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人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析 被引量:1
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作者 毛朝明 王胜军 +8 位作者 仝佳 马洁 杨敏 许小朋 邱谷风 唐莉 邵启祥 李龙 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1059-1063,共5页
目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2... 目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2+-IMAC柱纯化、复性并Western blot鉴定,流式细胞仪检测sAITRL重组蛋白的结合活性,增殖试验分析sAITRL的生物学活性。结果:成功构建了sAITRL-pQE30原核表达载体;表达相对分子质量约15kD的重组蛋白;sAITRL能与活化淋巴细胞上的天然受体AITR结合,低浓度的sAITRL能促进淋巴细胞的增殖,而在高浓度下则抑制了淋巴细胞的增殖。结论:成功表达了具有生物学活性的sAITRL重组蛋白,AITR-AITRL相互作用在调节淋巴细胞增殖过程中起重要作用。 展开更多
关键词 活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体 基因克隆 原核表达 重组蛋白
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逍遥丸对代谢相关脂肪性肝炎CYP2E1及FasL/TNF-α信号通路的影响
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作者 张馨月 张玉伟 +3 位作者 李梦琪 孟雅楠 李若瑜 苗宇船 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第7期1218-1224,共7页
目的研究逍遥丸治疗代谢相关脂肪性肝炎(MASH)大鼠的机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为对照组(CON组,n=8)和模型组(n=16),模型组给予高脂饮食+四氯化碳背部皮下注射+饥饱失常+夹尾,联合刺激4周建立MASH模型,再随机分为MOD组和逍遥丸组(... 目的研究逍遥丸治疗代谢相关脂肪性肝炎(MASH)大鼠的机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为对照组(CON组,n=8)和模型组(n=16),模型组给予高脂饮食+四氯化碳背部皮下注射+饥饱失常+夹尾,联合刺激4周建立MASH模型,再随机分为MOD组和逍遥丸组(XYW组),每组各8只。XYW组大鼠给予逍遥丸灌胃,其他两组给予0.9%氯化钠溶液灌胃。给药4周后,对不同组别大鼠的血清生化及氧化应激指标进行检测。HE染色和油红O染色对大鼠肝组织进行病理切片观察。Western blot对大鼠肝脏中细胞色素P4502E1(CYP2E1)、凋亡相关因子配体(FasL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达进行检测。RT-qPCR检测肝组织CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1 mRNA相对含量。结果XYW组大鼠的一般情况较MOD组有显著改善,肝指数较MOD组下降(P<0.01),体质量指数较MOD组上升(P<0.01);XYW组血清中三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、天冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转移酶、丙二醛、单核细胞趋化蛋白-1、TNF-α、白细胞介素(IL)-18水平较MOD组降低(均P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、IL-10水平较MOD组升高(均P<0.05);光镜下可观察到XYW组肝细胞内脂滴含量较MOD组明显减少;XYW组肝组织CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1的蛋白水平较MOD组降低(均P<0.05),CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1 mRNA相对含量较MOD组降低(均P<0.05)。结论逍遥丸通过调节CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1在MASH大鼠肝组织中的转录表达,减少肝脏脂肪酸蓄积,从而达到治疗MASH的目的。 展开更多
关键词 逍遥丸 代谢相关脂肪性肝炎 细胞色素P4502E1 凋亡相关因子配体 肿瘤坏死因子-α 转化生长因子-β1
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caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗TRAIL诱导凋亡中的作用 被引量:9
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作者 齐玲 于洪泉 +4 位作者 金宏 丁丽娟 温娜 唐泽波 李蕴潜 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期612-616,共5页
