鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1

1

作者 袁晓琴 陈仕怡 +5 位作者 刘梦茜 李春燕 许丽惠 周五朵 吴异健 王全溪 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期151-156,共6页

为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG... 为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。 展开更多

关键词 鸡真核生物翻译起始因子2α 原核表达 多克隆抗体

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日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析 被引量：1

2

作者 卢晓昭 彭鸿娟 陈晓光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期296-299,共4页

目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸... 目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。 展开更多

关键词 日本血吸虫 表达序列标签 基因克隆 真核生物翻译起始因子2α

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红藻氨酸致痫大鼠海马神经元中真核生物起始因子2α酶切片段的产生 被引量：7

3

作者 赵瑞 刘建民 +4 位作者 赵文元 黎莉 霍克克 许奕 黄清海 《医学研究生学报》 CAS 2005年第4期318-320,i015,共4页

目的:研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)在红藻氨酸癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中,对其已知底物真核生物起始因子2(eIF2α)的作用。方法:制备红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型,记录模型发作行为及脑电图表现,以TUNEL法检测模型癫痫发作终止... 目的:研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)在红藻氨酸癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中,对其已知底物真核生物起始因子2(eIF2α)的作用。方法:制备红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型,记录模型发作行为及脑电图表现,以TUNEL法检测模型癫痫发作终止后12、24、48、72和96h海马神经元凋亡情况,同时以Westernblot法检测模型鼠海马eIF2α的表达变化及其与细胞凋亡之间的相关性。结果:在癫痫发作后12h出现凋亡神经元,随时间延长,海马神经元凋亡数不断增加,72h达高峰;发作后24h海马神经元出现了Caspase3酶切eIF2α产生的片段,并逐渐变浓,至72h。结论:癫痫模型大鼠海马中Caspase3酶切eIF2α与神经元凋亡的发生时间一致,提示在癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中eIF2α被Caspase3酶切。 展开更多

关键词 癫痫 海马 凋亡 真核生物起始因子2 半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶

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小干扰RNA抑制真核翻译起始因子5A2对MKN28胃癌细胞恶性生物学行为的影响 被引量：2

4

作者 孟庆彬 于健春 +5 位作者 康维明 马志强 周立 叶欣 曹战江 田树波 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期482-487,共6页

目的研究真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在胃癌细胞增殖及迁移侵袭调控中的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测EIF5A2在MKN28、HGC27细胞及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)内的表达,评估小干扰RNA(siRNA)... 目的研究真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在胃癌细胞增殖及迁移侵袭调控中的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测EIF5A2在MKN28、HGC27细胞及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)内的表达,评估小干扰RNA(siRNA)对EIF5A2的抑制效果。检测EIF5A2蛋白在2例人胃癌及匹配的非癌胃黏膜组织的表达。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭力,Western blot法检测CyclinD1、CyclinD3、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、E-cadherin、Vimintin、C-myc及转移相关蛋白1(MTA1)的表达水平。结果 EIF5A2在MKN28细胞及人胃癌组织内呈高表达。EIF5A2 siRNA#1可明显抑制MKN28细胞内EIF5A2 mRNA及蛋白的表达。抑制EIF5A2后可明显抑制MKN28细胞增殖(P均<0.01)、迁移(P<0.001)及侵袭能力(P<0.001)。抑制EIF5A2后,Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,CyclinD1、CyclinD3、MTA1及C-myc表达明显受抑制。结论siRNA下调EIF5A2可能通过抑制CyclinD1、CyclinD3抑制MKN28细胞增殖,并通过抑制MTA1、C-myc及上皮间质转化抑制MKN28细胞迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子5A2 胃癌 小干扰RNA 增殖 转移

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真核生物起始因子5 被引量：2

5

作者 万永奇 朱克毅 +1 位作者 王善治 谢维 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期3-5,共3页

真核生物起始因子 5 (eIF 5 )是一种重要的翻译起始因子 ,过去人们认为它只是GTP酶活化因子 ,催化eIF 2上的GTP水解 ,促进 80S起始复合体的形成 .近年来人们发现它不仅可以催化eIF 2上的GTP水解 ,还参与eIF 3功能的发挥 ,与eIF 2、eIF ... 真核生物起始因子 5 (eIF 5 )是一种重要的翻译起始因子 ,过去人们认为它只是GTP酶活化因子 ,催化eIF 2上的GTP水解 ,促进 80S起始复合体的形成 .近年来人们发现它不仅可以催化eIF 2上的GTP水解 ,还参与eIF 3功能的发挥 ,与eIF 2、eIF 3同时结合 ,促进起始因子复合体的形成 . 展开更多

