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高分辨率熔解曲线分析(HRM)及其在植物种质资源鉴定中的应用 被引量:11
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作者 朱岩芳 张炜 +3 位作者 胡晋 朱丽伟 关亚静 王建成 《种子》 CSCD 北大核心 2013年第10期57-60,共4页
饱和荧光染料、未标记探针与实时荧光PCR结合产生的高分辨率熔解曲线分析(HRM)是一种新的实时定量技术,在核苷酸差异检测速度、灵敏度和准确性上具有突出的优点,近几年来在突变检测、遗传作图和基因分型等研究中发展迅速。本文对高分辨... 饱和荧光染料、未标记探针与实时荧光PCR结合产生的高分辨率熔解曲线分析(HRM)是一种新的实时定量技术,在核苷酸差异检测速度、灵敏度和准确性上具有突出的优点,近几年来在突变检测、遗传作图和基因分型等研究中发展迅速。本文对高分辨率熔解曲线分析的原理、特点及其在植物种质资源鉴定中的应用进行了综述。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线分析 种质鉴定 SSR SNP
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高分辨率溶解曲线分析技术在大豆Ecotilling中的应用 被引量:8
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作者 焦丽 刘相国 +3 位作者 杨春明 王虎义 郝东云 王庆钰 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期843-846,850,共5页
将高分辨率溶解曲线(High Resolution Melting,HRM)技术运用在大豆Ecotilling中,对256份栽培大豆的大豆异黄酮合酶基因(IFS1)的外显子区域进行SNP筛查,并采用直接测序的方法对HRM检测结果进行验证。结果表明:模板均一化后的检测效果较... 将高分辨率溶解曲线(High Resolution Melting,HRM)技术运用在大豆Ecotilling中,对256份栽培大豆的大豆异黄酮合酶基因(IFS1)的外显子区域进行SNP筛查,并采用直接测序的方法对HRM检测结果进行验证。结果表明:模板均一化后的检测效果较未均一化的检测效果差异显著,野生型样本与待测样本按1∶1及1∶4比例混样溶解曲线阈值较高,其中1∶4混样适合高通量检测。HRM对IFS1基因外显子区域的检测结果与PCR产物测序的结果比对显示,对IFS1第5段外显子和第7段外显子检测的准确率分别达到91.2%和100%,表明该研究利用HRM技术建立的栽培大豆的Ecotilling技术体系是一种高灵敏度、高通量和低成本检测SNP的新方法。 展开更多
关键词 大豆 高分辨率溶解曲线分析技术 Ecotilling SNP
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高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变及其临床意义 被引量:4
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作者 王倩 顾页 林洁 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第8期840-842,共3页
目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠... 目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠癌患者的手术标本,检测结直肠癌组织中K-ras基因第12、13位密码子的突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。结果 179例结直肠癌组织标本中,K-ras基因突变率为43.02%(77/179);在≥60岁组结直肠癌患者中K-ras基因突变率明显高于〈60岁组(55.17%vs 33.70%,P〈0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄对K-ras基因突变有显著影响(OR=1.506,95%CI:1.028~2.011)。结论结直肠癌患者K-ras基因的突变与年龄相关,与性别、分化程度、病变部位及Dukes分期无关。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线分析 结直肠癌 K-RAS基因 突变
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高分辨率熔解曲线分析法检测牦牛脂蛋白脂酶外显子7的多态性及与生长性状相关性分析 被引量:2
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作者 扎西卓玛 郭宪 +10 位作者 阎萍 吴晓云 王宏博 刘建 杨安圈 张德虎 王照忠 王成林 完马单智 诺科加 杨应川 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期84-88,共5页
脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一个分子质量为54kb的糖蛋白,其活性受营养因素、激素水平等调节,因牦牛生存环境的特殊性,试验拟从分子水平研究天峻县牦牛脂蛋白脂酶外显子7(LPL-Exon7)基因的多态性,并与生长发育性状进行关联分... 脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一个分子质量为54kb的糖蛋白,其活性受营养因素、激素水平等调节,因牦牛生存环境的特殊性,试验拟从分子水平研究天峻县牦牛脂蛋白脂酶外显子7(LPL-Exon7)基因的多态性,并与生长发育性状进行关联分析,从而为牦牛营养调控、品种资源保护和遗传育种提供科学理论依据。试验采集青海省海西州天峻县牦牛抗凝血106份,提取血样DNA,并利用PCR技术和高分辨率熔解曲线分析法对候选基因LPL-Exon7进行多态性分析,并于采血的同时对牦牛体重、体斜长、体高、胸围和管围等生长性状指标进行了相关性和遗传效应分析。结果表明,高原牦牛LPL-Exon7基因在高原牦牛和野血牦牛中都表现为多态,存在3种基因型,即AA、AB和BB,由1对等位基因A和B控制,A等位基因均为优势等位基因。经χ2检验,符合哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg)定律,处于平衡状态(P>0.05)。该位点在高原牦牛和野血牦牛群体中公、母牦牛的多态信息含量为0.3588和0.2103、0.3219和0.3343,高原牦牛母牛的多态信息含量PIC<0.25,处于低度多态,高原牦牛公牛和野血牦牛公、母牛的多态信息含量均在0.25<PIC<0.50,处于中度多态。LPL-Exon7位点多态对牦牛的体重、体高和管围存在显著影响(P<0.05),对牦牛的体斜长和胸围无显著影响(P>0.05)。因此,初步推断牦牛LPL-Exon7可以作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。 展开更多
关键词 高原牦牛 脂蛋白脂酶外显子7 PCR 高分辨率熔解曲线分析 多态性 相关性
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高分辨率融解曲线技术检测冠心病患者IL-1β和IL-1Ra基因多态性 被引量:8
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作者 齐晓明 白锋 +3 位作者 尤崇革 郭心灵 石磊 呼志斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期816-820,共5页
目的为探讨白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-IRa)基因单核苷酸多态性(SNP)与冠心病(CHD)易感及其血清学指标的相关性,应用高分辨率融解曲线分析(HRM)技术建立IL-1β和IL-1Ra基因SNP的分子诊断方法。方法建... 目的为探讨白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-IRa)基因单核苷酸多态性(SNP)与冠心病(CHD)易感及其血清学指标的相关性,应用高分辨率融解曲线分析(HRM)技术建立IL-1β和IL-1Ra基因SNP的分子诊断方法。方法建立IL-1B-511C〉T、IL-1β-31C〉T、IL-1β+3954C〉T和IL-1RNT〉C这4个SNP位点的PCR-HRM检测方法,对260例CHD患者和274例健康对照进行比较研究,分析其与CHD易感及血清学指标的关系。结果上述4个SNP位点未发现与CHD易感有统计学差异,性别分层后发现男性IL-1β.31C〉T位点和女性IL-1β+3954C〉T位点的等位基因频率,在病例组和对照组间存在差异;单倍型分析发现IL-1β-511T/IL-1β-31C/IL-1β+3954C/IL-1RNT(TCCT)单倍型增加CHD发病风险(OR=1.217,95%CI:0.950—1.559,P=0.123),CTCC和玳T单倍型降低cHD发病风险(OR=0.612,95%CI:0.376~0.994,P=0.046;OR=0.365,95%CI:0.154~0.862,P=0.017);病例组血清学指标的相关性分析未发现其与SNP位点之间有关联性。结论应用HRM技术建立的4个SNP位点PCR—HRM检测方法经测序验证和临床标本检测均能正确基因分型,实现了快速基因分型的均相检测。IL-1β-31C〉T、IL-1β+3954C〉T位点和单倍型CTCC和TTCT与中国兰州地区汉族人群CHD易感性有关。 展开更多
关键词 高分辨率融解曲线分析技术 白细胞介素1Β 白细胞介素1受体拮抗剂 单核苷酸多态性 冠心病
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基于高分辨率熔解度曲线技术的金银花真伪鉴别方法研究
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作者 肖世昌 赵仲麟 +9 位作者 张富丽 兰璞 陈泽一 王雨 徐石勇 赵清寰 宋君 刘征辉 王永 兰青阔 《天津农业科学》 CAS 2020年第10期11-15,共5页
