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骨保护素(Opg)基因敲除小鼠发生高转换型骨质疏松和动脉钙化(英文) 被引量:26
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作者 许勇 杨桦 +7 位作者 乔建瓯 李西华 严兰珍 王龙 徐国江 费俭 傅继粱 王铸钢 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期260-266,共7页
骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素(OPG)可能是联系两者的分子之一.构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉.通过胚胎干细胞(ES)基因打靶获得了正... 骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素(OPG)可能是联系两者的分子之一.构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉.通过胚胎干细胞(ES)基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆,ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠,交配传代获得杂合子和纯合子小鼠.RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,纯合子小鼠没有Opg基因的表达.纯合子小鼠骨量丢失明显,骨生物力学指标明显下降,发生严重的骨质疏松,此外,还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化.小鼠破骨功能亢进,与此同时,成熟成骨细胞数量增加,矿化功能强于野生型.Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失,而血清中水平没有变化,这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因.对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究,将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制,为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持. 展开更多
关键词 保护(opg)基因敲除小 质疏松 动脉钙化 转换 钙磷代谢
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骨保护素基因敲除小鼠发生骨质疏松症的特征 被引量:9
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作者 陈子贤 盛哲津 +2 位作者 邵云潮 施德源 陈统一 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期373-377,共5页
目的研究我国自行开发的骨保护素(OPG)基因敲除小鼠的骨质疏松基本数据及其所属的骨质疏松类型,为其进一步推广应用提供基线数据。方法将野生型OPG(OPG-WT)小鼠,7和13周龄的骨保护素基因敲除小鼠(OPG-/-)分成3组(每组6只),分别检测其血... 目的研究我国自行开发的骨保护素(OPG)基因敲除小鼠的骨质疏松基本数据及其所属的骨质疏松类型,为其进一步推广应用提供基线数据。方法将野生型OPG(OPG-WT)小鼠,7和13周龄的骨保护素基因敲除小鼠(OPG-/-)分成3组(每组6只),分别检测其血清碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)及骨钙素(OC)水平,并行骨密度测定、X线摄片、扫描电镜检查和生物力学测试,将所得数据进行统计学分析。结果OPG-/-小鼠的骨密度、股骨刚度和最大折断负荷均显著降低(P<0.01),血清ALP和ACP明显升高(P< 0.01),OC在早期与对照组无明显差异。OPG-/-小鼠在X线平片上表现为骨量减少,骨小梁稀疏或塌陷,骨皮质变薄。扫描电镜观察到OPG-/-小鼠骨小梁变细、变尖,骨小梁间隙增大,部分骨小梁塌陷。结论OPG-/-小鼠骨吸收活性增强伴继发性成骨活性提高,符合高转换型骨质疏松的特征,具有明显的优点,为研究OPG/OPGL/RANK体系提供了新的平台,有可能成为一种新的模型用于高转换型骨质疏松症的实验研究。 展开更多
关键词 保护 质疏松 基因敲除 动物模型
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OPG基因敲除小鼠骨质疏松情况的研究 被引量:29
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作者 程少丹 王拥军 +4 位作者 唐德志 周泉 李晨光 周重建 施杞 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2008年第1期16-19,共4页
