HER2／neu和Akt2在胃癌中的表达及意义 被引量：6

1

作者 王士娜 马静 +4 位作者 杨立宇 王星 吴璠 宦大为 王翠芳 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期131-134,共4页

目的检测HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌及正常胃组织中的表达,分析二者与胃癌临床病理指标间的关系。方法应用免疫组化方法检测HER2/neu和Akt2蛋白在80例胃癌及40例正常胃组织中的表达。结果 HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率胃癌中分别为17.50... 目的检测HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌及正常胃组织中的表达,分析二者与胃癌临床病理指标间的关系。方法应用免疫组化方法检测HER2/neu和Akt2蛋白在80例胃癌及40例正常胃组织中的表达。结果 HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率胃癌中分别为17.50%和67.50%,正常胃组织中分别为0和5.00%,胃癌组织与正常胃组织比较HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率的差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌中,HER2/neu的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度有关(P<0.05),与临床分期、淋巴结转移及浆膜浸润无关(P>0.05);而Akt2的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与浆膜浸润无关(P>0.05)。HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达有一定的一致性(χ2=4.97,P<0.05)。结论HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌中有表达,二者的表达可能与胃癌的不良预后有密切关系,HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达具有一定的一致性。 展开更多

关键词 HER2 NEU akt2 胃癌 免疫组化

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肺癌组织中Akt2、p-Akt蛋白的表达 被引量：7

2

作者 刘红 张茂林 +3 位作者 王静 邢丽华 苗丽君 程哲 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第4期674-677,共4页

目的:观察肺癌组织中Akt2、p-Akt的表达。方法:对原发性非小细胞肺癌组织80例和肺良性病变组织35例行HE染色及Akt2、p-Akt免疫组织化学染色。结果:肺癌组织中Akt2蛋白阳性率为91.3%(73/80),p-Akt蛋白阳性率为78.8%(63/80);肺良性病变组... 目的:观察肺癌组织中Akt2、p-Akt的表达。方法:对原发性非小细胞肺癌组织80例和肺良性病变组织35例行HE染色及Akt2、p-Akt免疫组织化学染色。结果:肺癌组织中Akt2蛋白阳性率为91.3%(73/80),p-Akt蛋白阳性率为78.8%(63/80);肺良性病变组织中Akt2蛋白阳性率为5.7%(2/35),p-Akt未表达。肺癌组织中Akt2、p-Akt蛋白阳性率高于肺良性病变组织(P<0.05)。Akt2、p-Akt蛋白阳性率与患者年龄、性别、组织学类型、TNM分期无关(P>0.05)。Akt2蛋白的表达与肺癌组织淋巴结转移有关(P<0.05);p-Akt蛋白与肺腺癌组织分化程度有关(P<0.05)。结论:Akt2及p-Akt蛋白的表达可能与肺癌的发生有关。 展开更多

关键词 akt2 P-AKT 肺肿瘤 非小细胞肺癌

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AKT2在非小细胞肺癌中的表达及预后意义 被引量：7

3

作者 缪小辉 宋勇 +3 位作者 吕镗烽 展平 吕艳玲 袁冬梅 《中国肺癌杂志》 CAS 2011年第5期396-399,共4页

背景与目的 AKT2是PI3K信号传导通路中重要因子,AKT2激活导致细胞生长和生存,近年来,许多研究表明AKT2在肿瘤形成、生长及转移中起着重要作用。本研究通过检测肿瘤组织中AKT2的表达水平,旨在研究AKT2在非小细胞肺癌(non-small cell lung... 背景与目的 AKT2是PI3K信号传导通路中重要因子,AKT2激活导致细胞生长和生存,近年来,许多研究表明AKT2在肿瘤形成、生长及转移中起着重要作用。本研究通过检测肿瘤组织中AKT2的表达水平,旨在研究AKT2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与临床预后的关系。方法通过免疫组化方法检测80例NSCLC及10例肺良性病变的组织标本中AKT2蛋白水平。结果 NSCLC中AKT2表达的阳性率为57.50%(46/80),明显高于肺良性病变组织(1/10,10.0%)中的表达,具有统计学差异(χ2=8.038,P=0.006)。AKT2表达与NSCLC患者临床病理特征无明显关系。AKT2表达与患者无进展生存期(χ2=12.671,P=0.005)及总生存期(χ2=9.851,P=0.021)有明显关系。结论 NSCLC中AKT2是患者预后不良的生物学标志。 展开更多

关键词 肺肿瘤 人akt2蛋白 预后

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人结肠癌中AKT2和PTEN蛋白表达的意义及相关性 被引量：6

4

作者 赵红波 张小元 +2 位作者 刘迪 刘永杰 张普 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期592-595,共4页

