目的:研究重组人骨形态发生蛋白-9(recombinant human bone morphogenetic protein-9,rhBMP-9)对体外人牙周膜成纤维细胞成骨细胞分化的影响。方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞,成骨分化培养基(osteogenic differentiation medium,ODM)...目的:研究重组人骨形态发生蛋白-9(recombinant human bone morphogenetic protein-9,rhBMP-9)对体外人牙周膜成纤维细胞成骨细胞分化的影响。方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞,成骨分化培养基(osteogenic differentiation medium,ODM)诱导成骨分化,加入不同浓度rhBMP-9或p38和胞外信号调节激酶1/2(extracellular signalregulated kinase1/2,ERK1/2)抑制剂SB203580和U0126处理。采用LabAssayTM碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测试剂盒检测ALP活性。提取总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测RUNT相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、分化抑制因子1(inhibitor of differentiation factor 1,ID1)、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达情况。结果:rhBMP-9可以显著增加人牙周膜成纤维细胞ALP活性,且呈浓度和时间依赖性。成骨分化相关转录因子RUNX2和ID1以及晚期成骨标志物BSP和OPN的表达在rhBMP-9的刺激下也显著升高。与rhBMP-9单独刺激组比较,加入SB203580和U0126共刺激后可完全抑制rhBMP-9促人牙周膜成纤维细胞成骨分化的作用。结论:rhBMP-9能够显著诱导人牙周膜成纤维细胞向成骨细胞样细胞分化,且其可能机制为调节p38和ERK1/2通路。展开更多
文摘目的探索成牙骨质细胞OCCM-30中骨形态发生蛋白2(BMP2)对硬化蛋白(SOST)表达的调控机制。方法用2种质量浓度的BMP2(50、100 ng·mL^(-1))处理成牙骨质OCCM-30细胞3、5、7 d,相同体积的PBS液为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法检测SOST m RNA和蛋白的表达情况。将OCCM-30细胞分为5组:空白对照组、BMP2组、BMP2+dorsomorphin组、BMP2+SB202190组、BMP2+PD98059组,根据分组分别加入100 ng·mL^(-1)的BMP2和相应的试剂共培养,于3、5 d时检测SOST m RNA和蛋白的表达情况。结果 100 ng·mL^(-1)BMP2对SOST表达的上调作用强于50 ng·mL^(-1) BMP2,且有时间依赖性(P<0.05)。BMP2+dorsomorphin组、BMP2+SB202190组、BMP2+PD98059组的SOST m RNA水平和蛋白质水平均降低,其中BMP2+dorsomorphin组降低最明显(P<0.05)。结论成牙骨质细胞中BMP2主要是通过Smad信号通路介导上调SOST的表达。
