17β-雌二醇-黄素腺嘌呤二核苷酸结合物的合成 被引量：1

1

作者 周乐 史远刚 +1 位作者 李键 王建辰 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第4期44-47,共4页

根据ＡＲＩＳ的需要，设计出标题物的分子结构模型。以黄素－５′－单磷酸、６－酮－１７β－雌二醇羧甲基肟和Ｎ６－（６－氨基己基）腺苷－５′－单磷酸为原料，经过３步反应合成出标题物。采用酶激活试验和免疫抑制试验确证了标题物... 根据ＡＲＩＳ的需要，设计出标题物的分子结构模型。以黄素－５′－单磷酸、６－酮－１７β－雌二醇羧甲基肟和Ｎ６－（６－氨基己基）腺苷－５′－单磷酸为原料，经过３步反应合成出标题物。采用酶激活试验和免疫抑制试验确证了标题物的结构。 展开更多

关键词 17Β-雌二醇 黄素腺嘌呤二核苷酸 ARIS PGLIA

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牛乳中黄嘌呤氧化酶研究综述 被引量：13

2

作者 方北曙 李翠莲 +1 位作者 黄中培 李艳红 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2006年第1期93-96,共4页

综述了牛乳中黄嘌呤氧化酶的各种性质及其应用。其性质主要包括:酶的构成、酶的分子量、酶的活性部位、酶的最适pH与最适温度、酶所催化的反应、反应类型、反应底物及产物等。另外,还介绍了一些酶反应动力学、酶活力的评价方法和酶的抑... 综述了牛乳中黄嘌呤氧化酶的各种性质及其应用。其性质主要包括:酶的构成、酶的分子量、酶的活性部位、酶的最适pH与最适温度、酶所催化的反应、反应类型、反应底物及产物等。另外,还介绍了一些酶反应动力学、酶活力的评价方法和酶的抑制剂等方面的问题。 展开更多

关键词 黄嘌呤氧化酶 黄素腺嘌呤二核苷酸 牛乳

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杂交犬单胺氧化酶B基因单核苷酸多态分布研究

3

作者 杨敏 刘宇欣 刘阳阳 《上海畜牧兽医通讯》 2012年第1期21-21,共1页

单胺氧化酶B（monoamine oxidase B，MAOB）是降解单胺类神经递质的重要酶类，其活性与神经活动和行为有密切联系。MAOB在体内的活性受遗传因素SNP位点多态性影响。犬MAOB基因第3外显子上sNPT199C导致第67位氨基酸由半胱氨酸转变为精氨... 单胺氧化酶B（monoamine oxidase B，MAOB）是降解单胺类神经递质的重要酶类，其活性与神经活动和行为有密切联系。MAOB在体内的活性受遗传因素SNP位点多态性影响。犬MAOB基因第3外显子上sNPT199C导致第67位氨基酸由半胱氨酸转变为精氨酸，影响MAOB的辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）的结合（结合部位位于62～103个氨基酸之间），从而导致对单胺类物质氧化脱氨效率改变。 展开更多

关键词 单胺氧化酶 OB基因 多态分布 单核苷酸 黄素腺嘌呤二核苷酸 单胺类神经递质 杂交 犬

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FAD核酸适配体生物传感器的制备及其葡萄糖检测的应用 被引量：1

4

作者 王艳 王悦 +4 位作者 张帅 赵宁 辛嘉英 孙立瑞 关桦楠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第12期179-186,共8页

