高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变及其临床意义 被引量：4

1

作者 王倩 顾页 林洁 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第8期840-842,共3页

目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠... 目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠癌患者的手术标本,检测结直肠癌组织中K-ras基因第12、13位密码子的突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。结果 179例结直肠癌组织标本中,K-ras基因突变率为43.02%（77/179）;在≥60岁组结直肠癌患者中K-ras基因突变率明显高于〈60岁组（55.17%vs 33.70%,P〈0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄对K-ras基因突变有显著影响（OR=1.506,95%CI：1.028~2.011）。结论结直肠癌患者K-ras基因的突变与年龄相关,与性别、分化程度、病变部位及Dukes分期无关。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线分析法 结直肠癌 K-RAS基因 突变

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高分辨率熔解曲线分析法检测牦牛脂蛋白脂酶外显子7的多态性及与生长性状相关性分析 被引量：2

2

作者 扎西卓玛 郭宪 +10 位作者 阎萍 吴晓云 王宏博 刘建 杨安圈 张德虎 王照忠 王成林 完马单智 诺科加 杨应川 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期84-88,共5页

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一个分子质量为54kb的糖蛋白,其活性受营养因素、激素水平等调节,因牦牛生存环境的特殊性,试验拟从分子水平研究天峻县牦牛脂蛋白脂酶外显子7(LPL-Exon7)基因的多态性,并与生长发育性状进行关联分... 脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一个分子质量为54kb的糖蛋白,其活性受营养因素、激素水平等调节,因牦牛生存环境的特殊性,试验拟从分子水平研究天峻县牦牛脂蛋白脂酶外显子7(LPL-Exon7)基因的多态性,并与生长发育性状进行关联分析,从而为牦牛营养调控、品种资源保护和遗传育种提供科学理论依据。试验采集青海省海西州天峻县牦牛抗凝血106份,提取血样DNA,并利用PCR技术和高分辨率熔解曲线分析法对候选基因LPL-Exon7进行多态性分析,并于采血的同时对牦牛体重、体斜长、体高、胸围和管围等生长性状指标进行了相关性和遗传效应分析。结果表明,高原牦牛LPL-Exon7基因在高原牦牛和野血牦牛中都表现为多态,存在3种基因型,即AA、AB和BB,由1对等位基因A和B控制,A等位基因均为优势等位基因。经χ2检验,符合哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg)定律,处于平衡状态(P>0.05)。该位点在高原牦牛和野血牦牛群体中公、母牦牛的多态信息含量为0.3588和0.2103、0.3219和0.3343,高原牦牛母牛的多态信息含量PIC<0.25,处于低度多态,高原牦牛公牛和野血牦牛公、母牛的多态信息含量均在0.25<PIC<0.50,处于中度多态。LPL-Exon7位点多态对牦牛的体重、体高和管围存在显著影响(P<0.05),对牦牛的体斜长和胸围无显著影响(P>0.05)。因此,初步推断牦牛LPL-Exon7可以作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。 展开更多

关键词 高原牦牛 脂蛋白脂酶外显子7 PCR 高分辨率熔解曲线分析 多态性 相关性

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高分辨率熔解曲线分析(HRM)及其在植物种质资源鉴定中的应用 被引量：11

3

作者 朱岩芳 张炜 +3 位作者 胡晋 朱丽伟 关亚静 王建成 《种子》 CSCD 北大核心 2013年第10期57-60,共4页

饱和荧光染料、未标记探针与实时荧光PCR结合产生的高分辨率熔解曲线分析(HRM)是一种新的实时定量技术,在核苷酸差异检测速度、灵敏度和准确性上具有突出的优点,近几年来在突变检测、遗传作图和基因分型等研究中发展迅速。本文对高分辨... 饱和荧光染料、未标记探针与实时荧光PCR结合产生的高分辨率熔解曲线分析(HRM)是一种新的实时定量技术,在核苷酸差异检测速度、灵敏度和准确性上具有突出的优点,近几年来在突变检测、遗传作图和基因分型等研究中发展迅速。本文对高分辨率熔解曲线分析的原理、特点及其在植物种质资源鉴定中的应用进行了综述。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线分析 种质鉴定 SSR SNP

