分化(EMT)过程中的关键事件包括上皮细胞蛋白(E-钙黏蛋白)的表达下调,细胞活动性增加,细胞基质生成的增多等。文中构建鼠原代肾小管上皮细胞培养及鉴定的方法,探究C3aR活化是否能够引起小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化。方法用鼠肾小管节段进行肾小管上皮细胞原代培养,以免疫细胞化学及免疫荧光染色对上皮细胞进行鉴定。实验分为正常对照组,C3aR激动剂设5个浓度组:0.1、1、100、500及2000 ng/m L组,另设3个时间组:6、12及24 h组。利用Real-time PCR检测肾小管上皮细胞中E-钙黏蛋白、α-SMA及collagen I的表达水平变化;利用Western blot检测E-钙黏蛋白、α-SMA蛋白表达水平;用鬼笔环肽对上皮细胞行骨架染色,观察细胞骨架形态变化。结果与正常对照组比较,C3aR激动剂组(500 ng/m L、刺激48 h)抑制E-钙黏蛋白表达[(0.950±0.901)vs(0.650±0.221),P<0.05],上调α-SMA[(1.380±0.062)vs(1.600±0.103),P<0.05]和collagen I表达(P<0.05),且各自表达趋势与C3aR激动剂呈时间和剂量依赖关系。细胞骨架染色结果显示,随着C3aR激动剂刺激时间的延长,上皮细胞内由激动蛋白构成的应力纤维生成逐渐增多。结论成功构建了小鼠肾小管上皮细胞原代培养及鉴定的方法;C3aR活化能够促进肾小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化,并在肾纤维化的发生发展中起一定作用,预示C3aR可能成为肾疾病治疗的新靶点。 展开更多

关键词 肾小管上皮细胞 原代培养 c3ar激动剂 上皮-间质细胞转分化

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抑制补体C3/C3aR信号可改善新生大鼠脑生发基质出血后脑积水 被引量：1

11

作者 耿军军 唐俊 +7 位作者 王莉莉 谭强 张建波 张波 王玲 魏林节 陈志 朱刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第22期2137-2145,共9页

目的研究补体C3/C3aR信号介导的小胶质细胞-星型胶质细胞交互作用对新生大鼠脑生发基质出血(germinal matrix hemorrhage,GMH)后脑积水的影响。方法检测胶原酶(Ⅶ-S型)诱导新生大鼠GMH后脑室周围C3和C3aR的表达。给予GMH大鼠C3aR拮抗剂(... 目的研究补体C3/C3aR信号介导的小胶质细胞-星型胶质细胞交互作用对新生大鼠脑生发基质出血(germinal matrix hemorrhage,GMH)后脑积水的影响。方法检测胶原酶(Ⅶ-S型)诱导新生大鼠GMH后脑室周围C3和C3aR的表达。给予GMH大鼠C3aR拮抗剂(complement C3 receptor antagonist,C3aRA)处理,观察C3aRA对大鼠脑积水(MRI检查)、学习记忆功能(水迷宫实验)和炎症反应(IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1和水通道蛋白4)的影响。结果 GMH后脑室周围补体C3和C3aR表达上调,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1表达增加,星形胶质细胞表面的水通道蛋白4异位表达且表达增加,脑室扩张,脑皮质和海马受压,大鼠学习记忆功能下降。阻断C3/C3aR信号后,相应C3、C3aR表达减低,炎症因子分泌减少,脑室扩张程度及皮层/海马受压减轻,大鼠神经功能明显改善。结论 GMH后星形胶质细胞上调并释放C3, C3与小胶质细胞表面的C3aR结合促进炎症反应,加重脑积水。星形胶质细胞表面水通道蛋白4的异位表达可能对GMH后脑积水产生起重要作用。 展开更多

关键词 生发基质出血 脑积水 C3/c3ar信号 星形胶质细胞 小胶质细胞 水通道蛋白4 大鼠 新生

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C3a分泌性表达载体及过表达C3a肾小管上皮细胞株的构建 被引量：1

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作者 郑敬民 尹广 +1 位作者 恽时锋 赵文紧 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第6期584-589,共6页

目的已有的研究表明包括糖尿病肾病在内的多种肾病患者肾小管上皮细胞存在C3a/C3aR轴过度活化现象,但有关C3a/C3aR轴过度活化在肾小管上皮细胞中的病理意义未知。文中构建分泌性过表达C3a的肾小肾小管上皮细胞株,为探讨各种病理情况下C3... 目的已有的研究表明包括糖尿病肾病在内的多种肾病患者肾小管上皮细胞存在C3a/C3aR轴过度活化现象,但有关C3a/C3aR轴过度活化在肾小管上皮细胞中的病理意义未知。文中构建分泌性过表达C3a的肾小肾小管上皮细胞株,为探讨各种病理情况下C3a/C3aR轴过度活化的病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3a分泌性表达单元,将其克隆到慢病毒表达载体p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;将p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞,包装成C3a表达重组慢病毒LV-C3a;以LV-C3a感染人肾小管上皮细胞系HK2,根据LV-C3a上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点,以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆;利用荧光定量PCR和ELISA方法对稳定转染细胞克隆的C3a表达水平和分泌情况进行分析,从中鉴定出稳定分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株。结果 1成功构建了序列完全正确的C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;2成功进行了重组慢病毒包装,得到了高滴度(5×108个/m L)的C3a表达重组慢病毒LV-C3a;3成功进行了LV-C3a对HK2细胞的转染,得到了稳定转染LV-C3a的HK2细胞株;基于荧光定量PCR和ELISA的分析证实,与HK2细胞比较,HK2-C3a细胞株中C3a mRNA表达水平显著升高[(1.0±0.5)vs(1 321.0±18.0),P<0.01],分泌的C3a水平显著升高[(0.3±0.2)ng/m L vs(249.0±37.0)ng/m L,P<0.01]。结论成功构建的C3a分泌性慢病毒表达载体和分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株为进一步研究各种病理情景中C3a/C3aR过度活化在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3a/C3aR过度活化在其他细胞中的病理意义创造了条件。 展开更多

