5-azaC对萝卜茎尖DNA甲基化和开花的影响 被引量：25

1

作者 汪炳良 李水凤 +1 位作者 曾广文 邓俭英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期265-268,共4页

本文研究了去甲基化因子5氮杂胞苷(5azaC)对萝卜开花及幼苗茎尖DNA甲基化水平的影响。用0(对照)、0.10、0.25、0.50和1.00mmolL5azaC处理‘短叶13’萝卜种子6d,除对照外,茎尖组织DNA甲基化水平均有所降低,并与春化后茎尖组织DNA甲基化... 本文研究了去甲基化因子5氮杂胞苷(5azaC)对萝卜开花及幼苗茎尖DNA甲基化水平的影响。用0(对照)、0.10、0.25、0.50和1.00mmolL5azaC处理‘短叶13’萝卜种子6d,除对照外,茎尖组织DNA甲基化水平均有所降低,并与春化后茎尖组织DNA甲基化水平相当;茎尖组织DNA甲基化水平随着处理浓度的提高而下降。同时,5azaC处理明显促进春性品种萝卜‘短叶13’的开花。结果表明5azaC可以部分代替低温诱导萝卜开花。 展开更多

关键词 萝卜 5-azac 花芽分化 开花 DNA甲基化 茎尖 甲基化水平 萝卜种子 5-氮杂胞苷 去甲基化

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5-azaC对HSG细胞增殖抑制的实验研究 被引量：1

2

作者 白忠诚 司徒镇强 +3 位作者 李莉莉 刘斌 施生根 张艳茹 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期849-851,共3页

目的:研究5-azaC对HSG细胞的作用,为5-azaC治疗涎腺肿瘤提供理论和实验基础。方法:通过体外生长曲线测定和体内移植实验检测5-azaC对HSG细胞的增殖抑制作用。结果:体外实验表明5-azaC可以抑制HSG细胞的增殖,5×10-6mol/L和10×1... 目的:研究5-azaC对HSG细胞的作用,为5-azaC治疗涎腺肿瘤提供理论和实验基础。方法:通过体外生长曲线测定和体内移植实验检测5-azaC对HSG细胞的增殖抑制作用。结果:体外实验表明5-azaC可以抑制HSG细胞的增殖,5×10-6mol/L和10×10-6mol/L5-azaC对HSG细胞的增殖抑制率分别为85%和92%。与对照组相比,用5-azaC处理HSG细胞后再移植到裸鼠皮下,其致瘤性降低。结论:体内、体外实验表明5-azaC能抑制HSG细胞的增殖。 展开更多

关键词 5-azac HSG 增殖抑制 体内

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DNA甲基化抑制剂5-azaC对花椰菜生长发育的影响 被引量：5

3

作者 袁建民 木万福 +4 位作者 麻继仙 杨龙 李易蓉 但忠 苏银玲 《江西农业学报》 CAS 2018年第2期42-45,共4页

研究了不同浓度DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-azaC)处理不同熟性花椰菜(青花和白花)的幼苗对现蕾时间等田间生长发育指标的影响。结果表明:一定浓度的5-azaC不仅能促进花椰菜提前现蕾和开花,而且对株高、株幅、花球直径、单球质量等生... 研究了不同浓度DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-azaC)处理不同熟性花椰菜(青花和白花)的幼苗对现蕾时间等田间生长发育指标的影响。结果表明:一定浓度的5-azaC不仅能促进花椰菜提前现蕾和开花,而且对株高、株幅、花球直径、单球质量等生长指标均有影响,影响大小与浓度密切相关。同一材料在不同浓度5-azaC条件下花椰菜现蕾时间存在显著差异,各处理的现蕾时间均比对照明显提前,现蕾时间可提前3~8 d,适宜的5-azaC浓度为10~20 mg/L。不同材料对5-azaC处理的敏感反应程度不同,低浓度5-azaC(5~20 mg/L)处理表现为促进作用,高浓度5-azaC(20~40 mg/L)处理表现为抑制作用。 展开更多

关键词 5-氮杂胞苷 花椰菜 生长发育 甲基化

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5-azaC处理对低温弱光胁迫下黄瓜幼苗抗氧化酶活性的影响 被引量：6