目的检测AKT2蛋白在人结肠癌组织中的表达及其与PTEN的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测30例正常结肠、30例腺瘤和64例结肠癌组织中AKT2和PTEN的表达。结果从正常组织、腺瘤组织到结肠癌组织,PTEN的阳性表达率呈递减趋势,AKT2呈递... 目的检测AKT2蛋白在人结肠癌组织中的表达及其与PTEN的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测30例正常结肠、30例腺瘤和64例结肠癌组织中AKT2和PTEN的表达。结果从正常组织、腺瘤组织到结肠癌组织,PTEN的阳性表达率呈递减趋势,AKT2呈递增趋势;PTEN在正常结肠组织中的表达明显高于结肠腺瘤和结肠癌组织中的表达,差异有统计学意义(χ2=68.855,P<0.05),而AKT2在结肠腺瘤和结肠癌组织中的表达明显高于正常结肠组织中的表达,差异有统计学意义(χ2=37.574,P<0.05);随结肠癌分化程度降低、淋巴结的转移、Dukes分期的增加,AKT2的阳性表达率升高(P<0.05);PTEN与AKT2的表达呈负相关(r=-0.143,n=64,P<0.05)。结论由于PTEN表达下调或缺失而导致AKT2的异常高表达,AKT2的高表达与结肠癌的发生发展有关。 展开更多

关键词 结肠癌 PTEN akt2 免疫组织化学法

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AKT2 S100A4及MMP-9在鼻咽癌组织中的表达 被引量：4

5

作者 陈应超 张少容 +2 位作者 李里香 罗英 刘月辉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期444-447,共4页

目的:探讨AKT2、S100A4及MMP-9在鼻咽癌组织中的表达、相互关系及临床意义。方法:应用免疫组化EliVision二步法检测50例鼻咽癌组织、25例慢性鼻咽炎组织标本中AKT2、S100A4及MMP-9蛋白的表达,并分析三者与鼻咽癌患者临床特征的关系及三... 目的:探讨AKT2、S100A4及MMP-9在鼻咽癌组织中的表达、相互关系及临床意义。方法:应用免疫组化EliVision二步法检测50例鼻咽癌组织、25例慢性鼻咽炎组织标本中AKT2、S100A4及MMP-9蛋白的表达,并分析三者与鼻咽癌患者临床特征的关系及三者表达的相关性。结果:鼻咽癌组织中AKT2、S100A4及MMP-9的阳性表达率分别为48.0%(24/50)、52.0%(26/50)、74.0%(37/50),显著高于慢性鼻咽炎组织的8.0%(2/25)、0(0/25)、36.0%(9/25),P均<0.01;AKT2和S100A4的表达均与鼻咽癌颈淋巴结转移及临床分期相关(P均<0.05),MMP-9的表达与鼻咽癌颈淋巴结转移相关(P<0.05),而三者的表达与患者性别、年龄及T分期无关(P均>0.05);鼻咽癌组织中AKT2和S100A4与MMP-9的表达呈正相关(P均<0.01),AKT2与S100A4的表达无关(P>0.05)。结论:AKT2、S100A4及MMP-9的高表达在鼻咽癌的发生、发展及转移方面可具有重要作用,AKT2和S100A4可能通过上调MMP-9的表达而促进鼻咽癌的发展及转移,联合检测三者的表达情况对判断鼻咽癌生物学行为和预测肿瘤转移有一定的临床价值。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 akt2 S100A4 MMP-9 免疫组织化学

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RNA干扰AKT2影响人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨的敏感性 被引量：4

6

作者 彭涛 周峰 +1 位作者 杨鹏 王春友 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期94-97,共4页

目的探讨RNA干扰AKT2对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨敏感性的影响。方法构建荷胰腺癌裸鼠模型,采用腹腔给药和瘤内注射方式,以吉西他滨配合AKT2 siRNA表达载体对荷瘤鼠进行联合干预治疗,对比观测裸鼠肿瘤生长情况,RT-PCR检测肿... 目的探讨RNA干扰AKT2对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨敏感性的影响。方法构建荷胰腺癌裸鼠模型,采用腹腔给药和瘤内注射方式,以吉西他滨配合AKT2 siRNA表达载体对荷瘤鼠进行联合干预治疗,对比观测裸鼠肿瘤生长情况,RT-PCR检测肿瘤细胞AKT2 mRNA的表达,免疫组织化学法检测肿瘤AKT2蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数。结果化疗+AKT2-siRNA组移植瘤组织中AKT2 mRNA及AKT2蛋白表达明显低于空白对照组、化疗组、化疗+空白质粒组。化疗+AKT2-siRNA组瘤重、肿瘤体积显著低于其他各组。化疗+AKT2-siRNA组抑瘤率、凋亡指数显著高于其他各组。结论RNA干扰AKT2明显提高人胰腺癌细胞株对吉西他滨化疗的敏感性。 展开更多

关键词 akt2 胰腺癌 吉西他滨

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癌基因AKT2在肺鳞癌和腺癌中的表达及与细胞增殖转移的关系 被引量：2

