3-羟酰基辅酶A脱氢酶在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

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作者 王长远 徐闯 沈冰蕾 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期263-265,共3页

目的:克隆并在大肠杆菌中表达3-羟酰基辅酶A脱氢酶(3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase,HCDH)并制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增HCDH基因片段,经DNA测序证实后克隆到原核表达载体pMAL-P2X,重组质粒转化大肠杆菌DE3,IPTG诱导表达,SDS-P... 目的:克隆并在大肠杆菌中表达3-羟酰基辅酶A脱氢酶(3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase,HCDH)并制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增HCDH基因片段,经DNA测序证实后克隆到原核表达载体pMAL-P2X,重组质粒转化大肠杆菌DE3,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经麦芽糖树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫獭兔,琼扩和ELISA检测抗血清的效价,Western blot检测其特异性。结果:PCR扩增得到786bp的目的片段,序列测定证实与GeneBank上登录的序列一致;成功构建了HCDH基因片段的原核表达载体;在详细探索表达条件的基础上,成功诱导HCDH的表达,并制备了相应的抗血清。结论:检测HCDH蛋白在表达水平上的变化及为HCDH基因表达调控的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 3-羟酰基辅酶a脱氢酶 原核表达 抗血清

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促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响 被引量：15

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作者 戈一峰 王大勇 +7 位作者 蒋超 张艳梅 韩雪峰 卢坤刚 崔英霞 黄宇烽 黄祝 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1138-1142,共5页

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH... 目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。 展开更多

关键词 GNRH类似物 荧光定量PCR 大鼠睾丸间质细胞 膜联蛋白5 3β-羟类固醇脱氢酶

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睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达 被引量：5

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作者 张国华 徐国宾 +1 位作者 刘英民 夏铁安 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期966-969,共4页

从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析... 从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。 展开更多

关键词 睾酮假单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶基因 质粒载体 构建 表达 胆汁酸 血清

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睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达 被引量：2

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作者 张国华 丛爱日 +3 位作者 徐国宾 孙立颖 严岩 夏铁安 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期203-206,共4页

目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据... 目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。 展开更多

关键词 睾丸酮丛毛单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶 克隆表达 大肠杆菌 基因组DNA 相对分子质量 亲和层析纯化 诱导表达 PCR扩增 分离鉴定 初步鉴定 生化特征 设计引物 扩增片段 重组质粒 培养特征 生化反应 融合蛋白 测定方法 酶活性

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游泳训练对载脂蛋白E基因敲除小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体-γ及脂代谢酶肉碱棕榈酰转移酶-1、中链酰基辅酶A脱氢酶的影响 被引量：2

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作者 孙垂华 蔡颖 +3 位作者 张文亮 谢康玲 刘元 刘遂心 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期134-138,153,共6页

目的:观察游泳训练对ApoE基因敲除小鼠胰岛素抵抗模型血清游离脂肪酸(FFA)、肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)及肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)mRNA表达的影响,初步探讨游泳训练改善ApoE基因敲... 目的:观察游泳训练对ApoE基因敲除小鼠胰岛素抵抗模型血清游离脂肪酸(FFA)、肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)及肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)mRNA表达的影响,初步探讨游泳训练改善ApoE基因敲除小鼠胰岛素抵抗(IR)的可能机制。方法:选取8周雄性ApoE基因敲除小鼠26只,随机分为:高脂运动组(n=13)和高脂静止组(n=13)。高脂运动组小鼠给予高脂饮食加游泳训练12周,高脂静止组除不进行游泳训练外,余同高脂运动组。另以健康雄性C57BL/6J(n=10)小鼠为正常对照组,普通饲料喂养12周。干预12周后,测各组小鼠空腹胰岛素(FIN)、空腹血糖(FPG)、并以HOMA法计算胰岛素抵抗指数(IRI),确定胰岛素抵抗模型建立;全自动生化分析仪测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度胆固醇脂蛋白(HDL)、低密度胆固醇脂蛋白(LDL)、游离脂肪酸(FFA)含量;RT-PCR法测肝脏组织中PPAR-γ、CPT-1、MCADmRNA表达水平。结果:运动训练干预12周以后:①与正常对照组相比较,高脂静止组体重显著增加(P<0.05);与高脂静止组比较,高脂运动组体重显著下降(P<0.05)。②与正常对照组相比较,高脂静止组FIN、FPG、Homa-IRI水平明显升高(P均<0.01);与高脂静止组相比较,高脂运动组FIN、FPG、Homa-IRI明显降低(P分别<0.05、0.01、0.01)。③与正常对照组相比较,高脂静止组TC、LDL、FFA水平明显升高(P均<0.01);与高脂静止组相比较,高脂运动组TC、LDL、FFA水平明显降低(P分别<0.05、0.05、0.01),HDL水平明显升高(P<0.05)。④与正常对照组相比较,高脂静止组PPAR-γ、CPT-1、MCADmRNA表达明显降低(P均<0.01);与高脂静止组相比较,高脂运动组PPAR-γ、CPT-1、MCADmRNA表达明显增加(P均<0.01)。结论:游泳训练可能通过上调肝脏组织PPAR-γ表达、进而上调CPT-1、MCAD的表达,改善小鼠脂代谢,从而改善ApoE基因敲除小鼠胰岛素抵抗。 展开更多