目的研究护骨素(Osteoprotegerin,OPG)基因敲除纯合子小鼠(homozygous OPG knockout mice,OPG-/-mice)骨质疏松发生情况,为OPG-/-小鼠骨质疏松模型的应用提供依据。方法非频密繁殖法获得OPG-/-小鼠,PCR技术进行OPG基因表型鉴定。16周龄O... 目的研究护骨素(Osteoprotegerin,OPG)基因敲除纯合子小鼠(homozygous OPG knockout mice,OPG-/-mice)骨质疏松发生情况,为OPG-/-小鼠骨质疏松模型的应用提供依据。方法非频密繁殖法获得OPG-/-小鼠,PCR技术进行OPG基因表型鉴定。16周龄OPG-/-子代小鼠和16周OPG野生型小鼠各10只,采用双能X线骨密度测量仪(DEXA)测定全身骨密度(Bone mineral density,BMD)、万能材料试验机测定股骨生物力学强度;骨组织形态计量学分析L5椎体骨小梁结构;实时荧光定量PCR检测L1椎体骨组织中BMP-2、Runx2 mRNA表达水平。结果OPG-/-子代小鼠和亲代纯合子小鼠表现出相同的OPG基因缺失表型。与同龄野生型小鼠比较,16周龄OPG-/-小鼠全身骨密度、股骨承受最大载荷、股骨结构刚度、腰椎椎体骨小梁数目、腰椎椎体骨小梁厚度显著下降(t=5.740,6.069,6.859,6.891,3.558,P<0.01);股骨承受破裂载荷、腰椎椎体骨小梁体积分数下降(t=3.157,3.329,P<0.05);股骨承受载荷后的最大位移、破裂位移显著增加(t=-3.868,-3.276,P<0.01);腰椎椎体骨小梁分离度增加(t=-2.575,P<0.05),腰椎椎体Runx2 mRNA表达升高(t=-3.738,P<0.05);腰椎椎体中BMP-2 mRNA表达升高不明显,差异无统计学意义(t=-1.589,P>0.05)。结论OPG-/-小鼠表现出明显的骨质疏松,是一种理想的骨质疏松模式动物。 展开更多
关键词 保护 基因敲除 小鼠 质疏松 动物模型
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人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定 被引量:1
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作者 王晓军 王爱民 +6 位作者 张忠荣 吴思宇 郭庆山 吴军 贺伟峰 汤守营 张全顺 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2005年第2期167-170,共4页
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携... 目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs) 进行感染。采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度。结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功, 病毒滴度可达2.5×108pfu/ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含 hOPG重组腺病毒载体。 展开更多
关键词 保护 基因重组腺病毒载体 adEasy系统 髓基质细胞 细菌内同源重组法 基因工程技术 293细胞 PCR方法 载体质粒 基因片段 大肠杆菌 架质粒 基因转染 酶切鉴定 病毒滴度 感染能力 G基因 hOP 计数法 检测 荧光
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雄激素对体外成骨细胞OPG及其配体基因表达的影响 被引量:8
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作者 张川 李孝鹏 +3 位作者 符诗聪 邹志强 朱雅萍 张风华 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2007年第2期77-81,共5页
目的检测小鼠胎鼠成骨细胞体外培养并将不同浓度雄激素干预后,OPG和OPGLmRNA表达的变化,探讨雄激素在成骨细胞介导破骨细胞分化、活化过程中的调控机制。方法分离得到小鼠胎鼠颅盖骨成骨细胞,培养传代并选择第二代细胞用于实验;对第二... 目的检测小鼠胎鼠成骨细胞体外培养并将不同浓度雄激素干预后,OPG和OPGLmRNA表达的变化,探讨雄激素在成骨细胞介导破骨细胞分化、活化过程中的调控机制。方法分离得到小鼠胎鼠颅盖骨成骨细胞,培养传代并选择第二代细胞用于实验;对第二代成骨细胞实施含10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L3种浓度雄激素的培养液干预;抽提细胞RNA,采用RT-PCR方法半定量观察成骨细胞中OPG和OPGL基因mRNA表达的变化。结果实验选用的各浓度组均未出现细胞毒性反应,雄激素干预使成骨细胞中OPG基因表达上调,而OPGL与OPG比率随时间呈递减趋势。结论雄激素可以特异性地在转录水平调节成骨细胞中OPG和OPGL基因的表达。 展开更多
关键词 雄激 细胞 保护(opg) 保护配体(opgL) 基因表达
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阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 沈霖 武嘉林 +5 位作者 李蕾 夏远军 高兰 谢晶 周丕琪 杨艳萍 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2005年第2期251-254,共4页