4

作者 邢潇晨 崔金霞 +1 位作者 刘慧英 肖春燕 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第4期422-426,共5页

为了研究5-azaC处理与植物耐冷性机理之间的关系,本实验以黄瓜幼苗为试材,研究了不同浓度5-azaC处理对低温弱光(10℃/6℃,300(μmol/m^2)/s)胁迫下黄瓜幼苗抗氧化酶活性的影响。结果表明:与对照相比,喷施500~800μmol/L的5-azaC处理可... 为了研究5-azaC处理与植物耐冷性机理之间的关系,本实验以黄瓜幼苗为试材,研究了不同浓度5-azaC处理对低温弱光(10℃/6℃,300(μmol/m^2)/s)胁迫下黄瓜幼苗抗氧化酶活性的影响。结果表明:与对照相比,喷施500~800μmol/L的5-azaC处理可以显著降低幼苗叶片内MDA含量(P<0.05),在低温24 h时分别降低了19.45%、19.83%,低温48 h时分别降低了12.19%、16.20%;提高SOD、CAT、APX和GR抗氧化酶活性,有效降低了黄瓜幼苗在低温弱光胁迫下活性氧(H_2O_2和O_2^-)的产生和积累;但随着浓度的升高,1000~5000μmol/L的5-azaC处理导致黄瓜叶片膜脂过氧化产生,使抗氧化酶活性显著降低,导致植物产生氧化损伤。 展开更多

关键词 黄瓜 5-氮杂胞苷 低温弱光 抗氧化酶

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5-杂氮胞苷对成人T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化水平的影响 被引量：2

5

作者 肖嵘 丁艳 +7 位作者 陆前进 李亚萍 李勇坚 杨心洁 苏玉文 梁云生 张桂英 文海泉 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期843-847,共5页

目的:研究DNA低甲基化对穿孔素基因mRNA和蛋白表达的影响。方法:密度梯度离心分离正常成人的外周血淋巴细胞,磁珠分离CD4和CD8细胞后进行细胞培养,DNA甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azaC)处理。分别提取DNA、RNA和蛋白质。亚硫酸氢钠处理DNA... 目的:研究DNA低甲基化对穿孔素基因mRNA和蛋白表达的影响。方法:密度梯度离心分离正常成人的外周血淋巴细胞,磁珠分离CD4和CD8细胞后进行细胞培养,DNA甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azaC)处理。分别提取DNA、RNA和蛋白质。亚硫酸氢钠处理DNA,巢式PCR进行扩增、转化入大肠杆菌,挑取克隆测序。实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测穿孔素mRNA的表达,Western印迹检测穿孔素蛋白量的变化。结果:5-azaC处理后的CD4细胞和CD8细胞穿孔素mRNA和蛋白表达显著高于未处理的CD4和CD8细胞组(P<0.05)。测序结果显示5-azaC处理后的CD4细胞和CD8细胞DNA穿孔素启动子区域的甲基化水平降低,与未处理的CD4和CD8细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-azaC处理后CD4和CD8细胞穿孔素mRNA的表达和蛋白的表达都有显著的增高,这种增高与CD4和CD8细胞穿孔素基因启动子区域出现的低甲基化有关。 展开更多

关键词 穿孔素 甲基化 亚硫酸氢钠测序 5-杂氮胞苷

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5-氮胞苷对贵州小型猪淋巴细胞DNA损伤及修复的影响 被引量：4

6

作者 钱宁 李达圣 甘世祥 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第4期223-226,共4页

目的　研究贵州小型猪淋巴细胞对化学物或药物引起的DNA损伤及修复影响的反应。方法　用单细胞凝胶电泳技术检测比较 5 氮胞苷对PHA刺激和未刺激淋巴细胞的DNA损伤及其修复过程。结果　 5 氮胞苷引起未刺激淋巴细胞明显的DNA泳动 (彗... 目的　研究贵州小型猪淋巴细胞对化学物或药物引起的DNA损伤及修复影响的反应。方法　用单细胞凝胶电泳技术检测比较 5 氮胞苷对PHA刺激和未刺激淋巴细胞的DNA损伤及其修复过程。结果　 5 氮胞苷引起未刺激淋巴细胞明显的DNA泳动 (彗星尾 ) ,经修复孵育 2h后 ,DNA泳动与孵育前比较无显著差异 ,而 5 氮胞苷引起的刺激细胞DNA泳动经 2h修复孵育后与孵育前比较显著减少。结论　 5 氮胞苷引起贵州小型猪未刺激淋巴细胞DNA损伤经 2h孵育未能修复 ,而刺激细胞的DNA损伤明显修复。 展开更多