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高分辨率熔解曲线法在BIM基因2,903bp片段插入/缺失检测中的应用 被引量：2

4

作者 夏金晶 白浩 +4 位作者 熊丽纹 李蓉 颜波 邵敏华 韩宝惠 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期238-242,共5页

背景与目的 BIM基因编码的蛋白属于BCL2蛋白家族的成员,作为凋亡调控因子参与多种细胞活动。BIM基因上2,903bp的插入缺失片段与非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向用药的获得性耐药相关。建立并优化HRM方法有助于快速、准确地检测BIM基因2,903 b... 背景与目的 BIM基因编码的蛋白属于BCL2蛋白家族的成员,作为凋亡调控因子参与多种细胞活动。BIM基因上2,903bp的插入缺失片段与非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向用药的获得性耐药相关。建立并优化HRM方法有助于快速、准确地检测BIM基因2,903 bp片段的缺失,为临床工作提供指导性的意见。本研究建立与稳定了HRM的检测方法,并在30例肺癌样本以及30例正常对照样本中检测BIM基因缺失情况。方法设计、合成针对BIM基因片段缺失的引物,优化高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析方法。并选取部分样本通过普通PCR方法和直接测序法检测BIM基因缺失情况。野生型模板扩增产物其解链温度要高于缺失型产物的解链温度。野生型和缺失型产物的熔解曲线可见明显差异,相应的Tm值相差约2.5 oC。结果经过HRM基因突变分析方法,在30例肺癌样本中检测到1例为BIM基因纯合缺失型,7例为杂合缺失型,22例为野生型。在30例正常对照样本中检测,2例为杂合缺失型,28例为野生型。结论本研究建立的对BIM基因片段缺失的高分辨率熔解曲线法是一种,灵敏、准确、快速、高通量的方法。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线法 BIM基因 肺肿瘤

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检测AKT1基因E17K突变的高分辨率熔解曲线法(HRM) 被引量：1

5

作者 任浩洋 《科学技术与工程》 2010年第26期6405-6408,共4页

建立并优化HRM方法检测AKT1基因的E17K(49G>A)突变,并在85例非小细胞肺癌中应用该法检测AKT1基因的E17K突变。设计、合成针对AKT1基因的E17K突变的引物、探针,优化不对称PCR条件及高分辨率熔解曲线(HRM)基因突变分析方法。对85例非... 建立并优化HRM方法检测AKT1基因的E17K(49G>A)突变,并在85例非小细胞肺癌中应用该法检测AKT1基因的E17K突变。设计、合成针对AKT1基因的E17K突变的引物、探针,优化不对称PCR条件及高分辨率熔解曲线(HRM)基因突变分析方法。对85例非小细胞肺癌标本提取的基因组DNA,应用HRM基因突变分析方法和直接测序的方法检测了AKT1基因的E17K突变情况。经优化后,设计的引物在不对称PCR反应条件下可扩增出良好的条带。检测探针与野生型模板的扩增产物杂交后,其解链温度要高于与突变型产物杂交的解链温度。野生型和突变型的质粒模板所产生的熔解曲线可见显著差异,相应的Tm值相差约3.5℃。经HRM基因突变分析方法和直接测序法检测,在85例非小细胞肺癌标本检测到1例AKT1基因的E17K位点为杂合突变型,其余均为野生型。本研究建立的对AKT1E47K突变检测的HRM方法是一种灵敏、准确、快速的方法。另外,本研究仅在非小细胞肺癌患者中发现频率极低的AKT1E47K突变。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线法 AKT1基因 非小细胞肺癌