目的:对人脑胶质母细胞瘤SC189细胞株中单克隆细胞株进行研究,探讨caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡分子机制中的作用。方法:获取SC189单克隆细胞株,应用酸性磷酸酶法检测SC189单克隆细胞株对TR... 目的:对人脑胶质母细胞瘤SC189细胞株中单克隆细胞株进行研究,探讨caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡分子机制中的作用。方法:获取SC189单克隆细胞株,应用酸性磷酸酶法检测SC189单克隆细胞株对TRAIL敏感性;Western blotting检测各单克隆细胞株表达FADD、DR5、DR4及caspase-8情况;经TRAIL作用后发生caspase-8、caspase-3、caspase-9、DFF-45凋亡级联裂解反应情况。结果:获得的5株SC189单克隆细胞株,经不同浓度TRAIL作用后细胞死亡率为-5.25%~45.80%,其中4株对TRAIL抵抗,1株对TRAIL相对敏感;Western blotting检测发现FADD、DR5、DR4表达相似,caspase-8表达不同,发生抵抗的细胞株caspase-8表达明显减少,经TRAIL作用后不发生凋亡级联裂解反应;相对敏感的细胞株caspase-8表达增多,经TRAIL作用后可出现明显的凋亡级联裂解反应。结论:SC189单克隆细胞株中caspase-8表达量直接与TRAIL反应敏感性有关联。 展开更多
关键词 脑胶质母细胞瘤 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 caspase一8
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达及意义 被引量:13
4
作者 赵湜 王红祥 +2 位作者 毛红 肖娟 邹萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期65-69,共5页
为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达 ,并探讨其在白血病治疗中的意义 ,采用RT PCR方法及流式细胞术 ,对 39例急性髓系白血病细胞 (患者组 )、18例完全缓解白血病细胞 (缓解组 )和 2 1... 为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达 ,并探讨其在白血病治疗中的意义 ,采用RT PCR方法及流式细胞术 ,对 39例急性髓系白血病细胞 (患者组 )、18例完全缓解白血病细胞 (缓解组 )和 2 1例正常人骨髓或外周血单个核细胞 (对照组 )表面TRAIL及其受体的表达进行检测。结果表明 :①患者组和缓解组TRAIL、DR4和DR5表达高 ,而DcR1和DcR2表达低。②缓解组DR5的表达高于患者组。③患者组和缓解组DR5的表达均高于DR4。④患者组AML不同亚型表达TRAIL及其受体相似。结论 :TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达具有明显的差异性。DR5在TRAIL介导的急性髓系白血病细胞凋亡中起重要的作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 急性髓系白血病 基因表达
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蛇床子素对TRAIL诱导白血病HL-60细胞凋亡的作用及其相关机制研究 被引量:8
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作者 于有江 叶记林 +3 位作者 彭建明 吴爱莲 王冬艳 刘延庆 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期1016-1021,共6页
目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μm... 目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μmol/L的Osthole和40 ng/ml TRAIL单独或联合处理细胞,通过流式细胞术测定HL-60细胞凋亡和细胞线粒体膜电位(MMP)的变化,RT-PCR法检测BCL-2、BAX和DR5 mRNA的表达,用分光光度法检测Caspase-3、-8、-9活性变化。结果:100μmol/L Osthole和40 ng/ml TRAIL联合处理HL-60细胞48 h,HL-60细胞的凋亡率达(33.9±2.7)%,较单用Osthole、TRAIL均显著提高(P<0.05),同时2者联合应用能增强降低MMP和BCL-2/BAX表达比值的效果,提高DR5的表达和Caspase-3、-8、-9活性。结论:Osthole能增强TRAIL诱导HL-60细胞凋亡的敏感性,其机制可能与其激活线粒体凋亡途径和上调DR5的表达密切相关。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HL-60细胞 细胞凋亡 蛇床子素
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可溶性人TRAIL诱导胃癌细胞BGC-823凋亡的研究 被引量:7
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作者 李彦 姜政 +3 位作者 向廷秀 曾波 陶小红 王丕龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1066-1070,共5页
目的通过构建pBud-EGFP-TRAIL质粒体外观察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)对胃癌细胞BGC-823的作用。方法以EFGP基因为报告基因,sTRAIL为目的基因,构建pBud-EGFP-TRAIL双表达质粒,鉴定酶切和测序重组体。经脂质体转染法转染体外培养的胃癌细... 目的通过构建pBud-EGFP-TRAIL质粒体外观察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)对胃癌细胞BGC-823的作用。方法以EFGP基因为报告基因,sTRAIL为目的基因,构建pBud-EGFP-TRAIL双表达质粒,鉴定酶切和测序重组体。经脂质体转染法转染体外培养的胃癌细胞BGC-823,用荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR及Western blot进一步检测sTRAIL mRNA及其蛋白的表达,MTT法检测转染后对胃癌细胞的生长抑制率,TUNEL法观察细胞的凋亡情况,流式细胞仪分析转染后胃癌细胞的凋亡率。结果测序结果证实pBud-EGFP-TRAIL载体构建成功,质粒经脂质体转染后,通过表达sTRAIL蛋白对胃癌细胞发挥作用。MTT法显示转染该质粒的细胞的生长抑制率明显高于对照组,TUNEL法显示细胞核固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体。流式细胞仪结果表明转染该质粒的细胞的的凋亡率明显高于对照组。结论在体外初步证实TRAIL能诱导胃癌细胞BGC-823凋亡。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤坏死因子 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 细胞凋亡 BGC-823细胞