关键词 胰岛素抵抗 运动 过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ 肉碱棕榈酰转移酶-1 中链酰基辅酶a脱氢酶

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3α-羟类固醇脱氢酶的亲和纯化及化学修饰提高酶稳定性

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作者 方亚男 段敬霞 +1 位作者 张玲 杨海麟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期747-751,共5页

研究了3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)经化学修饰后的稳定性变化。已构建的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a-hsd经诱导表达、镍柱亲和纯化得到电泳纯的3α-HSD酶,酶蛋白得率是16.5%,活性回收率为64.7%,纯化倍数约为3.8,15%SDS-PAGE结... 研究了3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)经化学修饰后的稳定性变化。已构建的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a-hsd经诱导表达、镍柱亲和纯化得到电泳纯的3α-HSD酶,酶蛋白得率是16.5%,活性回收率为64.7%,纯化倍数约为3.8,15%SDS-PAGE结果显示3α-HSD酶为单一条带,相对分子质量在28 000左右。采用邻苯二甲酸酐(PA)作为修饰剂,对3α-HSD纯酶进行化学修饰,与对照组相比,修饰酶抵抗p H波动的能力有所增强,50℃水浴10 min后酶的热稳定性明显提高,37℃贮藏40 h后修饰酶的贮藏稳定性比原酶提高9倍。 展开更多

关键词 3α-羟类固醇脱氢酶 亲和纯化 邻苯二甲酸酐 化学修饰 稳定性

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以黄疸为首发症状中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例报告 被引量：5

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作者 李甫棒 黄晓磊 陈洁 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期880-881,共2页

中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（medium chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency,MCADD）是一种常染色体隐性遗传病,主要表现为线粒体脂肪酸的β-氧化异常,并出现一系列相应代谢指标异常。急性发作时,常表现为低酮性低血糖、呕吐，其他... 中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（medium chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency,MCADD）是一种常染色体隐性遗传病,主要表现为线粒体脂肪酸的β-氧化异常,并出现一系列相应代谢指标异常。急性发作时,常表现为低酮性低血糖、呕吐，其他症状如抽搐、昏迷、心跳停止、猝死、肝大、高氨血症等都很常见。目前在我国对该病尚无典型病例及系统研究状况的报道。现报告1例以黄疸为首发症状的中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症病例。 展开更多

关键词 中链酰基辅酶a脱氢酶缺乏症 首发症状 黄疸 常染色体隐性遗传病 典型病例 β-氧化 主要表现 代谢指标

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磷脂酰肌醇3激酶信号通路在缺血后适应中对大鼠心肌保护机制的研究 被引量：2

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作者 赵昕 于宏颖 +1 位作者 全南虎 郑杨 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2010年第1期62-65,共4页