关键词 5-氮胞苷 贵州 小型猪 淋巴细胞DNA损伤 修复 实验动物

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5-氮杂胞苷对低温胁迫下黄瓜幼苗光合作用的影响 被引量：4

7

作者 邢潇晨 索琳格 +3 位作者 肖春燕 刘苗苗 刘慧英 崔金霞 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2017年第6期116-123,共8页

为探究降低基因组DNA甲基化水平在低温条件下对黄瓜幼苗光合作用的影响,以‘津研四号’黄瓜幼苗为试材,研究了不同浓度DNA甲基化抑制剂5-aza C处理对低温(10℃/6℃,300μmol·m^(-2)·s^(-1))胁迫下黄瓜幼苗叶片气体交换参数、... 为探究降低基因组DNA甲基化水平在低温条件下对黄瓜幼苗光合作用的影响,以‘津研四号’黄瓜幼苗为试材,研究了不同浓度DNA甲基化抑制剂5-aza C处理对低温(10℃/6℃,300μmol·m^(-2)·s^(-1))胁迫下黄瓜幼苗叶片气体交换参数、叶绿素荧光猝灭、细胞膜透性的影响。结果表明:低温条件下,500~800μmol·L^(-1)的5-aza C处理能够显著降低黄瓜幼苗叶片细胞膜透性(P<0.05);提高叶片净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr),降低胞间CO_2浓度(Ci);同时也促进PSⅡ的最大光化学效率(Fv/Fm)、实际光化学效率(ΦPSⅡ)、光合电子传递效率(ETR)和光化学猝灭系数(qP)的升高,非光化学猝灭系数(NPQ)和叶片光化学猝灭参数[Y(NO)]的降低,从而提高黄瓜幼苗的耐冷性。 展开更多

关键词 黄瓜幼苗 5-氮杂胞苷 低温 光合作用 耐冷性

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^(137)Cs-γ辐照及5-氮杂胞苷处理毛竹种子对其实生苗甲基化水平的影响 被引量：3

8

作者 陈昂 周明兵 汤定钦 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期218-224,共7页

为了研究药物和辐照对毛竹甲基化水平的影响,采用0、25、50、100、250μmol·L-1的5-氮杂胞苷和0、10、20、30、40、60、90、120 Gy的^(137)Cs-γ射线分别处理毛竹种子,并利用高效液相色谱技术,采用外标法测定实生苗叶片的甲基化水... 为了研究药物和辐照对毛竹甲基化水平的影响,采用0、25、50、100、250μmol·L-1的5-氮杂胞苷和0、10、20、30、40、60、90、120 Gy的^(137)Cs-γ射线分别处理毛竹种子,并利用高效液相色谱技术,采用外标法测定实生苗叶片的甲基化水平。结果表明,5-氮杂胞苷处理毛竹种子后,甲基化水平下降,其中250μmol·L-1处理后甲基化水平为20.8%,下降最显著;低剂量的辐照处理对甲基化的影响不明显,而在高剂量的γ射线胁迫下,DNA甲基化程度下降至26.0%,达到极显著水平。本研究揭示了辐照与基因组甲基化水平间的相关性,为毛竹辐照诱变和甲基化抑制育种提供了科学依据。 展开更多

关键词 毛竹实生苗 5-氮杂胞苷 辐照诱变 DNA甲基化 高效液相色谱

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5-氮杂胞苷对苦瓜果实成熟及转录表达谱的影响 被引量：1

9

作者 郭金菊 吴廷全 +4 位作者 王茹芳 谭德龙 曹海顺 王瑞 张长远 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2023年第2期93-101,共9页

