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鸡新城疫融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 王忠田 王新卫 +1 位作者 陈溥言 申秀琴 《河南畜牧兽医》 2000年第8期6-8,共3页
根据NDVNL株的F基因序列,自行设计带有XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增含NDVF基因的PFL质粒,扩增结果与设计相符,大小为630bp。该片段覆盖F基因的2/3的抗原决定簇。对该片段两端酶切后,克隆到融合表达载... 根据NDVNL株的F基因序列,自行设计带有XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增含NDVF基因的PFL质粒,扩增结果与设计相符,大小为630bp。该片段覆盖F基因的2/3的抗原决定簇。对该片段两端酶切后,克隆到融合表达载体pThioHisB中,并转化到大肠杆菌Top10内,利用AMP抗性筛选阳性重组子,并用PCR及双酶切鉴定克隆成功,用IPTG化学诱导表达了F基因。经SDS-PAGE电泳分析,结果在分子量约为35KD处可见到表达的蛋白条带。这与根据核苷酸大小计算的蛋白及融合蛋白之和的大小相符。说明外源片段插入正确表达成功。用HRP标记的兔抗鸡抗体与该条带进行Western-Blot检测,该条带呈阳性反应。进一步证实表达正确。通过蛋白灰度扫描显示表达的融合蛋白占菌体总蛋白的20%。 展开更多
关键词 鸡新城疫融合蛋白基因 聚合酶链式反应 原核表达 SDS-PAGE WESTERN-BLOT
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鸡新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及进化分析
2
作者 栾慎顺 魏玉荣 +2 位作者 张敏 金苗苗 沈国顺 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期782-785,共4页
根据GeneBank中报道的NDV融合蛋白基因(F)序列,设计了一对特异性引物,用该引物对NDVLN—SN株进行了RT—PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM—T连接得到重组质粒pGEM—F,用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp,编码55... 根据GeneBank中报道的NDV融合蛋白基因(F)序列,设计了一对特异性引物,用该引物对NDVLN—SN株进行了RT—PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM—T连接得到重组质粒pGEM—F,用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp,编码553个氨基酸;将LN—SN毒株与GeneBank中已报道的NDV毒株进行比较,F基因核苷酸序列的同源性在83.4%~99.9%之间,推导的F蛋白氨基酸序列的同源性在88.4%-99.8%之间。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 克隆 序列分析
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鸡新城疫病毒B_(95)株融合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:2
3
作者 苗儒 赵林立 +3 位作者 金晓 于丽萍 哈斯阿古拉 陈燕军 《当代畜禽养殖业》 2000年第6期23-25,共3页
以鸡新城疫病毒(NDV)澳大利亚布里斯班分离株R_(95)的基因组RNA为模板,运用RT—PCR技术扩增其融合蛋白(F_0)基因的cDNA。将扩增的F基因克隆到质粒PUC_(19)中,转化入大肠杆菌JM109中,经AIX平板筛选,PCR等方法鉴定出F基因的阳性重组质粒,... 以鸡新城疫病毒(NDV)澳大利亚布里斯班分离株R_(95)的基因组RNA为模板,运用RT—PCR技术扩增其融合蛋白(F_0)基因的cDNA。将扩增的F基因克隆到质粒PUC_(19)中,转化入大肠杆菌JM109中,经AIX平板筛选,PCR等方法鉴定出F基因的阳性重组质粒,同时测定了F基因5’端709个核苷酸及3’端768个核苷酸的序列。对相应的氨基酸序列的研究表明,B_(95)株属弱毒株,含有F_0中保守的疏水功能区和可糖基化位点,B_(95)与强毒株F_(48)E_8株、Miyadera株和中等毒力的Beaudette C株的氨基本酸序列抽源性在90%左右。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 融合蛋白基因 基因克隆 基因序列
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新城疫病毒F_(48)E_(8)株融合蛋白基因的克隆 被引量:4
4
作者 吴艳涛 刘秀梵 +1 位作者 张如宽 刘伟忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期176-180,共5页