目的研究缺血后适应(IPost)对大鼠心肌保护作用及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K/Akt)信号通路机制。方法将32只雄性Wistar大鼠随机分为缺血再灌注组(A组),IPost组(B组),IPost+Wortmannin组(C组)和缺血再灌注+SB216763组(D组),每组8只。测定各组... 目的研究缺血后适应(IPost)对大鼠心肌保护作用及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K/Akt)信号通路机制。方法将32只雄性Wistar大鼠随机分为缺血再灌注组(A组),IPost组(B组),IPost+Wortmannin组(C组)和缺血再灌注+SB216763组(D组),每组8只。测定各组左心室收缩压(LVSP)和再灌注30 min冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量。并测定心肌梗死面积,对心肌进行免疫组织化学染色,观察Akt磷酸化和GSK-3β磷酸化的表达。结果与B组比较,A组LVSP明显降低,乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量明显升高(P<0.05);同时IPost干预减小了心肌梗死面积(47.3% vs 29.5%),B组Akt磷酸化和GSK-3β磷酸化表达增加。结论 IPost对体外大鼠缺血再灌注损伤有明确的保护作用。Wortmannin可削弱IPost的保护作用,SB216763具有模拟IPost的心肌保护作用,Akt和GSK-3β的磷酸化水平在IPost的心肌保护作用信号通道传导机制中具有重要地位。 展开更多

关键词 1-磷脂酰肌醇3-激酶 再灌注损伤 信号传导 心肌缺血 L-乳酸脱氢酶 肌酸激酶

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细菌3-羟基丁酮及氧化还原产物代谢的研究进展 被引量：3

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作者 包永明 王天琪 姬芳玲 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期1-6,共6页

3-羟基丁酮及氧化还原产物是重要的4碳平台化合物,以糖质原料为底物的生物法制备是当今研究与生产的主流。介绍了3-羟基丁酮及氧化还原产物2,3-丁二醇、丁二酮产生的主要细菌,这些细菌积累3-羟基丁酮及氧化还原产物的代谢途径,主要的代... 3-羟基丁酮及氧化还原产物是重要的4碳平台化合物,以糖质原料为底物的生物法制备是当今研究与生产的主流。介绍了3-羟基丁酮及氧化还原产物2,3-丁二醇、丁二酮产生的主要细菌,这些细菌积累3-羟基丁酮及氧化还原产物的代谢途径,主要的代谢及调控方式,代谢关键酶:乙酰乳酸合成酶、α-乙酰乳酸脱羧酶、2,3-丁二醇脱氢酶的结构与功能等国内外研究进展;并对3-羟基丁酮及氧化还原产物细菌代谢、发酵制备的未来研究提出了展望。 展开更多

关键词 3-羟基丁酮 2 3-丁二醇 丁二酮 α-乙酰乳酸合成酶 Α-乙酰乳酸脱羧酶 2 3-丁二醇脱氢酶

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生物电化学法转化甘油生产1,3-二羟基丙酮 被引量：1

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作者 张雨薇 杨雪鹏 +1 位作者 魏东芝 艾志录 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期266-270,共5页

氧化葡萄糖酸杆菌中依赖辅基吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline Quinone,PQQ)的膜结合甘油脱氢酶(Glycerol dehydrogenase,GDH)是酶法转化甘油生成1,3-二羟基丙酮(1,3-Dihydroxyacetone,DHA)的关键酶。以铁氰化钾为电子媒介体,采用生物电化学... 氧化葡萄糖酸杆菌中依赖辅基吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline Quinone,PQQ)的膜结合甘油脱氢酶(Glycerol dehydrogenase,GDH)是酶法转化甘油生成1,3-二羟基丙酮(1,3-Dihydroxyacetone,DHA)的关键酶。以铁氰化钾为电子媒介体,采用生物电化学法,再生甘油脱氢酶的辅基PQQ,从而实现酶法循环转化甘油生产DHA。设计电耦联反应装置,在(28±2)℃,370mV电压下反应18h,DHA质量浓度达到27.21g/L,甘油转化率为52.93%。 展开更多

关键词 1-3二羟丙酮 甘油脱氢酶 生物电化学法 氧化葡萄糖酸杆菌

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粘虫飞行过程中四种相关酶的活性变化 被引量：12

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作者 李克斌 高希武 +2 位作者 罗礼智 尹姣 曹雅忠 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期643-647,共5页

对3日龄粘虫雌蛾吊飞过程中4种相关酶3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、3-磷酸甘油脱氢酶(GDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的研究结果表明,在室内条件下,粘虫在吊飞过程中其能量代谢有以下特点: 在吊飞的初始5 min,所有与糖... 对3日龄粘虫雌蛾吊飞过程中4种相关酶3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、3-磷酸甘油脱氢酶(GDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的研究结果表明,在室内条件下,粘虫在吊飞过程中其能量代谢有以下特点: 在吊飞的初始5 min,所有与糖代谢和脂肪代谢相关的酶活性都快速升高,这段时期脂肪代谢的酶活性也完全被活化,HOAD活性明显增强;但在随后的5～60 min持续吊飞期间与能量代谢有关的酶活性都有所下降,表明此时飞行活性趋于平稳.飞行中的粘虫具有极高的有氧代谢能力,也具备一定的无氧代谢能力.吊飞过程中HOAD∶GAPDH大于1,说明粘虫飞行过程中能源物质利用属于混合型,但动用脂肪比糖类要多. 展开更多

