5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对T47D乳腺癌细胞生物学行为的影响 被引量：2

1

作者 卢康荣 周娅 +3 位作者 孙建聪 薛侠 马文峰 王万山 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第15期10-12,共3页

目的探讨去甲基化5′-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对T47D乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响。方法分别使用浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、25.0、100.0μmol/L 5-Aza-CdR处理T47D细胞株。MTT法检测T47D细胞存活率。流式细胞仪检测T47D细... 目的探讨去甲基化5′-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对T47D乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响。方法分别使用浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、25.0、100.0μmol/L 5-Aza-CdR处理T47D细胞株。MTT法检测T47D细胞存活率。流式细胞仪检测T47D细胞生长周期,观察细胞凋亡情况。RT-PCR法检测处理前后抑癌基因p16 mR-NA表达。结果5-Aza-CdR作用后T47D细胞明显受抑,G0/G1期细胞明显增多,细胞阻滞于G1期,凋亡率明显增高;5-Aza-CdR处理后无p16表达的T47D细胞检测出p16基因的重新表达。结论5-Aza-CdR可抑制T47D细胞的生长,并促进其凋亡;其机制可能为消除某些抑癌基因启动子甲基化。 展开更多

关键词 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷 T47D乳腺癌细胞 细胞周期 细胞凋亡

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5-杂氮-2′-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞株细胞周期及14-3-3σ基因甲基化的影响 被引量：2

2

作者 谭双香 易红 +2 位作者 汤参娥 陈主初 肖志强 《山西医科大学学报》 CAS 2008年第6期536-540,563,共6页

目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响,并进一步分析5-aza-2dC处理对14-3-3σ基因甲基化状态的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞,MTT实验观察细胞... 目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响,并进一步分析5-aza-2dC处理对14-3-3σ基因甲基化状态的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞,MTT实验观察细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡比例,用甲基化特异性PCR(MSP)分析14-3-3σ基因甲基化状态。结果5-aza-2dC对4株细胞均有生长抑制作用,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。5-aza-2dC处理使4株细胞凋亡率出现剂量依赖性的增加,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。经5-aza-2dC处理后,CNE1、CNE2、6-10B细胞出现不同程度的G0/G1期阻滞,而5-8F表现为G0/G1期和G2/M期双期阻滞。不经5-aza-2dC处理情况下4株细胞14-3-3σ基因均存在不同程度的甲基化,5-aza-2dC处理能够使14-3-3σ基因去甲基化。结论5-aza-2dC具有抗鼻咽癌作用,抑制作用强弱可能与鼻咽癌分化程度和转移潜能有一定关系,其机制可能与使14-3-3σ等抑瘤基因去甲基化有关。 展开更多

关键词 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 鼻咽肿瘤 细胞周期 凋亡 甲基化

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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因甲基化及其表达的影响 被引量：1

3

作者 方汉林 于在诚 +2 位作者 金永堂 薛绍礼 陈首慧 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第14期20-22,共3页

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及其表达的影响,探讨肺癌细胞p16、MGMT基因失活的机制及去甲基化制剂对p16、MGMT基因表达的调控。方法 5-Aza-CdR处理体外培养... 目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及其表达的影响,探讨肺癌细胞p16、MGMT基因失活的机制及去甲基化制剂对p16、MGMT基因表达的调控。方法 5-Aza-CdR处理体外培养的肺癌SPC-A-1细胞,甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前后细胞p16、MGMT基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞p16、MGMT mRNA。结果加入5-Aza-CdR前,SPC-A-1细胞p16、MGMTmRNA表达缺失,其启动子区域表现为DNA甲基化。加入5-Aza-CdR后,SPC-A-1细胞中p16、MGMT基因呈现DNA去甲基化,而且表达缺失的p16、MGMT mRNA重新表达。结论启动子区高甲基化是肺癌细胞p16、MGMT基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能逆转p16、MGMT基因甲基化状态,从而调控p16、MGMT基因表达。 展开更多

关键词 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 P16基因 MGMT基因 DNA甲基化 肺癌

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对HepG2中抑癌基因MIA2表达的影响 被引量：1

4

作者 杨少奇 姚文暾 +3 位作者 杨花 黄睿 胡建国 何芳 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期479-482,共4页

