Gab2通过PI3K/Akt/ARK5/MMP途径影响乳腺癌的侵袭和转移 被引量：16

1

作者 田红艳 陈萍萍 +5 位作者 李笑 李洪利 任甜甜 张宝刚 尹崇高 刘雨清 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1014-1018,共5页

目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润... 目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的相关性,分析浸润性导管癌中Gab2、MMP-2及MMP-9蛋白表达的相关性。采用Western blot检测乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中Gab2蛋白的表达情况。采用RNAi技术将小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,应用Western blot检测转染成功后各组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况,应用Transwell体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭性,用EGF刺激细胞后Western blot检测Akt及ARK5的磷酸化情况。结果浸润性导管癌组织中Gab2蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),浸润性导管癌中Gab2蛋白的表达与ER、组织学分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),且其表达与MMP-2及MMP-9蛋白的表达呈正相关;MDA-MB-231细胞系中Gab2蛋白表达量高于MCF-7细胞系中表达量;转染干扰质粒24 h后,与转染空载细胞组相比,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功。同时,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组穿过Transwell小室人工基膜数量明显减少(P<0.05),并伴有MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。用EGF刺激各组细胞,结果显示:在SiG ab2/MDAMB-231细胞组Akt及ARK5的磷酸化明显受到抑制。结论Gab2通过PI3K/Akt/ARK5信号通路影响MMP-2、MMP-9的表达从而促进乳腺癌的侵袭与转移。 展开更多

关键词 乳腺癌 Gab2 AKT ark5 MMP 侵袭 转移

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ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究 被引量：15

2

作者 姬静 张宝刚 +3 位作者 张伟栋 郭爱华 崔若凡 杨兴杰 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期382-385,共4页

目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK... 目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性。转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低。ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 MMP-2 MMP-9 ark5 MDA-MB-435 小RNA干扰 侵袭

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ARK5、MMP-2和MMP-9在胃癌中的表达及与侵袭转移的关系 被引量：40

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作者 崔若凡 张宝刚 +1 位作者 姬静 郭文君 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第7期1073-1076,共4页

目的:探讨ARK5、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例胃癌组织及20例正常胃组织中ARK5... 目的:探讨ARK5、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例胃癌组织及20例正常胃组织中ARK5、MMP-2、MMP-9的表达;脂质体介导法将ARK5-siRNA转染入胃癌细胞株SGC-7901(siARK5/SGC7901细胞组),以SCRsiRNA转染组(scr/SGC7901细胞组)作为对照组,Western blot检测转染后ARK5、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力。结果:ARK5、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的阳性表达率分别为68%、76%、68%,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05);ARK5的表达与胃癌的浸润深度、细胞分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05);转染后siARK5/SGC7901细胞组表达ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白水平降低,体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:ARK5、MMP-2和MMP-9在组织中的表达有相关性,ARK5与胃癌的侵袭和转移密切相关,可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。 展开更多

关键词 胃肿瘤 ark5 MMP-2 MMP-9 侵袭

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Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究 被引量：5

4

作者 孙磊 刘雨清 +4 位作者 李小龙 刘菲 张丽娜 李洪利 张宝刚 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期551-554,共4页

目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及... 目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果:胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级)中表达明显高于低级别胶质瘤(WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级)。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%,siGab2的干扰效率为75%。转染后,与SCR/LN-229相比,siARK5/LN-229中ARK5表达降低,siGab2/LN-229中Gab2表达降低,siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少(P<0.01),且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著(P<0.01)。在IGF-1刺激下,siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论:应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低,同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化,提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。 展开更多

关键词 胶质瘤 ark5 Gab2 LN-229细胞 小RNA干扰 侵袭

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ARK5与肿瘤侵袭转移相关性的研究进展 被引量：1

5

作者 史圆圆 路名芝 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期665-668,共4页

ARK5(AMPK-related protein kinase 5,又称NUAK1)是AMPK(AMP-activated protein kinase)的亚家族成员之一,其是Akt的下游信号分子。ARK5在各种肿瘤细胞系中表达,有研究表明ARK5能促进肿瘤的发生和抑制肿瘤细胞的凋亡,且Akt-ARK5通路与... ARK5(AMPK-related protein kinase 5,又称NUAK1)是AMPK(AMP-activated protein kinase)的亚家族成员之一,其是Akt的下游信号分子。ARK5在各种肿瘤细胞系中表达,有研究表明ARK5能促进肿瘤的发生和抑制肿瘤细胞的凋亡,且Akt-ARK5通路与肿瘤的恶性发展密切相关。该文对ARK5在肿瘤侵袭和转移中的作用,及其与肿瘤侵袭相关的信号分子的相互关系进行综述。 展开更多

关键词 肿瘤 侵袭 转移 ark5

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ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响 被引量：2