7

作者 苗丽君 王静 +3 位作者 孙振涛 吴逸明 吴拥军 王新朝 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第23期1325-1328,共4页

目的:探讨癌基因AKT2在肺鳞癌和腺癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖与转移的关系。方法:应用免疫组化方法,检测肺鳞癌和腺癌组织80例、非肿瘤性肺组织标本35例中AKT2蛋白、PCNA的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果:AKT2蛋白在肺... 目的:探讨癌基因AKT2在肺鳞癌和腺癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖与转移的关系。方法:应用免疫组化方法,检测肺鳞癌和腺癌组织80例、非肿瘤性肺组织标本35例中AKT2蛋白、PCNA的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果:AKT2蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中总阳性表达率为91.3%(73/80),显著高于在非肿瘤性肺组织中的表达5.7%(2/35)(P<0.05);AKT2蛋白在淋巴结转移组和无淋巴结转移组阳性表达率分别为100%、80.6%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);AKT2的表达与患者年龄、性别、组织学类型、组织分化及TNM分期均无关(P>0.05)。在肺癌(鳞癌+腺癌)和非肿瘤性肺组织中,PCNA标记指数分别为(52.45±26.14)%和(9.57±2.20)%,两组之间差别有显著性意义(P<0.01)。在肺鳞癌和腺癌中,AKT2蛋白的总表达与PCNA高增殖指数呈正相关关系(P<0.01)。结论:AKT2的高表达与肺鳞癌和腺癌的高增殖活性及恶性行为有关,在肺癌的发生、发展中可能具有重要作用。 展开更多

关键词 肺肿瘤 鳞癌 腺癌 akt2 PCNA

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miR-184在氧糖剥夺诱导SK-N-SH细胞缺血损伤中的作用及其对抗凋亡基因AKT2表达的调节 被引量：2

8

作者 庞晓敏 向会尧 刘竞丽 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第20期3219-3222,共4页

目的:探讨miR-184在氧糖剥夺(OGD)诱导SK-N-SH细胞缺血缺氧损伤中的作用及其对抗凋亡基因AKT2的调节。方法:应用RT-PCR检测miR-184在SK-N-SH细胞OGD后的表达情况,并瞬时转染miR-184的类似物、抑制物及其阴性对照,分别行RT-PCR检测miR-18... 目的:探讨miR-184在氧糖剥夺(OGD)诱导SK-N-SH细胞缺血缺氧损伤中的作用及其对抗凋亡基因AKT2的调节。方法:应用RT-PCR检测miR-184在SK-N-SH细胞OGD后的表达情况,并瞬时转染miR-184的类似物、抑制物及其阴性对照,分别行RT-PCR检测miR-184和AKT2的表达,MTT染色检测细胞存活率。结果:与正常细胞相比,miR-184在OGD诱导的缺血损伤模型中表达下调(P<0.05);且过表达或抑制miR-184可显著改变AKT2的表达,影响缺血损伤细胞的存活率(P<0.05);而在非OGD作用下,miR-184对SK-N-SH细胞的活力无显著影响。结论:miR-184通过负性调节AKT2的表达水平,在OGD诱导的缺血损伤中发挥重要作用。 展开更多

关键词 氧糖剥夺 miR-184 akt2 缺血损伤

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AKT2-siRNA对肺癌细胞NCI-H446沉默作用的研究

9

作者 曹婷婷 张茂林 +2 位作者 赵国强 卢滨 王静 《中国肺癌杂志》 CAS 2008年第4期505-508,共4页

背景与目的肺癌是目前发病率较高的恶性肿瘤之一,其病死率居恶性肿瘤的首位,随着分子生物学研究的不断进展,人们越来越清楚地认识到肺癌的发生和发展是一个多基因参与的多步骤的过程,RNAi作为基因治疗中一种新的效率高、特异性强的治疗... 背景与目的肺癌是目前发病率较高的恶性肿瘤之一,其病死率居恶性肿瘤的首位,随着分子生物学研究的不断进展,人们越来越清楚地认识到肺癌的发生和发展是一个多基因参与的多步骤的过程,RNAi作为基因治疗中一种新的效率高、特异性强的治疗手段愈来愈多地受到人们的重视。本研究应用RNA干扰(RNAi)技术,以AKT2为靶基因,设计并构建重组真核表达载体,转染肺癌细胞NCI-H446,观察其对AKT2基因的沉默作用。方法利用已知AKT2的mRNA基因序列设计并合成具有短发夹结构的两条寡核甘酸序列及一条无关对照序列,与pGEM-TEasy载体连接后以T7和SP6为引物进行PCR鉴定,对表达载体pRNAT-U6.2及阳性克隆产物进行双酶切,将得到的基因及线性化的表达载体再次连接,利用PCR的方法进行重组体的筛选鉴定及测序分析,利用脂质体转染肺癌细胞NCI-H446,RT-PCR检测AKT2-mRNA沉默效果。结果将合成的DNA序列克隆到表达载体上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列,转染肺癌细胞NCI-H446后,AKT2-mRNA表达明显降低。结论成功构建的靶向AKT2-RNA的干扰重组表达载体可有效抑制肺癌细胞NCI-H446mRNA的表达。 展开更多

