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鳜鱼传染性脾肾坏死病病毒TB Green嵌合荧光定量PCR法的建立
1
作者 李雪雁 刘琪 +5 位作者 梁慧仪 叶树才 黄晓声 贾晓菲 李琳 潘子强 《中国动物检疫》 2025年第4期68-73,共6页
为建立鳜鱼传染性脾肾坏死病病毒(ISKNV)的快速检测方法,对ISKNV主衣壳蛋白(MCP)编码基因进行分析,依据编码基因保守序列设计并合成引物,建立了定性和定量检测ISKNV的TB Green嵌合荧光定量PCR法,并对该方法进行了灵敏度、重复性和特异... 为建立鳜鱼传染性脾肾坏死病病毒(ISKNV)的快速检测方法,对ISKNV主衣壳蛋白(MCP)编码基因进行分析,依据编码基因保守序列设计并合成引物,建立了定性和定量检测ISKNV的TB Green嵌合荧光定量PCR法,并对该方法进行了灵敏度、重复性和特异性试验。结果显示:自行重组质粒标准品构建的荧光定量PCR标准曲线R2值为0.997,线性关系良好;检测下限约为15.9 copies/μL,灵敏度是普通PCR的100倍;30个样品扩增曲线基本重合;对草鱼呼肠孤病毒和锦鲤疱疹病毒及阴性对照的检测结果均为阴性。本研究建立的ISKNV TB Green嵌合荧光定量PCR法具有灵敏度高、重复性好和特异性强等优点,在鳜鱼传染性脾肾坏死病诊断方面具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 传染性脾肾坏死病 鳜鱼 MCP蛋白 荧光定量pcr 染料法
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油田硫酸盐还原菌APS-MPN-PCR快速定量检测方法 被引量：3
2
作者 魏利 马放 《西安石油大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第1期91-94,共4页
为了解决现有油田污水中硫酸盐还原菌检测周期长、检测费用较高的问题，应用聚合酶链式反应（PCR）技术与倍比稀释法（MPN）相结合的APS-MPN-PCR法，对硫酸盐还原菌进行快速定量检测．从污水中制备了直接用于PCR扩增的菌液，保证了定量... 为了解决现有油田污水中硫酸盐还原菌检测周期长、检测费用较高的问题，应用聚合酶链式反应（PCR）技术与倍比稀释法（MPN）相结合的APS-MPN-PCR法，对硫酸盐还原菌进行快速定量检测．从污水中制备了直接用于PCR扩增的菌液，保证了定量检测的准确性；建立以腺苷酰硫酸还原酶基因（APS）为靶位点的通用探针APS7F和APS8R的反应体系和扩增条件．研究结果表明，与液体稀释培养法相比，该方法检测灵敏度提高了两个数量级，操作时间缩短（整个检测过程只需要3～4h），检测费用也降低．该方法检测结果非常稳定，真实的表征了污水中实际的SRB菌数量，可以在生产中应用． 展开更多
关键词 硫酸盐还原菌 定量检测 腺苷酰硫酸还原酶 aps-mpn—pcr法
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树生黄单胞菌李致病变种两种PCR检测方法的建立
3
作者 杨雯迪 马玉超 +4 位作者 王金鹏 沈建国 任争光 杨海清 李为民 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期224-229,237,共7页
树生黄单胞菌李致病变种Xanthomonas arboricola pv.pruni(Xap)是桃、李生产中最具毁灭性的病原细菌之一。为了快速准确地检测Xap,本研究以其编码基因L1B 16_06350的5′端序列(611 bp)为检测靶标,开发了常规PCR和TaqMan实时PCR检测方法... 树生黄单胞菌李致病变种Xanthomonas arboricola pv.pruni(Xap)是桃、李生产中最具毁灭性的病原细菌之一。为了快速准确地检测Xap,本研究以其编码基因L1B 16_06350的5′端序列(611 bp)为检测靶标,开发了常规PCR和TaqMan实时PCR检测方法。这两种方法与树生黄单胞菌胡桃致病变种X.arboricola pv.juglandis等8个不同属的11种细菌均没有交叉反应,其中常规PCR检测极限为10^(-2)ng,TaqMan探针法为10^(-3)ng,表现高度的灵敏度和特异性。利用田间样品进行测试,结果证实两种检测方法均可应用于Xap的常规检测。 展开更多
关键词 树生黄单胞菌李致病变种 常规pcr TaqMan探针法 特异性 灵敏度
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分枝杆菌三种检测方法的比较及结果不一致的原因分析
4
作者 陈保羽 张东英 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第4期549-552,555,共5页
目的探讨抗酸染色、RT-PCR法及荧光PCR熔解曲线法对分枝杆菌的阳性检出率,评估三者的准确性及灵敏度。方法选择病理诊断为上皮样肉芽肿病变的石蜡组织样本93例,分别使用抗酸染色检测分枝杆菌、RT-PCR检测组织中结核分枝杆菌复合群(RT-PC... 目的探讨抗酸染色、RT-PCR法及荧光PCR熔解曲线法对分枝杆菌的阳性检出率,评估三者的准确性及灵敏度。方法选择病理诊断为上皮样肉芽肿病变的石蜡组织样本93例,分别使用抗酸染色检测分枝杆菌、RT-PCR检测组织中结核分枝杆菌复合群(RT-PCR法)及荧光PCR熔解曲线法检测分枝杆菌。比较三种方法的检测结果,并分析三种方法结果不一致的原因。结果93例样本中,共有13例(14.0%)样本抗酸染色呈阳性;20例(21.5%)样本组织结核分枝杆菌复合群(RT-PCR法)检测为阳性;共有57例(61.3%)样本通过荧光PCR熔解曲线法检测为阳性,其中10例为结核分枝杆菌复合群阳性。结论对于组织结核分枝杆菌检测RT-PCR法的灵敏度最高。而荧光PCR熔解曲线法可以检出更多的分枝杆菌感染病例。非结核分枝杆菌感染(分枝杆菌属阳性)是导致抗酸染色阳性而结核分枝杆菌复合群检测(RT-PCR法)阴性的原因。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 抗酸染色 RT-pcr 荧光pcr熔解曲线法