金银花为常用大宗中药材,具有清热解毒功效,有些不法商家将价格便宜近十倍的山银花当金银花销售和使用,严重危害市场。为鉴别中药材金银花真伪,本研究基于高分辨率熔解曲线技术(High Resolution Melting,HRM),建立了金银花真伪分子鉴定... 金银花为常用大宗中药材,具有清热解毒功效,有些不法商家将价格便宜近十倍的山银花当金银花销售和使用,严重危害市场。为鉴别中药材金银花真伪,本研究基于高分辨率熔解曲线技术(High Resolution Melting,HRM),建立了金银花真伪分子鉴定方法。提取样品总DNA,对金银花及其伪品山银花的叶绿体基因组标志性核酸位点进行PCR扩增及HRM分析,并与标准样品的曲线作对比,判断供试金银花真伪。标志性核酸位点分型包括G/G、A/A两种,其中G/G型为金银花真品,A/A型为金银花伪品。本研究建立的基于HRM技术的金银花真伪鉴别方法具有快速、高通量的优点,为中草药监管和应用提供技术支撑。 展开更多
关键词 金银花 真伪鉴别 高分辨率熔解曲线技术
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应用高分辨率熔解曲线(HRM)开发大菱鲆(Scophthalmus maximus)SNP标记的研究 被引量:1
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作者 刘庆明 李猛 +3 位作者 马爱军 王新安 黄智慧 郭建丽 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1141-1148,共8页
利用Vector NTI Advance 11软件分析了NCBI数据库中大菱鲆的12428条EST序列,筛出候选SNP位点;应用高分辨率熔解曲线(HRM)对大菱鲆不同性状群体进行基因分型。结果表明,522个重叠群中共筛出160多个候选SNP位点;设计56对引物用于实验,能... 利用Vector NTI Advance 11软件分析了NCBI数据库中大菱鲆的12428条EST序列,筛出候选SNP位点;应用高分辨率熔解曲线(HRM)对大菱鲆不同性状群体进行基因分型。结果表明,522个重叠群中共筛出160多个候选SNP位点;设计56对引物用于实验,能扩增出目的片段的引物有37条,合45个位点,成功率为66.1%;设计探针,能与候选SNP位点杂交的探针有13条,杂交率为28.9%。本实验中能成功进行基因分型的位点共有8个,占杂交位点的61.5%,其中有6个为碱基替换型位点,即G-A和C-T各占3个,2个为碱基颠换型位点,即T-G和A-T各占1个。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性标记(SNP) 大菱鲆 高分辨率熔解曲线分析 EST序列
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羊乳中牛乳成分的环介导等温扩增高分辨熔解检测 被引量:4
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作者 张文娟 澹台玮 +2 位作者 李敏康 蔡露阳 徐秦峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期223-227,共5页
为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标... 为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标产物的T m值在80℃,羊引物目标产物的T m值在83℃,由于在传统熔解曲线中峰型有交叉重叠,同时检测存在干扰,因此使用HRM技术,实现了2种不同动物源性成分的有效区分。该方法特异性好,不需要针对牛、羊源性成分单独进行检测,当体系中存在其中一种或两种都存在时都可将其快速检出,且对其他物种没有交叉反应及假阳性现象的发生,成功应用于市售羊乳及其制品的检测。 展开更多
关键词 羊乳 牛乳 环介导等温扩增(LAMP)技术 高分辨率熔解曲线(HRM) 双重检测
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基于HRM分析技术的家蚕眠性主基因M的精细定位 被引量:1
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作者 刘晓晓 张洁葵 +6 位作者 张业顺 杨思思 夏定国 余俊杰 刘丽丽 吴阳春 张国政 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期656-662,共7页
就眠蜕皮是家蚕幼虫的一种重要生理现象,家蚕眠性性状主要受第6连锁群眠性主基因M控制。用四眠蚕品种大造(p50)与三眠蚕品种C3白构建BC1M群体p50×(C3白×p50),选择其中的598头三眠蚕个体作为定位群体,应用高分辨率熔解曲线(HRM... 就眠蜕皮是家蚕幼虫的一种重要生理现象,家蚕眠性性状主要受第6连锁群眠性主基因M控制。用四眠蚕品种大造(p50)与三眠蚕品种C3白构建BC1M群体p50×(C3白×p50),选择其中的598头三眠蚕个体作为定位群体,应用高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术进行家蚕基因组SSR标记基因型分析,对M基因进行精细定位。通过HRM筛选出8个与M基因连锁的多态性SSR标记,据此绘制出遗传总距离为2.4 cM的分子连锁图,标记S2853-2527和S2853-2843位于M基因两侧,遗传距离分别为0.2 cM和0.7 cM,M基因位于家蚕基因组nscaf2853:2527929~2843864之间,其间有4个预测基因都属于序列特异的DNA结合转录因子,推测眠性主基因的作用方式可能与DNA序列特异性转录调控有关。研究结果也验证了HRM技术应用于家蚕SSR标记基因型分析的可行性和可靠性。 展开更多