关键词 粘虫 吊飞 酶活性 3-羟酰辅酶a脱氢酶 3-磷酸甘油醛脱氢酶

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成骨细胞中3β-HSD活性的检测 被引量：4

12

作者 马晓欣 麻爽 +3 位作者 张淑兰 桑野壤 斋藤裕 矢内原巧 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期317-318,共2页

关键词 成骨细胞 3β-羟脱氢酶 骨代谢

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膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响 被引量：4

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作者 林钗英 柳海燕 +3 位作者 陶晓倩 时姗姗 路榕 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2011年第4期340-345,共6页

目的研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid deh... 目的研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制。方法将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只。对照组大鼠腹腔注射等量的pH8.0 Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20 d。用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化。结果与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04)vs(0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10)vs(1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14)vs(1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义。结论膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成。 展开更多

关键词 膜联蛋白5 类固醇急性调节蛋白 胆固醇侧链裂解酶 3β-羟类固醇脱氢酶

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17β-HSD-1、CD138和CD105在子宫内膜息肉组织中的表达及临床意义 被引量：7

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作者 杨蕾 程玲慧 徐福霞 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期389-393,共5页

目的:探讨子宫内膜息肉(EP)组织中17β-羟类固醇脱氢酶1(17β-HSD-1)、膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖配体蛋白聚糖-1(CD138)和血管生成标志因子内皮糖蛋白(CD105)的表达及其与临床参数的关系。方法:收集安徽省第二人民医院收治的EP患者39例,取... 目的:探讨子宫内膜息肉(EP)组织中17β-羟类固醇脱氢酶1(17β-HSD-1)、膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖配体蛋白聚糖-1(CD138)和血管生成标志因子内皮糖蛋白(CD105)的表达及其与临床参数的关系。方法:收集安徽省第二人民医院收治的EP患者39例,取其EP组织样本(增生期19例、分泌期20例)作为息肉组,及其息肉旁内膜组织样本作为息肉旁组,另选择同期因不孕症或异常子宫出血行宫腔镜检查的40例正常子宫内膜组织作为正常对照组(增生期21例,分泌期19例)。采用免疫组织化学方法测定17β-HSD-1、CD138和CD105在3组内膜组织中增生期及分泌期的表达情况。结果:17β-HSD-1、CD138、CD105在息肉组中的阳性表达率明显高于息肉旁组和正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。息肉组增生期CD138和CD105的阳性表达率显著低于分泌期,差异有统计学意义(P<0.05),而17β-HSD-1的阳性表达率在增生期和分泌期差异无统计学意义(78.9%vs 80.0%,P>0.05)。息肉组异常子宫出血患者CD105的阳性表达率显著低于无异常子宫出血者,差异有统计学意义(62.1%vs 90.0%,P<0.05)。17β-HSD-1和CD138(r=0.070)、17β-HSD-1和CD105(r=0.010)、CD138和CD105(r=0.010)在EP组织增生期及分泌期的阳性表达间均无相关性(P>0.05)。结论:EP组织中17β-HSD-1、CD138和CD105均呈现过表达,这种异常表达可能与EP的发生密切相关,其有可能参与了EP的形成,可能作为EP诊断的参考指标。 展开更多

关键词 子宫内膜息肉 17β-羟类固醇脱氢酶1 膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖配体蛋白聚糖-1 内皮糖蛋白

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雌二醇对香猪睾丸中SF-1和3β-HSD及NOS表达的影响

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作者 钟垒 曲月秀 +3 位作者 陈钊 主性 冯杰 田兴贵 《贵州农业科学》 CAS 2015年第9期121-123,共3页