关键词 akt2基因 RNA干扰 肺肿瘤

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RNAi抑制Akt2基因表达对卵巢癌细胞系A2780放射敏感性的影响 被引量：2

10

作者 孙冬岩 翁丹卉 +3 位作者 宋晓红 夏曦 卢运萍 马丁 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第2期96-100,共5页

背景与目的:许多研究已经表明蛋白激酶B(PI3K/Akt)在肿瘤细胞恶性增殖及肿瘤对放化疗的拮抗中起着重要作用,Akt2是Akt家族成员之一。本研究应用RNAi(RNA interference,RNAi)技术抑制Akt2基因的表达,观察其对肿瘤细胞生长和放射敏感性的... 背景与目的:许多研究已经表明蛋白激酶B(PI3K/Akt)在肿瘤细胞恶性增殖及肿瘤对放化疗的拮抗中起着重要作用,Akt2是Akt家族成员之一。本研究应用RNAi(RNA interference,RNAi)技术抑制Akt2基因的表达,观察其对肿瘤细胞生长和放射敏感性的影响。方法:构建Akt2基因的短发卡状RNA质粒转染人卵巢癌细胞A2780,同时以转染空载体和未转染组作为对照,3组细胞命名为pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780)运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹方法比较转染前后Akt2表达的差异;四甲基偶氮唑蓝实验绘制细胞生长曲线;克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;6MV X线10Gy照射后48h收集细胞,流式细胞仪(FACS)分析细胞凋亡情况。结果:与对照相比,shRNA可抑制Akt2mRNA转录和蛋白的表达,差异显著(P<0.05);pAkt2-shRNA/A2780细胞生长明显慢于pEGFP/A2780和A2780细胞;pAkt2-shRNA/A2780细胞克隆形成率明显低于pEGFP/A2780细胞和A2780细胞(P<0.05);pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780细胞凋亡率分别为(78.3±2.2)%、(41.2±1.8)%和(40.4±2.0)%,差异有显著性(P<0.05)。结论:转染针对Akt2基因shRNA真核表达载体,抑制卵巢癌细胞中Akt2基因表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,增强其对放射治疗的敏感性。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 RNA干扰 放射敏感性 细胞凋亡 akt2

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鳜AKT2在传染性脾肾坏死病毒增殖中的作用 被引量：1

11

作者 明月 牛银杰 +4 位作者 付小哲 刘礼辉 梁红茹 林强 李宁求 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2021年第2期14-22,共9页

【目的】研究鳜AKT2(ScAKT2)在传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)增殖中的作用,为鳜ISKNV防控提供参考。【方法】克隆ScAKT2基因开放阅读框,构建原核表达载体,进行原核表达及蛋白纯化。用纯化后的... 【目的】研究鳜AKT2(ScAKT2)在传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)增殖中的作用,为鳜ISKNV防控提供参考。【方法】克隆ScAKT2基因开放阅读框,构建原核表达载体,进行原核表达及蛋白纯化。用纯化后的ScAKT2重组蛋白免疫日本大耳兔后制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体的效价,用间接免疫荧光和Western blot法测定抗体的特异性。克隆鳜AKT2基因,构建过表达载体pCMV-EGFP-ScAKT2,将其转染至CPB细胞系中构建ScAKT2过表达细胞系,用荧光显微镜检测转染效率,用qRT-PCR法及Western blot法分别测定ScAKT2 mRNA水平和蛋白水平的表达,以鉴定ScAKT2过表达细胞系是否构建成功。将ISKNV接种至ScAKT2过表达细胞系中,用qPCR法及Western blot法分别测定ISKNV病毒拷贝数及ISKNV-MCP蛋白的表达,用qRT-PCR法测定ScIRF3、ScIRF7、ScMx、ScIL8、ScTRAF2和ScTRAF3等先天免疫因子mRNA水平的表达情况。【结果】PCR扩增获得1400 bp的AKT2 ORF片段,成功构建了原核表达质粒,诱导表达出72 ku的重组蛋白。成功制备了ScAKT2多克隆抗体,抗体效价达1∶256000,纯化后质量浓度约为10 mg/mL。成功构建了pCMV-EGFP-ScAKT2过表达载体和过表达ScAKT2的CPB细胞系,过表达ScAKT2 CPB细胞可极显著抑制ISKNV的增殖,能明显上调ScIRF3、ScIRF7、ScMx、ScIL8、ScTRAF2和ScTRAF3等先天免疫因子mRNA的表达水平。【结论】ScAKT2通过上调先天免疫因子的表达抑制ISKNV的增殖,为鳜ISKNV防控提供了新的潜在靶点。 展开更多