关键词 家蚕 眠性主基因 高分辨率熔解曲线分析 SSR标记 基因定位
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FMCA技术分析大前庭水管综合征家系及产前诊断 被引量:2
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作者 高慧 刘晶晶 +3 位作者 沈姗姗 梁少明 危林耿 王沙燕 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第3期536-540,共5页
目的应用FMCA技术检测双侧前庭水管扩大家系SLC26A4基因,探讨前庭水管扩大与SLC26A4基因的关系及FMCA技术最优条件。方法收集EVA家系临床资料,基于荧光定量PCR熔解曲线平台,运用FMCA技术分析107例正常人,6个EVA家系19位成员的SLC26A4基... 目的应用FMCA技术检测双侧前庭水管扩大家系SLC26A4基因,探讨前庭水管扩大与SLC26A4基因的关系及FMCA技术最优条件。方法收集EVA家系临床资料,基于荧光定量PCR熔解曲线平台,运用FMCA技术分析107例正常人,6个EVA家系19位成员的SLC26A4基因IVS7-2A>G(919-2A>G),2168A>G及1229C>T突变位点。并用直接测序技术予以验证。结果 107例正常人中有2例SLC26A4基因杂合突变,突变率为1.87%;EVA家系中有3例SLC26A4基因纯合突变,3例SLC26A4基因复合杂合突变,10例SLC26A4基因杂合突变,3例无SLC26A4基因突变,SLC26A4基因突变率为84.21%。对家系a进行产前诊断,结果为IVS7-2A>G/1229C>T复合杂合突变。所有检测结果与测序结果一致,符合率为100%。结论 FMCA平台能快速检测SLC26A4基因的IVS7-2A>G,2168A>G与1229C>T突变,其操作简单,成本低。且经测序技术验证,结果准确。可作为诊断遗传性疾病及产前诊断的快速有效方法。 展开更多
关键词 耳聋 前庭水管扩大 SLC26A4基因 FMCA 探针熔解曲线分析技术
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137例上海地区出生新生儿家系G6PD基因突变分析 被引量:13
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作者 许洪平 王燕敏 田国力 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期833-836,共4页
目的了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平。方法用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C10... 目的了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平。方法用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C1024T、C406T进行分析鉴定。结果 137例新生儿的家系中258例患者有213例检出突变类型,45例未检出突变类型。单个位点突变184例,G1376T,66例(30.9%);G1388A,64例(30%);A95G,25例(11.7%);C1024T,16例(7.5%);G392T,10例(4.7%);C406T,3例(1.4%)。复合位点突变共29例,G871A+C1311T+IVS11 93T→C,10例(4.7%);G1376T+IVS11 93T→C,7例(3.3%);C1311T+IVS11 93T→C,5例(2.3%);C406T+C1311T,2例(0.9%);G1388A+IVS11 93T→C,2例(0.9%);G1376T+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);A95G+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);C1024T+IVS11 93T→C,1例(0.5%)。结论随着外来人口的流入和通婚的增多,上海地区的G6PD基因突变也在发生变化,基因诊断是对该病分子水平的诊断,有利于杂合子的检测,以便做好产前筛查,同时对研究人口迁徙与遗传病分布之间的关系有一定意义。 展开更多
关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因突变 高分辨率熔解曲线分析技术
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沃尔什函数薄层评价技术在乌南油田中的应用 被引量:7
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作者 杨思通 孙建孟 +1 位作者 李玉泉 张振城 《石油物探》 EI CSCD 2005年第2期150-153,共4页