6

作者 蒋清虎 罗伟 +3 位作者 温路 胡惠雯 邓大炜 吴忠均 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期743-747,I0002,共6页

目的:检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。方法:采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5的小干扰RN... 目的:检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。方法:采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,转染至SMMC-7721细胞分别为实验组和阴性对照组,同时设空白对照组,采用MTT法和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖活性和细胞凋亡率。结果:PCR和Western blotting法检测,肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中ARK5mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织和LO2细胞(P<0.05)。MTT法检测,实验组24、48和72h细胞生长抑制率分别为(19.39±5.42)%、(23.19±0.53)%和(20.74±1.23)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);流式细胞术检测,实验组细胞凋亡率为(15.017±0.945)%,与空白对照组[(8.770±0.656)%]和阴性对照组[(8.763±1.201)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ARK5在肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中表达水平明显升高,抑制其表达可抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡,提示ARK5可能作为一种癌基因促进肝癌的形成。 展开更多

关键词 肝肿瘤 RNA干扰 ark5基因 SMMC-7721细胞

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miR-145-5p靶向ARK5调控人上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡的作用 被引量：6

7

作者 武磊 周文勤 +2 位作者 袁琳楠 李洁 裴美丽 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期669-676,共8页

目的探讨miR-145-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及可能涉及的分子机制。方法实时定量PCR检测miR-145-5p在正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中的表达差异,CCK-8、流式细胞术检测过表达miR-145-5p对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。... 目的探讨miR-145-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及可能涉及的分子机制。方法实时定量PCR检测miR-145-5p在正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中的表达差异,CCK-8、流式细胞术检测过表达miR-145-5p对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。靶基因预测软件预测miR-145-5p的靶基因,生物信息学、Western blot、双荧光素酶基因验证报告实验、挽救实验等方法预测并验证miR-145-5p在卵巢癌细胞中发挥作用涉及的分子机制。结果卵巢癌细胞中miR-145-5p的表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(t=4.345,P=0.049)。与对照组相比,过表达miR-145-5p的卵巢癌细胞增殖率明显降低(t=-15.790,P<0.001),凋亡率明显增加(t=5.433,P=0.032)。TargetScan软件在线预测及双荧光素酶基因验证报告实验结果表明,ARK5是miR-145-5p的直接靶基因(t=4.583,P=0.010)。ARK5过表达细胞的增殖率明显升高(t=27.290,P<0.001),凋亡率明显下降(t=-8.241,P=0.001)。过表达miR-145-5p可在mRNA(t=-12.824,P<0.001)及蛋白水平(t=-4.792,P=0.001)明显下调ARK5的表达。ARK5的挽救性表达显著抵消了miR-145-5p对细胞增殖的抑制(t=15.580,P=0.004)和促细胞凋亡(t=-12.470,P=0.006)的效果。结论miR-145-5p可能是通过靶向抑制ARK5来抑制卵巢癌细胞增殖和促进细胞凋亡的。 展开更多

关键词 miR-145-5p 卵巢癌 ark5

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siRNA沉默ARK5基因对SMMC-7721细胞侵袭及MMP-2蛋白分泌的影响

8

作者 蒋清虎 马吉安 +1 位作者 谭孝华 吴忠均 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第6期723-726,共4页

目的:观察siRNA沉默ARK5基因的表达对肝癌SMMC-7721细胞侵袭及MMP-2蛋白分泌的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot法检测SMMC-7721细胞和正常肝细胞LO2中ARK5的表达。体外合成靶向ARK5基因的siRNA,转染肝癌SMMC-7721细胞,并设阴性对... 目的:观察siRNA沉默ARK5基因的表达对肝癌SMMC-7721细胞侵袭及MMP-2蛋白分泌的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot法检测SMMC-7721细胞和正常肝细胞LO2中ARK5的表达。体外合成靶向ARK5基因的siRNA,转染肝癌SMMC-7721细胞,并设阴性对照和空白对照,采用Western blot方法检测3组细胞中ARK5蛋白的表达,通过Transwell小室模型检测细胞的体外侵袭能力,采用ELISA法检测细胞培养基中MMP-2蛋白的含量。结果:SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白的表达水平高于LO2细胞(P<0.05);沉默ARK5基因后,SMMC-7721细胞的侵袭受到抑制,且MMP-2蛋白的分泌水平低于阴性对照和空白对照(P<0.05)。结论:沉默ARK5基因可能通过MMP-2途径抑制SMMC-7721细胞的侵袭。 展开更多

关键词 肝癌 侵袭 ark5基因 RNA干扰 SMMC-7721细胞

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miR-424通过结合ARK5 mRNA 3'-UTR抑制胶质瘤细胞侵袭 被引量：5

9

作者 孙雪梅 郑书贤 +4 位作者 王瑞鸽 王照岩 李洪利 尹崇高 张宝刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期521-526,共6页