以提纯的我国标准NDVF48E8强毒株基因组RNA为模板、化学合成的融合蛋白(F)基因特异寡核苷酸为引物,反转录合成F基因cDNA,并采用同聚物加尾的方法克隆到细菌质粒pGEM3Zf(-)。经AIX平板筛选和酶切分析... 以提纯的我国标准NDVF48E8强毒株基因组RNA为模板、化学合成的融合蛋白(F)基因特异寡核苷酸为引物,反转录合成F基因cDNA,并采用同聚物加尾的方法克隆到细菌质粒pGEM3Zf(-)。经AIX平板筛选和酶切分析,并用F基因片段核酸探针作dot-blot检测,共获得插入片段长度在0.6~2.8kb之间的阳性克隆34个,其中插入片段大于1.5kb的阳性克隆8个。用多种限制性内切酶对阳性克隆pF7(1.8kb)作酶切分析,其结果与国外报道的几株F基因相符。 展开更多
关键词 新城疫 病毒 融合蛋白 基因克隆
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新城疫病毒鹌鹑分离株融合蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:4
5
作者 郭鑫 曹殿军 +4 位作者 闵平 闫丽辉 刘培欣 房海 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第6期430-435,共6页
本研究以一株从自然发生新城疫病死的鹌鹑中所分离到的新城疫病毒(QNDV/89)为研究对象,用反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)对QNDV/89株的F全基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119载体后,采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定其核苷... 本研究以一株从自然发生新城疫病死的鹌鹑中所分离到的新城疫病毒(QNDV/89)为研究对象,用反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)对QNDV/89株的F全基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119载体后,采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列,并推导出相应氨基酸序列。QNDV/89株F基因全长1662bp,单一的开放阅读框编码553个氨基酸的多肽,其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-R-F117,是NDV强毒株所特有的序列结构,这与其生物学特性及致病性实验结果是相一致的。序列分析结果表明,QNDV/89株与F48E9株的核苷酸同源率高达99.22%,氨基酸的同源率为98.37%;而与弱毒株LaSota的核苷酸同源率为88.93%,氨基酸的同源率为90.42%。本研究首次报道了流行于我国鹌鹑中的新城疫强毒融合蛋白基因序列,并与其它新城疫病毒进行了同源性比较,证明QNDV/89株核苷酸的变异引起了其蛋白质二级结构的部分改变。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鹌鹑 分离株 融合蛋白基因 克隆
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新城疫病毒F48E9株融合蛋白基因核苷酸序列分析 被引量:5
6
作者 曹殿军 苑纯秀 +3 位作者 郭鑫 闵平 孔宪刚 卢景良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期103-106,共4页
通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出新城疫病毒国内标准强毒株F48E9的融合蛋白基因的cD-NA。经双粘端定向克隆到pUC19的多克隆位点中,采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定cDNA片段的核苷酸序列... 通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出新城疫病毒国内标准强毒株F48E9的融合蛋白基因的cD-NA。经双粘端定向克隆到pUC19的多克隆位点中,采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定cDNA片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。F基因全长为1662个bp,单一的开放阅读框编码553个氨基酸的多肽。F蛋白的疏水构型有三个强疏水区;其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-116R-117F;F蛋白上共有12个Cys残基位点和五个潜在糖基化位点。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 核苷酸序列
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新城疫病毒中国株F_(48)E_9融合蛋白基因序列分析 被引量:1
7
作者 陈金顶 廖明 辛朝安 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期75-77,共3页
