高效疏水相互作用色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的包涵体蛋白质 被引量：2

1

作者 贾佳 王骊丽 +1 位作者 高栋 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期535-540,共6页

Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体... Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4mol/L脲、1.8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱法 复性 纯化 重组人Flt3配体 包涵体

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采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文) 被引量：2

2

作者 王骊丽 王超展 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期36-41,共6页

为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基... 为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱 重组人干细胞因子 包涵体

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高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究 被引量：3

3

作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期218-221,共4页

首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性... 首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。 展开更多

关键词 高效疏水相互作用色谱 还原变性 溶菌酶 蛋白质 折叠 复性

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无机基质疏水作用色谱填料的研制及扩试 被引量：1

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作者 何秀娟 赵睿 +3 位作者 吴晓军 乔桂娟 王萍 刘国诠 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期225-227,共3页

以无机基质可控孔径玻璃（ＣＰＧ）和大孔硅胶为基质、聚乙二醇（ＰＥＧ１０００）为配基，利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱（ＨＩＣ）填料，并进行了１５０ｇ／批的扩大试验，用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明，... 以无机基质可控孔径玻璃（ＣＰＧ）和大孔硅胶为基质、聚乙二醇（ＰＥＧ１０００）为配基，利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱（ＨＩＣ）填料，并进行了１５０ｇ／批的扩大试验，用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明，此类填料对蛋白质的分离性能良好，对胰蛋白酶的活性回收率大于９５％。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 疏水作用色谱填料 蛋白质

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高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量：4

5

作者 刘威 翁凌霄 +1 位作者 高明霞 张祥民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期601-612,共12页

蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究... 蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。 展开更多

关键词 高效液相色谱 反相液相色谱 亲水相互作用色谱 疏水作用色谱 离子交换色谱 体积排阻色谱 蛋白质组学

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蛋白折叠液相色谱法中流动相对重组人干扰素-γ质量回收率的影响 被引量：2

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作者 吴丹 王超展 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期197-202,共6页

蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、... 蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高。用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、梯度洗脱模式和流速对rhIFN-γ质量回收率和活性的影响。分别以3.0mol/L(NH4)2SO4+0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)和0.05mol/L KH2PO4(pH7.0)为流动相A和B,采用35min非线性梯度洗脱时,所得rhIFN-γ的质量回收率最高。 展开更多

关键词 高效疏水作用色谱法 流动相组成 梯度洗脱模式 纯化 复性 质量回收率 重组人干扰素-γ

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超高效液相色谱-紫外检测法测定婴幼儿配方乳粉中的核苷酸含量 被引量：4

7

作者 王象欣 单艺 +3 位作者 魏雪冬 李文斌 鄂来明 姜毓君 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第4期254-262,共9页

采用磺酸甜菜碱型两性离子亲水相互作用色谱法,建立婴幼儿配方乳粉中5种核苷酸(5’-胞嘧啶核苷酸、5’-尿嘧啶核苷酸、5’-腺嘌呤核苷酸、5’-次黄嘌呤核苷酸、5’-鸟嘌呤核苷酸)的测定方法。使用二维固相萃取模式,弱阴离子交换和强阳... 采用磺酸甜菜碱型两性离子亲水相互作用色谱法,建立婴幼儿配方乳粉中5种核苷酸(5’-胞嘧啶核苷酸、5’-尿嘧啶核苷酸、5’-腺嘌呤核苷酸、5’-次黄嘌呤核苷酸、5’-鸟嘌呤核苷酸)的测定方法。使用二维固相萃取模式,弱阴离子交换和强阳离子交换,对样品中的核苷酸进行提取,紫外检测器采集数据;用0.001%甲酸-乙腈溶液和pH 5的10 mmol/L磷酸二氢钠溶液作为流动相,等度洗脱。5种核苷酸在其线性范围内线性关系良好,定量限在0.10~0.15 mg/100 g范围内,方法回收率均在95%以上,精密度在10%以内。该方法快速、灵敏、准确,适合各类婴幼儿配方乳粉中核苷酸的测定。 展开更多

关键词 核苷酸 磺酸甜菜碱型两性离子亲水相互作用色谱法 二维固相萃取 超高效液相色谱 婴幼儿配方乳粉

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单用与复方给药后隐丹参酮在家兔体内的药物动力学比较 被引量：8

8

作者 李晓莉 李晓蓉 +3 位作者 王丽娟 李宇航 徐艳霞 薛明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1102-1105,共4页

目的研究比较单用及丹芎方给药后隐丹参酮在家兔体内的药物动力学变化。方法采用梯度洗脱,反相高效液相色谱法测定家兔血浆中隐丹参酮的浓度,应用3P87软件对主要药动学参数进行计算,比较单用和复方给药后隐丹参酮在家兔体内的药动学变... 目的研究比较单用及丹芎方给药后隐丹参酮在家兔体内的药物动力学变化。方法采用梯度洗脱,反相高效液相色谱法测定家兔血浆中隐丹参酮的浓度,应用3P87软件对主要药动学参数进行计算,比较单用和复方给药后隐丹参酮在家兔体内的药动学变化。结果单剂量单用及复方静脉给药后,隐丹参酮在家兔体内的药物动力学过程均符合开放二房室模型,除总体消除率(Cls)和药-时曲线下面积(AUC)差异有统计学意义外,其它主要药动学参数如分布半衰期(T12α)与消除半衰期(T21β)差异均无统计学意义。结论与单独给药相比,经静脉单次给药后丹芎方中的其它化学成分能够减慢隐丹参酮在家兔体内的分布和消除速度。 展开更多