关键词 真核生物起始因子 基因表达 结构 翻译

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雷公藤红素诱导未折叠蛋白反应信号通路中真核细胞翻译起始因子2α活化抑制多发性骨髓瘤细胞生长 被引量：5

6

作者 彭彬 宋瑜婷 +3 位作者 张雪 王莹 曹帆帆 张登海 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期963-969,共7页

目的研究雷公藤红素抑制多发性骨髓瘤细胞增殖与未折叠蛋白反应(UPR)的关系和分子机制,为多发性骨髓瘤的治疗提供新的药物靶点。方法 4种多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226、U266、SKO、KMS-11,经不同浓度雷公藤红素(增殖实验0.0~10.0μmol/... 目的研究雷公藤红素抑制多发性骨髓瘤细胞增殖与未折叠蛋白反应(UPR)的关系和分子机制,为多发性骨髓瘤的治疗提供新的药物靶点。方法 4种多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226、U266、SKO、KMS-11,经不同浓度雷公藤红素(增殖实验0.0~10.0μmol/L、凋亡实验0.0~4.0μmol/L、周期阻滞实验0.0~1.5μmol/L)处理不同时间(增殖实验1~3 d、凋亡实验1 d、周期阻滞实验1 d)后,检测细胞增殖、凋亡、周期阻滞情况;用蛋白质印迹法检测肌醇需求酶1(IRE1)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和活化转录因子6(ATF6)3条UPR信号通路中主要分子的表达,包括葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ATF6、PERK、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、IRE1、磷酸化IRE1(p-IRE1)。用慢病毒包被的含短发夹RNA(shRNA)载体对eIF2α表达进行干扰,观察雷公藤红素对干扰eIF2α表达后的RPMI 8226细胞UPR信号分子表达、凋亡和细胞周期的影响。结果雷公藤红素以剂量和时间依赖方式抑制4种多发性骨髓瘤细胞增殖、诱导凋亡、使细胞周期阻滞在G0/G1期,其中RPMI8226细胞对雷公藤红素最敏感。在RPMI8226细胞,雷公藤红素处理浓度在0.5~2.0μmol/L作用30 min^24 h时均能使UPR的PERK通路中p-eIF2α表达水平升高(P<0.05或P<0.01),其下游CHOP表达也相应增加(P<0.05或P<0.01),而对其他2条通路ATF6和IRE1影响不明显。用慢病毒干扰eIF2α表达后,雷公藤红素上调CHOP表达、诱导凋亡和周期阻滞的作用均减弱或消失。结论雷公藤红素能抑制多种多发性骨髓瘤细胞增殖,活化UPR的PERK信号通路中eIF2α分子可能是其作用机制之一。 展开更多

关键词 雷公藤红素 多发性骨髓瘤 未折叠蛋白反应 真核细胞翻译起始因子2α

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缺氧缺血性脑损伤新生大鼠磷酸化真核翻译起始因子2α和激活转录因子4表达的变化 被引量：2

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作者 潘红 王军 +2 位作者 朱冠南 曹修丽 李燕 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1573-1577,共5页

目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,... 目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,分别于缺氧缺血(HI)后6、12、24和72 h取其脑组织切片,采用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。假手术组不行缺氧缺血处理,采用同样方法检测其eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。结果:假手术组eIF2α(p)、ATF4蛋白少量表达,各时间点无明显变化(P>0.05);HIBD组6 h可以观察到较多eIF2α(p)、ATF4蛋白,12 h达到高峰,72 h明显减少,但仍高于假手术组。HIBD组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD组各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:eIF2α(p)、ATF4参与了新生大鼠HIBD病理生理过程。HIBD可能诱发了内质网应激反应,启动了PKR样内质网激酶(PERK)介导的未折叠蛋白应答(UPR)通路。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子2α 激活转录因子4 未折叠蛋白反应 缺氧缺血性脑损伤

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毛白杨翻译起始因子基因PtoeIF5A2的克隆及其表达特性分析 被引量：2

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作者 管阳 王宏芝 +4 位作者 张杰伟 陈亚娟 朱丹 丁莉萍 魏建华 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期63-69,共7页