青海乌南油田普遍发育厚度仅为几十cm的薄储层,这些薄储层和泥岩夹层形成了砂泥岩互层。乌南油田 老测井资料多为分辨率较低的常规测井资料,评价薄层困难,为此,提出了沃尔什函数薄层评价技术。介绍了沃 尔什函数在测井曲线薄层分析中应... 青海乌南油田普遍发育厚度仅为几十cm的薄储层,这些薄储层和泥岩夹层形成了砂泥岩互层。乌南油田 老测井资料多为分辨率较低的常规测井资料,评价薄层困难,为此,提出了沃尔什函数薄层评价技术。介绍了沃 尔什函数在测井曲线薄层分析中应用的理论依据,并利用沃尔什函数薄层评价技术对乌南油田7口井的测井资 料进行了处理,处理后的测井曲线与高分辨率测井中的微电位曲线有较好的匹配关系,分辨率得到了提高。最 终结果与实际地质情况较吻合。 展开更多
关键词 沃尔什函数 乌南油田 评价技术 应用 常规测井资料 测井曲线 薄层分析 匹配关系 高分辨率 地质情况 薄储层 砂泥岩
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HRM技术在瘦素基因启动子多态性与肝硬化发生相互关系研究中的应用 被引量:1
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作者 李善高 曹海军 +5 位作者 刘军 徐国萍 孙明洪 朱孝鸿 吕宾 孟立娜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1308-1313,共6页
目的:探讨PCR-高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术筛选和分析肝硬化患者瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变的可能性,同时研究突变基因型与肝硬化患者生理生化指标之间的关系。方法:采用PCR-HRM新型技术,同时对比传统方法 PCR-限制性片段... 目的:探讨PCR-高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术筛选和分析肝硬化患者瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变的可能性,同时研究突变基因型与肝硬化患者生理生化指标之间的关系。方法:采用PCR-HRM新型技术,同时对比传统方法 PCR-限制性片段长度多态性分析(RFLP),对对照组(n=100)和肝硬化组(n=100)瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变进行分析,同时检测生理生化指标。结果:(1)PCR-HRMA技术能够有效、高通量、准确地实现对瘦素基因启动子多态性的检测;(2)肝硬化患者瘦素基因启动子主要突变位点在C2549,而G2548位点没有发现突变;(3)肝硬化组中瘦素、游离瘦素指数(FLI)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于对照组,胰岛素敏感指数(ISI)及可溶性瘦素受体(sOB-R)低于对照组,除瘦素外,均有显著差异(P<0.05);FLI与FINS和HOMA-IR呈正相关(r=0.45、r=0.53,均P<0.05),与ISI呈负相关(r=-0.34,P<0.05);(4)肝硬化患者C2549杂合型占优势,肝硬化纯合型和杂合型突变个体中HOMI-IR、瘦素、sOB-R及FLI均高于野生型,除瘦素及sOB-R外均有显著差异(P<0.05)。结论:PCR-HRM能准确及高通量地实现对瘦素基因启动子多态性进行分析,并验证了A位点基因频率的增高可能和肝硬化发生有关;肝硬化患者存在高胰岛素血症及胰岛素抵抗,瘦素可能与肝硬化患者胰岛素抵抗发生有关。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线分析 瘦素 基因启动子 基因多态性 肝硬化
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应用HRM技术对CYP2C19*2和CYP2C19*3进行双重SNP分型 被引量:6
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作者 曹春鸽 孙海燕 +3 位作者 周芳芳 王诗铭 陈红岩 卢大儒 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期923-930,共8页
氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立... 氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立一种利用高分辨率熔解曲线分析(High-resolution melting curveanalysis,HRM)技术在闭合单管中同时对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行简便、准确分型的方法。本实验针对两个SNP位点分别设计特异性的HRM引物,并在两个位点引物的5′端分别加上富含AT和GC的序列,保证两个位点的扩增产物熔解峰无重叠。利用HRM技术,快速、灵敏地对64例随机DNA样本的CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行了基因分型,且HRM方法的分型结果与测序验证结果完全一致。因此,利用HRM技术可以实现在闭合单管中简便、准确地对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点同时进行基因分型。该方法有望应用于临床,指导氯吡格雷的个体化用药。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线分析 CYP2C19*2 CYP2C19*3 氯吡格雷 SNP分型