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GeneScan试剂盒法快速定量检测玉米中CaMV35S启动子
5
作者 朱飞宇 黄宇飞 +3 位作者 高梅莹 刘佳 刘丹 铁晓威 《现代农业科技》 2025年第14期121-124,130,共5页
针对玉米中转入的CaMV35S启动子,开展了一种新型试剂盒[GMO Quant(LR)35S Screen corn]荧光定量PCR检测方法试验,建立新的转基因玉米中含有CaMV35S启动子标记基因的定量检测方法。选用3个玉米品种先玉1321、裕丰303和先玉335进行了CaMV... 针对玉米中转入的CaMV35S启动子,开展了一种新型试剂盒[GMO Quant(LR)35S Screen corn]荧光定量PCR检测方法试验,建立新的转基因玉米中含有CaMV35S启动子标记基因的定量检测方法。选用3个玉米品种先玉1321、裕丰303和先玉335进行了CaMV35S启动子荧光定量PCR检测,标准偏差分别为0.15%、0.39%和0.61%,标准曲线相关系数均在0.98以上,扩增效率为90%~110%,试剂盒中配有1%MON863玉米基因组DNA(已知CaMV35S启动子含量在0.5%左右)作为对照材料,试验结果符合荧光定量PCR检测试验要求,确认此方法准确有效。此方法具有高度的特异性、高效性,是一种新型高效定量检测CaMV35S启动子的方法。 展开更多
关键词 荧光定量pcr CaMV35S启动子 转基因玉米 定量检测 GeneScan试剂盒法
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用于PCR扩增的细菌DNA提取方法比较 被引量：86
6
作者 冯广达 陈美标 +1 位作者 羊宋贞 朱红惠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期439-442,共4页
以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍... 以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍存在少数革兰阳性菌DNA提取失败的现象.因此,在菌株较多的情况下可先采用冻融法提取细菌DNA,对少数提取失败的菌株,弃冻融法得到的上清液,再以SDS法、CTAB法或DNA试剂盒的提取进行补充.采用该操作流程既能节省成本和时间,又减少了提取过程中有机废弃物的产生. 展开更多
关键词 DNA提取 冻融法 16S RRNA基因 pcr
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一种PCR产物克隆的新方法——T-A克隆法 被引量：23
7
作者 李新波 赵小松 +2 位作者 田德志 朱依纯 姚泰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期187-189,共3页
介绍一种ＰＣＲ产物克隆的新方法———ＴＡ克隆法．用改良碱裂解法抽提ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒，用ＥｃｏＲⅤ将ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒切成平端，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｄＴＴＰ制备ｐＢｌｕｅｓｃ... 介绍一种ＰＣＲ产物克隆的新方法———ＴＡ克隆法．用改良碱裂解法抽提ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒，用ＥｃｏＲⅤ将ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）质粒切成平端，利用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｄＴＴＰ制备ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）ＴＡ载体．将βａｃｔｉｎｃＤＮＡ片段克隆入自制的ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）ＴＡ载体，经ＥｃｏＲⅠ及ＨｉｎｄⅢ双酶切得到与设定长度一致的βａｃｔｉｎｃＤＮＡ片段． 展开更多
关键词 T-A克隆载体 pcr产物 T-A克隆法
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PCR法定性检测食用油脂中转基因成分 被引量：39
8
作者 覃文 董洁 +1 位作者 邓鸿铃 高东微 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期4-6,共3页
食用油脂 (尤其是精炼油 )被认为几乎不含DNA和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA含量极低、破坏严重的特点 ,成功地建立了食用油脂中DNA提取方法 ,并从中检测出玉米、大豆内源基因 (IVR、Lectin)以及外源抗虫基因 [CryIA(b) ]和... 食用油脂 (尤其是精炼油 )被认为几乎不含DNA和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA含量极低、破坏严重的特点 ,成功地建立了食用油脂中DNA提取方法 ,并从中检测出玉米、大豆内源基因 (IVR、Lectin)以及外源抗虫基因 [CryIA(b) ]和抗除草剂基因 (EPSPS) ,为油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。 展开更多