目的应用甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)作用肝癌细胞株HepG2,观察其对细胞增殖和凋亡的影响,并观察用药后肝癌细胞中黑色素瘤抑制蛋白2(melanoma inhibitory activity 2,MIA2)表达的变... 目的应用甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)作用肝癌细胞株HepG2,观察其对细胞增殖和凋亡的影响,并观察用药后肝癌细胞中黑色素瘤抑制蛋白2(melanoma inhibitory activity 2,MIA2)表达的变化情况。方法分别以浓度0、1、2、4、8、10、20、40μmol/L的5-Aza-CdR作用HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。再以0μmol/L和10μmol/L的5-Aza-CdR作用HepG2细胞,细胞免疫组化和Western blot检测细胞中MIA2蛋白表达。结果 5-Aza-CdR作用HepG2后,MTT结果显示细胞增殖受到抑制,在一定药物浓度范围内,细胞增殖抑制率和药物浓度呈正相关;流式细胞术结果显示细胞早期凋亡增加,在一定药物浓度范围内,早期凋亡率和药物浓度呈正相关;细胞免疫组化和Western blot结果显示与对照组(0μmol/L)比较,10μmol/L组中MIA2蛋白表达增强。结论 5-Aza-CdR作用HepG2细胞后,MIA2蛋白表达明显增强,细胞增殖受到抑制,早期凋亡增加。 展开更多

关键词 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 黑色素瘤抑制蛋白2(MIA2) 肝癌细胞 凋亡

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨 被引量：1

5

作者 袁昌劲 唐求 +1 位作者 王辉 陈锐 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第14期3-5,共3页

目的观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法分别用低、中、高浓度5-Aza-CdR处理AGS,对照组不处理。CCK-8检测AGS细胞增殖状态,流式细胞仪检测AGS细胞周期及凋亡率,MSP检测AGS中DAPK... 目的观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法分别用低、中、高浓度5-Aza-CdR处理AGS,对照组不处理。CCK-8检测AGS细胞增殖状态,流式细胞仪检测AGS细胞周期及凋亡率,MSP检测AGS中DAPK基因启动子甲基化状态,RT-PCR和Western blot法分别检测AGS中的DAPKmRNA及其蛋白。结果低、中、高浓度组AGS细胞增殖速度显著低于对照组(P均<0.05),并呈浓度、时间依赖性(P均<0.05)。5-Aza-CdR使AGS细胞停滞在G0/G1期(P均<0.05),细胞凋亡率增加(P均<0.05)。对照组DAPK基因启动子表现甲基化状态,低、中、高浓度组DAPK基因启动子被逆转成未甲基化状态。低、中、高浓度组AGS细胞DAPK mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组(P均<0.05),并呈浓度依赖性。结论 5-Aza-CdR可抑制AGS细胞增殖、促进其凋亡,可能与逆转DAPK基因启动子甲基化状态并使其重新表达有关。 展开更多

关键词 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 死亡相关蛋白激酶 甲基化状态 胃癌 胃癌细胞

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5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响 被引量：1

6

作者 葛畅 许春伟 +2 位作者 王鲁平 方园 张玉萍 《皖南医学院学报》 CAS 2014年第6期478-482,共5页

目的:探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine)对结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法:用不同浓度5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理结直肠癌细胞株H... 目的:探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine)对结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法:用不同浓度5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo。应用Taq Man探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和Lo Vo细胞中MLH-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果:Methylight检测HT-29细胞株中MLH-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后MLH-1基因mRNA和蛋白表达上调,实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.171±0.126、1.356±0.085和1.422±0.090;在Lo Vo细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.117±0.094、1.273±0.062和1.285±0.070。Western blot检测MLH-1蛋白对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为0.114±0.033、0.365±0.040、0.831±0.041和0.849±0.051;Lo Vo细胞株相对表达量分别为0.602±0.020、0.621±0.028、0.934±0.029和1.057±0.045。以上作用均呈时间、剂量依赖性,MLH-1基因mRNA在HT-29细胞株表达(F=8.918,P=0.010)和Lo Vo细胞株表达(F=8.351,P=0.011)具有统计学意义。MLH-1蛋白表达在HT-29细胞株表达(F=226.825,P=0.000)和Lo Vo细胞株表达(F=153.642,P=0.000)亦具有统计学意义。结论:结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-氮杂-2'-脱氧胞苷能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。 展开更多