真核翻译起始因子5A(eIF5A)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。以2个月的毛白杨‘BJHR01’幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,克隆得到PtoeIF5A2(GenBank登录号:HQ529480)基因全长cDNA序列。该基因包含483 bp开放读码框,编码160个... 真核翻译起始因子5A(eIF5A)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。以2个月的毛白杨‘BJHR01’幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,克隆得到PtoeIF5A2(GenBank登录号:HQ529480)基因全长cDNA序列。该基因包含483 bp开放读码框,编码160个氨基酸,预测蛋白分子质量为18 kDa,等电点为5.76。Real-Time qRT-PCR分析表明:PtoeIF5A2在6个月毛白杨幼苗叶片中的表达量最高,约为其在幼根中表达量的5倍。PtoeIF5A2响应了干旱、ABA(200μmol·L-1)、低温(4℃),尤其是NaCl(300 mmol·L-1)胁迫。在NaCl胁迫24 h后,PtoeIF5A2的表达量上调25倍,结合其启动子中含有6个病原体与高盐响应(GT-1 box)元件,推测该基因在响应高盐胁迫时起着重要作用。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子5A 毛白杨 盐胁迫 PtoeIF5A2

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真核翻译起始因子2α激酶在肾脏疾病中的作用研究进展 被引量：3

9

作者 郑笑慈 吴嵽 徐昕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1453-1461,共9页

肾脏疾病的防治一直是医学研究的重点。真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)是哺乳动物细胞中代谢应激反应的关键因子,可诱导整体蛋白质翻译抑制,并在不同的细胞代谢应激下控制细胞存活。eIF2α激酶在维持机体的正常生理功能方面及肿瘤、... 肾脏疾病的防治一直是医学研究的重点。真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)是哺乳动物细胞中代谢应激反应的关键因子,可诱导整体蛋白质翻译抑制,并在不同的细胞代谢应激下控制细胞存活。eIF2α激酶在维持机体的正常生理功能方面及肿瘤、免疫和代谢相关疾病等的发生发展过程中发挥重要作用。研究提示eIF2α激酶可能参与多种肾脏疾病的病理过程,因此,本文对eIF2α激酶家族及其在肾脏疾病中的可能作用等方面的研究进展进行归纳总结,以期为肾脏疾病的防治提供新的参考和理论依据。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子2α激酶 肾脏疾病 整合应激反应 内质网应激

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真核生物中mRNA的降解

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作者 邱平 李节 《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第4期10-12,共3页

真核生物中mRNA的稳定性是决定基因表达水平的一个重要因素。不同mRNA稳定程度差异很大,例如高等真核生物中有些mRNA半衰期为20分钟,而同一细胞中另一些mRNA的半衰期则为24hr以上;酵母细胞中最不稳定的mRNA 5分钟内就彻底降解,最稳定的... 真核生物中mRNA的稳定性是决定基因表达水平的一个重要因素。不同mRNA稳定程度差异很大,例如高等真核生物中有些mRNA半衰期为20分钟,而同一细胞中另一些mRNA的半衰期则为24hr以上;酵母细胞中最不稳定的mRNA 5分钟内就彻底降解,最稳定的半衰期为60分钟以上。mRNA的降解是受精密调控的。近年来有关这方面的研究中最惊人的发现是,在mRNA中发现了调节它自身稳定性的序列。 展开更多

关键词 真核生物 自身稳定性 POLYA 密码子 酵母细胞 基因表达 翻译起始因子 翻译因子 无义突变 结合蛋白

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Mnk2和eIF4E在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义 被引量：4

11

作者 曾博 冯沿芬 +9 位作者 黄启涛 陈景福 张昕 韩向前 张水深 邹健勇 苏春华 陈振光 罗红鹤 雷艺炎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期349-352,共4页

目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本9... 目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本98例及正常食管黏膜上皮组织20例,应用免疫组化SP法检测癌组织及正常食管黏膜组织中Mnk2和eIF4E的表达,并分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果:Mnk2在食管癌组织中的阳性率68.4%(67/98),eIF4E的阳性率为61.2%(60/98),Mnk2与eIF4E表达呈正相关(P<0.05),且Mnk2蛋白过表达与食管鳞癌的浸润深度、病理分期密切相关(P<0.05)。结论:Mnk2在食管癌组织中的过表达与浸润深度、TNM分期有关,同时与eIF4E在食管癌的表达相关,两者在食管癌的发展中有协同作用。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 MAPK相互作用激酶-2 真核细胞翻译起始因子4E

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猪EIF2S3基因克隆测序及其组织表达谱分析 被引量：1