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基于HRM技术的大白菜InDel标记高效检测技术构建及其应用 被引量:4
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作者 张志刚 司立英 +4 位作者 赵智中 王荣花 王立华 李巧云 刘栓桃 《山东农业科学》 2018年第10期128-133,共6页
高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是基于核酸小片段之间的GC含量差异而导致双链核酸解链温度差异的一门检测技术,更多地被用于特定类型的单碱基突变筛查,很少见用于插入/缺失突变的检测。本研究从前期鉴定的可以... 高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)分析技术是基于核酸小片段之间的GC含量差异而导致双链核酸解链温度差异的一门检测技术,更多地被用于特定类型的单碱基突变筛查,很少见用于插入/缺失突变的检测。本研究从前期鉴定的可以有效区分大白菜自交系He102与06-247的593对多态性InDel引物中筛选到271对特异性好、呈共显性分布的InDel引物,采用软件TMUtility_1.5预测了差异目标片段的熔解温度(Tm)值,发现63对标记的Tm差值满足HRM分型的灵敏度(差值绝对值≥0.2℃)要求,进一步采用梯度PCR技术对上述63对引物进行PCR扩增和HRM分型,从中鉴定出20对适宜进行HRM分型的InDel标记。构建了适宜LightScanner-96高分辨率熔解曲线分析仪分析的高效检测体系,并在大白菜种质基因型精准鉴定、杂交种纯度高效鉴定方面得到成功应用。本研究开发的适宜HRM分型的InDel标记还可以作为一种标记储备用于构建遗传连锁图谱和DNA指纹图谱、鉴定杂交种纯度和真实性、关联分析、分子标记辅助育种等。基于此构建的高通量检测方法也为其它动植物材料InDel标记的高通量检测和应用提供借鉴。 展开更多
关键词 大白菜 插入/缺失标记 高分辨率熔解曲线分析 高效检测技术
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Toll样受体和白细胞介素-17单核苷酸多态性与口腔扁平苔藓易感性的相关性研究
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作者 李然 胡月 +3 位作者 张宁 高瑞芳 王翔宇 葛学军 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期45-51,共7页
目的探讨Toll样受体(TLR)和白细胞介素-17(IL-17)基因的遗传多态性及与口腔扁平苔藓(OLP)的相关性。方法选取病例组(OLP组)患者与对照组(未患OLP人群)外周血提取的DNA为研究对象,选取TLR与IL-17上的7个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别是T... 目的探讨Toll样受体(TLR)和白细胞介素-17(IL-17)基因的遗传多态性及与口腔扁平苔藓(OLP)的相关性。方法选取病例组(OLP组)患者与对照组(未患OLP人群)外周血提取的DNA为研究对象,选取TLR与IL-17上的7个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别是TLR3中的rs5743312、TLR2中的rs121917864和IL-17A中的5个SNP位点(rs4711998、rs3819024、rs8193036、rs3748067和rs17878530)。采用高分辨率熔解曲线分析法进行外周血细胞PCR产物基因多态性检测,并与DNA测序结果比对。统计分析SNP位点与OLP发生的相关性。结果rs5743312(TLR3)、rs3819024(IL-17A)与OLP的发生相关,并有统计学意义(P<0.05)。其余5个SNP位点未检测出与OLP相关。结论rs5743312(TLR3)和rs3819024(IL-17A)可能与OLP的易感性相关。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 高分辨率熔解曲线分析 口腔扁平苔藓 易感性
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维生素D受体基因BsmI及FokI位点单核苷酸多态性与维生素D缺乏性佝偻病的相关性 被引量:11
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作者 郭敏 李宇宁 +3 位作者 凌继祖 姜莉 马建英 张俊芳 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1047-1050,共4页