关键词 鳜 akt2 传染性脾肾坏死病毒 病毒增殖

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miR-142通过上调AKT2的表达促进角膜新生血管形成 被引量：1

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作者 沈厉 周善璧 +4 位作者 毛旖旎 林天兰 岑超 胡雁 侯胜平 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期988-993,共6页

目的:研究micro RNA142(miR-142)对角膜新生血管形成的影响及其相关机制。方法:实验设置空白对照组、阴性对照组、过表达miR-142组以及干扰miR-142组,分别利用miR-142模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)过表达和干扰miR-142;CCK-8增殖实... 目的:研究micro RNA142(miR-142)对角膜新生血管形成的影响及其相关机制。方法:实验设置空白对照组、阴性对照组、过表达miR-142组以及干扰miR-142组,分别利用miR-142模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)过表达和干扰miR-142;CCK-8增殖实验检测miR-142对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因验证AKT2是否为miR-142的直接靶基因;RT-PCR和Western blot实验检测miR-142对AKT2表达水平的影响。结果:CCK-8增殖实验结果显示空白对照组、阴性对照组和过表达miR-142组96 h的吸光度(absorbance,A)均值分别为872.21±44.20、842.16±49.54和1 407.91±16.58,差异具有统计学意义(F=102.8,P=0.000)。干扰miR-142后HUVECs增殖能力明显减弱(空白对照组=919.69±25.46,阴性对照组=856.76±36.22,干扰miR-142组=602.77±25.62;F=72.8,P=0.000)。双荧光素酶报告基因结果发现过表达miR-142后AKT2表达水平没有明显变化(对照组=0.36,过表达miR-142组=0.46,P=0.147)。RT-PCR结果显示过表达miR-142(0.408±0.046)后AKT2表达水平较阴性对照组(0.173±0.022)升高(P=0.018),干扰miR-142组(0.16±0.02)较阴性对照组(0.362±0.068)明显降低(P=0.037),差异均具有统计学意义。Western blot实验进一步验证了miR-142对AKT2基因的调控作用。进一步研究发现,sh RNA干扰AKT2后miR-142促进HUVECs增殖的作用消失,对照组、过表达miR-142组、过表达miR-142+sh RNA-AKT2组和sh RNA-AKT2组的96 h吸光度值分别为981.80±75.40、1 357.81±47.56、806.39±49.70和921.59±40.38,差异具有统计学意义(F=40.97,P=0.000)。结论:miR-142通过上调AKT2的表达促进HUVECs增殖,从而促进角膜新生血管形成。 展开更多

关键词 角膜新生血管 人脐静脉内皮细胞 miR-142 akt2

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慢病毒载体介导的RNA干扰Akt2表达抑制猪前体脂肪细胞分化 被引量：7

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作者 王平 熊燕 +2 位作者 杨公社 沈清武 庞卫军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期53-60,共8页

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase2,Akt 2)是胰岛素信号通路的关键基因,与细胞生存和癌症的发生密切相关.但Akt2在前体脂肪细胞分化中的作用仍然不是十分清楚.本研究构建了慢病毒干扰载体pLentiH1-Akt2 shRNA 1,... 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase2,Akt 2)是胰岛素信号通路的关键基因,与细胞生存和癌症的发生密切相关.但Akt2在前体脂肪细胞分化中的作用仍然不是十分清楚.本研究构建了慢病毒干扰载体pLentiH1-Akt2 shRNA 1,2,3及scrambled,经酶切和测序鉴定均正确;这4种干扰载体分别转染HEK293T细胞后,均获得有感染性的病毒颗粒并感染猪前体脂肪细胞.转染HEK293T细胞48 h后real-time PCR分析和转染72 h后Western印迹分析表明,Akt2 shRNA2和shRNA3介导的Akt2 mRNA和蛋白表达被显著下调(P<0.05),其中pLentiH1-Akt2 shRNA3介导的对Akt2 mRNA和蛋白的干扰效率均达到70%以上(P<0.01).进一步研究发现,猪前体脂肪细胞中Akt2被有效干扰后,细胞中脂滴明显减少并变小,且成脂标志基因PPARγ和aP2蛋白水平被显著下调.本研究结果表明,Akt2 knockdown可显著抑制猪前体脂肪细胞分化. 展开更多

关键词 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 慢病毒载体 猪 前体脂肪细胞

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Akt2抑制剂促进大鼠根尖周炎症微环境中巨噬细胞的极化:基于降低miR-155-5p的表达 被引量：4

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作者 李敬怡 杨思圆 +4 位作者 韩振 江天乐 朱耀 周子航 周静萍 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期568-576,共9页