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应用高分辨率熔解曲线(HRM)开发大菱鲆(Scophthalmus maximus)SNP标记的研究 被引量：1

6

作者 刘庆明 李猛 +3 位作者 马爱军 王新安 黄智慧 郭建丽 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1141-1148,共8页

利用Vector NTI Advance 11软件分析了NCBI数据库中大菱鲆的12428条EST序列,筛出候选SNP位点;应用高分辨率熔解曲线(HRM)对大菱鲆不同性状群体进行基因分型。结果表明,522个重叠群中共筛出160多个候选SNP位点;设计56对引物用于实验,能... 利用Vector NTI Advance 11软件分析了NCBI数据库中大菱鲆的12428条EST序列,筛出候选SNP位点;应用高分辨率熔解曲线(HRM)对大菱鲆不同性状群体进行基因分型。结果表明,522个重叠群中共筛出160多个候选SNP位点;设计56对引物用于实验,能扩增出目的片段的引物有37条,合45个位点,成功率为66.1%;设计探针,能与候选SNP位点杂交的探针有13条,杂交率为28.9%。本实验中能成功进行基因分型的位点共有8个,占杂交位点的61.5%,其中有6个为碱基替换型位点,即G-A和C-T各占3个,2个为碱基颠换型位点,即T-G和A-T各占1个。 展开更多

关键词 单核苷酸多态性标记(SNP) 大菱鲆 高分辨率熔解曲线分析 EST序列

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应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变 被引量：7

7

作者 胡韦维 李进 +5 位作者 刘益 刘之岱 张娟 余朝文 邹琳 张鹏辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期830-835,共6页

目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者... 目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者外周血,采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变,以金标准Sanger测序来评价两种方法。同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片,采用MMCA法筛查G6PD基因突变。结果 429例疑似病例中,G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96.8%、特异性100%,与Sanger测序法一致性好(Kappa=0.917,P<0.05);但女性的灵敏度仅10%,特异性100%,与Sanger测序法一致性差(Kappa=0.127,P<0.05)。MMCA法诊断男性的灵敏度95.7%,特异性100%,与Sanger测序法一致性较好(Kappa=0.891,P<0.05);女性的灵敏度100%,特异性100%,与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05)。1 754例女性中杂合子占1.14%(20/1 754),G6PD酶活性均正常。结论与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较,MMCA法检测杂合子灵敏度更高,可用于G6PD缺乏症杂合子筛查,为一种简便、准确的诊断新方法。 展开更多

关键词 多色探针熔解曲线分析法 G6PD缺乏症 杂合子 基因诊断

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137例上海地区出生新生儿家系G6PD基因突变分析 被引量：13

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作者 许洪平 王燕敏 田国力 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期833-836,共4页

目的了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平。方法用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C10... 目的了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平。方法用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C1024T、C406T进行分析鉴定。结果 137例新生儿的家系中258例患者有213例检出突变类型,45例未检出突变类型。单个位点突变184例,G1376T,66例(30.9%);G1388A,64例(30%);A95G,25例(11.7%);C1024T,16例(7.5%);G392T,10例(4.7%);C406T,3例(1.4%)。复合位点突变共29例,G871A+C1311T+IVS11 93T→C,10例(4.7%);G1376T+IVS11 93T→C,7例(3.3%);C1311T+IVS11 93T→C,5例(2.3%);C406T+C1311T,2例(0.9%);G1388A+IVS11 93T→C,2例(0.9%);G1376T+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);A95G+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);C1024T+IVS11 93T→C,1例(0.5%)。结论随着外来人口的流入和通婚的增多,上海地区的G6PD基因突变也在发生变化,基因诊断是对该病分子水平的诊断,有利于杂合子的检测,以便做好产前筛查,同时对研究人口迁徙与遗传病分布之间的关系有一定意义。 展开更多