【目的】研究5-氮杂胞苷(5-azaC)对苦瓜果实成熟和基因表达模式的影响,为解析苦瓜果实成熟的分子调控机制提供理论依据。【方法】以苦瓜(Momordica charantia L.)高世代自交系E12201-e1为材料,利用50 mmol/L 5-azaC处理绿熟期(授粉后18... 【目的】研究5-氮杂胞苷(5-azaC)对苦瓜果实成熟和基因表达模式的影响,为解析苦瓜果实成熟的分子调控机制提供理论依据。【方法】以苦瓜(Momordica charantia L.)高世代自交系E12201-e1为材料,利用50 mmol/L 5-azaC处理绿熟期(授粉后18 d)苦瓜果实,以ddH2O处理为对照,观察处理组(TR)和对照组(CK)果实的表型变化,并利用RNA-seq技术比较TR和CK苦瓜果肉组织中的转录水平差异。【结果】50 mmol/L 5-azaC处理能明显延迟苦瓜果实成熟。RNA-seq获得的数据质量较高,可满足后续分析需求。通过筛选共获得1773个差异表达基因(DEGs),其中1007个上调基因,766个下调基因。GO和KEGG分析结果表明,DEGs主要富集在细胞组分和分子功能模块,217个DEGs共富集到93条代谢通路中,其中30个DEGs显著富集到光合作用和苯丙烷类生物合成通路。8个DEGs参与细胞壁代谢过程,其中6个基因在5-azaC处理中下调表达。共获得681个差异表达转录因子(TFs),分属于220个TF家族。12个DEGs的qRT-PCR结果与RNA-seq结果变化趋势一致。【结论】5-azaC处理抑制苦瓜果实成熟,并影响果实成熟相关基因的表达模式。 展开更多

关键词 苦瓜 5-氮杂胞苷 转录组测序 果实成熟

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5-氮胞苷与2,4-D处理对龙眼早期体胚发生及DlAGOs表达的影响 被引量：1

10

作者 陈荣珠 赖钟雄 《热带农业科学》 2021年第8期31-39,共9页

表观遗传过程,如DNA甲基化,在调控植物的生长发育和体细胞胚胎(SE)的正常发生中起着关键作用。植物体细胞胚胎发生是一个细胞分化与器官形态建成的过程,植物体细胞胚胎发生体系可作为研究胚胎发育特别是早期胚胎发育的良好替代体系。本... 表观遗传过程,如DNA甲基化,在调控植物的生长发育和体细胞胚胎(SE)的正常发生中起着关键作用。植物体细胞胚胎发生是一个细胞分化与器官形态建成的过程,植物体细胞胚胎发生体系可作为研究胚胎发育特别是早期胚胎发育的良好替代体系。本研究利用植物体细胞胚胎发生体系分析了DNA甲基化水平对龙眼球形胚发生的影响,并采用实时荧光定量技术检测了不同浓度5-氮胞苷(5-azac)与2,4-D处理下龙眼Argonaute基因家族(DlAGOs)的相对表达水平。结果发现:(1)当2,4-D浓度为0.1 mg/L时,对照组以及5-azac浓度为5和25μmol/L的处理组均有球形胚产生,而5-azac浓度为25μmol/L处理组中龙眼球形胚更典型,数量更多;(2)2,4-D浓度为0.5 mg/L时,只有5-azac为5μmol/L处理组中有球形胚产生;(3)DlAGOs在不同浓度5-azac和2,4-D处理下具有不同的表达模式,5-azac浓度为5μmol/L能显著诱导DlAGO4的表达。这些研究结果表明,5-azac作为甲基化抑制剂,适宜浓度的5-azac能抑制2,4-D的甲基化作用,降低龙眼胚性愈伤组织的DNA甲基化水平,促使龙眼球形胚提前发生,同时,DNA甲基化水平降低能够促进DlAGO4的表达。以上的研究结果为龙眼体胚发生过程中的DNA甲基化机制研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 5-氮胞苷 DNA甲基化 龙眼 体胚发生 DlAGOs

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DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用 被引量：12

11

作者 聂丽娟 王子成 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期362-365,386,共5页

本文综述了DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用。DNA甲基化抑制剂使甲基基团不能转移到腺嘌呤或胞嘧啶,导致DNA甲基化反应受阻,从而使基因组甲基化水平降低。DNA甲基化抑制剂已被用于因DNA甲基化引起的植物表观... 本文综述了DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用。DNA甲基化抑制剂使甲基基团不能转移到腺嘌呤或胞嘧啶,导致DNA甲基化反应受阻,从而使基因组甲基化水平降低。DNA甲基化抑制剂已被用于因DNA甲基化引起的植物表观遗传研究中,同时它可以代替低温促进植物提早开花,并可能在植物性状改良中得到进一步的研究和应用。 展开更多