目的通过构建大鼠慢性根尖周炎模型,探讨Akt2抑制剂对根尖周组织巨噬细胞极化的影响及其相关因素。方法随机选取32只健康SD大鼠,其中28只作为实验组,通过髓腔开放法建立大鼠根尖周炎模型,在模型构建过程中分别在下颌第一磨牙左右侧髓腔... 目的通过构建大鼠慢性根尖周炎模型,探讨Akt2抑制剂对根尖周组织巨噬细胞极化的影响及其相关因素。方法随机选取32只健康SD大鼠,其中28只作为实验组,通过髓腔开放法建立大鼠根尖周炎模型,在模型构建过程中分别在下颌第一磨牙左右侧髓腔内注射生理盐水和Akt2抑制剂。另外4只为健康对照组,不做任何处理。于开髓后第7、14、21、28天随机处死7只实验组和1只健康对照组大鼠后,分离下颌骨获取样本。X线和苏木精-伊红(HE)染色观察根尖周组织炎症浸润情况;免疫组织化学(IHC)染色观察Akt2、巨噬细胞及炎症介质的表达与定位,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察Akt2、CD86、CD163、炎症介质(IL-6、IL-10)、miR-155-5p及C/EBPβ的mRNA表达,分析对巨噬细胞极化的影响。结果X线和苏木精-伊红染色结果显示:髓腔开放21 d后大鼠根尖周表现明显的慢性炎症,确认慢性大鼠根尖周炎模型构建成功。IHC染色和RT-PCR结果表明:与健康对照组相比,髓腔开放21 d后实验组大鼠根尖周炎组织中Akt2、CD86、CD163、miR-155-5p、C/EBPβ、及IL-10表达显著增高(P<0.05),与生理盐水组相比,Akt2抑制剂组大鼠根尖周组织中Akt2、CD86、miR-155-5p和IL-6的表达水平以及CD86+M1型/CD163+M2型巨噬细胞比值显著降低(P<0.05),而CD163、C/EBPβ和IL-10的表达水平明显增高(P<0.05)。结论抑制Akt2可减缓大鼠根尖周炎症进展,促进大鼠根尖周炎症微环境中巨噬细胞向M2型极化;Akt2抑制剂可能通过降低miR-155-5p表达,激活Akt信号通路中转录因子C/EBPβ的表达,从而影响巨噬细胞极化。 展开更多

关键词 根尖周炎 akt2 巨噬细胞极化 miR-155-5p C/EBPΒ

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AKT2基因的过表达抑制H_2O_2诱导的乳腺癌细胞凋亡

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作者 凌彩虹 兰风华 +2 位作者 韩俊勇 董荔红 黄俏佳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1044-1050,共7页

研究AKT2基因对H2O2诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响.RT-PCR扩增人AKT2基因全长cDNA序列后克隆入pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建AKT2基因的真核表达载体(野生型,WT-AKT2);应用QuikChange定点诱变,制备AKT2激酶活性丧失的负性表达载体(DN-A... 研究AKT2基因对H2O2诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响.RT-PCR扩增人AKT2基因全长cDNA序列后克隆入pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建AKT2基因的真核表达载体(野生型,WT-AKT2);应用QuikChange定点诱变,制备AKT2激酶活性丧失的负性表达载体(DN-AKT2).WT-AKT2和DN-AKT2分别转染人乳腺癌MCF-7细胞,新霉素筛选稳定转染细胞克隆;设计并合成针对人AKT2基因2个不同部位的siRNA片段,转染入同样的细胞.通过TUNEL和DNA ladder测定,研究转染AKT2基因及AKT2 siRNA前后细胞对H2O2诱导凋亡的抵抗作用.测序鉴定证实,WT-AKT2和DN-AKT2表达载体构建成功.Western印迹结果显示,WT-AKT2和DN-AKT2基因在MCF-7细胞中表达良好,而AKT2 siRNA则可有效地抑制AKT2的表达;TUNEL和DNA ladder测定结果表明,WT-AKT2表达上调的稳定克隆组,可显著提高MCF-7细胞对H2O2诱导的凋亡的抵抗作用(转染DN-AKT2具相反作用).经H2O2作用后,其凋亡细胞数显著低于空载体稳定转染克隆及未转染亲代细胞的,差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者之间差异无统计学意义(P>0.05).AKT2抑制乳腺癌细胞对H2O2诱导凋亡的作用可被AKT2 siRNA和PI3K/AKT信号途径抑制剂wortmannin所阻断.内源性的结果进一步证明了AKT2的功能.本研究表明,AKT2能够抑制H2O2诱导的MCF-7人乳腺癌细胞凋亡,可能成为乳腺癌治疗的靶点之一,并为研究乳腺癌细胞抵抗活性氧诱导的细胞凋亡的分子机制奠定了基础. 展开更多

关键词 人蛋白激酶Bβ 基因克隆 RNA干扰 基因转染 H2O2 细胞凋亡

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短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

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作者 翁丹卉 邢辉 邓友星 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期807-807,共1页

关键词 基因特异性 shRNA akt2 短发卡 卵巢癌细胞 表达增强 SKOV3细胞 敏感性

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茯苓多糖对糖尿病小鼠糖脂代谢和氧化应激紊乱的影响 被引量：5

