ALV-A p27基因的原核表达及其鼠源多克隆抗体的制备 被引量：8

1

作者 徐丽 林汉卿 +7 位作者 温贵兰 李昌红 张升波 田浪 杨佰启 陈彦希 文明 龚新勇 《中国家禽》 北大核心 2019年第2期15-19,共5页

试验拟通过构建A亚群禽白血病病毒(ALV-A) p27基因原核表达载体,从而制备抗p27蛋白鼠源多克隆抗体。将感染ALV-A毒株的DF-1细胞反复冻融后提取RNA并反转录为cDNA,利用PCR扩增获得ALV-A p27基因,将目的基因克隆至pColdⅠ载体,并转化入大... 试验拟通过构建A亚群禽白血病病毒(ALV-A) p27基因原核表达载体,从而制备抗p27蛋白鼠源多克隆抗体。将感染ALV-A毒株的DF-1细胞反复冻融后提取RNA并反转录为cDNA,利用PCR扩增获得ALV-A p27基因,将目的基因克隆至pColdⅠ载体,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌中进行诱导表达,经镍柱纯化后免疫28～32日龄的雌性小鼠,采用间接ELISA法测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性。试验经PCR扩增出750 bp左右的特异性条带,并成功构建pColdⅠ-ALV-A-p27原核表达载体,加入终浓度为1 mmol/L的IPTG于18℃诱导表达18～24 h成功得到重组蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测显示,制备的鼠源多克隆抗体血清抗体效价为1∶3 200;Western blot检测结果表明,制备的多克隆抗体能特异性识别原核表达的p27蛋白。试验结果在ALV的抗原分析、血清学诊断等方面有着重要的应用价值。 展开更多

关键词 alv-a P27 原核表达 鼠源多克隆抗体

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致蛋鸡髓细胞瘤型ALV-A病毒株的分离与鉴定 被引量：1

2

作者 熊瑛 王莹 +3 位作者 李长风 梁雄燕 杨玉莹 顾玉芳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期45-46,F0002,共3页

禽白血病是由禽白血病病毒引起的严重危害我国养鸡业的重要肿瘤性疾病。不同亚群的禽白血病病毒可以引起鸡淋巴细胞瘤、髓细胞瘤、血管瘤、成红细胞瘤等多种类型肿瘤发生,A、B亚群主要引起鸡经典的淋巴细胞瘤,J亚群禽白血病病毒主要引... 禽白血病是由禽白血病病毒引起的严重危害我国养鸡业的重要肿瘤性疾病。不同亚群的禽白血病病毒可以引起鸡淋巴细胞瘤、髓细胞瘤、血管瘤、成红细胞瘤等多种类型肿瘤发生,A、B亚群主要引起鸡经典的淋巴细胞瘤,J亚群禽白血病病毒主要引起髓细胞瘤、血管瘤为主的肿瘤。过去十几年给我国养鸡业造成了巨大威胁,而其他亚群的禽白血病病毒引起病例报道较少。近年来,随着各种外在条件的变化,禽白血病病毒不同毒株和不同亚群之间交叉重组时有发生. 展开更多

关键词 alv-a PCR 髓细胞瘤 禽白血病病毒

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2022-2025年三明市禽白血病定点监测与分析

3

作者 凌芳芳 吴尚明 叶恒 《福建畜牧兽医》 2025年第5期31-33,共3页

通过对三明市禽白血病定点监测点的持续监测,分析2022-2025年禽白血病监测数据,揭示该地区禽白血病的流行特征与变化趋势。J亚型禽白血病(ALV-J)抗体阳性率从2022年的36%(18/50)显著下降至2023年的10%(5/50)、2024年的12%(6/50),并于202... 通过对三明市禽白血病定点监测点的持续监测,分析2022-2025年禽白血病监测数据,揭示该地区禽白血病的流行特征与变化趋势。J亚型禽白血病(ALV-J)抗体阳性率从2022年的36%(18/50)显著下降至2023年的10%(5/50)、2024年的12%(6/50),并于2025年降至0%;而A/B亚型抗体(ALV-A/B)和p27抗原(ALV-p27)在2022-2024年未检出阳性,仅2025年出现1例ALV-A/B抗体阳性(2%)。数据表明:定点监测点的禽白血病以ALV-J亚群为主,但需警惕ALV-A/B亚型的潜在流行风险,建议进一步加强生物安全管理和禽白血病监测,为下一步做好禽白血病净化工作提供依据。 展开更多