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DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用 被引量:10
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作者 马远方 杨东亮 +1 位作者 陆士新 陈有海 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期332-334,共3页
目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆... 目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果 :DR5在Jurkat细胞表面的表达率为 94 83% ,TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡 ,呈现明显的剂量相关性 ,TRAIL浓度在 5 0~ 10 0ng ml时 ,杀伤率达 90 %以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后 ,TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断 ,其平均阻断率达90 4 9%。结论 :DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体5 凋亡 抗DR5单克隆抗体
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藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制 被引量:9
8
作者 叶记林 吴爱莲 +3 位作者 王冬艳 彭建明 于有江 刘延庆 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期256-262,共7页
背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸... 背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和(或)GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果:联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制(抑瘤率达67.0%)和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论:GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。 展开更多
关键词 藤黄酸 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HT-29细胞 Nrf2 Bcl-2 Bax DR5
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制 被引量:7
9
作者 郑中华 李蕴潜 +3 位作者 郭敏 于洪泉 丁丽娟 齐玲 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期16-18,共3页
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人非小细胞肺癌H596细胞发生凋亡,初步阐明非小细胞肺癌细胞经TRAIL诱导凋亡的作用和机制。方法:培养H596细胞,设对照组和不同浓度(0.01、0.03、0.10、0.30、1.00、3.00、10.00、30.00... 目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人非小细胞肺癌H596细胞发生凋亡,初步阐明非小细胞肺癌细胞经TRAIL诱导凋亡的作用和机制。方法:培养H596细胞,设对照组和不同浓度(0.01、0.03、0.10、0.30、1.00、3.00、10.00、30.00和100.00μg.L-1)TRAIL组,TRAIL作用H596细胞24h后,酸性磷酸酶法检测细胞凋亡的百分率;Western blotting法检测TRAIL相关蛋白caspase-8、Bcl-2及Fas相关死亡结构域(FADD)的表达情况。结果:TRAIL浓度为0.01~0.03μg.L-1时,对H596细胞的生长无明显抑制作用,细胞出现增殖趋势;从0.10μg.L-1开始,随着TRAIL浓度升高,细胞开始出现凋亡,至10.00μg.L-1时细胞凋亡水平显著增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测,caspase-8、Bcl-2和FADD蛋白表达正常。结论:高浓度的TRAIL可以诱导H596细胞发生凋亡,可能与TRAIL相关蛋白表达正常有关联。 展开更多
关键词 非小细胞肺 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡
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新城疫病毒通过上调小鼠NK细胞TRAIL表达杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞 被引量:6
10
作者 宋德志 梁莹 +4 位作者 樊晓晖 殷君 宫金伶 赖振屏 高灵茜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期599-604,共6页