目的探讨东乡族婴幼儿维生素D受体(VDR)基因BsmI、Fokl位点单核苷酸多态性(SNP)与维生素D缺乏性佝偻病(佝偻病)的关系,研究东乡族婴幼儿该病的遗传易感性。方法选取东乡族佝偻病患儿69例和东乡族健康婴幼儿72例作为研究对象,应... 目的探讨东乡族婴幼儿维生素D受体(VDR)基因BsmI、Fokl位点单核苷酸多态性(SNP)与维生素D缺乏性佝偻病(佝偻病)的关系,研究东乡族婴幼儿该病的遗传易感性。方法选取东乡族佝偻病患儿69例和东乡族健康婴幼儿72例作为研究对象,应用高分辨率熔解曲线分析技术(HRM)、基因测序方法检测并比较两组中VDR基因Bsml、Fokl位点SNP各基因型分布频率及其与佝偻病的关系。结果东乡族婴幼)LVDR基因BsmI位点SNP的不同基因型在病例组和对照组中的分布差异无统计学意义(x^2=o.19,P〉0.05);VDR基因Fokl位点SNP的不同基因型在两组中的分布差异有统计学意义(x^2=13.72,P〈0.05),其中T/T基因型罹息佝偻病的危险度高(OR=3.63,95%(7/:1.92-6.86),C/C基因型罹患佝偻病的危险度低(OR=0.39,95%CI:0.21-0.72)。结论东乡族婴幼儿VDR基因FokI位点SNP与佝偻病发病相关,此位点T/T基因型是佝偻病的危险基因型,C/C基因型是佝偻病的保护基因型。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线技术 佝偻病 单核苷酸多态性 维生素D受体基因
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胶质瘤IDH1基因突变检测及其临床应用策略 被引量:5
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作者 黎相照 薛小磊 +3 位作者 张中满 张颖芬 丁彦青 韩慧霞 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期778-781,共4页
目的 比较免疫组化EnVision法与高分辨率熔解曲线分析(high resolution melting curve analysis,HRM)法在测定异柠檬酸脱氢酶-1(IDH1)基因突变中的优缺点,为临床IDH1基因突变的检测提供策略。方法 运用免疫组化EnVision法和HRM法检... 目的 比较免疫组化EnVision法与高分辨率熔解曲线分析(high resolution melting curve analysis,HRM)法在测定异柠檬酸脱氢酶-1(IDH1)基因突变中的优缺点,为临床IDH1基因突变的检测提供策略。方法 运用免疫组化EnVision法和HRM法检测279例人胶质瘤及胶质神经元混合性肿瘤中IDH1基因突变。结果 免疫组化检测结果:279例中有81例发生IDH1基因突变;HRM检测结果:275例中77例存在IDH1基因突变,4例因为DNA质量不佳导致检测无结果。免疫组化EnVision法和HRM法检测IDH1基因突变具有较好的一致性,差异无显著性(P=0.375)。结论 IDH1基因突变主要发生在WHOⅡ~Ⅳ级的星形细胞、少突胶质细胞以及星形-少突胶质细胞瘤中;中国人IDH1基因突变率较国外低,原因有待进一步分析。IDH1-R132H抗体免疫组化检测IDH1基因突变的结果与HRM法检测结果具有高度的一致性,临床IDH1-R132检测首推免疫组化法,IDH1突变分子检测适用于免疫组化检测突变阴性的病例。 展开更多
关键词 脑肿瘤 胶质瘤 IDH1 免疫组织化学 高分辨率熔解曲线分析
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几种定量线粒体DNA1555A>G异质性突变检测方法 被引量:1
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作者 高慧 沈姗姗 +7 位作者 刘晶晶 王琳凯 梁少明 张阮章 胡玉华 郭辉 林玉梅 王沙燕 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第5期686-691,共6页
目的利用Taq Man探针建立熔解曲线定量分析技术平台,比较Taq Man探针熔解曲线技术、变性高效液相色谱技术(DHPLC)及测序技术在检测线粒体DNA 1555A>G异质性突变负荷方面的差异。方法建立Taq Man探针熔解曲线技术,分析氨基糖苷类药物... 目的利用Taq Man探针建立熔解曲线定量分析技术平台,比较Taq Man探针熔解曲线技术、变性高效液相色谱技术(DHPLC)及测序技术在检测线粒体DNA 1555A>G异质性突变负荷方面的差异。方法建立Taq Man探针熔解曲线技术,分析氨基糖苷类药物性耳聋家系及正常人群的线粒体DNA 1555A>G异质性突变水平,并与前期实验中DHPLC技术及测序技术的检测结果进行对比分析。结果 Taq Man探针熔解曲线技术成功分析50例样本的线粒体DNA 1555A>G突变水平,相比于Sanger测序技术多发现1例异质性突变,但比DHPLC技术少发现3例异质性突变。结论本实验建立的Taq Man探针熔解曲线技术成功检出19%至86%范围内的线粒体DNA 1555A>G异质性突变水平,操作简单,成本低。 展开更多
关键词 线粒体DNA1555A〉G 耳聋 TAQMAN探针 熔解曲线 变性高效液相色谱分析技术
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