该研究经全自动序列测定 ,获得了新城疫病毒中国株F4 8E9融合蛋白 (F)基因 1 838bp的cDNA核苷酸序列 ,并推导出编码 5 49个残基的氨基酸序列 序列分析表明 ,该序列中有 6个潜在的糖基化位点 ,1 3个半胱氨酸残基 ,裂解位点区氨基酸序列... 该研究经全自动序列测定 ,获得了新城疫病毒中国株F4 8E9融合蛋白 (F)基因 1 838bp的cDNA核苷酸序列 ,并推导出编码 5 49个残基的氨基酸序列 序列分析表明 ,该序列中有 6个潜在的糖基化位点 ,1 3个半胱氨酸残基 ,裂解位点区氨基酸序列为Arg Arg Gln Arg Arg Phe 同源性分析表明 ,新城疫病毒中国株F4 8E9融合蛋白 (F)氨基酸序列与国外发表的其他新城疫病毒株F蛋白相比 ,同源性在 96 .1 7%~ 92 .1 6 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 序列分析
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新城疫病毒分离株融合蛋白基因的遗传变异分析
8
作者 魏玉荣 刘丽娜 +1 位作者 沈国顺 吴高峰 《畜禽业》 2006年第1期22-25,共4页
根据GenBank中报道的NDV融合蛋白基因(F)序列,设计了一对特异性引物,用该引物对所分离的LN-SN株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pGEM-F,用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp,编码553个氨基... 根据GenBank中报道的NDV融合蛋白基因(F)序列,设计了一对特异性引物,用该引物对所分离的LN-SN株进行了RT-PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM-T连接得到重组质粒pGEM-F,用于核苷酸序列测定。结果该基因ORF长1662bp,编码553个氨基酸;将LN-SN毒株与GenBank中已报道的NDV毒株进行比较,F基因核苷酸序列的同源性在83.1%~98.9%之间,推导的F蛋白氨基酸序列的同源性在88.1%~99.5%之间。 展开更多
关键词 新城疲病毒 融合蛋白基因 遗传变异
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基于cGAS-STING通路和突触融合蛋白17介导的自噬在脑缺血再灌注损伤中的作用研究进展
9
作者 杨航 高安邦 +2 位作者 倪莹 马跃 高名同 《中国卒中杂志》 北大核心 2025年第4期479-485,共7页
急性缺血性卒中后,脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)可进一步损伤患者的神经功能,影响其预后。自噬在CIRI的病理过程中是一把“双刃剑”,其不同的激活程度以及在CIRI的不同时期,可对脑组织产生保护或损伤... 急性缺血性卒中后,脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)可进一步损伤患者的神经功能,影响其预后。自噬在CIRI的病理过程中是一把“双刃剑”,其不同的激活程度以及在CIRI的不同时期,可对脑组织产生保护或损伤的相反作用。环鸟苷酸-腺苷酸合酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)-干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)通路是先天免疫中重要的效应通路,突触融合蛋白17(syntaxin 17,STX17)是可溶性N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性因子附着蛋白受体亚家族成员,两者在CIRI过程中对细胞自噬和线粒体自噬均具有重要的调节作用。本文对cGAS-STING通路和STX17在CIRI中调控自噬的机制及其相互关系进行综述,以期为CIRI的干预提供新的思路和依据。 展开更多
关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合酶-干扰素基因刺激因子通路 突触融合蛋白17 自噬 脑缺血再灌注损伤
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鸡新城疫病毒F蛋白的研究进展 被引量:6
10
作者 梁华 于立辉 《畜牧兽医科技信息》 2005年第5期77-78,共2页
关键词 鸡新城疫病毒 F蛋白 研究进展 负链RNA病毒 融合蛋白 神经氨酸酶 核衣壳蛋白 NDV 结构蛋白 副粘病毒 基质蛋白 免疫应答 聚合酶 基因 血凝素 磷酸化 蛋白 功能性 致病性 囊膜
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鸡新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断方法 被引量:16
11
作者 曹殿军 刘培欣 +1 位作者 闫丽辉 孙建宏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第6期415-417,共3页