关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因突变 高分辨率熔解曲线分析技术

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基于HRM分析技术的家蚕眠性主基因M的精细定位 被引量：1

9

作者 刘晓晓 张洁葵 +6 位作者 张业顺 杨思思 夏定国 余俊杰 刘丽丽 吴阳春 张国政 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期656-662,共7页

就眠蜕皮是家蚕幼虫的一种重要生理现象,家蚕眠性性状主要受第6连锁群眠性主基因M控制。用四眠蚕品种大造(p50)与三眠蚕品种C3白构建BC1M群体p50×(C3白×p50),选择其中的598头三眠蚕个体作为定位群体,应用高分辨率熔解曲线(HRM... 就眠蜕皮是家蚕幼虫的一种重要生理现象,家蚕眠性性状主要受第6连锁群眠性主基因M控制。用四眠蚕品种大造(p50)与三眠蚕品种C3白构建BC1M群体p50×(C3白×p50),选择其中的598头三眠蚕个体作为定位群体,应用高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术进行家蚕基因组SSR标记基因型分析,对M基因进行精细定位。通过HRM筛选出8个与M基因连锁的多态性SSR标记,据此绘制出遗传总距离为2.4 cM的分子连锁图,标记S2853-2527和S2853-2843位于M基因两侧,遗传距离分别为0.2 cM和0.7 cM,M基因位于家蚕基因组nscaf2853:2527929～2843864之间,其间有4个预测基因都属于序列特异的DNA结合转录因子,推测眠性主基因的作用方式可能与DNA序列特异性转录调控有关。研究结果也验证了HRM技术应用于家蚕SSR标记基因型分析的可行性和可靠性。 展开更多

关键词 家蚕 眠性主基因 高分辨率熔解曲线分析 SSR标记 基因定位

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Toll样受体和白细胞介素-17单核苷酸多态性与口腔扁平苔藓易感性的相关性研究

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作者 李然 胡月 +3 位作者 张宁 高瑞芳 王翔宇 葛学军 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期45-51,共7页

目的探讨Toll样受体(TLR)和白细胞介素-17(IL-17)基因的遗传多态性及与口腔扁平苔藓(OLP)的相关性。方法选取病例组(OLP组)患者与对照组(未患OLP人群)外周血提取的DNA为研究对象,选取TLR与IL-17上的7个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别是T... 目的探讨Toll样受体(TLR)和白细胞介素-17(IL-17)基因的遗传多态性及与口腔扁平苔藓(OLP)的相关性。方法选取病例组(OLP组)患者与对照组(未患OLP人群)外周血提取的DNA为研究对象,选取TLR与IL-17上的7个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别是TLR3中的rs5743312、TLR2中的rs121917864和IL-17A中的5个SNP位点(rs4711998、rs3819024、rs8193036、rs3748067和rs17878530)。采用高分辨率熔解曲线分析法进行外周血细胞PCR产物基因多态性检测,并与DNA测序结果比对。统计分析SNP位点与OLP发生的相关性。结果rs5743312(TLR3)、rs3819024(IL-17A)与OLP的发生相关,并有统计学意义(P<0.05)。其余5个SNP位点未检测出与OLP相关。结论rs5743312(TLR3)和rs3819024(IL-17A)可能与OLP的易感性相关。 展开更多

关键词 单核苷酸多态性 高分辨率熔解曲线分析 口腔扁平苔藓 易感性

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微卫星不稳定性(MSI)检测技术专家共识 被引量：9

11

作者 中国医师协会医学技师委员会病理技术专家组 中国医学装备协会病理装备分会标准化部 +7 位作者 中国研究型医院学会病理学专业委员会病理技术学组 中国抗癌协会肿瘤病理专业委员会病理技术学组 杨军 徐志杰 朱卫东 张静 师艺 丁伟 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期228-235,共8页

