非核糖体多肽合成酶研究进展 被引量：8

1

作者 明镇寰 潘建伟 朱睦元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期667-669,共3页

细菌和真菌采用非核糖体系统合成一些重要的多肽类物质 .近年来的研究表明 ,在该系统中发挥关键作用的是一类分子巨大的非核糖体多肽合成酶 .它们由顺序排列的组件构成 ,酶分子结构本身即蕴涵着多肽合成的信息 .对非核糖体多肽合成酶结... 细菌和真菌采用非核糖体系统合成一些重要的多肽类物质 .近年来的研究表明 ,在该系统中发挥关键作用的是一类分子巨大的非核糖体多肽合成酶 .它们由顺序排列的组件构成 ,酶分子结构本身即蕴涵着多肽合成的信息 .对非核糖体多肽合成酶结构和功能的了解 。 展开更多

关键词 非核糖体多肽合成酶 研究进展 结构 功能 细菌 真菌

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链霉菌GEMSM4(6)中聚酮合酶和非核糖体多肽合成酶基因的筛选及克隆 被引量：5

2

作者 李娜 黄胜 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期73-79,共7页

链霉菌GEMSM 4（6）的发酵产物具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌的活性,同时还对酵母及丝状真菌尤其是植物病原菌,具有较强的抑制作用。本研究利用简并性引物对该链霉菌基因组中可能存在的聚酮合酶（PKS）和非核糖体多肽合成酶（NRPS）基因进... 链霉菌GEMSM 4（6）的发酵产物具有抗革兰氏阳性菌和阴性菌的活性,同时还对酵母及丝状真菌尤其是植物病原菌,具有较强的抑制作用。本研究利用简并性引物对该链霉菌基因组中可能存在的聚酮合酶（PKS）和非核糖体多肽合成酶（NRPS）基因进行PCR扩增及序列分析,找到了3个NRPS及15个PKS基因的片段,其中PKS基因与Streptomyces violaceusniger Tu 4113的PKS基因序列同源性最高,达到91%~99%;而NRPS基因与数据库中已知的NRPS基因序列同源性仅为60%~62%。为克隆NRPS生物合成基因簇,构建了链霉菌GEMSM 4（6）的基因组细菌人工染色体（BAC）文库,通过PCR筛选得到包含有这3个NRPS基因的克隆子,为后期的异源表达及基因组发掘分析提供基础。 展开更多

关键词 链霉菌 聚酮合酶 非核糖体多肽合成酶 简并性引物 细菌人工染色体文库

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牛樟芝非核糖体多肽合成酶基因(AcNRPS)的克隆与鉴定 被引量：1

3

作者 原晓龙 胡唐阁然 +5 位作者 赵能 陈剑 陈中华 王娟 杨宇明 王毅 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期14-19,共6页

胶霉毒素属于真菌天然次生代谢产物epipolythiodioxopiperazine(ETP)家族,具有免疫抑制剂、抗真菌等多种生物活性,是由非核糖体多肽合成酶(NRPSs)催化合成。从牛樟芝(Antrodia camphorata)基因组中挖掘出非核糖体多肽合成酶基因(AcNRPS,... 胶霉毒素属于真菌天然次生代谢产物epipolythiodioxopiperazine(ETP)家族,具有免疫抑制剂、抗真菌等多种生物活性,是由非核糖体多肽合成酶(NRPSs)催化合成。从牛樟芝(Antrodia camphorata)基因组中挖掘出非核糖体多肽合成酶基因(AcNRPS,NCBI登录号为KX430967),克隆获取其全长cDNA,并对其进行生物信息学分析和表达谱分析。结果显示AcNRPS基因cDNA全长6 687 bp;与其DNA序列比对发现AcNRPS基因含有12个内含子;其开放阅读框编码2 229个氨基酸残基,BLAST比对发现其含有2个A-C-T结构域,底物需2个氨基酸;系统发育树结果显示AcNRPS与其他合成产物为胶霉毒素的NRPS基因聚为一类,其可合成胶霉毒素类化合物;表达谱分析显示,以葡萄糖和土豆蛋白胨作为碳、氮源的培养基能够有效促进牛樟芝NRPS基因的表达。 展开更多