关键词 禽白血病 ALV-J抗体 alv-a/B抗体 ALV-p27抗原

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种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与鸡群禽白血病发病率的相关性研究 被引量：17

4

作者 赵鹏 崔治中 马诚太 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1618-1622,共5页

本研究旨在观察种鸡群所产种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与种鸡群发病状况及其下一代鸡群禽白血病发病率的相关性,为鸡群净化和禽白血病预警提供参考依据。对国内海兰褐蛋鸡等品系不同祖代及父母代共7个种鸡场所产种蛋的P27抗原进行... 本研究旨在观察种鸡群所产种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与种鸡群发病状况及其下一代鸡群禽白血病发病率的相关性,为鸡群净化和禽白血病预警提供参考依据。对国内海兰褐蛋鸡等品系不同祖代及父母代共7个种鸡场所产种蛋的P27抗原进行了检测,对部分种鸡场的ALV-A/B和ALV-J抗体进行了检测和病毒的分离鉴定,对各种鸡群孵化后下一代鸡群的禽白血病发病状况和客户投诉情况进行了追踪调查。7个种鸡场所产种蛋中P27抗原检出率为0%～12%,P27抗原检出率与种鸡群的发病状况及其子代鸡群的发病状况和客户投诉情况密切相关,即种蛋中P27抗原检出率越高,种鸡群发病情况越严重,下游客户鸡群发病率和投诉率越高。种鸡群的种蛋P27检出率与种鸡群及其孵化后鸡群的禽白血病感染状况具有较好的吻合性,可以作为开展ALV的流行病学调查和禽白血病感染风险评估的重要指标。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 P27抗原 alv-a/B ALV-J

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SPF鸡感染禽白血病病毒A/B亚群后血清抗体与卵黄抗体的变化及其相关性 被引量：3

5

作者 赵鹏 李德庆 +2 位作者 董宣 徐海鹏 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期614-620,共7页

拟研究以卵黄抗体替代血清抗体检测判定SPF鸡群禽白血病病毒(ALV)感染状态的可行性。在人工接种ALV-A/B后的40只SPF鸡刚开产时,从21只抗体阳性鸡及19只抗体阴性鸡分别采集血清和卵黄并一一对应,比较卵黄不同稀释度与血清中ALV-Ab抗体的... 拟研究以卵黄抗体替代血清抗体检测判定SPF鸡群禽白血病病毒(ALV)感染状态的可行性。在人工接种ALV-A/B后的40只SPF鸡刚开产时,从21只抗体阳性鸡及19只抗体阴性鸡分别采集血清和卵黄并一一对应,比较卵黄不同稀释度与血清中ALV-Ab抗体的阴阳性吻合率及ELISA检测S/P值相关系数。另外36只同批次不攻毒的SPF鸡单独饲养作为对照,76只鸡在25~34周龄期间,每隔3周分别采集1次血清,每周采集1次种蛋,共采集了304份血清样品及836份卵黄样品。所有血清和卵黄抗体用IDEXX的ALV-Ab抗体ELISA检测试剂盒检测。血清按试剂盒规定的1∶500稀释,卵黄按预试验结果选定稀释度稀释。同一只鸡同一时段采集的血清和卵黄样品,严格在同一次ELISA试验中检测。结果表明,相对于血清抗体,将卵黄做1∶300稀释时,假阳性和假阴性最少,确定1∶300为卵黄最适稀释度。在25~34周龄,836份卵黄抗体的检测判定结果与304份血清抗体检测结果吻合率达94.7%,即这些血清抗体阳性鸡同时期采集的卵黄抗体也全部阳性,血清阴性鸡的卵黄抗体也均为阴性。结果提示疫苗生产企业可通过检测SPF种蛋的卵黄抗体来判断SPF鸡场对ALV的洁净度。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 alv-a ALV-B 血清抗体 卵黄抗体 相关性