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作者 张淑静 宁真真 《天然产物研究与开发》 北大核心 2025年第2期195-203,共9页

研究茯苓多糖(Poria cocos polysaccharides,PCP)对C57BL/6J小鼠糖尿病模型中糖脂代谢和氧化应激的改善作用及其机制。通过喂食高脂肪食物结合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射诱导2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)模型,将... 研究茯苓多糖(Poria cocos polysaccharides,PCP)对C57BL/6J小鼠糖尿病模型中糖脂代谢和氧化应激的改善作用及其机制。通过喂食高脂肪食物结合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射诱导2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)模型,将小鼠随机分为正常对照组、糖尿病对照组、低剂量PCP组(50 mg/kg)、高剂量PCP组(100 mg/kg)和罗格列酮组(RSG)。各组小鼠接受相应处理,连续灌胃6周后,检测血糖、胰岛素、肝糖原、肌糖原、血脂、氧化应激指标等水平。蛋白质印迹分析葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,GLUT2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)蛋白水平。通过尾静脉注射编码GLUT2 shRNA的腺病毒载体(Ad-GLUT2 shRNA)探究GLUT2在PCP调控糖脂代谢和氧化应激中的作用。结果显示,PCP显著改善了小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素耐量,降低了空腹血糖和胰岛素水平,并提高了肝糖原和肌糖原水平,表明PCP具有抗高血糖作用。同时,PCP显著降低了小鼠的体重、肝组织、附睾脂肪和皮下脂肪重量,并改善了血脂水平,包括降低总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)水平,提高高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平。此外,PCP还通过增强超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,减少活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,从而减轻氧化应激。机制研究显示,PCP通过激活葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,GLUT2)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路,促进葡萄糖的摄取和利用,调节糖脂代谢,并增强抗氧化基因如核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NRF2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和非竞争性氧化还原酶-1(non-Q-dependent reductase-1,NQO-1)的表达,从而改善氧化应激状态。通过葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,GLUT2)敲低实验证实,PCP通过调控GLUT2表达来影响糖脂代谢和氧化应激。综上所述,茯苓多糖在糖尿病模型中表现出显著的抗高血糖、降脂和抗氧化作用,为茯苓多糖作为糖尿病辅助治疗药物的开发提供了科学依据。 展开更多

关键词 茯苓多糖 糖尿病 糖脂代谢 氧化应激紊乱 GLUT2/PI3K/AKT信号通路

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扶金化积丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠Akt/MDM2/p53信号通路的影响

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作者 付芸芸 李炜 +8 位作者 李林洲 秦大凯 任德祥 赵峻 陈露露 吕学颖 夏小军 雷旭东 单金姝 《中成药》 北大核心 2025年第9期3085-3089,共5页

目的探究扶金化积丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、顺铂组(0.005 g/kg)和中药低、中、高剂量组(0.54、1.07、2.14 g/kg扶金化积丸),每组10只,除空白组外,其余各组小鼠均腋下接种L... 目的探究扶金化积丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、顺铂组(0.005 g/kg)和中药低、中、高剂量组(0.54、1.07、2.14 g/kg扶金化积丸),每组10只,除空白组外,其余各组小鼠均腋下接种Lewis细胞悬液,构建Lewis肺癌移植瘤模型。各组连续给药14 d后取材,称量小鼠体质量,剥离肿瘤并称量肿瘤质量,计算抑瘤率;流式细胞仪检测肿瘤细胞周期的变化;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况;HE染色观察肿瘤组织病理形态变化;RT-qPCR及Western blot法检测肿瘤组织Akt、MDM2、p53、p21、Bcl-2、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组小鼠毛发暗淡,精神状态差,行动迟缓,饮食量减少,大便干燥;与模型组比较,顺铂组和中药各剂量组小鼠毛发光泽,活动增加,精神状态好转,粪质状态改善,药物干预第7、14天体质量无明显变化(P>0.05)。与模型组比较,中药高剂量组和顺铂组小鼠肿瘤质量降低(P<0.05),抑瘤率均增加;肿瘤组织细胞核皱缩,少量细胞核破碎、溶解,肿瘤组织出现不同程度坏死;肿瘤组织凋亡细胞数增多,阳性表达密度较高,细胞凋亡率升高(P<0.05);肿瘤组织G_(0)/G_(1)期细胞比例增加(P<0.05),S期、G_(2)/M期细胞比例降低(P<0.05);肿瘤组织Akt、MDM2、Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),p53、p21、Bax mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论扶金化积丸可能通过调控Akt/MDM2/p53信号通路诱导肿瘤细胞凋亡,进而抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长。 展开更多

关键词 扶金化积丸 肺癌 顺铂 Akt/MDM2/p53信号通路 凋亡

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镰形棘豆提取物调节PI3K/AKT/Nrf2通路改善高糖诱导足细胞氧化损伤的作用及机制研究