本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩... 本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩增出 2 5 2bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段。只需一个RT_PCR反应 ,整个实验过程可在 5小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于 5 0 0pg的NDVRNA。为了增加方法的实用性 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 RT-PCR
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嗜水气单胞菌TPS-30株丝氨酸蛋白酶基因与溶血素基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:11
12
作者 潘晓艺 郝贵杰 +3 位作者 姚嘉赟 徐洋 尹文林 沈锦玉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期591-597,共7页
嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶和溶血素是该菌重要的致病因子与保护性抗原。致病性嗜水气单胞菌TPS-30株为江浙一带鱼类暴发病病原主要血清型O:9的代表株。研究利用PCR方法扩增嗜水气单胞菌TPS-30株的丝氨酸蛋白酶基因(Spe)和溶血素基因(Hl... 嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶和溶血素是该菌重要的致病因子与保护性抗原。致病性嗜水气单胞菌TPS-30株为江浙一带鱼类暴发病病原主要血清型O:9的代表株。研究利用PCR方法扩增嗜水气单胞菌TPS-30株的丝氨酸蛋白酶基因(Spe)和溶血素基因(Hly),将基因Spe和Hly通过柔性片段进行融合,并将融合片段插入pET32a的多克隆位点,构建成重组融合表达载体pET32a-Spe-Hly。将重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙醛-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得融合蛋白Spe-Hly。表达产物经SDS-PAGE检测,显示与预期大小约130kD相吻合的融合蛋白带。纯化融合蛋白并对鲫鱼进行免疫攻毒试验。结果表明,丝氨酸蛋白酶基因和溶血素基因融合表达载体构建成功,并成功获得了融合蛋白Spe-Hly,对鲫鱼的免疫保护率达81.4%。这为基因工程亚单位多价疫苗的开发提供基础。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 丝氨酸蛋白基因 溶血素基因 融合表达
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一株鸡新城疫强毒引起非典型发病的机理探讨 被引量:3
13
作者 徐辉 顾亚仙 +2 位作者 郑滔 梁华丽 华炯钢 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期194-196,共3页
对 1株从不表现鸡新城疫临床症状 ,只引起产蛋下降的鸡群中分离的新城疫野毒株 (PMV_CO2 )开展了研究。经测定 ,该毒株的颅内接种致病指数 (ICPI)为 1.85 ,静脉接种指数 (IVPI)为 2 .42 ,确定为强毒型。对该病毒的融合蛋白裂解基因的核... 对 1株从不表现鸡新城疫临床症状 ,只引起产蛋下降的鸡群中分离的新城疫野毒株 (PMV_CO2 )开展了研究。经测定 ,该毒株的颅内接种致病指数 (ICPI)为 1.85 ,静脉接种指数 (IVPI)为 2 .42 ,确定为强毒型。对该病毒的融合蛋白裂解基因的核酸序列进行了测定 ,其推测的F1/F2裂解位点附近的氨基酸序列为112 R_R_Q_K_R116,这一序列附合典型鸡新城疫强毒112 R/K_R_Q_K/R_R116,的普遍规律 ,确定该毒株不是超强毒株。为进一步了解该病毒对鸡的非典型发病的原因 ,我们通过人工发病方法对不同ND抗体水平的产蛋鸡进行了攻毒试验。结果该毒株致使ND抗体阴性或抗体水平极低的蛋鸡 (HI效价 1∶5 )发病致死并呈现典型的ND病症和病理变化 ,低抗体水平鸡 (HI效价 1∶10~ 1∶40 )呈现一过性产蛋停止 ,并在 2周后恢复 ,未表现出典型的ND症状 ,高水平抗体鸡 (HI效价 1∶80~ 1∶32 0 )则未见异常。从而推断抗体抑制为引起本病毒非典型ND发病的原因而非毒株变异引起。 展开更多
关键词 非典型鸡新城疫 融合蛋白裂解基因 发病机理 人工发病 蛋鸡
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嗜水气单胞菌外毒素和外膜蛋白双基因融合表达载体的构建和高效表达 被引量:8
14
作者 何鸣筱 叶巧真 +2 位作者 陈诚 谢俊锋 何建国 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期169-173,共5页