目的观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系。方法给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后... 目的观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系。方法给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后,用ELISA检测小鼠外周血IFN-γ浓度;分离小鼠脾脏NK细胞,用反转录PCR法检测NK细胞中TRAIL mRNA转录水平,Western blot法检测脾脏NK细胞中TRAIL蛋白水平,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。结果腹腔注射NDV可以提高BALB/c小鼠外周血IFN-γ浓度,上调小鼠脾脏NK细胞TRAIL mRNA和蛋白表达水平,增强小鼠脾脏NK细胞体外条件下对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性。TRAIL中和抗体能抑制NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。IFN-γR-/-B6.129S7小鼠接受NDV注射后脾脏NK细胞的TRAIL表达无显著增加,NDV激活的NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性显著低于IFN-γ受体正常的BALB/c小鼠。结论腹腔注射NDV可增强脾脏NK细胞的体外抗肿瘤活性,其机制之一是通过IFN-γ受体途径上调NK细胞表面TRAIL蛋白表达来发挥作用。 展开更多
关键词 新城疫病毒 NK细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡配体 肝癌细胞
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TRAIL在系统性红斑狼疮发病机制中的作用及其相关性研究 被引量:5
11
作者 盛君 汪国生 +2 位作者 李向培 徐修才 张宏 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第3期315-319,共5页
目的探索肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在系统性红斑狼疮(SLE)细胞凋亡、自身抗体产生和疾病活动中作用。方法60例SLE患者及20名健康对照,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析外周血单个核细胞(PBMC)的TRAIL mRNA表达;比色法测... 目的探索肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在系统性红斑狼疮(SLE)细胞凋亡、自身抗体产生和疾病活动中作用。方法60例SLE患者及20名健康对照,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析外周血单个核细胞(PBMC)的TRAIL mRNA表达;比色法测定PBMC内Caspase-3活性表达;酶联免疫法(ELISA)测定PBMC内核小体水平、血清中可溶性TRAIL(sTRAIL)和抗核小体抗体(AnuA)浓度。结果狼疮活动组与稳定组及健康对照组相比,TRAILmRNA平均表达水平(0.82±0.07)vs(0.77±0.06)vs(0.75±0.05)、Caspase-3活性(0.53±0.27)vs(0.39±0.23)vs(0.35±0.18)、核小体浓度(U/ml)((3.09)vs(0.53)vs(0.77)及血清sTRAIL水平(μg/L)(0.88±0.74)vs(0.58±0.32)vs(0.48±0.28),差异均有显著性(P<0.05)。SLE患者TRAILmRNA平均表达水平与sTRAIL、Caspase-3活性及Caspase-3活性与核小体水平均呈显著正相关(P<0.05)。SLE患者TRAIL mRNA表达水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分数、抗dsDNA抗体、ESR、AnuA浓度呈正相关,与淋巴细胞计数及补体C4呈负相关;sTRAIL浓度与SLEDAI积分数呈正相关,与淋巴细胞计数呈负相关。核小体浓度与SLEDAI积分数、抗dsDNA抗体、AnuA浓度均呈显著正相关,与补体C3、C4水平呈负相关。结论SLE活动患者PBMC的TRAIL表达水平及血清sTRAIL水平增高,凋亡酶Caspase-3的活性增高,可能介导PBMC异常凋亡,使核小体释放增加,自身抗体水平增加,参与疾病活动。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 配体 受体 肿瘤坏死因子 核小体 半胱氨酸蛋白水解酶类 细胞凋亡
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补肾法对去卵巢大鼠骨髓细胞OPG、RANKL和TNF-α基因表达的影响 被引量:11
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作者 曾天舒 陈璐璐 +1 位作者 潘世秀 夏文芳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2006年第4期323-326,共4页
目的观察补肾中药对大鼠去卵巢后骨髓细胞表达核因子κB受体活化子配体(RANKL)、核因子κB受体活化子(RANK)、护骨素(OPG)和肿瘤坏死因子α(TNFα)基因的影响。方法健康3月龄雌性SD大鼠72只,其中24只为假手术对照组,48只去卵巢后随机分... 目的观察补肾中药对大鼠去卵巢后骨髓细胞表达核因子κB受体活化子配体(RANKL)、核因子κB受体活化子(RANK)、护骨素(OPG)和肿瘤坏死因子α(TNFα)基因的影响。方法健康3月龄雌性SD大鼠72只,其中24只为假手术对照组,48只去卵巢后随机分为去卵巢组和中药组,每组24只。分别于去卵巢后2、4、6、12周每组各取6只大鼠骨髓细胞提取RNA,RTPCR半定量分析其表达。结果与对照组比较,去卵巢后2周,去卵巢组骨髓细胞TNFα和RANKL的mRNA表达显著升高(P<0.05~0.01),第4~6周,上述改变达高峰,至第12周TNFα仍呈有意义增高;而去卵巢组OPG表达在第2~6周则明显降低,2~4周为最低点。中药组TNFα和RANKL表达低于去卵巢组(P<0.05,P<0.01),而OPG表达明显高于去卵巢组。但是中药治疗未能使以上基因表达完全恢复正常。各组全程未见RANK基因表达水平有明显变化。结论补肾中药在一定程度上抑制去卵巢大鼠骨髓细胞过度表达TNFα和RANKL,同时增加OPG的表达。 展开更多