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2017—2019年安徽省部分禽场禽白血病定点监测 被引量：8

6

作者 王倩 王维 +5 位作者 周迎春 王军 沈艳 刘华 何长生 占松鹤 《中国动物检疫》 CAS 2020年第9期16-20,共5页

为了解安徽省部分禽场禽白血病病毒(avian leucosis virus,ALV)感染情况,2017—2019年,采用ELISA检测试剂盒,对安徽省59个禽场的3275份血清和2100份蛋清进行ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原检测,并对相关结果进行三间分布数据分析。结... 为了解安徽省部分禽场禽白血病病毒(avian leucosis virus,ALV)感染情况,2017—2019年,采用ELISA检测试剂盒,对安徽省59个禽场的3275份血清和2100份蛋清进行ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原检测,并对相关结果进行三间分布数据分析。结果显示:2017—2019年ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原平均抗体阳性率分别为19.36%、7.66%和5.90%;从不同养殖规模看,大型场的ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原的场阳性率分别为73.91%、73.91%和62.52%,均高于中型场和小型场;从不同场点类型来看,祖代场的ALV-J抗体和p27抗原的个体阳性率最高,分别为21.52%和6.01%,商品代场的ALV-A/B抗体的个体阳性率最高;从不同养殖品种看,黄羽肉鸡ALV-J抗体个体阳性率(26.24%)、鸭ALV-A/B抗体个体阳性率(12.31%)均高于其他禽种。结果表明,安徽省禽白血病流行较为严重,尤其是大型场、祖代场以及肉鸡和鸭的ALV感染风险较高。建议进一步加强对高风险禽场和禽群的禽白血病监测,持续推进禽白血病净化工作。 展开更多

关键词 禽白血病 ALV-J抗体 alv-a/B抗体 ALV-p27抗原

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禽网状内皮组织增生病毒和A亚群禽白血病病毒共感染SPF雏鸡诱导的免疫学反应 被引量：4

7

作者 侯力丹 刘丹 +8 位作者 翟天舒 毛娅卿 王嘉 孔冬妮 黄小洁 杨汉春 张亚文 赵鹏 李俊平 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第6期68-76,共9页

禽网状内皮组织增生病毒(REV)和A亚群禽白血病病毒(ALV-A)是鸡群中常见的两种垂直传播性病毒,它们均可以诱导严重的免疫抑制,流行病学调查显示两者共感染现象比较普遍。为系统观察REV与ALV-A分别两者单独感染或共感染SPF鸡后的免疫学反... 禽网状内皮组织增生病毒(REV)和A亚群禽白血病病毒(ALV-A)是鸡群中常见的两种垂直传播性病毒,它们均可以诱导严重的免疫抑制,流行病学调查显示两者共感染现象比较普遍。为系统观察REV与ALV-A分别两者单独感染或共感染SPF鸡后的免疫学反应,本研究于1日龄时对SPF雏鸡分别以REV与ALV-A单独或联合攻毒,于攻毒后不同时间点对不同组SPF鸡的IL-1等9种细胞因子的含量、外周血T淋巴细胞分群和Toll样受体mRNA转录水平等免疫相关指标进行检测和比较分析。结果表明:各感染组IL-1等9种细胞因子的浓度差异不显著,但在感染后期,共感染组IL-2、IL-4浓度下降且显著低于空白对照组,同时IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α浓度升高,显著或极显著高于空白对照组。各感染组CD4^(+)与CD8^(+)T淋巴细胞总数无显著差异,但在第2周~12周其CD4^(+)/CD8^(+)比值始终不同程度低于空白对照组,其中共感染组比值最低。外周血淋巴细胞中Toll样受体mRNA表达水平总体受单感染或共感染的影响均不显著。上述结果表明,REV与ALV-A单感染均未诱导机体产生显著的免疫学反应,进一步印证了REV与ALV-A的免疫抑制特性,相对于单感染,两者共感染导致的免疫抑制反应出现增强的同时彼此也存在一定的干扰作用。 展开更多