用基因融合方式 ,以嗜水气单胞菌基因组DNA为模板 ,设计引物通过聚合酶链式反应 (PCR)把去除部分毒性活性编码区的细胞毒肠毒素基因 (act)与去除信号肽的外膜蛋白基因 (OmpTS)连接一起 ,两基因之间插入一个link er(Gly4Ser) 3 经BamHⅠ... 用基因融合方式 ,以嗜水气单胞菌基因组DNA为模板 ,设计引物通过聚合酶链式反应 (PCR)把去除部分毒性活性编码区的细胞毒肠毒素基因 (act)与去除信号肽的外膜蛋白基因 (OmpTS)连接一起 ,两基因之间插入一个link er(Gly4Ser) 3 经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,得到 2 .1kb的双基因融合片段 ,克隆于表达质粒pQE 30中 ,构建了双基因重组表达载体pQE30 /act GS ompTS ,转化大肠杆菌M15 (pREP4 ) ,经IPTG诱导 ,表达出预期大小 (81.0kD)的融合蛋白Act GS OmpTS ,此蛋白占菌体总蛋白的 4 2 %。Westernblot检测结果显示 ,该蛋白与抗Act兔血清和抗OmpTS兔血清都呈阳性反应 ,表明融合蛋白保留了外毒素和外膜蛋白的反应原性 。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 细胞毒肠毒素基因 外膜蛋白基因 融合基因表达
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枯草杆菌DC-2纳豆激酶基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表达 被引量:21
15
作者 彭勇 黄庆 张义正 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期559-563,共5页
纳豆激酶是一种纤维蛋白溶解酶 ,有望开发成为新型的溶栓药物 .从中国豆豉中分离的具有较强纤溶活性的枯草杆菌DC 2中提取总DNA ,根据纳豆激酶 (NK)基因序列设计引物 ,用PCR法扩增NK基因 .序列分析表明 ,NK基因成熟肽编码区含有 82 5bp ... 纳豆激酶是一种纤维蛋白溶解酶 ,有望开发成为新型的溶栓药物 .从中国豆豉中分离的具有较强纤溶活性的枯草杆菌DC 2中提取总DNA ,根据纳豆激酶 (NK)基因序列设计引物 ,用PCR法扩增NK基因 .序列分析表明 ,NK基因成熟肽编码区含有 82 5bp ,编码 2 75个氨基酸残基 ,与文献报道的序列分别有 93 4 %和 94 5 %同源性 .将NK基因插入载体pGEX 4T1构建表达质粒pGEX NK ,转化大肠杆菌JM10 9后 ,经 1mmol LIPTG诱导 4h ,发现大量NK融合蛋白表达 ,并形成包涵体 .SDS PAGE分析表明 ,NK融合蛋白作为包涵体的分子量为 5 3kD .凝胶自动扫描结果显示 ,NK融合蛋白约占菌体可溶性蛋白的 2 6 % . 展开更多
关键词 枯草杆菌DC-2 纳豆激酶基因 融合蛋白 基因克隆 基因表达 大肠杆菌
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HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗诱导小鼠持久的细胞免疫应答 被引量:13
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作者 赵平 姜春鹏 +2 位作者 赵兰娟 温新宇 戚中田 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期576-582,共7页
构建编码HBV包膜 核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因... 构建编码HBV包膜 核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因DNA疫苗诱生免疫应答的强度 ,发现融合基因DNA疫苗诱生抗体的效率明显不及单基因DNA疫苗 ,但其能诱导更强、更持久的细胞免疫应答 ,表明HBV包膜 核心蛋白融合基因DNA疫苗对于治疗慢性乙型肝炎可能比单基因DNA疫苗更为有效 . 展开更多
关键词 HBV 包膜-核心蛋白融合基因 DNA疫苗 诱导 小鼠 细胞免疫应答
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犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析 被引量:11
17
作者 鞠会艳 乔军 +2 位作者 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期112-120,共9页
根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白... 根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白基因全长1989bp,预测编码662个氨基酸,F蛋白氨基酸序列中含有5个潜在的N-联糖基化位点。聚类分析提示,CDVLP株是一株与CDV强毒株亲源关系很近的毒株。用DNAstar软件对CDVLP株和Onderstepoort弱毒株N蛋白和F蛋白进行了疏水性及抗原表位预测分析。抗原表位差异提示CDVLP毒株N和F蛋白的免疫原性可能要优于Onderstepoort弱毒株。在分子水平上阐明了CDVLP株的N和F蛋白基因更适合作为构建基因疫苗和重组活载体疫苗的目的基因。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒小熊猫株 蛋白融合蛋白基因 克隆 序列分析