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作者 任梦涵 姚建莉 +1 位作者 杨丽霞 舒畅 《中国临床药理学与治疗学》 北大核心 2025年第10期1361-1373,共13页

目的:通过PI3K/AKT/Nrf2通路探讨镰形棘豆提取物含药血清对高糖诱导的足细胞氧化应激损伤的作用。方法:体外培养大鼠肾足细胞,筛选D-葡萄糖造模浓度和时间以及镰形棘豆提取物含药血清最佳给药浓度和时间;将细胞分为正常组、高糖组、高糖... 目的:通过PI3K/AKT/Nrf2通路探讨镰形棘豆提取物含药血清对高糖诱导的足细胞氧化应激损伤的作用。方法:体外培养大鼠肾足细胞,筛选D-葡萄糖造模浓度和时间以及镰形棘豆提取物含药血清最佳给药浓度和时间;将细胞分为正常组、高糖组、高糖+空白血清组、镰形棘豆组、抑制剂组、镰形棘豆+抑制剂组,采用罗丹明染色及电镜观察足细胞形态、病理学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光及荧光探针法分别检测细胞p-AKT荧光表达和ROS水平,ELISA检测细胞上清液中MDA、NO、SOD、T-AOC含量,Western blot检测细胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白表达,RT-qPCR检测细胞Nrf2、HO-1、GCLM、SODmRNA表达。结果:筛选出45mmol/LD-葡萄糖诱导48h为最佳造模条件,含药血清1倍稀释及48 h为最佳给药浓度和时间。与正常组比较,高糖组细胞足突广泛融合、相互粘连,凋亡率、迁移能力和ROS水平均升高(P<0.01),p-AKT荧光表达降低(P<0.01),MDA、NO含量增加,SOD、T-AOC含量显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白表达及Nrf2、HO-1、GCLM、SOD mRNA表达均降低(P<0.01)。与高糖组比较,各给药组细胞足突融合、相互粘连情况有不同程度的改善,凋亡率、迁移能力和ROS水平均降低(P<0.05,P<0.01),p-AKT荧光表达增加(P<0.01),MDA、NO含量下降,SOD、T-AOC含量升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及Nrf2、HO-1、GCLM、SOD mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01),而抑制剂组细胞ROS水平升高(P<0.01),p-AKT荧光表达降低(P<0.05),NO含量升高,T-AOC含量降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及HO-1、GCLM、SODmRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。与镰形棘豆组比较,镰形棘豆组+抑制剂组细胞凋亡率、迁移能力和ROS水平均升高(P<0.05,P<0.01),p-AKT荧光表达降低(P<0.01),MDA、NO含量增加,SOD、T-AOC含量降低(P<0.05,P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及HO-1、GCLM、SODmRNA表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:镰形棘豆提取物可能通过激活PI3K/AKT/Nrf2信号通路,从而改善高糖诱导的足细胞形态、结构和功能的改变,抑制氧化应激反应,达到保护足细胞的作用。 展开更多

关键词 镰形棘豆提取物 糖尿病肾脏病 足细胞 氧化应激 PI3K/AKT/Nrf2

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大鼠腓肠肌内蛋白激酶B各亚型表达的年龄差异 被引量：1

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作者 张兵 夏春 陈福 《中国微创外科杂志》 CSCD 2008年第3期273-275,共3页

目的研究大鼠腓肠肌内蛋白激酶B(Akt/PKB)各亚型伴随年龄变化的表达差异。方法用反转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹(westernblotting)检测老年组(30月龄)和青年组(6月龄)大鼠腓肠肌内Akt各亚型mRNA和蛋白表达,并统计分析比较。结果(1)30月龄... 目的研究大鼠腓肠肌内蛋白激酶B(Akt/PKB)各亚型伴随年龄变化的表达差异。方法用反转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹(westernblotting)检测老年组(30月龄)和青年组(6月龄)大鼠腓肠肌内Akt各亚型mRNA和蛋白表达,并统计分析比较。结果(1)30月龄组大鼠腓肠肌内Akt1与Akt2的mRNA水平均高于6月龄组(t=7.124,P=0.000;t=2.598,P=0.021),Akt3差异无显著性(t=0.460,P=0.653)。(2)两组间Akt1蛋白表达水平无显著变化(t=0.469,P=0.646),30月龄组Akt1的Thr308磷酸化水平低于6月龄组的表达,有显著差异(t=-9.861,P=0.000);30月龄组Akt2的蛋白水平高于6月龄组的表达,有显著差异(t=7.522,P=0.000);Akt3蛋白表达在两组间无差异(t=0.058,P=0.955)。结论大鼠腓肠肌中Akt三种亚型伴随年龄改变表达存在差异,推测Akt各亚型在此过程中可能发挥不同功效。 展开更多

关键词 AKT1 akt2 Akt3 大鼠 腓肠肌 萎缩

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