关键词 补肾法 骨髓 护骨素 肿瘤坏死因子α 核因子κB受体活化子配体
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纤连蛋白对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝星状细胞凋亡的影响 被引量:3
13
作者 高杰 许春海 +2 位作者 梁明 于建武 李树臣 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第11期1199-1202,共4页
目的研究纤连蛋白(FN)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及调控机制。方法 MTT比色法、流式细胞术检测加入FN时,外源性TRAIL对HSC-T6细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;采用Western Blot检测粘着斑激酶(F... 目的研究纤连蛋白(FN)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及调控机制。方法 MTT比色法、流式细胞术检测加入FN时,外源性TRAIL对HSC-T6细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;采用Western Blot检测粘着斑激酶(FAK)、磷酸化粘着斑激酶(pFAK)、Bax的表达。结果 TRAIL可以抑制HSC-T6细胞增殖,可以诱导HSC-T6细胞凋亡,而FN的存在可以使TRAIL诱导的HSC-T6细胞凋亡明显减少(P<0.05),Western Blot分析显示TRAIL诱导HSC-T6细胞凋亡时加入FN,细胞浆pFAK表达上调而线粒体Bax表达下降。结论 FN可以使外源性TRAIL诱导的HSC-T6细胞凋亡减少,机制可能与FN促使FAK磷酸化,pFAK表达上调并减少线粒体Bax表达有关。 展开更多
关键词 肝星状细胞 纤连蛋白类 肿瘤坏死因子Α 配体 细胞凋亡
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三氧化二砷增强TRAIL杀伤人A549细胞的作用及机制研究 被引量:9
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作者 赵雪强 王绩英 +3 位作者 王昌明 莫碧文 蒋明 陈峰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期415-418,共4页
目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 ... 目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Survivin、Caspase-3 mRNA表达变化。结果 As2O3有抗肿瘤活性,IC50值为(42.44±0.66)μmol.L-1;As2O3与TRAIL联用时IC50值为(7.04±0.19)μmol.L-1;As2O3协同增强TRAIL的抗肿瘤活性,CDI值为0.94。联合药物组作用48h后,随As2O3浓度增高Survivin mRNA的表达降低,Caspase-3mRNA的表达增强。结论 As2O3是有效的化疗药物,通过下调Survivin mRNA的表达,上调Caspase-3 mRNA的表达,逆转A549的耐药性,协同TRAIL增强对肺癌细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 三氧化二砷 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 非小细胞肺癌 Survivin CASPASE-3 耐药
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2-DG增强TRAIL诱导白血病细胞HL-60凋亡的作用 被引量:4
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作者 赵素容 段海峰 +3 位作者 张配 刘浩 蒋琛琛 蒋志文 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期351-355,共5页
本研究旨在探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)增强HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的作用及其可能机制。采用MTT法检测不同浓度2-DG、TRAIL对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的10 mmol/L的2-DG和100 ng/ml... 本研究旨在探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)增强HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的作用及其可能机制。采用MTT法检测不同浓度2-DG、TRAIL对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的10 mmol/L的2-DG和100 ng/ml的TRAIL单独或联合处理细胞,用PI单染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测RIP1、GRP78、PARP蛋白的表达,试剂盒检测caspase-3的活性变化。结果表明,2-DG(10mmol/L)与TRAIL(100 ng/ml)联合作用于HL-60细胞48 h的凋亡率为(45.1±4.3)%,较单用2-DG、TRAIL的凋亡率明显提高(P<0.01),同时二者联合应用能增强GRP78蛋白的表达及caspase-3的活性,下调RIP1蛋白的表达。结论:2-DG能增强TRAIL诱导HL-60细胞的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应、下调RIP1蛋白的表达以及增加caspase-3的活性。 展开更多