以纳米金(gold nanoparticles,AuNPs)为主体,甲烷氧化菌素(methanobactin,Mb)和黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)为配体构建FAD核酸适配体传感器。利用AuNPs颗粒较强的吸附能力,将Mb包裹于纳米颗粒上,形成稳定的Mb-... 以纳米金(gold nanoparticles,AuNPs)为主体,甲烷氧化菌素(methanobactin,Mb)和黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)为配体构建FAD核酸适配体传感器。利用AuNPs颗粒较强的吸附能力,将Mb包裹于纳米颗粒上,形成稳定的Mb-AuNPs结构体。采用滴涂法将Mb-AuNPs结构体修饰于裸金电极表面,借助Mb结构中的—COOH与FAD牢固结合,将FAD引入Mb-AuNPs结构体上,提高对葡萄糖的识别能力,从而构建具备葡萄糖氧化酶活性的新型核酸适配体生物传感器。通过循环伏安法及时间-电流曲线法探讨其应用于葡萄糖检测的可行性。在温度25℃、pH 7.2时,葡萄糖浓度为10~200μmol/L,与该生物传感器的响应电流存在良好的线性关系,R^(2)为0.99791,检出限为4.22×10^(-8) mol/L(R_(SN)=3)。该核酸适配体传感器具有制备简单、价格低廉、易于操作、可快速检测等优点。 展开更多

关键词 核酸适配体生物传感器 葡萄糖氧化酶模拟酶 甲烷氧化菌素 黄素腺嘌呤二核苷酸 葡萄糖检测

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17β-雌二醇-ARIS构建及其标准曲线的质量评估

5

作者 周乐 史远刚 +1 位作者 李键 王建辰 《动物医学进展》 CSCD 2001年第2期77-79,共3页

以 1 7β-雌二醇 -黄素腺嘌呤二核苷酸结合物为标记物 ,以葡萄糖氧化酶为全酶 ,建立了 1 7β-雌二醇脱辅基酶再激活免疫测定系统 (1 7β- E2 - ARIS) ,完成了两条标准曲线的制作 ,通过 logit代换法对两条标准曲线进行了直线回归。两条... 以 1 7β-雌二醇 -黄素腺嘌呤二核苷酸结合物为标记物 ,以葡萄糖氧化酶为全酶 ,建立了 1 7β-雌二醇脱辅基酶再激活免疫测定系统 (1 7β- E2 - ARIS) ,完成了两条标准曲线的制作 ,通过 logit代换法对两条标准曲线进行了直线回归。两条标准曲线的拟合度 (r)分别为0 .996 7* * 和 0 .9991 * * ,灵敏度分别为 1 1 .5 4pg· m L- 1 (2 . 31 pg·孔 - 1 )和 1 4.88pg·m L- 1 (2 . 98pg·孔 - 1 ) ,平均变异系数(CV% )分别为 4.6 4%和 9.34% ,测定范围为 31 .2 5～ 1 0 0 0 pg·m L- 1 。 展开更多

关键词 17Β-雌二醇 酶免疫测定法 ARIS 生物活性物质 葡萄糖氧化酶 黄素腺嘌呤二核苷酸 标准曲线

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植物乳杆菌LAI的酵母表面展示 被引量：2

6

作者 刘佩 阮晖 +3 位作者 沈生荣 周倩 马鎏鏐 何国庆 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第9期140-146,共7页

为了研究亚油酸异构酶(LAI)的功能并构建基因工程菌株,克隆了植物乳杆菌lp15-2-1的lai基因并对其编码序列进行分析比对,随后将其融合酵母信号肽序列和α-凝集素锚定序列,构建酵母表面展示载体;使用电击法转化酿酒酵母K601,并在尿嘧啶缺... 为了研究亚油酸异构酶(LAI)的功能并构建基因工程菌株,克隆了植物乳杆菌lp15-2-1的lai基因并对其编码序列进行分析比对,随后将其融合酵母信号肽序列和α-凝集素锚定序列,构建酵母表面展示载体;使用电击法转化酿酒酵母K601,并在尿嘧啶缺失型培养基上筛选出转化子.氨基酸序列比对分析表明,LAI与肌球蛋白交叉反应抗原蛋白家族同源性极高,N端含有一个半保守的黄素腺嘌呤二核苷酸结合基序.对酵母工程菌株的研究表明,LAI成功地在酵母细胞表面展示,酶活在诱导培养48 h时达到最大,为40.5 U/mL.气相色谱检测发现,酵母工程菌株能够合成单一的c9t,11-共轭亚油酸异构体. 展开更多

关键词 植物乳杆菌 酿酒酵母 亚油酸异构酶 表面展示 黄素腺嘌呤二核苷酸

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乳糖诱导E.coli发酵生产FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶 被引量：1