关键词 食用油脂 DNA 提取 转基因检测 pcr法
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不同引物及数据分析方法对定量PCR结果的影响 被引量：17
9
作者 刘正霞 徐阳 +3 位作者 徐进梅 杨明夏 马磊 朱昌亮 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1112-1117,共6页
目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响。方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCND1、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,并分别使用2-△... 目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响。方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCND1、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,并分别使用2-△△CT法、Pfaffl法及相对标准曲线法计算肺癌紫杉醇敏感细胞株及耐药细胞株间目的基因的表达差异,分析不同引物和数据计算方法对实验结果的影响。结果:统计学分析表明,引物的扩增效率对定量PCR结果分析有显著影响,不同引物特异性扩增得到的样本间表达倍数有显著差异(P<0.05)。3种计算方法中,Pfaffl法与相对标准曲线法无统计学差异(P>0.05),而2-△△CT法与其他2种方法均有显著差异(P<0.05)。结论:引物的选择对于定量PCR结果有显著影响;Pfaffl法是更准确,更合理的相对定量计算方法。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 2^-△△CT法 Pfaffl法 相对标准曲线法 扩增效率
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2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较 被引量：6
10
作者 姜国忠 谢华 +2 位作者 郭玉忠 范天黎 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第1期41-44,共4页
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白... 目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。 展开更多
关键词 反向pcr 连接介导法pcr 盐藻 肌动蛋白 旁侧序列cDNA 简并引物
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大豆DNA提取方法及降落PCR检测转基因成分的研究 被引量：7
11
作者 陈彦 潘见 +2 位作者 王亚 惠爱玲 杨毅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第24期355-358,共4页
采用改良的CTAB法,植物基因组DNA小量制备试剂盒,SDS法和高盐低pH值法4种方法提取安徽市场上8种大豆种子的基因组DNA,首次用降落PCR(TD-PCR)检测转基因成分,并对阳性产物进行酶切验证。结果表明改良的CTAB法是一种简单、高效的大豆DNA... 采用改良的CTAB法,植物基因组DNA小量制备试剂盒,SDS法和高盐低pH值法4种方法提取安徽市场上8种大豆种子的基因组DNA,首次用降落PCR(TD-PCR)检测转基因成分,并对阳性产物进行酶切验证。结果表明改良的CTAB法是一种简单、高效的大豆DNA提取方法,能够满足各种分子生物学分析;TD-PCR显著提高了PCR扩增的特异性和效率,可有效检测大豆转基因成分,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 大豆 转基因成分 改良的CTAB法 降落pcr
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检测HBVDNA/Ig-双特异性循环免疫复合物的免疫捕捉法PCR 被引量：7
12
作者 周裕林 彭宣宪 +3 位作者 柳珑 肖军生 岑岭 杨天赐 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期71-72,75,共3页
目的:建立一种免疫捕捉法PCR技术,研究血清免疫复合物中不同Ig类型抗体结合HBV的情况,并初步探讨其意义。方法:以羊抗人μ、γ、α链的IgG为捕捉抗体,再利用PCR扩增捕捉物中的HBVDNA。结果:成功地建立了检测HBVDNA/IgM、IgG和IgATCIC的... 目的:建立一种免疫捕捉法PCR技术,研究血清免疫复合物中不同Ig类型抗体结合HBV的情况,并初步探讨其意义。方法:以羊抗人μ、γ、α链的IgG为捕捉抗体,再利用PCR扩增捕捉物中的HBVDNA。结果:成功地建立了检测HBVDNA/IgM、IgG和IgATCIC的免疫捕捉法PCR技术。该技术特异性强、敏感性高、重复性好,可以显著提高HBVDNA的检出率。同时发现,结合HBV的抗体的Ig类型组合有明显差异,三者均阳性最高。结论:说明乙肝患者血清免疫复合物中有较多的病毒颗粒。研究HBVDNA/IgTCIC对乙肝发病机理的深入阐明可能具有重要意义。 展开更多
关键词 免疫捕捉法pcr HBVDNA 乙型肝炎 TCIC