目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制。方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照... 目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制。方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液。培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养。采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P<0.05)。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml/L时最强,与雌激素组比较无显著性差异(P>0 05),且明显高于对照组(P<0.05)。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml/L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P<0 05),且明显低于对照组(P<0.05)。结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节 OPG/RANKL表达而治疗骨质疏松。 展开更多
关键词 阿胶强口服液 含药血清 配体 基因mRNA表达 RANKL Wistar大 MTT比色分析 显著性差异 细胞 新生SD大 细胞增殖 胸腺嘧啶核苷 质疏松 对照组 单细胞悬液 放免法测定 PCR测定 opg 雌激 分子机制
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钛微粒对成骨细胞护骨素基因表达的调控 被引量:2
7
作者 蔡贤华 陈安民 《实用医学杂志》 CAS 2005年第8期776-778,共3页
目的:探讨磨损微粒引起假体周围骨溶解过程中的骨保护能力,为人工关节假体松动的机制及预防研究打下基础。方法:M G-63细胞在无酚红的M EM培养基中单层培养,采用不同浓度细胞可吞噬钛微粒(粒径小于3μm对其进行24h干预或采用0.05%钛微... 目的:探讨磨损微粒引起假体周围骨溶解过程中的骨保护能力,为人工关节假体松动的机制及预防研究打下基础。方法:M G-63细胞在无酚红的M EM培养基中单层培养,采用不同浓度细胞可吞噬钛微粒(粒径小于3μm对其进行24h干预或采用0.05%钛微粒干预0h、12h、24h、36h及48h,半定量R T-PC R观察其对护骨素)(OPG基因表达的影响。结果:随着钛微粒浓度及刺激时间逐渐增加,O PG m R N A表达上调逐渐增加。结论:在假体)松动病理过程中,骨保护能力增加,虽然其增加程度不及骨溶解,但为干预假体松动提供了基础。 展开更多
关键词 基因表达 细胞 半定量RT-PCR 假体周围溶解 MG-63细胞 调控 假体松动 磨损微粒 预防研究 人工关节 单层培养 0.05 不同浓度 刺激时间 表达上调 mRNA 病理过程 24h 培养基 MEM 干预 opg 能力 保护
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失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响 被引量:18
8
作者 徐琳 谭颖徽 +1 位作者 王建华 张纲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期988-990,共3页
目的 明了失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响及其调节骨折愈合的机制。方法 40只新西兰白兔随机分为:单纯下颌骨骨折组及下齿槽神经离断+下颌骨骨折组。分别于骨折术后7、14、2 1、2 8d处死,取骨痂标本行HE... 目的 明了失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响及其调节骨折愈合的机制。方法 40只新西兰白兔随机分为:单纯下颌骨骨折组及下齿槽神经离断+下颌骨骨折组。分别于骨折术后7、14、2 1、2 8d处死,取骨痂标本行HE及免疫组织化学染色。结果 单纯骨折组骨折后7d骨痂中即可见到降钙素基因相关肽(CGRP)阳性神经纤维,沿血管分布,14、2 1d在编织骨边缘有大量的CGRP阳性神经纤维,2 8d仍较多。同时骨折后7d骨保护素(OPG)强阳性表达,以后逐渐下降,但均保持较高水平的表达。破骨细胞分化因子(RANKL)的表达高峰则在骨折后第14天;而失神经骨折组除7d骨痂中见CGRP阳性表达外,7d后骨痂中仅有极低水平的CGRP表达。同样,OPG在骨折后7d在骨痂中阳性表达以后持续弱阳性表达。RANKL则持续强阳性表达。结论 在骨折愈合过程中,CGRP能够上调OPG/RANKL的表达量的比值,从而参与骨折愈合过程的调节,失神经支配失去了CGRP对OPG/RANKL表达的调节作用,不利于骨折愈合。 展开更多
关键词 降钙基因相关肽(CGRP) 保护(opg) 细胞分化因子(RANKL)失神经支配 下颌
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