7

作者 张玲 宋祖坤 +2 位作者 林荣 王男 杨海麟 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1879-1886,共8页

黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH,EC1.1.5.9),具有辅基结合紧密、催化效率高的优点,可替代目前诊断用葡萄糖氧化酶应用于血糖指标的临床生化检测。本文选取Burkholderia cepacia的葡萄糖脱氢酶基因(gdh)构建表达质... 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH,EC1.1.5.9),具有辅基结合紧密、催化效率高的优点,可替代目前诊断用葡萄糖氧化酶应用于血糖指标的临床生化检测。本文选取Burkholderia cepacia的葡萄糖脱氢酶基因(gdh)构建表达质粒pTrc99a-gdh,转化E. coli BL21(DE3)。异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导发酵,通过酶活测定及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得可溶性表达的FAD-GDH,分子量约为60000。利用乳糖替代IPTG作为诱导剂,摇瓶水平初步探索诱导条件,酶活达到994U/L。7.5L发酵罐放大培养该菌,采用梯度流加补料策略,分阶段温度控制,并采用不同的乳糖流加速率进行诱导。当采用0.3mL/min的乳糖流加速率时,酶活达22200U/L,菌体量达69.48g/L。经过镍柱层析,最终获得纯酶的比酶活104.5U/mg。为医用诊断原料用酶葡萄糖脱氢酶新酶种的工业化生产提供借鉴。 展开更多

关键词 黄素腺嘌呤二核苷酸 葡萄糖脱氢酶 乳糖诱导 发酵优化 层析分离

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启动子串联及改造提高FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶在Bacillus subtilis中的表达 被引量：1

8

作者 张玲 林荣 +2 位作者 宋祖坤 王男 杨海麟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期15-21,共7页

以黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase with FAD,FAD-GDH,EC 1.1.99.10),与辅基结合紧密,催化效率高,是临床检测血糖指标的新型诊断用酶。将Burkholderia cepacia的FAD-GD... 以黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(glucose dehydrogenase with FAD,FAD-GDH,EC 1.1.99.10),与辅基结合紧密,催化效率高,是临床检测血糖指标的新型诊断用酶。将Burkholderia cepacia的FAD-GDH基因(gdh)构建含单启动P_(HpaⅡ)的穿梭质粒p MA5-1,在蛋白酶缺陷型菌株Bacillus subtilis WB600中表达。为了获得该酶的高效表达,采用启动子串联及改造策略考察产酶情况。将4种启动子(P_(amyQ’),P_(43),P_(gsiB),P_(opuaa))分别与质粒上自带的启动子P_(HpaⅡ)串联,结果表明P_(HpaⅡ)-P_(amyQ’)串联组合获得的FAD-GDH胞内酶活最高,为2 497 U/L,是串联前单启动子的2.7倍。为了减少发酵过程中,葡萄糖和甘油对产酶的抑制作用,在串联组合的基础上删去P_(amyQ’)启动子中与碳代谢调控蛋白结合的cre位点,使胞内产酶水平提高至3 626 U/L,说明cre位点的去除能够减少碳代谢产物对启动子转录的抑制。本研究为新型诊断用酶FAD-GDH的菌种改造和工业化生产应用提供参考与借鉴。 展开更多

关键词 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD) 葡萄糖脱氢酶 枯草芽孢杆菌 串联启动子 cre位点

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SERS光谱研究银离子诱导葡萄糖氧化酶结构变化 被引量：1

9

作者 孙丹 齐国华 +1 位作者 徐抒平 徐蔚青 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第S1期265-266,共2页

重金属离子的毒性通常是指其与蛋白质(尤其是各种不同的具有生物催化活性的酶)或核酸的相互作用。本研究利用表面增强拉曼(SERS)光谱技术探讨银离子与葡萄糖氧化酶(GOX)的相互作用。黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)是GOX中对其SERS信号产生贡... 重金属离子的毒性通常是指其与蛋白质(尤其是各种不同的具有生物催化活性的酶)或核酸的相互作用。本研究利用表面增强拉曼(SERS)光谱技术探讨银离子与葡萄糖氧化酶(GOX)的相互作用。黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)是GOX中对其SERS信号产生贡献的部分,通过对比Ag+-GOX和Ag+-FAD混合物的SERS光谱,证实了Ag+是与GOX中的辅酶因子FAD发生了相互作用。进而通过比较GOX与Ag+-GOX的SERS光谱图,推断出Ag+在FAD中N-5和C-4上的羰基氧之间形成了配位键,这项研究为分析重金属离子与蛋白质的相互作用提供了可靠的依据,具有非常重要的生命科学意义。 展开更多