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组织因子膜外区融合蛋白基因的表达及产物的分离纯化与活性分析 被引量:7
18
作者 关明 吕元 +3 位作者 倪赞明 王云贵 戴金风 陈常庆 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期35-39,共5页
为构建表达组织因子 (TF)膜外区的融合载体 ,制备组织因子膜外区 ,抽提人胎盘组织的总RNA,通过 RT- PCR法扩增出 TF的 c DNA克隆至 p UC1 8并测定全序列 .然后以此为模板 ,再次PCR扩增出 TF膜外区 (soluble TF,s TF) c DNA,并将其插入... 为构建表达组织因子 (TF)膜外区的融合载体 ,制备组织因子膜外区 ,抽提人胎盘组织的总RNA,通过 RT- PCR法扩增出 TF的 c DNA克隆至 p UC1 8并测定全序列 .然后以此为模板 ,再次PCR扩增出 TF膜外区 (soluble TF,s TF) c DNA,并将其插入到谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体 p GEX4T- 1 ,构建了 tac启动子控制下的 GST- s TF融合蛋白的表达载体 .表达的融合蛋白经亲和层析、凝血酶切得到纯化的 s TF.表达产物经 ELISA验证 ,能特异性地与 TF抗体结合 .重新脂化后 ,该产物具有较大凝血活性 .以上说明采用融合蛋白表达系统可以大量制备组织因子膜外区 ,为研制国产重组凝血活酶试剂和研究 s TF的结构和功能创造条件 . 展开更多
关键词 组织因子 融合蛋白 基因表达 分离纯化 活性 跨膜糖蛋白
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人钠/二羧酸协同转运蛋白1基因融合表达及其抗体制备 被引量:12
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作者 何娅妮 陈香美 +4 位作者 于志恒 吕杨 师锁柱 朱晗玉 彭丽霞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期356-360,共5页
利用DNA重组技术 ,将编码人钠 羧酸协同转运蛋白 1(hNaDC1)抗原表位区 (W138 Q2 19)的cDNA克隆至融合表达载体pGEX 5X 1,构建重组质粒pGEX hNaDCL6 .在大肠杆菌BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,获得谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) hNaDC1重组融合蛋... 利用DNA重组技术 ,将编码人钠 羧酸协同转运蛋白 1(hNaDC1)抗原表位区 (W138 Q2 19)的cDNA克隆至融合表达载体pGEX 5X 1,构建重组质粒pGEX hNaDCL6 .在大肠杆菌BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,获得谷胱甘肽巯基转移酶 (GST) hNaDC1重组融合蛋白的表达 .以谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的GST hNaDC1.以此为免疫原制备的抗hNaDC1抗体可特异性识别人类和大鼠肾组织以及小肠组织中天然的钠 二羧酸协同转运蛋白 1.利用该抗体 ,首次证实了hNaDC1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘 ,与大鼠钠 二羧酸协同转运蛋白 1(SDCT1)分布一致 . 展开更多
关键词 人钠/二羧酸协同转运蛋白 1基因融合表达 抗体 制备
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牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达 被引量:4
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作者 曹世诺 于龙政 +3 位作者 薛书江 贾立军 周末 张守发 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期866-869,874,共5页
为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶... 为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得1151bp的双基因融合片段,克隆于表达质粒pGEX-4T-1中,构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出预期大小70.0ku的融合蛋白。Western blot检测结果显示,该蛋白与牛瑟氏泰勒虫抗血清呈阳性反应,表明融合蛋白具有反应原性,为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛瑟氏泰勒虫 P23表面蛋白基因 P33表面蛋白基因 融合基因表达
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