关键词 DNA甲基化 5’-氮杂-2’-脱氧胞苷 HT-29 LOVO MLH-1基因

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷诱导肝癌细胞株SLIT2基因去甲基化的实验研究 被引量：2

7

作者 李培坤 耿小平 《安徽医学》 2015年第2期137-140,共4页

目的观察肝细胞癌(HCC)细胞株SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B及ep G2中SLIT2基因在5-Aza-CdR作用后,其启动子区甲基化状态及表达的变化,探讨HCC细胞株中SLIT2基因调控规律及甲基化调节抑制剂5-Aza-CdR对SLIT2基因转录的影响。方法... 目的观察肝细胞癌(HCC)细胞株SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B及ep G2中SLIT2基因在5-Aza-CdR作用后,其启动子区甲基化状态及表达的变化,探讨HCC细胞株中SLIT2基因调控规律及甲基化调节抑制剂5-Aza-CdR对SLIT2基因转录的影响。方法对上述HCC细胞株体外培养,MSP法检测HCC细胞株中SLIT2启动子相关区域的甲基化状况。应用10mmol/L浓度的5-Aza-CdR处理体外培养的5种HCC细胞后,MSP法检测用药前后细胞中SLIT2基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞中SLIT2 mRNA的变化。结果 SLIT2基因在各细胞株中启动子区呈异常高甲基化状态,mRNA低表达。经过5-Aza-CdR处理后,SLIT2基因启动子区呈显著去甲基化状态,其mRNA表达增强。结论启动子区异常甲基化是HCC细胞SLIT2基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能逆转SLIT2基因甲基化状态,从而调控SLIT2基因表达。 展开更多

关键词 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 肝细胞癌 SLIT2基因 DNA甲基化

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5-杂氮-2′-脱氧胞苷对白血病K562细胞株SHP-1和JAK2基因表达的影响及意义 被引量：1

8

作者 闫俊红 刘建亮 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第11期62-63,共2页

目的探讨白血病的发病机制及有效治疗方法。方法用RPM I1640培养基对白血病细胞株K562进行传代培养,用0.5、2、5μmol/L的5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对其进行处理,于24、48、72 h收取细胞,用实时定量PCR法检测SHP-1和JAK2 mRNA表... 目的探讨白血病的发病机制及有效治疗方法。方法用RPM I1640培养基对白血病细胞株K562进行传代培养,用0.5、2、5μmol/L的5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对其进行处理,于24、48、72 h收取细胞,用实时定量PCR法检测SHP-1和JAK2 mRNA表达水平。结果5-aza-CdR作用于K562细胞株后随作用时间延长和浓度升高,SHP-1 mRNA表达水平升高,JAK2 mRNA表达水平降低。二者呈负相关。结论5-aza-CdR可抑制肿瘤的发生,其可能通过抑制JAK/STAT通路发挥作用。 展开更多

关键词 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 SHP-1基因 JAK2 甲基化 甲基化抑制剂 K562细胞

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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化作用及意义

9

作者 邱庆安 吕云福 +3 位作者 陈一明 林友刚 伍海鹰 刘宁 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第14期6-7,共2页

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化的作用,并探讨其临床意义。方法分别采用BSP和RT-PCR技术检测5-Aza-CdR处理前后胃癌AGS细胞CHFR基因启动子甲基化状态及其mRNA。结果 AGS细胞CHFR基因启动子在5-Az... 目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化的作用,并探讨其临床意义。方法分别采用BSP和RT-PCR技术检测5-Aza-CdR处理前后胃癌AGS细胞CHFR基因启动子甲基化状态及其mRNA。结果 AGS细胞CHFR基因启动子在5-Aza-CdR处理前呈现高甲基化状态(甲基化率≥60%),其mRNA表达完全缺失;5-Aza-CdR处理后则表现为低或无甲基化状态(甲基化率≤20%),其mRNA表达恢复正常。结论 CHFR基因启动子在AGS细胞中呈高甲基化状态,5-Aza-CdR能显著逆转其CHFR基因异常甲基化,诱导CHFR基因表达,为胃癌的治疗提供新思路。 展开更多