关键词 表观遗传学 DNA甲基化 DNA甲基化抑制剂 5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azac)

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DNA去甲基化试剂处理对青花菜春化作用的影响 被引量：3

12

作者 于锡宏 李丹 蒋欣梅 《中国蔬菜》 北大核心 2008年第10期16-18,共3页

以早熟品种清风103和中熟品种绿秀为试材,采用5-氮胞苷(5-azaC)不同施用方式处理,研究DNA去甲基化对青花菜春化作用和春化过程中植株体内C/N的影响。结果表明,叶面喷施5-azaC处理可明显促进青花菜春化及花芽分化,且植株体内全糖/全氮、... 以早熟品种清风103和中熟品种绿秀为试材,采用5-氮胞苷(5-azaC)不同施用方式处理,研究DNA去甲基化对青花菜春化作用和春化过程中植株体内C/N的影响。结果表明,叶面喷施5-azaC处理可明显促进青花菜春化及花芽分化,且植株体内全糖/全氮、可溶性糖/可溶性蛋白、蔗糖/可溶性蛋白的值均高于5-azaC根施处理和清水、清水+吐温对照。不同熟性品种春化启动所需的时间不同,中熟品种比早熟品种需要更长的启动时间。 展开更多

关键词 DNA去甲基化 青花菜 春化作用 5-azac

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DNA去甲基化参与提高白菜型冬油菜抗寒性的生理机制 被引量：1

13

作者 王万鹏 马骊 +14 位作者 孙柏林 郭秀娟 王世发 牛早霞 祁伟亮 蒲媛媛 路晓明 呼芳娣 许金苗 马学才 武军艳 李学才 方彦 孙万仓 刘丽君 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2021年第5期29-39,49,共12页

利用来自不同育种环境的10份白菜型冬油菜材料,通过半致死温度的测定分析其抗寒性与环境的关系,并利用不同浓度DNA甲基化抑制剂5-azaC处理,分析DNA去甲基化对白菜型冬油菜DNA整体甲基化水平及低温胁迫下苗期生理特性的影响。结果表明,... 利用来自不同育种环境的10份白菜型冬油菜材料,通过半致死温度的测定分析其抗寒性与环境的关系,并利用不同浓度DNA甲基化抑制剂5-azaC处理,分析DNA去甲基化对白菜型冬油菜DNA整体甲基化水平及低温胁迫下苗期生理特性的影响。结果表明,不同育种环境选育的材料,其半致死温度具有显著差异,其中材料2018-FJT、DT-7、DT-9与MXW-1的半致死温度分别为-16.04℃、-15.98℃、-15.63℃、-15.04℃;材料CT-2360、CT-2380、CT-2400、CT-2420、CT-2440、CT-2460的半致死温度分别为-11.32℃、-11.6℃、-11.42℃、-11.44℃、-12.97℃、-13.28℃。依据半致死温度,10个白菜型冬油菜抗寒性由强到弱依次为:2018-FJT>DT-7>DT-9>MXW-1>CT-2460>CT-2400>CT-2380>CT-2420>CT-2440>CT-2360。抗寒性的形成与育成环境的纬度和年平均气温呈极显著正相关。选择抗寒性及产地不同的4个材料CT-2360、MXW-1、2018-FJT、DT-7进行生理测定,结果表明,1000μmol·L^(-1)5-azaC处理能显著抑制幼苗的根生长,4个材料的根长较对照减少93.14%~95.06%;低温下5-azaC处理对抗寒性较弱材料CT-2360幼苗的相对电导率、丙二醛含量以及强抗寒性材料DT-7幼苗的脯氨酸、可溶性蛋白含量影响最显著(P<0.05);低温处理过程中,4个材料的SOD、POD、CAT活性均上升,以低温处理5d最显著(P<0.05),其中2018-FJT的SOD活性增幅最高,为45.85%,DT-7的POD活性增幅最大,为460%,CT-2360的CAT活性增幅最显著,为321.02%。HPLC分析发现常温下抗寒性较弱材料CT-2360的甲基化水平为77.48%,高于其他3个抗寒性强的材料;经过5-azaC处理后发生明显的去甲基化作用,证明抗寒能力受DNA去甲基化的调控。 展开更多