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作者 龙熙 张廷焕 +5 位作者 赵久刚 蓝静 柴捷 郭宗义 王金勇 张亮 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2062-2069,共8页

【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列... 【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列,在线完成各种生物信息学分析后,利用实时荧光定量PCR分析猪EIF2S3基因的组织表达特征。【结果】猪EIF2S3基因mRNA全长1813 bp,其中蛋白质编码区(CDS)长1419 bp,5'UTR区、3'UTR区分别长14和380 bp,编码472个氨基酸。EIF2S3蛋白分子量51.1 kD,理论等电点(pI)8.62,包含58个带正电的氨基酸和52个带负电的氨基酸,其前体蛋白靠近N端区域有一个强疏水区;EIF2S3蛋白的空间结构由α-螺旋、β-折叠、延伸及无规则卷曲构成。EIF2S3蛋白氨基酸序列与狗和大白鼠的相似性最高(99.6%),其次是马、猫、牛、羊和人类(99.4%),与斑马鱼的相似性最低(96.6%)。EIF2S3基因在猪的心脏、胸腺和淋巴组织中表达量较高,在脾脏和肌肉中呈中度表达,在肾脏中的表达量较低,而在肝脏中基本不表达。【结论】猪EIF2S3基因全长1813 bp,在核酸和氨基酸水平上与其他物种的EIF2S3基因高度同源,尤其与狗和大白鼠的遗传距离最近;其在猪心脏、胸腺和淋巴组织中的表达量较高,在肝脏中基本不表达,据此推测EIF2S3参与合成的蛋白更多地参与心脏泵血和免疫相关功能,基本不发挥能量代谢功能。 展开更多

关键词 猪 真核翻译起始因子2(eIF2) EIF2S3基因 克隆 序列分析 组织表达谱

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siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制 被引量：1

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作者 王贺彬 汪雅芳 +3 位作者 沈妙言 李娜 赵丽晶 滕博 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期39-43,I0001,共6页

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E... 目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。 展开更多

关键词 小干扰RNA 真核细胞翻译起始因子4E 喉肿瘤 HEP-2细胞 细胞凋亡

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白质消融性白质脑病致病基因EIF2B的突变功能研究 被引量：1

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作者 冷雪荣 吴晔 姜玉武 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期125-128,共4页

白质消融性白质脑病(leukoencephalopathy with vanishing white matter,VWM)是儿童最常见的遗传性白质脑病之一,是目前人类遗传性疾病中首个被确定由于mRNA翻译启动异常所致疾病,是由编码真核细胞翻译启动因子2B(eukaryotic translatio... 白质消融性白质脑病(leukoencephalopathy with vanishing white matter,VWM)是儿童最常见的遗传性白质脑病之一,是目前人类遗传性疾病中首个被确定由于mRNA翻译启动异常所致疾病,是由编码真核细胞翻译启动因子2B(eukaryotic translation initiation factor 2B,eIF2B)的五个亚单位(eIF2Bα、β、γ、δ、ε)的基因(EIF2B1-5)任一突变所致。eIF2B是一种鸟嘌呤核苷酸交换因子,调控全部mRNA的翻译起始过程。eIF2B突变功能研究尚处于起步阶段。EIF2B突变可能通过不同的途径影响eIF2B的功能。例如,通过影响eIF2B复合体的形成或其与底物的结合从而破坏eIF2B的鸟苷酸转移因子(GEF)活性或引起细胞应激反应异常。EIF2B突变是否影响胶质前体细胞的分化是VWM发病机制的另一个关键问题。 展开更多

关键词 白质消融性白质脑病 真核翻译起始因子2B 基因突变

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前列地尔对暴发性肝衰竭大鼠eIF2α/ATF4/CHOP通路及肝功能的影响 被引量：2

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作者 李盼盼 符健 +1 位作者 陈伟 陈丽 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期55-62,共8页