关键词 REV alv-a 共感染 细胞因子 外周血T淋巴细胞分群 Toll样受体

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广西凭祥斗鸡禽白血病病毒检测及分离株env基因分析 被引量：3

8

作者 何成伟 王培坤 +5 位作者 秦丽莉 毕玉彧 邹广珍 杨永立 彭昊 韦平 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期23-26,共4页

为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒（ALV）的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.1... 为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒（ALV）的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.13%,血清样品病毒分离阳性率为12.97%,ALV-J和ALV-A/B抗体阳性率分别为22.39%和7.46%;对从2只斗鸡获得的病毒分离株DJ-3-18和DJ-45进行病毒囊膜蛋白基因env的扩增、序列测定及比较分析,结果显示2株病毒的gp85基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为88.2%～96.5%,gp37基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为91.4%～98.0%,其中与台湾A亚群蛋鸡源分离株TW-3577的亲缘关系最近,而与ALV其他亚群毒株的同源性则较低。结果表明,首次获得的2株斗鸡源ALV分离株属A亚群。 展开更多

关键词 斗鸡 禽白血病 流行病学调查 ENV基因 alv-a亚群

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禽网状内皮组织增生症病毒和A亚群禽白血病病毒共感染对疫苗免疫鸡生长性能和免疫器官的影响 被引量：4

9

作者 黄小洁 刘丹 +7 位作者 孔冬妮 张兵 吴华伟 薛麒 杨飞 侯力丹 薛青红 李俊平 《中国兽药杂志》 2022年第2期9-18,共10页

为分析不同免疫状态下禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和A亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-A)共感染对鸡生长性能及免疫器官的影响,通过对1日龄和10日龄常规疫苗免疫鸡群、1日龄灭活疫苗免疫鸡群... 为分析不同免疫状态下禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和A亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-A)共感染对鸡生长性能及免疫器官的影响,通过对1日龄和10日龄常规疫苗免疫鸡群、1日龄灭活疫苗免疫鸡群、1日龄活疫苗免疫鸡群进行REV与ALV-A单感染或共感染,于不同日龄称重,采集免疫器官,对生长性能、免疫器官比重进行比较和分析。结果显示,1日龄鸡单感染或共感染REV和ALV-A均会引起发病、死亡及体重下降,REV、ALV-A单感染组及共感染组平均病死率依次为27.6%、11.6%及31.9%,表明,疫苗免疫刺激增强了REV与ALV-A感染的致病性。10日龄鸡REV、ALV-A单感染及共感染于81日内病死率分别为13.3%、6.7%及20%,低于1日龄感染各相应组,体重下降程度也低于1日龄感染鸡,表明鸡的日龄越高对REV、ALV-A感染的抵抗力越强。活疫苗与灭活疫苗免疫的比较显示,两种疫苗免疫应激均能引起鸡体重下降明显,且活疫苗免疫对体重的抑制作用更明显。REV单感染和共感染对生长发育的抑制作用高于ALV-A单感染,尤其是共感染对鸡体重的抑制作用最明显。对免疫器官比重的影响方面,1日龄感染时,共感染组胸腺比重显著降低,10日龄感染影响不显著,表明鸡日龄越大对病毒感染的抵抗力越强;常规免疫可引起法氏囊比重下降,但对法氏囊的影响是可恢复的,而REV单感染和共感染会加重常规免疫对法氏囊的损伤,且损伤更持久或不可恢复;ALV-A单感染对法氏囊的损伤影响不明显;单感染和共感染对脾脏比重的影响均不显著。本研究为深入研究REV和ALV-A单感染或者共感染诱导鸡群发生免疫抑制机制积累了重要的实验数据。 展开更多

关键词 REV alv-a 共感染 生长性能 免疫器官

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福州市周边蛋鸡场禽白血病亚群的血清流行病学检测 被引量：1

10

作者 林伯全 徐磊 +4 位作者 黄招玲 廖惠珍 林祚贵 杜海江 杨慧 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第2期181-183,共3页

