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小麦ArfGAP基因的克隆、半定量RT-PCR分析及原核表达 被引量：2
1
作者 许峰 闫素辉 +3 位作者 张从宇 时侠清 李文阳 张子学 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1631-1638,共8页
为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121b... 为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121bp。生物信息学分析表明,TaArfGAP蛋白氨基端方向存在一个典型的ArfGAP蛋白结构域,在亲缘关系上与山羊草、乌拉尔图小麦和短柄草较近,而与甘蓝等作物关系较远。半定量RT-PCR分析表明,TaArfGAP基因在干旱、PEG和NaCl胁迫下显著上调表达,但在高温条件下则显著下调表达。SDS-PAGE检测结果表明,IPTG终浓度为0.8~1.0mmol·L-1、诱导温度为24℃及诱导时间为10h时,在分子量大小为81kD左右可以得到较大的可溶性表达蛋白量,且与预期结果一致,说明TaArfGAP基因在原核表达体系中成功表达。 展开更多
关键词 小麦 adp核糖基化因子gtp水解酶激活蛋白 半定量RT-PCR 融合蛋白
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盆底肌损伤后修复过程中囊泡转运相关基因的表达 被引量：4
2
作者 陈珏 洪莉 +6 位作者 李素廷 王治 陈茂 郝梦磊 肖雅 闵洁 胡鸣 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1092-1098,共7页
目的:探讨在阴道分娩导致盆底肌损伤的过程中与骨骼肌再生修复及囊泡转运相关的基因表达,初步阐明ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白3(ARFGAP3)等效应分子在盆底肌损伤后再生修复中的潜在作用。方法:选取12周龄的C57 BL/6健康雌性处鼠32只,... 目的:探讨在阴道分娩导致盆底肌损伤的过程中与骨骼肌再生修复及囊泡转运相关的基因表达,初步阐明ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白3(ARFGAP3)等效应分子在盆底肌损伤后再生修复中的潜在作用。方法:选取12周龄的C57 BL/6健康雌性处鼠32只,通过阴道扩张加远端牵引法构建盆底肌损伤模型,分为对照组、造模1 d组、造模3 d组和造模5 d组。在基因表达综合数据库(GEO)中,以“muscle regeneration”为关键词搜索与骨骼肌再生修复相关的信息,选取GSE5413、GSE45577和GSE4693个数据集,使用GE02R在线分析工具和R软件筛选差异表达基因,在共差异表达基因中选出与胞内囊泡转运相关的10个基因(ARFGAP3、LGALS3、KDELR3、CSF1R、ANXA4、STMN1、THBS2、PLXNB2、KIF20A和EMR1)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测盆底肌损伤修复过程中小鼠盆底肌组织中上述囊泡转运相关差异基因的表达水平。结果:在盆底肌损伤后表达水平升高的基因有ARFGAP3、STMN1、THBS2和PLXNB2。与对照组比较,造模1 d组小鼠盆底肌组织中ARFGAP3、STMN1和THBS2基因表达水平升高(P<0.05或P<0.01),造模3 d组小鼠盆底肌组织中ARFGAP3和PLXNB2基因表达水平升高(P<0.01)。在盆底肌损伤后表达水平降低的基因有CSF1R、ANXA4和EMR1。与对照组比较,造模1 d组小鼠盆底肌组织中CSF1R和EMR1基因表达水平降低(P<0.05或P<0.01);造模3 d组小鼠盆底肌组织中CSF1R和ANAX4基因表达水平降低(P<0.05),造模5 d组小鼠盆底肌组织中ANAX4基因表达水平降低(P<0.05)。在盆底肌损伤后表达水平不变的基因有LGARLS3、KDELR3和KIF20A。结论:ARFGAP3可能在盆底肌损伤后修复过程中起到重要调控作用。 展开更多
关键词 盆底肌损伤 肌肉再生 囊泡转运 adp核糖基化因子gtp酶活化蛋白3 基因表达
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细胞内物质转运调节分子ARFGAP3的克隆表达及生化活性
3
作者 刘晓勤 张成岗 +2 位作者 邢桂春 陈清棠 贺福初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期507-513,共7页
ADP核糖基化因子 GTP酶活化蛋白 (ARFGAP)是重要的细胞内物质转运调节分子 .在 2 2周孕龄人胎肝cDNA文库中发现一种新基因 ,其编码的氨基酸序列与大鼠ARF1GAP有 32 %同源性 .将这种新基因命名为“ARFGAP3” ,对其进行功能研究 ,利用逆... ADP核糖基化因子 GTP酶活化蛋白 (ARFGAP)是重要的细胞内物质转运调节分子 .在 2 2周孕龄人胎肝cDNA文库中发现一种新基因 ,其编码的氨基酸序列与大鼠ARF1GAP有 32 %同源性 .将这种新基因命名为“ARFGAP3” ,对其进行功能研究 ,利用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR ) ,从人胎盘总RNA中扩增ARFGAP3全长cDNA序列 ,并将其亚克隆到 pGEM T载体 ;采用RNA印迹法和斑点杂交法 ,检测其组织表达谱 ,发现在多种腺体和睾丸中有很高水平ARFGAP3基因转录 ,并且只有一种约 2 7kb的转录本 .利用基因重组技术 ,构建表达质粒 pBAD/Thio ARFGAP3,在大肠杆菌中表达 ,采用亲和层析法纯化表达产物 ,利用肠激酶切除重组融合蛋白N端引导序列 .检测重组ARFGAP3的生化活性 ,证实ARFGAP3对ARF1具有GAP活性 ,促进ARF1结合的GTP水解为GDP ,磷脂酰肌醇二磷酸 (PIP2 )增强其GAP活性 ,而磷脂酰胆碱 (PC) 展开更多
关键词 ARFGAP3 细胞内物质转运 adp核糖基化因子 gtp酶活化蛋白 生化活性
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