关键词 牛樟芝 非核糖体多肽合成酶（NRPSs） 克隆 表达

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多肽类生物活性物质的非核糖体合成机理 被引量：4

4

作者 张学成 张惠 杨官品 《青岛海洋大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第3期389-394,共6页

遗传信息通过信使核糖核酸、转运核糖核酸和核糖体转变成蛋白质的过程是分子生物学的基石。但是 ,许多多肽类生物活性物质是通过非核糖体途径合成的 ,只有非核糖体多肽合成酶系参与。非核糖体多肽合成酶系是一类多功能蛋白质复合体 ,能... 遗传信息通过信使核糖核酸、转运核糖核酸和核糖体转变成蛋白质的过程是分子生物学的基石。但是 ,许多多肽类生物活性物质是通过非核糖体途径合成的 ,只有非核糖体多肽合成酶系参与。非核糖体多肽合成酶系是一类多功能蛋白质复合体 ,能识别、激活、转运氨基酸底物并按特定顺序合成多肽。非核糖体多肽合成酶系同时具有酶和模板功能 ,因此被称为蛋白质模板。由于底物大部分是稀有氨基酸 ,经由该途径合成的多肽类生物活性物质种类繁多。了解多肽非核糖体合成机理有助于寻找多肽类生物活性物质 ,有利于通过人工操作非核糖体合成酶系生产多肽类药物。近年来的研究已经使人们初步了解了多肽非核糖体合成的机理。本文将介绍非核糖体合成酶系组成。 展开更多

关键词 非核糖体多肽合成酶 多肽类生物活性物质 合成机理 人工合成 药用价值

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虫生真菌非核糖体多肽活性产物生物合成潜力预测

5

作者 张礼文 István MOLNÁR 徐玉泉 《合成生物学》 CSCD 2021年第5期815-825,共11页

肉座菌目虫生真菌合成的非核糖体多肽类天然产物具有抗菌、杀虫、抗癌、调节免疫等生物活性,在临床和农业等领域有重要应用价值。近年来,随着真菌基因组测序数量的迅速增加、注释和分析工具的不断进步,人们发现真菌基因组中存在大量产... 肉座菌目虫生真菌合成的非核糖体多肽类天然产物具有抗菌、杀虫、抗癌、调节免疫等生物活性,在临床和农业等领域有重要应用价值。近年来,随着真菌基因组测序数量的迅速增加、注释和分析工具的不断进步,人们发现真菌基因组中存在大量产物未知的天然产物合成基因。准确有效地预测这些基因的功能,筛选最有潜力合成新颖天然产物的基因簇,可以提高天然产物挖掘的效率。本研究选取40株肉座菌目虫生真菌基因组,系统分析了编码非核糖体多肽合成酶的基因及基因簇。基于隐马尔可夫模型,预测了445个模块型非核糖体多肽合成酶和1243个类非核糖体多肽合成酶;通过提取腺苷酰化结构域,构建序列相似性网络,以已知功能的非核糖体多肽合成酶作为标签,利用马尔可夫聚类算法,分析了非核糖体多肽产物的主要类别,发现了可能合成线性多肽、环缩肽、脂多肽、生物碱等新型结构化合物的基因簇。研究结果不仅揭示了肉座菌目虫生真菌合成非核糖体多肽活性产物的巨大潜力,而且为通过激活沉默基因簇挖掘新产物、利用合成生物学手段改造合成途径提供参考。 展开更多