关键词 白血病 2-脱氧葡萄糖 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡
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TRAIL与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡时Fas和cFLIP表达的改变及其意义 被引量:4
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作者 徐玉生 陶惠民 +1 位作者 陈维善 杨迪生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1900-1904,共5页
目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)及其基因Ad/GT -TRAIL和顺铂 (DDP)联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用 ,并分析细胞表面Fas蛋白和细胞内cFLIPmRNA表达对凋亡影响。方法 :将TRAIL(10 0 μg/L)、Ad/GT -T... 目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)及其基因Ad/GT -TRAIL和顺铂 (DDP)联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用 ,并分析细胞表面Fas蛋白和细胞内cFLIPmRNA表达对凋亡影响。方法 :将TRAIL(10 0 μg/L)、Ad/GT -TRAIL和顺铂作用于培养的人RD横纹肌肉瘤细胞 ,通过MTT比色法、流式细胞仪检测细胞凋亡和Fas蛋白表达、RT -PCR检测cFLIPmRNA表达 ,观察和分析TRAIL及其基因Ad/GT -TRAIL对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂协同作用的机制。结果 :Ad/GT -TRAIL和 10 0 μg/LTRAIL对横纹肌肉瘤细胞的生长抑制率分别为 5 2 5 %和 4 3 5 % ,凋亡诱导率为 12 95 %和 10 2 6 % ,联合应用顺铂 ,生长抑制率和凋亡诱导率均显著高于单独应用 (P <0 0 5 ) ,FCM分析显示联合应用提高了Fas蛋白的表达 ,RT -PCR显示cFLIPmRNA表达下降 ,与联合应用组细胞凋亡率增加相一致。结论 :TRAIL和Ad/GT -TRAIL能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长 。 展开更多
关键词 横纹肌肉瘤 肿瘤坏死因子凋亡诱导配体 细胞凋亡 顺铂 基因疗法
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恶性胶质瘤细胞死亡诱导信号复合体表达与TRAIL诱导凋亡的关系 被引量:3
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作者 于洪泉 张宇 +3 位作者 金宏 赵东海 杨淑艳 齐玲 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期904-906,共3页
目的:通过研究恶性胶质瘤细胞中死亡诱导信号复合体(DISC)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的关系,初步探讨TRAIL诱导凋亡抵抗的机制。方法:分离恶性胶质瘤组织,获得和培养原代胶质瘤细胞,用100μg.L-1 TRAIL作用后采用... 目的:通过研究恶性胶质瘤细胞中死亡诱导信号复合体(DISC)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的关系,初步探讨TRAIL诱导凋亡抵抗的机制。方法:分离恶性胶质瘤组织,获得和培养原代胶质瘤细胞,用100μg.L-1 TRAIL作用后采用酸性磷酸酶法检测细胞凋亡水平;Western blotting法检测细胞表达死亡诱导信号复合体的水平。结果:获得3株(GC417、GC321、GC125)原代恶性胶质瘤细胞;3株细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感程度不同[GC321(0.12±0.01 vs 0.51±0.02)和GC125(0.22±0.01 vs 0.36±0.01)],对TRAIL诱导凋亡作用敏感,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而GC417(0.24±0.01 vs 0.23±0.02)对TRAIL诱导凋亡不敏感。Western blotting法检测结果显示,死亡诱导信号复合体表达不同,GC321和GC125表达增高,GC417表达减少。结论:不同来源的原代培养恶性胶质瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的反应不同,死亡诱导信号复合体表达也不同,死亡诱导信号复合体表达的减少可能与凋亡抵抗的发生密切相关。 展开更多
关键词 胶质瘤 死亡诱导信号复合体 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 细胞凋亡
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雌激素调节大鼠去卵巢后骨髓细胞OPG、RANKL、RANK基因表达 被引量:4
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作者 曾天舒 潘世秀 +1 位作者 陈璐璐 夏文芳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2006年第2期138-141,共4页