目的探究前列地尔(PGE1)对暴发性肝衰竭(FHF)大鼠对肝功能的影响,并探讨其对真核翻译起始因子2α(eIF2α)/激活转录因子4(ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)通路的调控作用。方法SPF级SD雄性大鼠90只按随机数表法分为对照组、模型组、阳性对照... 目的探究前列地尔(PGE1)对暴发性肝衰竭(FHF)大鼠对肝功能的影响,并探讨其对真核翻译起始因子2α(eIF2α)/激活转录因子4(ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)通路的调控作用。方法SPF级SD雄性大鼠90只按随机数表法分为对照组、模型组、阳性对照组、低、中、高剂量PGE1组,除对照组外,其它组大鼠均采用腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)-大肠杆菌内毒素脂多糖(LPS)的方法建立FHF大鼠模型,对照组腹腔注射等量的生理盐水。造模6 h后,阳性对照组及低、中、高剂量PGE1组分别尾静脉注射促肝细胞生长素1.36 mg/kg,PGE112.5、25、37.5μg/kg,每天1次,连续给药3 d,对照组和模型组尾静脉注射等量的生理盐水。在造模72 h后处死大鼠,腹主动脉采血,检测血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平;解剖取肝组织用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肝组织病理学变化;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肝组织中eIF2α/ATF4/CHOP/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和蛋白、磷酸化-eIF2α(p-eIF2α)蛋白水平。结果与对照组相比,模型组肝细胞广泛变性并有局灶性坏死,中央静脉受损,血清ALT、AST、TBIL,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平均升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、低、中、高剂量PGE1组肝细胞损害有所降低,坏死细胞数量减少,血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平降低(P<0.05);且随着PGE1给药剂量的增加,低、中、高剂量PGE1组血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平依次降低(P<0.05),呈剂量依赖性;与阳性对照组相比,低、中剂量PGE1组血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平均升高(P<0.05),高剂量PGE1组血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论PGE1可能通过抑制eIF2α/ATF4/CHOP通路表达,减轻大鼠肝细胞凋亡,达到保护肝的作用,可能作为FHF潜在的治疗药物。 展开更多

关键词 前列地尔 暴发性肝功能衰竭 大鼠 真核翻译起始因子2α 激活转录因子4 C/EBP同源蛋白

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我国辣椒资源pvr2-eIF4E基因的多样性分析 被引量：3

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作者 曹亚从 顾晓振 +10 位作者 张正海 于海龙 冯锡刚 张南南 张伟丽 景雅欣 王海平 李锡香 Benoît MOURY 张宝玺 王立浩 《辣椒杂志》 2021年第1期1-9,共9页

真核翻译起始因子4E(eIF4E)基因pvr2与辣椒抗马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)相关。为全面了解我国辣椒资源中pvr2的多样性及抗性,本文以1863份辣椒种质资源为研究对象,对pvr2进行了基因编码序... 真核翻译起始因子4E(eIF4E)基因pvr2与辣椒抗马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus,TEV)相关。为全面了解我国辣椒资源中pvr2的多样性及抗性,本文以1863份辣椒种质资源为研究对象,对pvr2进行了基因编码序列和抗性评价鉴定,结果显示有10种pvr2等位基因,其中已报道9种,1种未见报道,将其命名为pvr2^(23);此10种pvr2等位基因中,有2种为已报道感病等位基因,7种为已报道抗病等位基因。含有已报道抗性pvr2等位基因的材料共有649份,其中6份含有已报道抗PVY_(0),1,2的等位基因,1份含有已报道抗TEV的等位基因,642份材料含有已报道抗PVY_(0)的等位基因;含有新发现等位基因pvr2^(23)的材料有1份,在第1外显子的第185位碱基发生突变,导致编码苯丙氨酸的密码子(UGG)突变为终止密码子(UAG),人工接种PVY-LYE84.2(PVY_(0))和PVY-SON41(PVY_(0,1,2))后感病。利用SSR基因分型数据对含有抗性等位基因的材料进行遗传关系分析,为了实施基于遗传多样性的育种策略,选择了53份材料作为PVY和TEV抗性辣椒核心种质,包括所有pvr2等位基因和广泛的遗传背景。本研究通过对pvr2的多样性分析,明确了对PVY和TEV具有抗性的辣椒材料,为辣椒资源在抗性育种中的利用提供了依据;发现了一种pvr2新的变异位点,对该基因的抗性机制研究具有重要意义。 展开更多

关键词 辣椒 真核翻译起始因子 pvr2 多样性

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CML细胞eIF4E和Trib2基因mRNA表达分析

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作者 黄莲芬 冯文莉 +1 位作者 万根平 罗红伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1358-1360,共3页