微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是DNA复制过程中形成大量移码突变、引起的核苷酸重复单元数量改变的现象,多种肿瘤中均可见MSI,常见于结直肠癌、子宫内膜癌和胃癌。MSI检测对多种实体瘤患者有重要意义,包括林奇综合征... 微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是DNA复制过程中形成大量移码突变、引起的核苷酸重复单元数量改变的现象,多种肿瘤中均可见MSI,常见于结直肠癌、子宫内膜癌和胃癌。MSI检测对多种实体瘤患者有重要意义,包括林奇综合征筛查、指导5-FU类化疗药物的选择、预后分层和筛选免疫检查点抑制剂获益人群等。目前,MSI检测主要包括PCR+毛细管电泳法、PCR+高分辨率熔解曲线法和N GS法,其中以PCR+毛细管电泳法为金标准。 展开更多

关键词 微卫星 微卫星不稳定性 错配修复 毛细管电泳法 高分辨率熔解曲线法 NGS 专家共识

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胶质瘤IDH1基因突变检测及其临床应用策略 被引量：5

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作者 黎相照 薛小磊 +3 位作者 张中满 张颖芬 丁彦青 韩慧霞 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期778-781,共4页

目的 比较免疫组化EnVision法与高分辨率熔解曲线分析（high resolution melting curve analysis,HRM）法在测定异柠檬酸脱氢酶-1（IDH1）基因突变中的优缺点,为临床IDH1基因突变的检测提供策略。方法 运用免疫组化EnVision法和HRM法检... 目的 比较免疫组化EnVision法与高分辨率熔解曲线分析（high resolution melting curve analysis,HRM）法在测定异柠檬酸脱氢酶-1（IDH1）基因突变中的优缺点,为临床IDH1基因突变的检测提供策略。方法 运用免疫组化EnVision法和HRM法检测279例人胶质瘤及胶质神经元混合性肿瘤中IDH1基因突变。结果 免疫组化检测结果：279例中有81例发生IDH1基因突变;HRM检测结果：275例中77例存在IDH1基因突变,4例因为DNA质量不佳导致检测无结果。免疫组化EnVision法和HRM法检测IDH1基因突变具有较好的一致性,差异无显著性（P=0.375）。结论 IDH1基因突变主要发生在WHOⅡ~Ⅳ级的星形细胞、少突胶质细胞以及星形-少突胶质细胞瘤中;中国人IDH1基因突变率较国外低,原因有待进一步分析。IDH1-R132H抗体免疫组化检测IDH1基因突变的结果与HRM法检测结果具有高度的一致性,临床IDH1-R132检测首推免疫组化法,IDH1突变分子检测适用于免疫组化检测突变阴性的病例。 展开更多

关键词 脑肿瘤 胶质瘤 IDH1 免疫组织化学 高分辨率熔解曲线分析法

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HRM技术在瘦素基因启动子多态性与肝硬化发生相互关系研究中的应用 被引量：1

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作者 李善高 曹海军 +5 位作者 刘军 徐国萍 孙明洪 朱孝鸿 吕宾 孟立娜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1308-1313,共6页