关键词 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 CHFR基因 去甲基化 胃癌 胃癌细胞

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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对肝癌DNA甲基转移酶1及上皮钙黏附素表达的影响

10

作者 吴守伟 汤必奎 +2 位作者 黄银久 胡明洁 赵莉 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期328-332,共5页

目的：研究5-氮杂-2＇脱氧胞苷（5～Aza—CdR）对肝癌细胞中DNA甲基转移酶1（DNMT1）及上皮钙黏附素（E-cadherin）表达的影响。方法：免疫组织化学检测上皮钙黏附素在肝癌（26例）及癌旁组织（20例）中的表达。用终浓度10μmol／L的5-A... 目的：研究5-氮杂-2＇脱氧胞苷（5～Aza—CdR）对肝癌细胞中DNA甲基转移酶1（DNMT1）及上皮钙黏附素（E-cadherin）表达的影响。方法：免疫组织化学检测上皮钙黏附素在肝癌（26例）及癌旁组织（20例）中的表达。用终浓度10μmol／L的5-Aza-CdR处理培养的肝癌细胞株GQY-7703作为实验组，未处理细胞为对照组；DNMT1基因和上皮钙黏附素基因（CDH1）的转录产物及表达蛋白分别使用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测；CDH1的甲基化状态使用甲基化特异性PCR（MSP）检测。结果：相比较癌旁组织，肝癌组织中上皮钙黏附素表达显著下调。5-Aza-CdR降低了GQY-7703细胞中DNMT1在转录水平和翻译水平的表达；CDH1CpG岛的甲基化水平降低；上皮钙黏附素mRNA和蛋白表达量明显增高，对电泳条带的半定量分析显示实验组和对照组之间的差异具有统计学意义。结论：5-Aza-CdR通过抑制DNMT1的表达，改变了CDH1基因的异常甲基化状态，进而恢复上皮钙黏附素的表达。 展开更多

关键词 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 肝癌细胞 DNA甲基转移酶1 上皮钙黏附素

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5-杂氮-2′-脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移能力的影响及机制探讨

11

作者 沈三弟 吴爱国 +1 位作者 邵国利 赵志 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第34期23-24,共2页

目的观察5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对非浸润性人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移能力的影响,并探讨其机制。方法将MCF-7细胞分两组,观察组用含5.0μM5-Aza-CdR的培养液处理4 d,对照组加入等体积的DMSO。采用细胞划痕实验观察细胞体外迁... 目的观察5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对非浸润性人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移能力的影响,并探讨其机制。方法将MCF-7细胞分两组,观察组用含5.0μM5-Aza-CdR的培养液处理4 d,对照组加入等体积的DMSO。采用细胞划痕实验观察细胞体外迁移能力,采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(MSP)法检测CXC趋化因子受体-4(CXCR4)、乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)mRNA及其启动子区甲基化状态。结果与对照组比较,观察组36、48 h细胞划痕愈合率明显升高,MCF-7细胞的CXCR4 mRNA表达量明显增加(P<0.05);5-Aza-CdR使CXCR4启动子区甲基化的CpG岛1完全去甲基化,BRMS1启动子区CpG岛B的非甲基化状态亦无明显改变。结论 5-Aza-CdR增强了MCF-7细胞的体外迁移能力,可能与其去甲基化机制上调了促转移基因CXCR4表达有关。 展开更多

关键词 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 趋化因子受体-4 乳腺癌转移抑制基因-1 基因甲基化 细胞迁移力

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人胃癌细胞株BGC803生长及死亡相关蛋白激酶基因表达的影响