关键词 C3A c3ar 慢病毒 肾小管上皮细胞 过表达

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红景天苷通过抑制补体C3的表达对MCAO大鼠缺血侧NeuN、Egr4影响的研究 被引量：11

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作者 宋百颖 赖文芳 +3 位作者 苏燕青 林昱 许文 洪桂祝 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1579-1584,共6页

目的探讨红景天苷(Sal)通过抑制补体C3对MCAO大鼠缺血侧NeuN、Egr4的影响。方法♂成年SD大鼠45只随机分成假手术组(sham)、模型组(MCAO)以及给药组(MCAO+Sal),采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion,M... 目的探讨红景天苷(Sal)通过抑制补体C3对MCAO大鼠缺血侧NeuN、Egr4的影响。方法♂成年SD大鼠45只随机分成假手术组(sham)、模型组(MCAO)以及给药组(MCAO+Sal),采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO)。连续给药1、2 d,免疫荧光及Western blot技术检测NeuN、Egr4、C3和C1的表达情况。健康成年♂SD大鼠60只,随机分为6组,即人工脑脊液+sham、C3aR抑制剂+sham、人工脑脊液+MCAO、C3aR抑制剂+MCAO、人工脑脊液+MCAO+Sal、C3aR抑制剂+MCAO+Sal,Western blot技术检测缺血侧脑组织NeuN、Egr4、C3的表达水平。结果与MCAO组相比较,经红景天苷分别作用1、2d能使C3的表达明显下降,NeuN表达明显上升;红景天苷给药1d对Egr4和C1没有明显影响,但能使2 d的Egr4表达明显升高,C1的表达明显降低;经连续2d侧脑室注射C3aR抑制剂或给予红景天苷后,均能够降低P50的表达,增加Egr4的表达。结论红景天苷对脑缺血/再灌注亚急性期的神经保护功能可能与抑制补体经典途径的激活,调控Egrs,从而减少细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 红景天苷 脑缺血/再灌注 补体C3 c3ar抑制剂 Egrs 神经保护

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丹酚酸A抑制血小板及中性粒细胞活化作用 被引量：3

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作者 杨文杰 王洪颖 +11 位作者 马璐璐 方乐玉 李春晓 张璐莎 张丽媛 王倩怡 孙伟 冷雨泽 薛岳进 李梦瑶 陈璐 王虹 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期740-748,共9页

目的探究丹酚酸A(Salvianolic acid A,SAA)对心肌梗死(myocardial infarction,MI)小鼠心脏的血小板募集、活化及中性粒细胞的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为:假手术组、MI模型组、SAA(5、10 mg·kg^(-1))组、替罗非班(tirofiban,0... 目的探究丹酚酸A(Salvianolic acid A,SAA)对心肌梗死(myocardial infarction,MI)小鼠心脏的血小板募集、活化及中性粒细胞的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为:假手术组、MI模型组、SAA(5、10 mg·kg^(-1))组、替罗非班(tirofiban,0.87 mg·kg^(-1))组,尾静脉注射给药3 d。超声心动、HE染色检测小鼠心功能及梗死面积;采用IHC、FCS、ELISA、Western blot等方法探讨了SAA抑制血小板及中性粒细胞活化作用。结果与MI组相比,SAA可以改善MI小鼠的心功能及心脏病理变化;减少心肌组织中CD42c及外周血中CD62p的表达,同时不影响尾出血时间;降低ADP诱导的血小板活化,上调p-VASP/VASP比值,降低p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值;减少心肌组织中CD45、Ly6G以及CXCL1和CXCL2表达;减少心肌组织中补体成分C3aR的表达,降低C3a诱导的NE、MPO、MMP9、LF的水平。结论SAA具有通过抑制PI3K/AKT、VASP通路发挥抗血小板活化的作用,以及通过抑制C3aR及C3a的表达发挥抗中性粒细胞活化的作用。 展开更多

关键词 丹酚酸A 心肌梗死 中性粒细胞 血小板募集 血小板活化 补体c3ar

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复合物C_6H_5CH_3…Ar分子间的外部振动频率 被引量：4

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作者 胡义华 吴怀选 +3 位作者 陈丽 刘美希 王小涓 杨世和 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第8期1447-1450,共4页

利用双光子共振电离光谱和飞行时间质谱技术在超声分子束中观察到 C6H5CH3 …Ar的振动光谱 .借助同位素光谱效应、内转动能级和分子间振动能级的理论计算 ,合理地归属了涉及 CH3 转动和 Ar原子振动的光谱 ,并由此获得复合物分子间各种... 利用双光子共振电离光谱和飞行时间质谱技术在超声分子束中观察到 C6H5CH3 …Ar的振动光谱 .借助同位素光谱效应、内转动能级和分子间振动能级的理论计算 ,合理地归属了涉及 CH3 转动和 Ar原子振动的光谱 ,并由此获得复合物分子间各种模式的振动频率 . 展开更多

关键词 复合物 C6H5CH3…Ar分子 外部振动频率 共振光电离光谱 内转动光谱 范德华振动

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