目的:探讨PCR-高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术筛选和分析肝硬化患者瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变的可能性,同时研究突变基因型与肝硬化患者生理生化指标之间的关系。方法:采用PCR-HRM新型技术,同时对比传统方法 PCR-限制性片段... 目的:探讨PCR-高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术筛选和分析肝硬化患者瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变的可能性,同时研究突变基因型与肝硬化患者生理生化指标之间的关系。方法:采用PCR-HRM新型技术,同时对比传统方法 PCR-限制性片段长度多态性分析(RFLP),对对照组(n=100)和肝硬化组(n=100)瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变进行分析,同时检测生理生化指标。结果:(1)PCR-HRMA技术能够有效、高通量、准确地实现对瘦素基因启动子多态性的检测;(2)肝硬化患者瘦素基因启动子主要突变位点在C2549,而G2548位点没有发现突变;(3)肝硬化组中瘦素、游离瘦素指数(FLI)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于对照组,胰岛素敏感指数(ISI)及可溶性瘦素受体(sOB-R)低于对照组,除瘦素外,均有显著差异(P<0.05);FLI与FINS和HOMA-IR呈正相关(r=0.45、r=0.53,均P<0.05),与ISI呈负相关(r=-0.34,P<0.05);(4)肝硬化患者C2549杂合型占优势,肝硬化纯合型和杂合型突变个体中HOMI-IR、瘦素、sOB-R及FLI均高于野生型,除瘦素及sOB-R外均有显著差异(P<0.05)。结论:PCR-HRM能准确及高通量地实现对瘦素基因启动子多态性进行分析,并验证了A位点基因频率的增高可能和肝硬化发生有关;肝硬化患者存在高胰岛素血症及胰岛素抵抗,瘦素可能与肝硬化患者胰岛素抵抗发生有关。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线分析 瘦素 基因启动子 基因多态性 肝硬化

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应用HRM技术对CYP2C19*2和CYP2C19*3进行双重SNP分型 被引量：6

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作者 曹春鸽 孙海燕 +3 位作者 周芳芳 王诗铭 陈红岩 卢大儒 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期923-930,共8页

氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立... 氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立一种利用高分辨率熔解曲线分析(High-resolution melting curveanalysis,HRM)技术在闭合单管中同时对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行简便、准确分型的方法。本实验针对两个SNP位点分别设计特异性的HRM引物,并在两个位点引物的5′端分别加上富含AT和GC的序列,保证两个位点的扩增产物熔解峰无重叠。利用HRM技术,快速、灵敏地对64例随机DNA样本的CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行了基因分型,且HRM方法的分型结果与测序验证结果完全一致。因此,利用HRM技术可以实现在闭合单管中简便、准确地对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点同时进行基因分型。该方法有望应用于临床,指导氯吡格雷的个体化用药。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线分析 CYP2C19＊2 CYP2C19＊3 氯吡格雷 SNP分型

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基于HRM技术的大白菜InDel标记高效检测技术构建及其应用 被引量：4

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作者 张志刚 司立英 +4 位作者 赵智中 王荣花 王立华 李巧云 刘栓桃 《山东农业科学》 2018年第10期128-133,共6页

高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是基于核酸小片段之间的GC含量差异而导致双链核酸解链温度差异的一门检测技术,更多地被用于特定类型的单碱基突变筛查,很少见用于插入/缺失突变的检测。本研究从前期鉴定的可以... 高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是基于核酸小片段之间的GC含量差异而导致双链核酸解链温度差异的一门检测技术,更多地被用于特定类型的单碱基突变筛查,很少见用于插入/缺失突变的检测。本研究从前期鉴定的可以有效区分大白菜自交系He102与06-247的593对多态性InDel引物中筛选到271对特异性好、呈共显性分布的InDel引物,采用软件TMUtility_1.5预测了差异目标片段的熔解温度(Tm)值,发现63对标记的Tm差值满足HRM分型的灵敏度(差值绝对值≥0.2℃)要求,进一步采用梯度PCR技术对上述63对引物进行PCR扩增和HRM分型,从中鉴定出20对适宜进行HRM分型的InDel标记。构建了适宜LightScanner-96高分辨率熔解曲线分析仪分析的高效检测体系,并在大白菜种质基因型精准鉴定、杂交种纯度高效鉴定方面得到成功应用。本研究开发的适宜HRM分型的InDel标记还可以作为一种标记储备用于构建遗传连锁图谱和DNA指纹图谱、鉴定杂交种纯度和真实性、关联分析、分子标记辅助育种等。基于此构建的高通量检测方法也为其它动植物材料InDel标记的高通量检测和应用提供借鉴。 展开更多

关键词 大白菜 插入/缺失标记 高分辨率熔解曲线分析 高效检测技术

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