应用ELISA方法对分别采集自福州市周边30个蛋鸡场的597羽海兰蛋鸡、512羽罗曼蛋鸡、486羽伊莎蛋鸡和553羽特佳蛋鸡共2148羽的血样进行禽白血病病毒(ALV)亚群ALV-A/B和ALV-J抗体检测.结果表明:样品ALV-A/B抗体阳性率由高至低依次为:特佳... 应用ELISA方法对分别采集自福州市周边30个蛋鸡场的597羽海兰蛋鸡、512羽罗曼蛋鸡、486羽伊莎蛋鸡和553羽特佳蛋鸡共2148羽的血样进行禽白血病病毒(ALV)亚群ALV-A/B和ALV-J抗体检测.结果表明:样品ALV-A/B抗体阳性率由高至低依次为:特佳蛋鸡群11.39%(63/553)、罗曼蛋鸡群11.32%(58/512)、海兰蛋鸡群8.54%(51/597)和伊莎蛋鸡群7.61%(37/486);样品ALV-J抗体阳性率由高至低依次为:特佳蛋鸡群5.24%(29/553)、罗曼蛋鸡群4.10%(21/512)、伊莎蛋鸡群3.51%(13/486)和海兰蛋鸡群3.18%(19/597);而样品ALV-A/B抗体总阳性率为9.73%(209/2148),高于ALV-J抗体总阳性率3.82%(82/2148),其中有0.70%(15/2148)的ALV-A/B和ALV-J抗体双阳性样品;蛋鸡场ALV-A/B抗体阳性率为70.00%(21/30),高于ALV-J抗体阳性率36.7%(11/30),其中有16.7%(5/30)的ALVA/B和ALV-J抗体双阳性样品.结论:福州市周边蛋鸡场不同品系和不同鸡群间存在不同程度的ALV流行,相比ALV-J,ALV-A/B流行更普遍,且存在ALV-A/B和ALV-J抗体双阳性样品,应予重视. 展开更多

关键词 禽白血病 亚群 alv-a/B抗体 ALV-J抗体 福州市

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表达A亚群禽白血病病毒Gp85蛋白的乳酸菌的构建 被引量：2

11

作者 李鼎伟 高可丽 +4 位作者 曾扬 方春 杨玉莹 刘晶 梁雄燕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3456-3463,共8页

本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的活菌疫苗,用于预防禽白血病。使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组... 本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的活菌疫苗,用于预防禽白血病。使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组DNA为模板,使用PCR方法扩增ALV-A Gp85蛋白的编码基因gp85,将树突状细胞靶向肽(DC-targeting peptide,DCpep)编码基因与gp85基因进行融合,获得gp85-DCpep基因;使用乳酸菌锚定表达载体pSIP409-pgsA’通过同源重组的方法构建重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85;经测序正确后将上述质粒分别电转化植物乳杆菌NC8感受态细胞,获得重组植物乳杆菌;使用SppIP诱导重组植物乳杆菌的表达,收集处于对数生长期的菌体,通过反复冻融获取细胞膜的蛋白样,采用Western blotting技术检测pgsA’-gp85-DCpep和pgsA’-gp85蛋白的表达情况。结果显示,试验成功获得基因片段gp85和gp85-DCpep,构建的重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85测序无突变和丢失情况,并成功电转到植物乳杆菌NC8感受态细胞中,使用SDS-PAGE和Western blotting技术在细胞膜蛋白样中检测到蛋白的表达,大小分别为48.3(pgsA’-gp85-DCpep)和47 ku(pgsA’-gp85)。本试验成功构建了重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85,获得的重组植物乳杆菌NC8-pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA’-gp85中的蛋白均成功表达,且具有反应原性,为后期深入研究重组植物乳杆菌在抗ALV-A感染中的保护机制奠定良好的基础。 展开更多

关键词 A亚群禽白血病病毒(alv-a) Gp85蛋白 植物乳杆菌 树突状细胞 锚定表达

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江苏常州地区禽白血病血清学调查研究 被引量：5

12

作者 王建 孙彤 +3 位作者 孙竹筠 苏苌 陈鸿军 陈丹清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期185-189,共5页