关键词 隐丹参酮 丹芎方 药物动力学 相互作用 高效液相色谱法

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人肝微粒体内红霉素等药物对西尼地平代谢的影响 被引量：1

9

作者 孟群 柳晓泉 王广基 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期524-527,共4页

目的用人肝微粒体研究部分临床常用的药物对西尼地平代谢的影响。方法采用HPLC方法测定西尼地平及其代谢物,色谱柱为HypersilC18柱(250mm×46mmID,5μm),流动相为乙腈甲醇001mol/L四丁基溴化铵溶液(55∶5∶40),柱温50℃,紫外检测波... 目的用人肝微粒体研究部分临床常用的药物对西尼地平代谢的影响。方法采用HPLC方法测定西尼地平及其代谢物,色谱柱为HypersilC18柱(250mm×46mmID,5μm),流动相为乙腈甲醇001mol/L四丁基溴化铵溶液(55∶5∶40),柱温50℃,紫外检测波长238nm。结果环孢素、红霉素和辛伐他丁可以较明显地抑制肝微粒体中西尼地平的代谢,而其他药物甲苯磺丁脲、格列齐特、格列喹酮、格列美脲、二甲双胍、卡托普利、法莫替丁对西尼地平的代谢没有明显的影响。结论研究提示环孢素、红霉素和辛伐他丁与西尼地平可能产生代谢相互作用。 展开更多

关键词 西尼地平 高效液相色谱法 肝微粒体 代谢 相互作用

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引言

10

作者 梁鑫淼 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期903-903,共1页

反相液相色谱（ RPLC）是当前色谱分离中应用最为广泛的色谱模式，依靠疏水固定相与溶质之间的疏水相互作用实现弱极性和中等极性化合物的高效分离。但是，RPLC对极性化合物（如寡糖、强极性寡肽、药物等）的保留很弱，甚至不保留。反... 反相液相色谱（ RPLC）是当前色谱分离中应用最为广泛的色谱模式，依靠疏水固定相与溶质之间的疏水相互作用实现弱极性和中等极性化合物的高效分离。但是，RPLC对极性化合物（如寡糖、强极性寡肽、药物等）的保留很弱，甚至不保留。反相离子对色谱（ RPIC）、离子交换色谱（ IEC）和正相色谱（ NPLC）等可以作为RPLC的补充，用于极性化合物的分离。然而，它们又各自存在一定的局限性，不能满足当前复杂样品的分离和表征需求。 展开更多

关键词 极性化合物 疏水相互作用 反相离子对色谱 反相液相色谱 色谱分离 RPLC 离子交换色谱 高效分离

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注射用头孢曲松钠-他唑巴坦钠人体药代动力学 被引量：7

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作者 郭阳 孙德助 +3 位作者 宋敏 杭太俊 杨林 文爱东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期354-358,共5页

采用交叉试验设计,研究12名健康受试者分别静脉滴注注射用头孢曲松钠-他唑巴坦钠(4∶1,1.0 g)或注射用头孢曲松钠(0.8 g)的药代动力学特征,确定头孢曲松钠-他唑巴坦钠复方用药是否有药代动力学相互作用。采用HPLC-UV法分别测定血浆中头... 采用交叉试验设计,研究12名健康受试者分别静脉滴注注射用头孢曲松钠-他唑巴坦钠(4∶1,1.0 g)或注射用头孢曲松钠(0.8 g)的药代动力学特征,确定头孢曲松钠-他唑巴坦钠复方用药是否有药代动力学相互作用。采用HPLC-UV法分别测定血浆中头孢曲松和他唑巴坦的浓度,DAS 2.0软件计算药代动力学参数。受试者分别给予复方制剂和单方制剂后,头孢曲松的主要药代动力学参数分别为:cmax(145.3±14.0)和(123.8±17.1)μg/mL,tmax(0.52±0.04)和(0.51±0.09)h,t1/2(9.02±1.04)和(8.93±0.72)h,MRT0-τ(9.34±0.50)和(9.58±0.42)h,AUC0-τ(979±90)和(984±83)μg.h/mL。给予复方制剂后他唑巴坦相应的药代动力学参数则分别为:(10.4±1.8)μg/mL,(0.53±0.04)h,(1.20±1.66)h,(0.94±0.20)h和(8.33±2.23)μg.h/mL。药代动力学参数统计分析表明,头孢曲松与他唑巴坦无明显的药代动力学相互作用。 展开更多

关键词 头孢曲松 他唑巴坦 药代动力学 药物相互作用 高效液相色谱法

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