为探明外源雌二醇（E2）对香猪睾丸中类固醇生成因子-1（SF-1）、3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）和一氧化氮合酶（NOS）表达的影响,以便进一步探讨雌激素影响睾丸生殖功能的作用机制,将12头1日龄雄性贵州香猪随机平分为对照组（空白）... 为探明外源雌二醇（E2）对香猪睾丸中类固醇生成因子-1（SF-1）、3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）和一氧化氮合酶（NOS）表达的影响,以便进一步探讨雌激素影响睾丸生殖功能的作用机制,将12头1日龄雄性贵州香猪随机平分为对照组（空白）、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,试验Ⅰ～Ⅲ组从2日龄连续9d经腹腔每头每天分别注射E20.1mL、0.5mL和2.5mL,26日龄时手术取出左侧睾丸,采用酶联免疫吸附法测定SF-1、3β-HSD及NOS的含量。结果表明：与对照组相比,试验Ⅰ～Ⅲ组睾丸中SF-1、3β-HSD和NOS的表达量显著升高（P〈0.05）。其中,SF-1的表达量随E2用量增加显著升高（P〈0.05）;3β-HSD的表达量在E2用量为0.5mL/（d·头）时最高,在2.5mL/（d·头）时表达量又下降（P〈0.05）;NOS的表达量各试验组间差异不显著（P〉0.05）。E2能够促进新生香猪睾丸中SF-1、3β-HSD及NOS的表达。 展开更多

关键词 雌二醇 睾丸 类固醇生成因子-1 3β-羟类固醇脱氢酶 一氧化氮合酶 香猪

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Ehhadh通过调控脂代谢抑制高脂饮食小鼠肾小管间质炎症

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作者 闫嘉欣 吴婷 +3 位作者 朱艳 姚芳 王晓峰 杜春阳 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第9期1665-1673,共9页

目的:观察烯酰辅酶A水解酶/L-3-羟酰辅酶A脱氢酶(Ehhadh)在高脂饮食(HFD)小鼠肾小管间质炎症中的作用及分子机制。方法:24只雄性C57BL/6N实验小鼠随机分为4组:标准饮食(SD)组、HFD组、HFD+Ehhadh基因过表达组和HFD+载体对照组,每组6只。... 目的:观察烯酰辅酶A水解酶/L-3-羟酰辅酶A脱氢酶(Ehhadh)在高脂饮食(HFD)小鼠肾小管间质炎症中的作用及分子机制。方法:24只雄性C57BL/6N实验小鼠随机分为4组:标准饮食(SD)组、HFD组、HFD+Ehhadh基因过表达组和HFD+载体对照组,每组6只。HFD小鼠给予60%脂肪、20%蛋白和20%碳水化合物的饲料16周,HFD+Ehhadh基因过表达组和HFD+载体对照组小鼠在HFD喂养8周后,尾静脉分别注射腺相关病毒9(AAV9)-Ehhadh和AAV9-vector,随后继续8周HFD喂养。观察小鼠肾功能及肾组织形态学变化;Western blot及免疫组化检测小鼠肾组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、caspase-1 p10、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的表达水平;免疫荧光共定位检测Ehhadh与过氧化物酶体生物发生因子14(Pex14)的共定位情况;ELISA检测小鼠尿液中IL-1β和IL-18含量;尼罗红染色观察肾组织脂质沉积情况;靶向定量脂质组学分析检测小鼠肾皮质脂质亚类含量。结果:与SD组相比,HFD组小鼠肾小管细胞过氧化物酶体Ehhadh蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。Ehhadh过表达显著改善HFD小鼠肾功能(P<0.01),减轻肾小管上皮细胞的病理形态学变化,显著抑制炎症因子IL-1β和IL-18的表达和肾间质巨噬细胞浸润(P<0.01),使HFD诱导的NLRP3炎症小体活化被抑制(P<0.01)。同时,Ehhadh过表达减少肾小管细胞脂质沉积(P<0.01),促进胆固醇和磷脂等长链脂肪酸的氧化分解。结论:Ehhadh可抑制HFD小鼠肾小管间质炎症反应,这一作用是通过促进过氧化物酶体脂肪酸氧化,进而抑制NLRP3炎症小体活化实现的。 展开更多

关键词 高脂饮食 烯酰辅酶a水解酶/L-3-羟酰辅酶a脱氢酶 过氧化物酶体 肾小管间质炎症 脂质组学

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去氢表雄酮及其代谢产物对人肿瘤细胞系的抗增殖作用 被引量：2

