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一种利用Cre/loxP系统进行标记基因删除与靶基因置换的细胞模型研究(英文)
被引量：
2
1
作者
崔文涛
任立明
+3 位作者
侯健
张颖
陈永福
安晓荣
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期650-660,共11页
Cre/lox系统可以介导DNA的定点插入和定点删除,可利用其实现转基因动物中'友好位点'的重复利用及标记基因的有效删除.为直观地评估该系统介导的以上两种重组反应的效果,通过标记基因并利用大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88进行了模型研究...
Cre/lox系统可以介导DNA的定点插入和定点删除,可利用其实现转基因动物中'友好位点'的重复利用及标记基因的有效删除.为直观地评估该系统介导的以上两种重组反应的效果,通过标记基因并利用大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88进行了模型研究.首先构建了两个载体:a.整合载体pTE-lox2272-DsRed-loxP-GFP-loxP,含有红色荧光标记基因DsRed和绿色荧光标记基因GFP;b.置换载体pT-lox2272-neo-loxP,含有筛选标记基因neo,用以置换DsRed基因.然后,用整合载体转染SHZ-88细胞,并随机挑取了3个同时表达DsRed和GFP的稳定整合细胞克隆.随后用置换载体和Cre表达载体PBS185对以上每个克隆分别进行了3次共转染,通过G418筛选并扩增培养后,总共获得1070个克隆.通过分析标记基因DsRed和GFP在这些克隆中的表达情况:Cre介导的删除效率为91.1%,定点置换效率为29.3%.最后对部分克隆进行了PCR和DNA印迹鉴定,分子鉴定结果与发光的表型状况一致.这一方法为Cre/lox系统在转基因家畜生产中的进一步应用提供了实验依据.
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关键词
lox2272
LOXP
CRE
标记
基因
删除
靶基因置换
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职称材料
题名
一种利用Cre/loxP系统进行标记基因删除与靶基因置换的细胞模型研究(英文)
被引量：
2
1
作者
崔文涛
任立明
侯健
张颖
陈永福
安晓荣
机构
中国农业大学
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期650-660,共11页
基金
国家高技术研究发展计划资助项目(863)(2002AA206311和2006AA02Z148).~~
文摘
Cre/lox系统可以介导DNA的定点插入和定点删除,可利用其实现转基因动物中'友好位点'的重复利用及标记基因的有效删除.为直观地评估该系统介导的以上两种重组反应的效果,通过标记基因并利用大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88进行了模型研究.首先构建了两个载体:a.整合载体pTE-lox2272-DsRed-loxP-GFP-loxP,含有红色荧光标记基因DsRed和绿色荧光标记基因GFP;b.置换载体pT-lox2272-neo-loxP,含有筛选标记基因neo,用以置换DsRed基因.然后,用整合载体转染SHZ-88细胞,并随机挑取了3个同时表达DsRed和GFP的稳定整合细胞克隆.随后用置换载体和Cre表达载体PBS185对以上每个克隆分别进行了3次共转染,通过G418筛选并扩增培养后,总共获得1070个克隆.通过分析标记基因DsRed和GFP在这些克隆中的表达情况:Cre介导的删除效率为91.1%,定点置换效率为29.3%.最后对部分克隆进行了PCR和DNA印迹鉴定,分子鉴定结果与发光的表型状况一致.这一方法为Cre/lox系统在转基因家畜生产中的进一步应用提供了实验依据.
关键词
lox2272
LOXP
CRE
标记
基因
删除
靶基因置换
Keywords
lox2272,loxP, Cre, marker gene deletion, target gene replacement
分类号
Q5 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种利用Cre/loxP系统进行标记基因删除与靶基因置换的细胞模型研究(英文)
崔文涛
任立明
侯健
张颖
陈永福
安晓荣
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
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