利用PCR方法克隆香蕉束顶病毒海南分离物(Banana bunchy top virus,BBTV-HN)DNA2编码区,将其插入到原核表达载体pGEX-6p-1谷胱苷肽-S-转移酶(GST)基因下游。所得克隆pGEX-HN-B2测序结果表明,插入的DNA2片段为267bp,且表达相位和理论上...利用PCR方法克隆香蕉束顶病毒海南分离物(Banana bunchy top virus,BBTV-HN)DNA2编码区,将其插入到原核表达载体pGEX-6p-1谷胱苷肽-S-转移酶(GST)基因下游。所得克隆pGEX-HN-B2测序结果表明,插入的DNA2片段为267bp,且表达相位和理论上设计的完全一致。把此重组质粒转化到E.coli Rosetta(DE3)中,经过异丙硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后出现约33Ku融合蛋白质表达条带。为获得特异的血清,切下目的表达条带并免疫兔子。经Western-blotting检测,获取的血清可以和表达的33Ku融合蛋白特异结合,表明已成功获得DNA2编码蛋白的血清。展开更多
克隆得到1条新的香蕉束顶病毒(BBTV)6核苷酸全序列,对其进行序列分析发现,该序列含有2个主要的特征序列CR-SL(Stem-loop common regions)和CR-M(Major common regions)。BBTV6氨基酸进化树结果显示其分成2大类。将6种BBTV组分的序列进...克隆得到1条新的香蕉束顶病毒(BBTV)6核苷酸全序列,对其进行序列分析发现,该序列含有2个主要的特征序列CR-SL(Stem-loop common regions)和CR-M(Major common regions)。BBTV6氨基酸进化树结果显示其分成2大类。将6种BBTV组分的序列进行比较发现,6种组分内核苷酸和氨基酸的最高相似性分别为96.10%和98.27%,6种组分间核苷酸和氨基酸最高相似性分别为70.78%和56.24%。6种BBTV组分的核苷酸及其氨基酸进化树将所有分离物按照组分类别分成6组,而6种BBTV组分的CR-M核苷酸序列进化树将所有的分离物按照地域分成2大类。对BBTV的6种组分的蛋白质进行分析,结果表明,各种组分蛋白质的二级结构和理化性质有明显的差异。展开更多
文摘利用PCR方法克隆香蕉束顶病毒海南分离物(Banana bunchy top virus,BBTV-HN)DNA2编码区,将其插入到原核表达载体pGEX-6p-1谷胱苷肽-S-转移酶(GST)基因下游。所得克隆pGEX-HN-B2测序结果表明,插入的DNA2片段为267bp,且表达相位和理论上设计的完全一致。把此重组质粒转化到E.coli Rosetta(DE3)中,经过异丙硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后出现约33Ku融合蛋白质表达条带。为获得特异的血清,切下目的表达条带并免疫兔子。经Western-blotting检测,获取的血清可以和表达的33Ku融合蛋白特异结合,表明已成功获得DNA2编码蛋白的血清。
文摘克隆得到1条新的香蕉束顶病毒(BBTV)6核苷酸全序列,对其进行序列分析发现,该序列含有2个主要的特征序列CR-SL(Stem-loop common regions)和CR-M(Major common regions)。BBTV6氨基酸进化树结果显示其分成2大类。将6种BBTV组分的序列进行比较发现,6种组分内核苷酸和氨基酸的最高相似性分别为96.10%和98.27%,6种组分间核苷酸和氨基酸最高相似性分别为70.78%和56.24%。6种BBTV组分的核苷酸及其氨基酸进化树将所有分离物按照组分类别分成6组,而6种BBTV组分的CR-M核苷酸序列进化树将所有的分离物按照地域分成2大类。对BBTV的6种组分的蛋白质进行分析,结果表明,各种组分蛋白质的二级结构和理化性质有明显的差异。