12

作者 沈薇 胡金瑶 +1 位作者 高伟 赵慧 《中国医药导报》 CAS 2014年第32期14-16,29,共4页

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)对人胃癌细胞BGC803增殖、凋亡及对死亡相关蛋白激酶(DAPK)m RNA表达水平的影响。方法用不同浓度的5-Aza-Cd R处理BGC803细胞,设立不含5-Aza-Cd R的对照组及3个实验组:5-Aza-Cd ... 目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)对人胃癌细胞BGC803增殖、凋亡及对死亡相关蛋白激酶(DAPK)m RNA表达水平的影响。方法用不同浓度的5-Aza-Cd R处理BGC803细胞,设立不含5-Aza-Cd R的对照组及3个实验组:5-Aza-Cd R 1μmol/L组、5-Aza-Cd R 5μmol/L组、5-Aza-Cd R 10μmol/L组。CCK-8检测细胞的增殖情况,AnnexinⅤ/PI双染及流式细胞术检测药物处理后细胞凋亡的情况,RT-PCR检测用药前后DAPK m RNA的表达水平变化。结果实验组BGC803细胞增殖速度显著低于对照组,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示,BGC803细胞中DAPK基本无表达,5-Aza-Cd R处理后,细胞中DAPK m RNA表达量显著高于对照组(P<0.05)。结论 5-Aza-Cd R抑制BGC803细胞增殖,并促进细胞凋亡,可能与其诱导DAPK基因表达有关。 展开更多

关键词 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 死亡相关蛋白激酶 胃癌 细胞增殖 细胞凋亡

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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对HepG2中SLIT2甲基化和细胞恶性表型影响的实验研究 被引量：2

13

作者 戴欣 耿小平 +6 位作者 李晓明 朱立新 赵红川 刘付宝 王国斌 赵义军 黄帆 《肝胆外科杂志》 2011年第4期302-305,共4页

目的评估5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dc)对人肝癌细胞系HepG2中抑癌基因SLIT2甲基化状态和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨SLIT2基因在肝癌中的作用及5-aza-2dc的体外抑制肝癌的效应。方法实验分为对照组和加药组,分别应用MSP、... 目的评估5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dc)对人肝癌细胞系HepG2中抑癌基因SLIT2甲基化状态和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨SLIT2基因在肝癌中的作用及5-aza-2dc的体外抑制肝癌的效应。方法实验分为对照组和加药组,分别应用MSP、MTT、划痕实验、侵袭实验、Annexin V-FITC/PI双染实验检测细胞中SLIT2基因的甲基化状态和细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化。结果 5-aza-2dc处理后,HepG2细胞株中SLIT2基因甲基化程度得到一定程度逆转,并呈现出剂量依赖性;划痕实验48 h后,对照组肝癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组肝癌细胞迁移受到抑制;侵袭实验24 h后,加药组细胞的侵袭能力较对照组降低(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染实验显示加药组细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论 5-aza-2dc对HepG2细胞有抑制细胞增殖、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,其中对抑制细胞迁移和侵袭的作用可能是通过逆转SILT2基因甲基化、恢复其表达来实现的。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 SLIT2基因 甲基化 侵袭 凋亡

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酶法合成5-杂氮-2’-脱氧胞苷 被引量：1

14

作者 王丽慧 丁庆豹 +3 位作者 欧伶 许彦梅 张春燕 王玥 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期325-329,共5页

将瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)中的N-脱氧核糖转移酶II的基因(ntd)克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中,构建原核表达系统,成功地得到一株大量表达N-脱氧核糖转移酶II的菌株PND。以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂,该重组菌可大量... 将瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)中的N-脱氧核糖转移酶II的基因(ntd)克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中,构建原核表达系统,成功地得到一株大量表达N-脱氧核糖转移酶II的菌株PND。以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂,该重组菌可大量表达N-脱氧核糖转移酶II。在此酶作用下,以5-杂氮胞嘧啶和脱氧胸苷为底物,生成胸腺嘧啶和目标产物5-杂氮-2’-脱氧胞苷。最佳反应条件为:底物浓度均为2 mmol/L,20 mmol/LTris-HCl缓冲液(pH为7.1),200μL酶,最终反应体积2 mL,55℃反应2 h,转化率可达61%。 展开更多

关键词 N-脱氧核糖转移酶II 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 合成

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5-杂氮-2'-脱氧胞苷调控UCHL1基因表达对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响 被引量：1

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作者 李俊枫 罗子国 +1 位作者 丁璇 唐溧 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期107-109,共3页