前期的研究证明,人腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)通过Gab2-Akt-ARK5通路,促进胶质瘤的侵袭。然而,ARK5的调节机制尚不清楚。本研究旨在探讨miR-424是否通过与ARK5 mRNA结合,进而影响胶质瘤侵袭。通过Targetscan找到与ARK5的3'-UTR区互... 前期的研究证明,人腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)通过Gab2-Akt-ARK5通路,促进胶质瘤的侵袭。然而,ARK5的调节机制尚不清楚。本研究旨在探讨miR-424是否通过与ARK5 mRNA结合,进而影响胶质瘤侵袭。通过Targetscan找到与ARK5的3'-UTR区互补结合的microRNA(miR-424)。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胶质瘤细胞系中miR-424表达水平,发现3种胶质瘤母细胞(高级别胶质瘤细胞)株中,miR-424表达量均不同程度低于低级别胶质瘤H4细胞株。miR-424及miR-424抑制剂质粒转染胶质瘤细胞系H4、LN-229并结合蛋白质印迹法显示,miR-424可负向调控ARK5蛋白表达。qRT-PCR显示,在胶质瘤细胞内过表达miR-424后,ARK5mRNA无显著变化,提示miR-424在翻译水平影响ARK5蛋白表达。Transwell侵袭实验显示,过表达miR-424导致胶质瘤细胞体外侵袭能力明显减弱。双荧光素酶基因报告检测显示,miR-424能与ARK5 mRNA的3'-UTR结合,抑制荧光素酶活性。上述结果提示,miR-424可以结合ARK5mRNA的3'-UTR而抑制ARK5蛋白翻译,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。 展开更多

关键词 胶质瘤 侵袭 miR-424 人腺苷酸活化蛋白激酶5

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PTTG1影响胶质瘤细胞侵袭力机制的研究 被引量：7

10

作者 陈为一 李小龙 +5 位作者 齐岳亮 李洪利 尹崇高 刘晓丽 张宝刚 郭文君 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期329-332,共4页

背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用... 背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用蛋白质印迹法(Western blot)检测PTTG1蛋白在不同胶质瘤细胞系中的表达;采用小RNA质粒干扰技术抑制U87细胞中PTTG1蛋白的表达,应用Western blot技术检测转染的效率;通过体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭力的变化;采用Western blot技术检测经过表皮细胞生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后敲除PTTG1的细胞组(siPTTG1/U87)与转染空载的细胞组(Scr/U87)中Akt、ARK5磷酸化的情况。结果:PTTG1蛋白在各恶性胶质瘤细胞系中均高表达;敲除PTTG1后U87细胞的侵袭力明显下降;对Scr/U87细胞进行EGF刺激5 min后,Akt、ARK5的磷酸化情况显著增强,而无论有无EGF的刺激,siPTTG1/U87中Akt、ARK5的磷酸化情况都没有明显改变。结论:在恶性胶质瘤细胞中,PTTG1蛋白呈高表达状态并且与侵袭性显著相关,其对侵袭性的调控可能是通过Akt-ARK5通路实现的。 展开更多

关键词 胶质瘤 侵袭 垂体肿瘤转化基因1 ark5 SIRNA

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蛋白激酶NUAK1的定位及其与NF-κB信号通路关系的探讨 被引量：3

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作者 杨兰兰 刘先俊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期998-1001,共4页

目的:确定蛋白激酶NUAK1的定位,检测其是否参与NF-κB信号通路。方法:构建质粒NUAK1-pEGFP顺转于293细胞,然后用DAPY染核,荧光显微镜下观察NUAK1的定位。构建质粒NUAK1-pcDNA3.1和显性失活突变体NU-AK1(D178N)-pcDNA3.1,以空载pcDNA3.1... 目的:确定蛋白激酶NUAK1的定位,检测其是否参与NF-κB信号通路。方法:构建质粒NUAK1-pEGFP顺转于293细胞,然后用DAPY染核,荧光显微镜下观察NUAK1的定位。构建质粒NUAK1-pcDNA3.1和显性失活突变体NU-AK1(D178N)-pcDNA3.1,以空载pcDNA3.1做对照,分别过表达于带稳转有NF-κB荧光酶素报告基因质粒的293细胞株中,检测在有或没有TNF-α刺激下的NF-κB荧光酶素报告基因的活性,为进一步确认,对NUAK1-pcDNA3.1设了个浓度梯度进行检测。结果:293细胞中,NUAK1定位于细胞核。在TNF-α的刺激下,以空载和显性失活突变体为对照,NU-AK1显著抑制NF-κB的活性,且与其表达量成正相关。结论:由于NUAK1定位于细胞核中,且显著抑制TNFα刺激下NF-κB的活性,所以NUAK1可能参与NF-κB的转录调控。 展开更多

关键词 NUAK1/ark5 NF-ΚB 293细胞 核定位 转录调控

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