关键词 SERS 银离子 葡萄糖氧化酶 黄素腺嘌呤二核苷酸

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人类隐花色素蛋白(Homosapiens Cryptochrome,HsCRY)昆虫表达系统的建立及其与FAD结合状态的NMR研究

10

作者 王晓明 王嘉榕 +1 位作者 李燕 王玉娟 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期943-951,共9页

隐花色素(Cryptochrome,CRY)蛋白是一种对蓝光敏感的蛋白,它与辅因子黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)形成的自由基电子对在调节生物钟及感应磁场中发挥重要的作用,但目前对人类CRY(Homo sapiens CRY,HsCRY)蛋白的... 隐花色素(Cryptochrome,CRY)蛋白是一种对蓝光敏感的蛋白,它与辅因子黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)形成的自由基电子对在调节生物钟及感应磁场中发挥重要的作用,但目前对人类CRY(Homo sapiens CRY,HsCRY)蛋白的结构功能研究尚未见报道.以HeLa细胞RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增得到全长1 761bp的HsCRY1基因,把其克隆到HTA杆状病毒转座载体上,经菌落PCR和测序鉴定出阳性重组转座载体HTA-HsCRY1,转化含有病毒杆粒bacmid的DH10Bac感受态细胞,蓝白斑筛选和PCR检测获得重组质粒BacmidHsCRY1,转染昆虫Spodoptera frugiperda(sf9)细胞,产生的病毒感染昆虫细胞获得分子量为66kDa的目的蛋白HsCRY1.蛋白经Western Blot和SDS-PAGE鉴定,并利用镍亲和层析柱纯化,结果100mmol/L及200mmol/L咪唑均可洗脱下较纯的目标蛋白.同源蛋白的多序列比对表明HsCRY1的W320,W374以及W397可能组成传递电子的色氨酸三联体,对3个突变蛋白W320F,W374F以及W397F进行表达纯化.31P核磁共振检测蛋白与辅因子FAD的结合状态,发现与自由态FAD的磷谱相比,野生型HsCRY1及突变体3(W397F)结合的FAD的化学位移发生了改变,而HsCRY1突变体1(W320F)以及突变体2(W374F)不结合FAD.本实验成功构建了表达HsCRY1蛋白及其色氨酸突变蛋白的杆状病毒-昆虫表达系统,并通过核磁共振的方法发现色氨酸突变位点会对蛋白与FAD的结合产生影响. 展开更多

关键词 人类隐花色素(CRY)蛋白 突变蛋白 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD) 杆状病毒-昆虫表达系统

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短链伯醇氧化酶的研究进展

11

作者 王首丰 丛文杰 +4 位作者 曹昕莼 陆婷 王明轩 周化岚 张建国 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第15期296-304,共9页

真核甲基营养菌中的短链伯醇氧化酶(short-chain primary alcohol oxidase,SPAOX,EC 1.1.3.13)是一种依赖于黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD),能氧化短链伯醇生成相应醛的蛋白质。SPAOX位于真核生物的过氧化物酶体... 真核甲基营养菌中的短链伯醇氧化酶(short-chain primary alcohol oxidase,SPAOX,EC 1.1.3.13)是一种依赖于黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD),能氧化短链伯醇生成相应醛的蛋白质。SPAOX位于真核生物的过氧化物酶体中,是参与醇类代谢的重要酶。SPAOX的催化反应能循环使用FAD,且底物广泛,广泛应用于检测和生物转化生产。SPAOX的聚体结构,使得其在反应和储存过程中容易受到环境和化合物的影响,这限制了其应用。文章从SPAOX的来源、催化机制和结构、底物、稳定性等方面简述了SPAOX的基本特点,为SPAOX的应用和发展提供了基础,也从分子说展望了SPAOX的研究进展,为SPAOX的研究提供参考。 展开更多