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人前列腺癌细胞(PC-3)株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)... 目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人前列腺癌细胞(PC-3)株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测UCHL1 mRNA表达;甲基化测序聚合酶链反应(BSP)检测UCHL1 CpG岛的甲基化状态;蛋白质印迹法(Western Blot)检测UCHL1蛋白的表达。结果:5-Aza-CdR对PC-3细胞生长有抑制作用;与对照组相比细胞凋亡率明显增高(P<0.01);5-Aza-CdR处理细胞后UCHL1的启动子甲基化水平明显降低(P<0.01);UCHL1 mRNA表达水平显著上调(P<0.01);UCHL1蛋白表达水平上升(P<0.01)。结论:5-Aza-CdR能诱导前列腺癌PC-3细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza-CdR能逆转PC-3细胞UCHL1启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。 展开更多

关键词 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 UCHL1 甲基化

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5-氮杂-2′-脱氧胞苷联合紫杉醇对中分化胃腺癌细胞株SGC-7901的作用 被引量：3

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作者 秦东媛 师水生 《临床医药实践》 2009年第6期411-414,共4页

目的：探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）联合紫杉醇对中分化胃腺癌细胞SGC-7901作用，及对抑癌基因PTEN和E—cadherin（E—cad）表达的影响。方法：应用MTT、流式细胞术、RT-PCR方法检测5-Aza-CdR和紫杉醇单用... 目的：探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）联合紫杉醇对中分化胃腺癌细胞SGC-7901作用，及对抑癌基因PTEN和E—cadherin（E—cad）表达的影响。方法：应用MTT、流式细胞术、RT-PCR方法检测5-Aza-CdR和紫杉醇单用和联用后对细胞的增殖抑制、周期分布、凋亡率．以及对抑癌基因PTEN和E—cad mRNA表达的改变。结果：紫杉醇和5-Aza—CdR可抑制胃腺癌细胞的生长，呈浓度依赖性。联合作用后，协同效应明显。紫杉醇可以使细胞阻滞在G2／M期．而5-Aza—CdR可以使细胞阻滞在S期，联合作用后，细胞同时阻滞在S和G2／M周期，凋亡率也增加。紫杉醇对抑癌基因PTEN，E—cad mRNA的表达与对照组相比差异无显著性，5-Aza—CdR可使其重新表达，两药联合作用后．PTEN和E—cad的表达量增多。结论：5-Aza—CdR可增强紫杉醇对胃癌细胞的增殖抑制作用；5-Aza-CdR可以使胃癌细胞阻滞在S期．而紫杉醇使细胞阻滞在G2／M期．两药联合应用后．胃癌细胞在这两个周期的分布以及凋亡率都明显高于单药的应用；5-Aza-CdR可以使胃癌细胞中的抑癌基因PTEN mRNA和E—cad mRNA重新表达。而紫杉醇则不能．但能促进5-Aza—CdR对抑癌基因的重新表达作用。 展开更多

关键词 胃肿瘤 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 紫杉醇 上皮细胞钙黏蛋白

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5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖及RUNX3基因启动子区甲基化状态的影响 被引量：4

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作者 吴明彩 蒋明 +1 位作者 李大彩 毕富勇 《皖南医学院学报》 CAS 2011年第6期436-439,共4页

目的:探讨5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖及其抑癌基因RUNX3启动子区甲基化状态的影响。方法:应用MTT法观察5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖的抑制能力;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测5-氮-2'脱氧胞苷干预前后RUNX3基因启动子... 目的:探讨5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖及其抑癌基因RUNX3启动子区甲基化状态的影响。方法:应用MTT法观察5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖的抑制能力;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测5-氮-2'脱氧胞苷干预前后RUNX3基因启动子区的甲基化状况;应用RT-PCR检测干预前后RUNX3基因的mRNA表达水平的变化。结果:经5-氮-2'脱氧胞苷处理后,RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生部分去甲基化,5-氮-2'脱氧胞苷处理前启动子高甲基化的RUNX3 mRNA未见表达,而在其处理后该基因可见重新表达,经5-氮-2'脱氧胞苷处理后,Reh细胞生长缓慢。结论:5-氮-2'脱氧胞苷能使Reh细胞RUNX3基因启动子区发生部分去甲基化,从而调控RUNX3基因表达并能抑制其细胞生长。启动子区异常甲基化是白血病Reh细胞RUNX3基因失活的主要原因之一。 展开更多

关键词 5-氮-2'脱氧胞苷 RUNX3基因 甲基化

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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对苯并[a]芘致海马神经元毒性的保护作用