目的:为了探索慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)急变机理,寻求新的治疗靶标,我们对获得的9例CML病人骨髓标本以及CML急性红系变细胞株中K562细胞株中eIF4E基因和Trib2基因的表达水平进行初步检测,为进一步的研究奠... 目的:为了探索慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)急变机理,寻求新的治疗靶标,我们对获得的9例CML病人骨髓标本以及CML急性红系变细胞株中K562细胞株中eIF4E基因和Trib2基因的表达水平进行初步检测,为进一步的研究奠定基础。方法:分离骨髓单个核细胞,用Trizol裂解提取RNA,RT-PCR检测eIF4E基因和trib2基因mRNA的表达水平。结果:初步分析显示部分CML病人eIF4E基因mRNA表达水平很高,为CML疾病进展机制进一步研究奠定了基础。结论:部分CML病人骨髓标本中eIF4E和TRIB2基因mRNA表达水平较高,eIF4E和trib2有可能成为CML病人新的治疗靶点。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 真核细胞翻译起始因子4E Trib2

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结肠腺癌中eIF2c的表达及与细胞凋亡的关系 被引量：4

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作者 刘爱东 唐慧 +1 位作者 庞久玲 闫丰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期40-43,共4页

目的 :检测结肠腺癌组织中真核翻译起始因子2c(eukaryotic translation initiation factor 2c,eIF2c)的表达,分析其与细胞凋亡的关系。方法:以69例结肠腺癌患者为研究对象,留取肿瘤组织为观察组,留取正常结肠黏膜组织为对照组。应用免... 目的 :检测结肠腺癌组织中真核翻译起始因子2c(eukaryotic translation initiation factor 2c,eIF2c)的表达,分析其与细胞凋亡的关系。方法:以69例结肠腺癌患者为研究对象,留取肿瘤组织为观察组,留取正常结肠黏膜组织为对照组。应用免疫组化法检测e IF2c、半胱氨酸肽酶-3(Caspase-3)的表达,应用Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)的表达。构建过表达eIF2c结肠癌SW480细胞系,应用Western blot检测BAX的表达。结果:2组中eIF2c的阳性率差别有统计学意义(56.5%vs. 13.0%,χ^2=28.750,P=0.000)。eIF2c在不同肿瘤最大径(68.1%vs. 31.8%,χ^2=8.021,P=0.005)、浸润深度(81.2%vs. 35.1%%,χ^2=14.849,P=0.001)、有无坏死(48.0%vs. 78.9%%,χ^2=5.366,P=0.021)、淋巴结转移(83.3%vs.42.2%,χ^2=10.765,P=0.001)和癌栓(87.5%vs. 47.2%,χ^2=8.134,P=0.004)的分组中,差异有统计学意义。e IF2c与Caspase-3呈负相关性(r=-0.69,P=0.000),eIF2c与BAX呈负相关性(r=-0.66,P=0.000)。生存分析显示,eIF2c与生存时间相关(χ^2=14.00,P=0.000)。过表达e IF2c结肠癌细胞系中BAX表达下降。结论:e IF2c在结肠腺癌中高表达,与临床病理特征和预后相关,e IF2c异常表达与凋亡因子有关联。 展开更多

关键词 结肠腺癌 真核翻译起始因子2c 凋亡 预后

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EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

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作者 何嘉文 李友 +1 位作者 廖科棋 李胜男 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期831-839,共9页

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒 稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

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家蚕丝腺组织高丰度表达基因BmeIF5A的克隆和进化分析 被引量：1

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作者 刘文明 李春峰 +2 位作者 范晓东 黄科 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期12-19,共8页

从家蚕丝腺组织克隆得到2种mRNA形式的家蚕Bm eIF5A基因(GenBank登陆号:DQ202521;DQ201182),虽都具有相同的编码160个氨基酸的编码区,但却为不同长短的3′非编码区(3′UTR)。家蚕Bm eIF5A基因包含3个外显子和2个内含子。组织表达谱分析... 从家蚕丝腺组织克隆得到2种mRNA形式的家蚕Bm eIF5A基因(GenBank登陆号:DQ202521;DQ201182),虽都具有相同的编码160个氨基酸的编码区,但却为不同长短的3′非编码区(3′UTR)。家蚕Bm eIF5A基因包含3个外显子和2个内含子。组织表达谱分析发现该基因在丝腺组织里高丰度表达。分析推导的氨基酸序列揭示该基因产物具有eIF5A家族蛋白质共有的保守区。序列同源性分析表明eIF5A家族基因在所有的真核生物中都高度保守。进化生物学的分析显示家蚕的eIF5A基因与昆虫的同源性较高。 展开更多

关键词 真核生物翻译起始因子 翻译起始 丝腺 家蚕

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