为了解江苏常州地区肉鸡禽白血病病毒(ALV)感染情况,本研究采集了该地区2019年7-12月、2020年1-4月肉鸡血清样本1257份,通过ELISA试剂盒检测ALV-A/B、ALV-J、抗原p27阳性率。结果显示:在接受调查的两个地区均存在ALV感染及混合感染,且AL... 为了解江苏常州地区肉鸡禽白血病病毒(ALV)感染情况,本研究采集了该地区2019年7-12月、2020年1-4月肉鸡血清样本1257份,通过ELISA试剂盒检测ALV-A/B、ALV-J、抗原p27阳性率。结果显示:在接受调查的两个地区均存在ALV感染及混合感染,且ALV-A/B感染率(13.13%)均高于ALV-J(5.01%);不同月份阳性率存在一定差异,ALV-A/B、ALV-J均为春夏季阳性率较高,秋冬季逐渐下降趋势;抗体阳性样本中有54.39%的p27抗原阳性率。本次调查为江苏常州地区商品肉鸡ALV净化及防控提供一定的参考依据。 展开更多

关键词 ALV-J alv-a/B P27抗原 ELISA

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E3泛素连接酶RNF165在A亚群禽白血病病毒复制中的作用 被引量：1

13

作者 王兴明 王后坤 +3 位作者 陈雪阳 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3781-3789,共9页

【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时... 【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时荧光定量PCR方法分别从体外和体内两个方面验证ALV-A对宿主RNF165表达的影响;参考已公布的RNF165基因序列设计过表达引物,通过PCR扩增RNF165基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1;将验证表达的重组质粒转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,使用Western blotting检测过表达RNF165对病毒复制的影响;最后设计突变引物,构建RNF165功能结构域突变质粒,将过表达质粒和突变质粒分别转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,Western blotting测定gp85蛋白表达差异。【结果】ALV-A感染DF-1细胞后未能检测到内源性的RNF165蛋白,但基因转录水平较对照组明显下调(P<0.01)。在体内试验中,与对照组相比,感染病毒雏鸡肝脏中RNF165基因和蛋白表达水平均有所下调(P<0.01);通过PCR成功扩增到大小为1068 bp的目的片段并成功克隆至pcDNA3.1,Western blotting结果显示,在39 ku处出现目的条带,RNF165过表达后促进了病毒复制;测序结果显示,成功构建出功能结构域突变质粒,与过表达质粒组相比,RNF165突变质粒组病毒的复制水平受到显著抑制。【结论】ALV-A感染抑制DF-1细胞和雏鸡肝脏RNF165的表达,在体外试验中,过表达RNF165会促进ALV-A的复制,且这种影响与其保守结构域有关。 展开更多

关键词 环指蛋白165 A亚群禽白血病病毒(alv-a) 病毒复制 功能结构域突变

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E3泛素连接酶RNF185对A亚群禽白血病病毒体外复制的影响 被引量：3

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作者 刘晶 陈雪阳 +1 位作者 曾扬 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4364-4371,共8页

【目的】环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员。试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响,为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影... 【目的】环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员。试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响,为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影响和介导的致瘤机制提供参考。【方法】参考GenBank中已公布的鸡RNF185基因(登录号:NP_001007841)序列分别设计RNF185过表达引物和RNF185单链shRNA,通过PCR扩增RNF185基因及合成双链shRNA,将其分别克隆至真核表达载体psi-flag和干扰载体pLKO.1-GFP,并使用PCR、双酶切和测序等方法验证重组质粒。使用Western blotting验证重组质粒的表达和干扰效果,并使用CCK-8试剂盒检测重组质粒对DF-1细胞活性的影响。在RNF185过表达和干扰后的DF-1细胞中分别接种10~4半数组织感染剂量(TCID)ALV-A(rHB2015012)病毒液,于接种完成后3、4和5 d收取细胞,并使用Western blotting检测ALV-A的病毒载量。【结果】PCR成功扩增出RNF185基因,单链shRNA经退火后形成双链shRNA,并成功构建重组质粒psi-flag-RNF185、pLKO.1-RNF185-1和pLKO.1-RNF185-2。Western blotting结果表明,构建的过表达和干扰质粒能够在DF-1细胞中稳定表达和干扰RNF185。CCK-8结果表明,过表达和干扰RNF185不影响DF-1细胞的活性。RNF185过表达可以促进ALV-A在DF-1细胞中的复制,干扰RNF185表达可以抑制ALV-A在DF-1细胞中的复制。【结论】本研究构建了可以在DF-1细胞中高效表达和干扰RNF185的过表达质粒和干扰质粒,RNF185对DF-1细胞增殖无明显影响,能够促进ALV-A(rHB2015012)在体外的复制。 展开更多