关键词 白菜型冬油菜 抗寒性 育种选择 5-azac 低温胁迫 DNA甲基化 生理机制

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长波紫外线照射和基因甲基化状态对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响 被引量：1

14

作者 李吉 陈潇 +4 位作者 李薇 谢红付 陈明亮 唐桦 陈翔 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期642-645,共4页

目的:研究长波紫外线(UVA)照射和基因甲基化状态改变对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:5J/cm2UVA照射HaCaT细胞后24h、48h和72h及1μmol/L5-氮杂胞苷(5-azaC)处理HaCaT细胞24h、72h和120h后,采用反转录(RT)-PCR、We... 目的:研究长波紫外线(UVA)照射和基因甲基化状态改变对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:5J/cm2UVA照射HaCaT细胞后24h、48h和72h及1μmol/L5-氮杂胞苷(5-azaC)处理HaCaT细胞24h、72h和120h后,采用反转录(RT)-PCR、Western blot方法和巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction,N-PCR)分别检测iNOSmRNA、蛋白和cDNA的表达情况。结果:HaCaT细胞正常对照组无iNOSmRNA、蛋白和cDNA的表达;5J/cm2UVA照射后,HaCaT细胞的iNOSmRNA、蛋白和cDNA表达在24h时出现,48h达高峰,且明显高于24h(P<0.05),72h无表达;5-azaC处理HaCaT细胞24h后,仅有iNOScDNA表达,72h和120h有iNOSmRNA、蛋白和cDNA表达,且120h表达量强于72h(P<0.05)。结论:HaCaT细胞iNOS表达与UVA照射存在一定的时间关系,iNOS基因甲基化状态的改变可以影响其表达。 展开更多

关键词 紫外线 长波 细胞 HACAT iNOS 5-氮杂胞苷 基因甲基化

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基因组DNA去甲基化法改良蛹虫草菌株高产虫草素及性状稳定性评价 被引量：1

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作者 朱巍巍 李莉 +3 位作者 陈飞 李杨 王艳华 包永明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期47-52,共6页

基因组DNA去甲基化能够激活沉默基因,改变次级代谢产物谱,是一种全新的菌种改良途径。利用不同浓度的DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-aza C)处理蛹虫草菌株CM-L1,降低基因组DNA甲基化水平,高效液相色谱筛检得到改良株LB-C3和LD-A7,菌丝... 基因组DNA去甲基化能够激活沉默基因,改变次级代谢产物谱,是一种全新的菌种改良途径。利用不同浓度的DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-aza C)处理蛹虫草菌株CM-L1,降低基因组DNA甲基化水平,高效液相色谱筛检得到改良株LB-C3和LD-A7,菌丝体中虫草素含量分别提升127%和144.3%。LD-A7不能形成子实体,推测与关键的DNA甲基化修饰作用被改变有关。经5次继代培养后,以虫草素含量为指标考察性状稳定性。随传代次数增加,基因组中甲基化的DNA含量增加,液体发酵菌丝体中的虫草素含量均显著降低,但是子实体中虫草素含量非常稳定,改良的菌株更适合栽培生产而非工业发酵。 展开更多

关键词 DNA去甲基化 5-氮杂胞苷 蛹虫草 虫草素

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胆道闭锁患儿外周血T细胞ITGAL基因启动子区甲基化状态及其mRNA表达

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作者 董瑞 赵瑞 +2 位作者 郑珊 宋再 孙松 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2011年第3期220-224,共5页