关键词 短链伯醇氧化酶 黄素腺嘌呤二核苷酸 底物 稳定性

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CAZy-AA3家族酶及其在生物传感器中的应用研究进展 被引量：1

12

作者 张振宇 公维丽 +4 位作者 马耀宏 朱思荣 王丙莲 韩庆晔 陈彦儒 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1192-1207,共16页

碳水化合物活性酶数据库(CAZy)中位于“辅助活性”(auxiliary activities,AA) 3家族的酶属于葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶大家族。它们以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)作为辅酶,通过反应产物(H2O2或对苯二酚)协助其他AA家族酶发挥作用,或辅助... 碳水化合物活性酶数据库(CAZy)中位于“辅助活性”(auxiliary activities,AA) 3家族的酶属于葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶大家族。它们以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)作为辅酶,通过反应产物(H2O2或对苯二酚)协助其他AA家族酶发挥作用,或辅助糖苷水解酶降解木质纤维素。根据结构序列相似性,AA3家族酶进一步细分为4个亚家族,包括AA3_1 (纤维二糖脱氢酶)、AA3_2 (芳醇氧化酶、葡萄糖氧化还原酶)、AA3_3 (醇氧化酶)、AA3_4 (吡喃糖氧化还原酶)。AA3家族酶因其独特的结构、广泛的用途,近几十年来受到人们的广泛关注。本文系统综述了CAZy-AA3家族酶来源、分子结构及改造,对部分AA3家族酶在生物传感器中的最新研究进展进行了重点综述,并对未来研究方向进行了展望。 展开更多

关键词 AA3家族酶 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD) 亚家族 生物传感器

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FAD通过激活SCAD抑制tBHP诱导的大鼠H9C2心肌细胞凋亡

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作者 陈春雨 秦学 +3 位作者 马智超 徐庆萍 彭欢 周四桂 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2122-2129,共8页

目的:探讨黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)对叔丁基过氧化氢(tBHP)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法:体外培养大鼠H9C2心肌细胞,设立对照(Con)组、tBHP组、FAD组及tBHP+FAD组。采用FAD孵育H9C2细胞24 h,tBHP损伤6 h。CCK-8法检测细... 目的:探讨黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)对叔丁基过氧化氢(tBHP)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法:体外培养大鼠H9C2心肌细胞,设立对照(Con)组、tBHP组、FAD组及tBHP+FAD组。采用FAD孵育H9C2细胞24 h,tBHP损伤6 h。CCK-8法检测细胞活力;Western blot检测短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)蛋白表达;RT-qPCR检测SCAD的mRNA表达水平;检测SCAD酶活性,以及游离脂肪酸、ATP和活性氧(ROS)含量。结果:与Con组相比,tBHP组心肌细胞内SCAD的蛋白和mRNA表达减少,SCAD酶活性下降,ATP含量减少(P<0.01),但游离脂肪酸和ROS含量增加(P<0.01)。与tBHP组相比,tBHP+FAD组SCAD的蛋白和mRNA表达增加,SCAD酶活性增加,ATP含量增加(P<0.01),而游离脂肪酸和ROS含量减少(P<0.01)。结论:FAD可抑制tBHP诱导的大鼠H9C2心肌细胞凋亡;该作用可能通过促进心肌细胞SCAD表达、增强脂肪酸β氧化、减少氧化应激、改善能量代谢而实现。 展开更多

关键词 黄素腺嘌呤二核苷酸 短链酰基辅酶A脱氢酶 心肌细胞凋亡 脂肪酸β氧化 能量代谢

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仔鸡维生素B_2缺乏症的发病特点及治疗方法

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作者 叶希培 李振秋 吴文兴 《浙江畜牧兽医》 2008年第1期39-39,共1页

关键词 维生素B2缺乏症 发病特点 仔鸡 黄素腺嘌呤二核苷酸 治疗 黄素单核苷酸 碳水化合物 微生物合成

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