目的观察大鼠去卵巢后骨髓细胞核因子κB受体活化子配体(RANKL)、核因子κB受体活化子(RANK)、护骨素(OPG)以及TNFα基因表达的改变和雌激素的影响。方法健康3m龄雌性SD大鼠72只,24只为假手术对照组,48只去卵巢,随机分为去卵巢组和雌激... 目的观察大鼠去卵巢后骨髓细胞核因子κB受体活化子配体(RANKL)、核因子κB受体活化子(RANK)、护骨素(OPG)以及TNFα基因表达的改变和雌激素的影响。方法健康3m龄雌性SD大鼠72只,24只为假手术对照组,48只去卵巢,随机分为去卵巢组和雌激素组,每组24只。分别于去卵巢后2、4、6、12w每组各取6只大鼠骨髓细胞提取RNA,RTPCR半定量分析其表达。结果与对照组相比,去卵巢后2w,去卵巢组骨髓细胞TNFα和RANKLmRNA表达显著升高(P<0.05~0.01),第4~6w,上述改变达高峰,至第12wTNFα仍呈有意义增高;而OPG表达在第2~6w则明显降低(P<0.01),2~4w为最低点;OPGRANKL比值2~6w为最低(P<0.01),12w仍低于对照组。雌激素组以上各时间TNFα和RANKL表达低于去卵巢组(P<0.05,P<0.01)而OPG表达和OPGRANKL比值明显高于去卵巢组(P<0.01)。各组全程未见RANK基因表达水平有明显变化。结论雌激素抑制大鼠去卵巢后骨髓细胞过度表达RANKL和TNFα而增加OPG的表达。 展开更多
关键词 雌激素 骨髓 护骨素 肿瘤坏死因子α 核因子 κB受体活化子配体
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rhTRAIL对小鼠乳腺癌的抑制作用 被引量:3
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作者 陈伟莉 牟旭鹏 +2 位作者 马杰 刘韦 颜炜群 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期480-483,共4页
目的:探讨重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)对小鼠乳腺癌的抑制作用。方法:将5×109cells/L对数生长期的小鼠乳腺癌细胞D2F2接种于BALB/c小鼠右上肢皮下,每只接种0.2mL(1×106个细胞),随机分为5组。空白对照组:PBS0... 目的:探讨重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)对小鼠乳腺癌的抑制作用。方法:将5×109cells/L对数生长期的小鼠乳腺癌细胞D2F2接种于BALB/c小鼠右上肢皮下,每只接种0.2mL(1×106个细胞),随机分为5组。空白对照组:PBS0.2mL;rhTRAIL低、中、高剂量组:剂量分别为2.5mg/kg、5.0mg/kg、10.0mg/kg;阳性药物组:环磷酰胺30.0mg/kg。各组均采用腹腔注射,每天1次,共15d。每天小鼠称重记录,每3d观察肿瘤的生长情况并用游标卡尺测定肿瘤的长径和短径,计算肿瘤体积和抑瘤率。停药后处死小鼠,取瘤进行肿瘤组织光镜和电镜观察。同时流式细胞仪检测经不同浓度rhTRAIL作用后细胞凋亡及细胞周期变化。结果:与空白对照组相比,rhTRAIL2.5mg/kg、5.0mg/kg、10.0mg/kg(低、中、高)剂量组的肿瘤重量和体积明显低于空白对照组(P<0.01),且rhTRAIL低、中、高剂量组的肿瘤重量和体积随药物浓度的增加而降低(P<0.01)。rhTRAIL2.5mg/kg、5.0mg/kg、10.0mg/kg(低、中、高)剂量组肿瘤细胞既有坏死也有凋亡样改变,肿瘤组织破坏面积大,很多区域看不到正常的肿瘤细胞,可见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示rhTRAIL蛋白可诱导D2F2细胞凋亡,0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L组细胞凋亡率分别为7.56%、21.37%、27.16%,凋亡率随剂量增大而升高(P<0.05)。结论:rhTRAIL可诱导小鼠乳腺癌细胞D2F2凋亡并有大量的乳腺癌细胞坏死,rhTRAIL对小鼠乳腺癌细胞D2F2具有抑制作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 乳腺肿瘤 细胞凋亡
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抑制卵巢癌3AO细胞增殖并促进细胞凋亡 被引量:3
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作者 张少华 刘凯歌 +3 位作者 成碧萍 高倩 王莉 杨筱凤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期453-457,共5页
目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制。方法用(12.5、25.0、50.0)ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细... 目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的分子机制。方法用(12.5、25.0、50.0)ng/mL的重组人TRAIL蛋白与卵巢癌3AO细胞共孵育72 h,观察细胞的形态变化,在不同时间段收集细胞,MTT法检测细胞生长增殖,计算细胞的生长抑制率,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,原位末端标记法(TUNEL)观察凋亡形态特征,Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3蛋白表达。结果各浓度组的TRAIL都可以引起3AO细胞形态学改变,对细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),25 ng/mL和50 ng/mL TRAIL处理的3AO细胞出现明显的细胞凋亡和周期阻滞,随着药物作用时间的延长,G1期细胞比例逐渐增多,而S期和G2/M期细胞比例减少,caspase-3蛋白呈高表达,但两组之间的凋亡率和凋亡蛋白的表达无显著性差异(P>0.05)。结论 TRAIL是通过抑制细胞周期、阻滞DNA合成、活化caspase-3诱导卵巢癌3AO细胞凋亡。 展开更多
关键词 TRAIL 3AO细胞 细胞凋亡 细胞周期 CASPASE-3蛋白
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