目的研究胆道闭锁(BA)患儿外周血T细胞ITGAL基因启动子区DNA甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法选取2010年4~8月于复旦大学附属儿科医院(我院)初诊、并经外科手术病理学检查证实为BA的患儿为研究对象,分为BA组和甲基化结果验证组;选... 目的研究胆道闭锁(BA)患儿外周血T细胞ITGAL基因启动子区DNA甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法选取2010年4~8月于复旦大学附属儿科医院(我院)初诊、并经外科手术病理学检查证实为BA的患儿为研究对象,分为BA组和甲基化结果验证组;选取我院同期行斜疝手术、日龄≤120 d和肝功能、肾功能正常的患儿为对照组。分离BA组和对照组CD4+和CD8+T细胞,提取DNA和RNA,行ITGAL基因启动子区DNA甲基化水平和mRNA表达水平检测。甲基化结果验证组分离细胞后,予5-氮杂胞苷干预和培养后,行甲基化水平和mRNA表达水平检测,验证研究结果。结果 BA组和对照组各20例进入研究,两组年龄和性别均匹配。①BA组和对照组CD4+和CD8+T细胞ITGAL基因启动子序列-250~250 bp均未发生甲基化。BA组CD4+T细胞-1450^-950 bp的CG二核苷酸平均甲基化水平显著高于CD8+T细胞(0.94vs0.75,P=0.02),也显著高于对照组CD4+T细胞(0.94vs0.66,P<0.001)。②BA组外周血CD4+T细胞ITGALmRNA表达显著低于CD8+T细胞(0.021±0.002vs0.032±0.004,P=0.013),也显著低于对照组(0.021±0.002vs0.031±0.003,P=0.007)。BA组CD8+T细胞ITGALmRNA表达与对照组差异无统计学意义(0.032±0.004vs0.034±0.006,P=0.266)。③甲基化验证组纳入5例BA患儿。验证结果显示,5-氮杂胞苷干预后CD4+和CD8+T细胞ITGAL启动子区平均甲基化水平均显著低于未予5-氮杂胞苷干预的水平;ITGALmRNA的表达均显著高于未予5-氮杂胞苷干预的水平。结论 BA患儿外周血CD4+T细胞ITGAL启动子区发生高甲基化,并对mRNA表达产生影响。 展开更多

关键词 胆道闭锁 DNA甲基化 ITGAL基因 5氮-杂胞苷

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龙眼体胚发生过程中DlAGO4基因的克隆及表达分析 被引量：4

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作者 陈荣珠 申序 +3 位作者 林美珍 陈晓慧 徐小萍 赖钟雄 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期747-755,共9页

该研究基于龙眼基因组数据库,采用RT-PCR技术,以‘红核子’品种龙眼松散型胚性愈伤组织cDNA为模板,进行龙眼胚性愈伤组织DlAGO4基因的克隆和生物信息学分析,并采用实时荧光定量技术分析其在龙眼体细胞胚胎发生不同阶段、不同组织部位、... 该研究基于龙眼基因组数据库,采用RT-PCR技术,以‘红核子’品种龙眼松散型胚性愈伤组织cDNA为模板,进行龙眼胚性愈伤组织DlAGO4基因的克隆和生物信息学分析,并采用实时荧光定量技术分析其在龙眼体细胞胚胎发生不同阶段、不同组织部位、激素和非生物胁迫处理以及5-氮胞苷(5-azac)处理的表达模式。结果表明:(1)DlAGO4基因cDNA全长为3425 bp,包含开放阅读框长度为2781 bp,编码926个氨基酸。(2)生物信息学分析表明,DlAGO4蛋白为碱性亲水非分泌蛋白,含有AGO经典的保守结构域PAZ和Piwi,与克莱门柚CcAGO4的同源性最近,含有85个磷酸化位点和2个糖基化位点;亚细胞定位预测其最可能定位于细胞核;MicroRNA预测显示,DlAGO4基因受到4个miRNA靶向调控。(3)qRT-PCR结果表明,DlAGO4在龙眼球形胚阶段和种子中相对表达量最高;激动素、水杨酸、NaCl、甘露醇、PEG-4000和ABA处理均能促进DlAGO4基因的表达,而2,4-D和MeJA处理抑制其表达;不同浓度的5-azac处理1 d和3 d抑制DlAGO4的表达,但从处理第6天开始该基因呈上调表达,并于处理第12天相对表达量最高。研究认为,DlAGO4基因可能参与龙眼球形胚和种子的转录调控,且可能参与KT、SA的激素信号转导途径和NaCl、甘露醇、PEG-4000、ABA的逆境胁迫响应途径以及DNA甲基化调控机制。 展开更多

关键词 龙眼体胚发生 AGO4 激素响应 非生物胁迫 5-氮胞苷 实时荧光定量PCR

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