关键词 环指蛋白185(RNF185) A亚群禽白血病病毒(alv-a) 病毒复制

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E3泛素连接酶FBXL8对A亚群禽白血病病毒复制的影响

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作者 郑诗龄 陈雪阳 +3 位作者 刘晶 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1696-1705,共10页

【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原... 【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,将其转化大肠杆菌表达菌株RIL进行诱导表达及纯化,将表达产物His-FBXL8免疫10月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA分别检测抗体特异性及效价;针对已公布的FBXL 8基因序列设计过表达引物及靶向FBXL 8基因的干扰序列,构建过表达质粒psi-flag-FBXL8及干扰质粒pLKO.1-FBXL8-shRNA,使用Western blotting检测其表达效果。将构建成功的过表达质粒和干扰质粒转染DF-1细胞,24 h后感染ALV-A,通过半定量PCR、Western blotting分别检测ALV-A的结构蛋白P27、GP85表达水平。【结果】PCR成功扩增出大小为1182 bp的FBXL 8基因片段,并成功构建FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,诱导表达的融合蛋白His-FBXL8大小为43 ku。Western blotting和间接ELISA结果显示,制备的FBXL8兔多克隆抗体可特异性识别外源蛋白,且抗体效价为1∶64000。成功构建了FBXL8过表达质粒和干扰质粒,其在DF-1细胞中能够实现对FBXL8的过表达和敲低。半定量PCR和Western blotting检测结果显示,过表达FBXL8可抑制ALV-A复制,而敲低FBXL8则促进其复制。【结论】本研究制备的FBXL8多克隆抗体具有良好特异性及反应性;在DF-1细胞中,FBXL8负向调控ALV-A复制,研究结果为进一步深入探究FBXL8生物学特性提供了重要参考,并为揭示FBXL8抗ALV-A感染分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 FBXL8 A亚群禽白血病病毒(alv-a) 多克隆抗体 病毒复制

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玉林市部分规模种禽场三黄鸡禽白血病流行情况调查 被引量：4

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作者 黄宇 《广西畜牧兽医》 2019年第2期64-66,共3页

为了解玉林市部分种禽场三黄鸡禽白血病流行情况,本研究分别采集了玉林市4个未进行禽白血病净化的小型规模种禽场(场1～场4)和2个已连续多年开展禽白血病净化的中大型规模种禽场(场5～场6)的三黄鸡蛋清和相应鸡血清样品,通过检测禽白血... 为了解玉林市部分种禽场三黄鸡禽白血病流行情况,本研究分别采集了玉林市4个未进行禽白血病净化的小型规模种禽场(场1～场4)和2个已连续多年开展禽白血病净化的中大型规模种禽场(场5～场6)的三黄鸡蛋清和相应鸡血清样品,通过检测禽白血病ALV-p27抗原、ALV-A/B抗体、ALV-J抗体,分析玉林市部分规模种禽场三黄鸡禽白血病的流行情况。结果显示,场1～场4 ALV-p27抗原、ALV-A/B抗体、ALV-J抗体抽样总阳性率分别为13. 62%、15. 02%和72. 77%,混合感染现象严重,以ALV-J亚群感染为主;场5～场6ALV-p27抗原、ALV-A/B抗体、ALV-J抗体抽样总阳性率分别为0. 75%、0. 00%和0. 75%,3项指标均低于禽白血病净化所要求的标准。结果表明禽白血病在玉林市小规模种禽场已经普遍存在,今后要采取措施加强对该病的净化及根除工作,有效控制其蔓延。 展开更多

关键词 玉林市三黄鸡 禽白血病 ALV-p27抗原 alv-a/B抗体 ALV-J抗体

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