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PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展 被引量：16
13
作者 汪月霞 赵会杰 赵一丹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第24期11435-11436,11445,共3页
对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时... 对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。 展开更多
关键词 沙门氏菌 多重逆转录pcr 毛细管pcr 荧光定量pcr DNA环介导的恒温扩增法
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双标准曲线相对定量PCR试验原理与方法 被引量：66
14
作者 徐丽华 刘春雷 +4 位作者 常玉梅 梁利群 刘金亮 高国强 韩启霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期70-75,共6页
实时荧光定量PCR(FQ-PCR)是一种准确有效的核酸定量分析技术,具有易操作、高通量、高敏感性、高特异性、高度自动化和低污染等优点,并随新定量PCR仪及新操作方法的发展而得到广泛应用,但是,定量PCR的高敏感性特点使得实验操作严格而繁... 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)是一种准确有效的核酸定量分析技术,具有易操作、高通量、高敏感性、高特异性、高度自动化和低污染等优点,并随新定量PCR仪及新操作方法的发展而得到广泛应用,但是,定量PCR的高敏感性特点使得实验操作严格而繁琐。阐述了一种改进的相对定量方法——双标准曲线法的试验原理和特点,描述了定量PCR体系的优化方式,探讨了试验误差分析方法及试验操作技巧,并就试验数据的处理方法进行讨论。试验证明,双标准曲线法是一种经济、简单而准确的定量方法。 展开更多
关键词 双标准曲线法 相对定量pcr 荧光扩增曲线 试验误差分析 归一化值
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用于PCR检测的扩展青霉基因组DNA提取方法比较 被引量：4
15
作者 何鸿举 焦凌霞 +3 位作者 樊明涛 刘晓娇 吕丽娟 魏新元 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期198-201,共4页
为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法... 为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法的效果。结果表明,4种方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为试剂盒法、玻璃珠+氯化苄法、玻璃珠法、氯化苄法。其中玻璃珠+氯化苄法提取效率接近试剂盒法,效果良好,并且此法成本低廉、操作简单、结果稳定,可代替昂贵的试剂盒法用于扩展青霉基因组DNA的提取。 展开更多
关键词 氯化苄法 玻璃珠法 DNA提取 pcr
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实时荧光定量PCR和测序法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较 被引量：11
16
作者 李永文 刘红雨 +4 位作者 李颖 王玉丽 王竞 陈军 周清华 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第12期1255-1259,共5页
背景与目的以厄洛替尼(Erlotinib)为代表的小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌已经取得很好的疗效。许多研究发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与酪氨酸激酶抑制剂的疗效密... 背景与目的以厄洛替尼(Erlotinib)为代表的小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌已经取得很好的疗效。许多研究发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关。本研究目的是通过比较荧光定量PCR(Real-time PCR)和DNA测序法检测EGFR基因突变的一致性,建立适用于临床的EGFR基因突变检测方法。方法应用荧光定量PCR(Real-time PCR)及DNA测序法检测103例非小细胞肺癌标本的EGFR外显子19和21的基因突变,结果比较采用卡方检验。结果两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变的检测结果无统计学差异,且荧光定量PCR法比测序法更快捷和灵敏。结论与测序法相比,荧光定量PCR更适用于临床检测。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 基因突变 荧光定量pcr DNA测序法
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PCR构建融合基因方法的建立 被引量：5
17
作者 陈国梁 白兴俊 +2 位作者 赵蓉 雷鸿亮 陈宗礼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期209-213,共5页