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作者 姜艳芳 赵平伟 +2 位作者 谭岩 方艳秋 松崎静司 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期985-989,共5页

目的:研究去氢表雄酮(DHEA)及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯(DHEAs)对HepG2和HT-29细胞增殖的抑制作用及其机制。方法:HepG2和HT-29细胞分别分为对照组、不同浓度(1、10、50、100及200μmol·L-1)DHEA组和DHEAs组,孵育8、24、48及72h后... 目的:研究去氢表雄酮(DHEA)及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯(DHEAs)对HepG2和HT-29细胞增殖的抑制作用及其机制。方法:HepG2和HT-29细胞分别分为对照组、不同浓度(1、10、50、100及200μmol·L-1)DHEA组和DHEAs组,孵育8、24、48及72h后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和BrdU测定法检测DHEA对肿瘤细胞的生长抑制率,同时测定3-羟基-3-甲基戊二酸单酰A还原酶(HMGR)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:①MTT法结果显示,与对照组比较,不同浓度DHEA组HepG2和HT-29细胞增殖抑制率均显著增加(P<0.05)。作用24h时,100μmol·L-1DHEA组细胞增殖抑制率降低最显著(P<0.05),而DHEAs组差异无显著性(P>0.05)。②BrdU法结果显示,当DHEA浓度在50、100和200μmol·L-1时细胞的生长均显著受到抑制,尤其以HepG2细胞的生长抑制率最高(P<0.05)。③DHEA对HepG2细胞HMGR活性抑制率为62%,对HT-29细胞HMGR活性抑制率为51%,而DHEAs则无明显作用。④100μmol·L-1DHEA抑制G6PD的效力为85%,而DHEAs的抑制效力仅为6%。⑤DHEA和DHEAs对细胞LDH的活性影响组间比较差异无显著性(P>0.05)。结论:DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用,能明显降低细胞的G6PD或HMGR活性,DHEAs则无明显作用。 展开更多

关键词 去氢表雄酮 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰A还原酶

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下调ACADM介导的脂毒性抑制雌激素受体阳性乳腺癌细胞的侵袭与转移

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作者 李嘉豪 冼瑞婷 李荣 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第6期1163-1173,共11页

目的探讨中链酰基辅酶A脱氢酶(ACADM)对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及潜在作用机制。方法采用KaplanMeier Plotter数据库分析ACADM在乳腺癌组织及正常组织中表达水平与预后关系。通过慢病毒转染构建人乳腺癌MCF-7细胞、T47D细胞ACAD... 目的探讨中链酰基辅酶A脱氢酶(ACADM)对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及潜在作用机制。方法采用KaplanMeier Plotter数据库分析ACADM在乳腺癌组织及正常组织中表达水平与预后关系。通过慢病毒转染构建人乳腺癌MCF-7细胞、T47D细胞ACADM低表达细胞株,并建立原位成瘤及裸鼠尾静脉转移模型。分为ACADM高表达及低表达MCF-7细胞、T47D细胞组,分别进行油红O染色实验、ROS检测、线粒体呼吸链功能检测,ROS清除剂、心磷脂氧化抑制剂Elamipretide、AKT激活剂SC79干预后功能检测,Transwell小室实验、Boyden体外侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western blotting检测相关信号通路蛋白表达水平。结果ACADM高表达组的OS要比低表达ACADM更短。ACADM下调表达的MCF-7细胞和T47D细胞中N calnexin、Vimentin、p-P13K和p-AKT蛋白表达下调,游离脂肪酸含量显著增加,活性氧含量也增加,线粒体呼吸链复合物Ⅲ和线粒体呼吸链复合物Ⅴ的活性下降,线粒体内心磷脂明显减少,细胞侵袭能力降低,分别使用ROS清除剂、心磷脂氧化抑制剂Elamipretide、特异性AKT激活剂SC79后可逆转细胞侵袭功能。结论下调ACADM可抑制HR阳性乳腺癌细胞迁移、侵袭能力,这一过程是因ACADM低表达导致的脂毒性,损伤线粒体功能,并通过ROS/PI3K/AKT通路实现的。 展开更多

关键词 乳腺癌 中链酰基辅酶a脱氢酶 侵袭 脂毒性 ROS PI3K-AKT

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卡前列甲酯合并酪氨酰肼对小鼠的抗早孕作用

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作者 郑卫红 段红 王乃功 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期135-139,共5页

