以日本甜柿品种次郎(Diospyros kaki Thunb.cv.Jirou)的叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了次郎柿遗传转化体系。结果表明,菌液OD600值为0.6,乙酰丁香酮浓度为200mg·L-1,筛选培养3d,头孢霉素为300mg·L-1的转化率最高。在...以日本甜柿品种次郎(Diospyros kaki Thunb.cv.Jirou)的叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了次郎柿遗传转化体系。结果表明,菌液OD600值为0.6,乙酰丁香酮浓度为200mg·L-1,筛选培养3d,头孢霉素为300mg·L-1的转化率最高。在此条件下,将ACC合成酶和氧化酶的反义联合基因导入到次郎柿的组培苗中,经PCR检测,得到了8株转基因植株。展开更多
文摘乙烯是一种重要的植物激素,参与植物许多生理过程。ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)合成酶(ACS)是植物乙烯合成过程中的限速酶,对乙烯的合成具有重要的调控作用。利用其它植物ACS基因的保守序列设计兼并引物,采用RACE(Rapid Amplificationc DNA Ends)和RT-PCR等技术,克隆得到编码茶树ACS基因的全长cDNA序列,长1579bp,编码478个氨基酸,预测分子量约为53.7kD,等电点8.039,GenBank登录为EF205149。以Neighbor-Joining法构建进化树,发现茶树ACS基因与柿树中的同类基因亲缘关系最近。茶树ACS基因的克隆为从分子水平认识乙烯在茶树上的生理作用奠定了基础。
文摘以日本甜柿品种次郎(Diospyros kaki Thunb.cv.Jirou)的叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了次郎柿遗传转化体系。结果表明,菌液OD600值为0.6,乙酰丁香酮浓度为200mg·L-1,筛选培养3d,头孢霉素为300mg·L-1的转化率最高。在此条件下,将ACC合成酶和氧化酶的反义联合基因导入到次郎柿的组培苗中,经PCR检测,得到了8株转基因植株。