以聚合酶链式反应为基础的片段拼接技术——融合PCR技术是一种新的基因片段融合技术。以含有马铃薯块茎两种淀粉合成关键酶ssⅡ和ssⅢ基因为模板,利用融合PCR对其进行融合拼接,初步建立以PCR产物(不回收)及一步PCR法融合基因的构建方法... 以聚合酶链式反应为基础的片段拼接技术——融合PCR技术是一种新的基因片段融合技术。以含有马铃薯块茎两种淀粉合成关键酶ssⅡ和ssⅢ基因为模板,利用融合PCR对其进行融合拼接,初步建立以PCR产物(不回收)及一步PCR法融合基因的构建方法,并对融合基因构建时PCR产物(不回收)的使用量及一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度等条件进行优化。结果表明,以不回收的PCR产物为模板构建融合基因时PCR产物(不回收)的使用量在10-20 ng范围内为佳;一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度在25-1 000 nmol/L为宜。 展开更多
关键词 融合基因 一步pcr法 模板浓度 引物浓度
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PCR法快速检测鸭疫里氏杆菌的研究 被引量：27
18
作者 杨建远 邓舜洲 何后军 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期439-442,共4页
根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确PCR检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大... 根据Gen-Bank中25株鸭疫里氏杆菌(RA)的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守区设计了一对特异性引物,成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确PCR检测方法。RA参考菌株J04(2型)、J07(JX1型)均能扩增出671bp的特异性目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌、鸭源葡萄球菌的扩增结果均为阴性。PCR产物经EcoRI酶切鉴定得494bp和177bp两个预期条带。最低检出基因组DNA浓度为800fg。用全菌体进行PCR时,本实验室分离鉴定的60株RA均能够扩增出特异性目的条带。25份临床疑似病例的分离菌株的PCR扩增阳性率与生化鉴定率完全一致。该方法表明能从病料组织培养8h的混合菌群中快速、准确地检测到RA,可用于RA的快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 快速检测 pcr法 pcr检测方法 多杀性巴氏杆菌 流行病学调查 特异性引物 pcr产物 DNA浓度 pcr扩增 基因序列 外膜蛋白 大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌 酶切鉴定 分离鉴定 生化鉴定 分离菌株 疑似病例 组织培养
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内参PCR法在布鲁氏菌病诊断中的应用 被引量：5
19
作者 李博 易新萍 +6 位作者 叶锋 刘丽娅 吐尔洪江.努尔 谷文喜 闫晶华 李金平 钟旗 《中国动物检疫》 CAS 2010年第5期55-58,共4页
本试验以布鲁氏菌致病力因子VirB7下游至VirB9上游基因序列为目的扩增片段,设计上、下游引物,优化血样、奶样中布鲁氏菌基因组DNA的提取方法,建立布鲁氏菌内参PCR(IR-PCR)检测方法,用于血液、奶液样本中布鲁氏菌的检测。结果显示,内参PC... 本试验以布鲁氏菌致病力因子VirB7下游至VirB9上游基因序列为目的扩增片段,设计上、下游引物,优化血样、奶样中布鲁氏菌基因组DNA的提取方法,建立布鲁氏菌内参PCR(IR-PCR)检测方法,用于血液、奶液样本中布鲁氏菌的检测。结果显示,内参PCR法有效地降低了PCR法诊断布鲁氏菌的假阴性率,且检测结果与常规的布鲁氏菌的诊断方法(细菌培养分离鉴定、iELASA)一致,该方法不仅提高了常规布鲁氏菌诊断方法的效率及灵敏度,而且降低了其假阴性和假阳性率。对血样、奶样的检出量分别为35CFU/mL、350 CFU/mL,适合于血样、奶样中布鲁氏菌的检测。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 内参pcr法 检测
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PCR法检测水牛乳中致病性大肠杆菌O157:H7的研究 被引量：7
20
作者 黄丽 李玲 +3 位作者 杨攀 冯玲 农皓如 曾庆坤 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期46-47,51,共3页
针对大肠杆菌O157:H7型菌株的志贺祥毒素Stx I和Ⅱ基因的特异序列设计并合成两对引物,确定了大小为350 bp和262 bp的检测引物都具有较强的特异性。其中采用Stx I引物结合PCR技术可直接检测水牛乳中大肠杆菌O157:H7,灵敏度高,检出限为8.5... 针对大肠杆菌O157:H7型菌株的志贺祥毒素Stx I和Ⅱ基因的特异序列设计并合成两对引物,确定了大小为350 bp和262 bp的检测引物都具有较强的特异性。其中采用Stx I引物结合PCR技术可直接检测水牛乳中大肠杆菌O157:H7,灵敏度高,检出限为8.58×103m L^(-1),总的检测时间可控制在24 h内可完成,使得水牛乳中的大肠杆菌O157:H7的检测能够快速、准确、灵敏的进行。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 pcr法 水牛乳
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