目的观察卡前列甲酯（ＰＧ０５）合并酪氨酰肼对小鼠抗早孕作用。方法小鼠于妊娠第７～９天给药，观察妊娠率；用放射免疫法测定血清孕酮水平。结果小鼠口服９０ｍｇ／ｋｇ酪氨酰肼（３ｄ）能显著增强皮下注射０．２ｍｇ／ｋｇＰＧ０５... 目的观察卡前列甲酯（ＰＧ０５）合并酪氨酰肼对小鼠抗早孕作用。方法小鼠于妊娠第７～９天给药，观察妊娠率；用放射免疫法测定血清孕酮水平。结果小鼠口服９０ｍｇ／ｋｇ酪氨酰肼（３ｄ）能显著增强皮下注射０．２ｍｇ／ｋｇＰＧ０５（２ｄ）的抗早孕作用，并协同ＰＧ０５降低孕小鼠血清孕酮的水平。３０μｇ／ｍｌ酪氨酰肼对大鼠黄体细胞３β－ＨＳＤ的活性有明显的抑制作用。口服１５０ｍｇ／ｋｇ酪氨酰肼（３ｄ）对假孕大鼠子宫孕激素受体数目无显著影响。结论酪氨酰肼抑制体内孕酮的生成可能是其协同ＰＧ０５抗早孕作用的主要机制。 展开更多

关键词 酪氨酰肼 卡前列甲酯 抗早孕 3β-羟甾脱氢酶

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补肾活血化痰方改善雄激素致不孕大鼠高雄激素血症的机制探讨 被引量：9

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作者 俞瑾 张洁 +3 位作者 韩洁 雷玲 俞超芹 翟东霞 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期498-501,共4页

目的观察补肾活血化痰方(BHHR)对雄激素致不孕大鼠(ASR)高雄激素血症的治疗作用及治疗前后ASR卵巢内雄激素合成酶和代谢酶的表达量的变化,并探讨其可能的作用机制。方法 SD雌性大鼠于9日龄在颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮(1.25 mg)制... 目的观察补肾活血化痰方(BHHR)对雄激素致不孕大鼠(ASR)高雄激素血症的治疗作用及治疗前后ASR卵巢内雄激素合成酶和代谢酶的表达量的变化,并探讨其可能的作用机制。方法 SD雌性大鼠于9日龄在颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮(1.25 mg)制备ASR模型。将造模成功的ASR随机分为3组,分别为模型组(蒸馏水10 mL/kg灌胃)、二甲双胍治疗组(0.1 g/kg灌胃)和BHHR治疗组(10 mL/kg灌胃),每组各13只。另设正常对照组(n=10)。疗程(28 d)结束后观察大鼠的性周期恢复情况、体质量及卵巢质量/体质量比值。采用放射免疫分析法测定血清睾酮(T)水平;免疫组织化学定量方法检测卵巢3β-羟甾脱氢酶、细胞色素P450 17α-羟化酶/17,20-裂解酶和P450芳香化酶的表达量。结果 (1)性周期恢复:BHHR治疗组及二甲双胍治疗组中恢复性周期的大鼠数量多于模型组(P<0.01)。(2)体质量:模型组大鼠体质量高于正常对照组(P<0.01);BHHR治疗组与二甲双胍治疗组大鼠体质量均较模型组降低(P<0.01)。(3)卵巢质量/体质量比值:模型组大鼠卵巢质量/体质量比值高于正常对照组、BHHR治疗组及二甲双胍治疗组(P<0.01)。(4)血清T水平:模型组大鼠血清T值高于正常对照组、BHHR治疗组及二甲双胍治疗组(P<0.01)。(5)免疫组织化学结果:与模型组和正常对照组相比,BHHR治疗组大鼠P450arom表达升高(P<0.01);BHHR治疗组3β-羟甾脱氢酶、细胞色素P450 1 7α-羟化酶/17,20-裂解酶的表达与模型组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BHHR可以降低ASR模型大鼠血清T水平,其机制可能是通过上调雄激素代谢酶P450arom的表达而实现的。 展开更多

关键词 类固醇17α-羟化酶 细胞色素P450 3β-羟甾脱氢酶 补肾活血化痰方 雄激素增多症 芳香化酶 雄激素致不孕大鼠 正常对照组

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