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作者 魏智超 冯婧宇 +1 位作者 聂继盛 魏建宏 《中国医药导报》 CAS 2023年第16期26-30,共5页

目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)对苯并[a]芘(B[a]P)致海马神经元毒性的保护作用。方法体外培养海马神经元至第5天,观察并鉴定细胞。实验设立对照组,B[a]P组(20μmol/L B[a]P)和B[a]P+5-Aza-cdR组(20μmol/L B[a]P+10μmol/L 5-... 目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)对苯并[a]芘(B[a]P)致海马神经元毒性的保护作用。方法体外培养海马神经元至第5天,观察并鉴定细胞。实验设立对照组,B[a]P组(20μmol/L B[a]P)和B[a]P+5-Aza-cdR组(20μmol/L B[a]P+10μmol/L 5-Aza-cdR)。观察细胞形态;检测细胞活力、DNA甲基转移酶蛋白和基因表达水平;测定细胞中的总甲基化水平和细胞凋亡情况。结果与对照组比较,B[a]P组海马神经元活性降低(P<0.05);细胞凋亡率升高(P<0.05);DNMT3A、DNMT3B基因和DNMT1、DNMT3A蛋白表达水平上升(P<0.05);总甲基化水平升高(P<0.05)。与B[a]P组比较,B[a]P+5-Aza-cdR组提高了海马神经元活性(P<0.05);降低细胞凋亡率(P<0.01);DNMTs基因和蛋白表达水平明显下降(P<0.05);总甲基化水平下降(P<0.01)。结论5-Aza-cdR对B[a]P诱导的海马神经元损伤有保护作用。 展开更多

关键词 苯并[A]芘 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 海马神经元 甲基化

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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对胎牛成纤维细胞增殖、周期和凋亡的影响

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作者 于孟飞 王文璐 易建明 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期727-734,共8页

胎牛成纤维细胞是细胞重编程和去甲基化研究的常用材料。本文以胎牛成纤维细胞为材料,用不同浓度的DNA去甲基抑制剂药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷分别处理24、48和72 h后,研究其对胎牛成纤维细胞的增殖、活力、细胞周期分布和凋亡率的影响。... 胎牛成纤维细胞是细胞重编程和去甲基化研究的常用材料。本文以胎牛成纤维细胞为材料,用不同浓度的DNA去甲基抑制剂药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷分别处理24、48和72 h后,研究其对胎牛成纤维细胞的增殖、活力、细胞周期分布和凋亡率的影响。结果显示,5-氮杂-2’-脱氧胞苷以浓度依赖性的方式抑制胎牛成纤维细胞的增殖、活力,并增加细胞的总凋亡率。其中,用浓度低于0.1μmol/L的5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理24 h时,胎牛成纤维细胞受到的不利影响最小。这也说明采用相对低浓度的DNA去甲基抑制剂处理体细胞对于细胞的重编程是有益的。 展开更多

关键词 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡

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5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响及其机制探讨

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作者 沈军 邵雪非 +2 位作者 徐宗华 江晓春 徐善水 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第15期8-11,共4页

目的观察5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、5、10μmol/L)5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞,比较细胞增殖抑制率和Bcl-2腺病毒E1B19k Da相关蛋白3 mRNA(BNIP3 mRNA);将... 目的观察5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、5、10μmol/L)5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞,比较细胞增殖抑制率和Bcl-2腺病毒E1B19k Da相关蛋白3 mRNA(BNIP3 mRNA);将5μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞0、1、2、3、4、5、6 d,比较细胞增殖抑制率及BNIP3 mRNA。将5μmol/L 5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞4 d,并分别添加和不添加Caspase抑制剂Boc-D-FMK,测算细胞增殖抑制率。结果 5-氮杂脱氧胞苷对U87细胞增殖有抑制作用,且呈剂量及时间依赖性(P均<0.05),抑制作用最强的浓度为5μmol/L,最强的时间点为4 d;Boc-D-FMK并不能抑制由BNIP3所诱导的细胞凋亡,P>0.05。结论 5-氮杂脱氧胞苷可抑制U87细胞增殖,其机制可能与BNIP3 mRNA表达上调有关。 展开更多

关键词 5-氮杂脱氧胞苷 胶质母细胞瘤 Bcl-2腺病毒E1B19kDa相关蛋白3

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