关键词 肉座菌目虫生真菌 非核糖体多肽合成酶 非核糖体多肽 生物合成基因簇 序列相似性网络分析

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绿僵菌素的异源生物合成

6

作者 李思嘉 张安心 +1 位作者 徐新然 尹文兵 《中国抗生素杂志》 北大核心 2025年第9期1116-1122,I0003,共8页

目的在丝状真菌构巢曲霉(Aspergillus nidulans)中异源生产绿僵菌素类化合物,为建立绿色高效的生物合成方法奠定基础。方法在罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii)基因组中PCR扩增绿僵菌素生物合成基因dtxS1和dtxS2的DNA序列,利用酵母... 目的在丝状真菌构巢曲霉(Aspergillus nidulans)中异源生产绿僵菌素类化合物,为建立绿色高效的生物合成方法奠定基础。方法在罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii)基因组中PCR扩增绿僵菌素生物合成基因dtxS1和dtxS2的DNA序列,利用酵母组装法构建异源表达载体,通过PEG介导的原生质体转化法将载体导入构巢曲霉LO8030底盘菌中。利用乙酸乙酯萃取转化子培养物并获得粗提物,利用LC-MS确定绿僵菌素类化合物的分子量。结果参与绿僵菌素生物合成的非核糖体多肽合成酶基因dtxS1和细胞色素P450基因dtxS2可以直接在丝状真菌构巢曲霉底盘菌中异源表达。由于底盘菌中存在绿僵菌素生物合成基因簇中dtxS3和dtxS4的同源序列,故仅表达dtxS1和dtxS2就能产生绿僵菌素类化合物,且其种类多于罗伯茨绿僵菌野生型产生的。结论丝状真菌构巢曲霉可成功异源表达绿僵菌素生物合成基因dtxS1和dtxS2,并产生一系列绿僵菌素类化合物。 展开更多

关键词 绿僵菌素 生物合成 异源表达 构巢曲霉 非核糖体多肽合成酶 细胞色素P450

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基于NRPS基因筛选鉴定产生环脂肽葡萄附生细菌的研究 被引量：4

7

作者 王傲 杨柯 +2 位作者 吕曼 史雅凝 辛志宏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期164-170,共7页

本研究采用平板稀释法和斜面分离纯化技术,从夏黑葡萄中筛选分离到5株附生细菌,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S r DNA序列,产物纯化后进行克隆测序,利用MEGA 6.0软件对序列进行同源性比对分析,构建系统进化树后,将5株附生细菌分别鉴定... 本研究采用平板稀释法和斜面分离纯化技术,从夏黑葡萄中筛选分离到5株附生细菌,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S r DNA序列,产物纯化后进行克隆测序,利用MEGA 6.0软件对序列进行同源性比对分析,构建系统进化树后,将5株附生细菌分别鉴定为克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、克考氏菌(Kocuria marina)、嗜气芽孢杆菌(Bacillus aerophilus)、类芽孢杆菌(Paenibacillus agaridevorans)。在此基础上,以非核糖体多肽合成酶基因(non-ribosomal peptide compounds synthetase,NRPS)为靶点,筛选到含有目的条带的菌株PTWA2,经系统发育树预测该菌株能够产生环脂肽类化合物。该菌株发酵产物经有机溶剂萃取、常压硅胶柱层析、Sephedex LH-20等分离手段纯化得到一个单体化合物,采用核磁共振和质谱方法鉴定该化合物为环脂肽Surfactin A。该研究结果为以功能基因定向筛选产生环脂肽化合物的菌株提供了新的研究方法与理论依据。 展开更多

关键词 附生菌 16S RDNA 序列分析 非核糖体多肽合成酶 系统发育树 结构鉴定

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基于NRPS功能基因筛选鉴定盐生海芦笋内生细菌的研究 被引量：3

8

作者 杨柯 王傲 +1 位作者 吕曼 辛志宏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期175-182,共8页

本研究从盐生海芦笋中分离得到两株具有抑菌活性的内生细菌YK-7、YK-10,利用形态学观察、分子生物学方法与生理生化实验对其进行鉴定,并对其发酵产物进行了预测与验证。结果表明两株菌株分别为解淀粉芽胞杆菌亚种(Bacillus amyloliquefa... 本研究从盐生海芦笋中分离得到两株具有抑菌活性的内生细菌YK-7、YK-10,利用形态学观察、分子生物学方法与生理生化实验对其进行鉴定,并对其发酵产物进行了预测与验证。结果表明两株菌株分别为解淀粉芽胞杆菌亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.Plantarum)以及阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)。通过PCR扩增非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因,发现菌株YK-7含有NRPS基因片段,经系统发育树分析,预测该菌株可能产生环脂肽类化合物Surfactin,进一步对该菌株发酵产物进行电喷雾质谱(Electrospray mass,ESI-MS)分析证实了预测结果。该研究结果证实了从基因预测化合物的结构类型对于定向筛选有价值的化合物具有重要意义。 展开更多

关键词 内生细菌 分离鉴定 系统发育分析 非核糖体多肽合成酶 质谱 环脂肽类化合物

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基于NRPS基因筛选与鉴定葡萄附生真菌 被引量：2

9

作者 吕曼 杨柯 +2 位作者 王傲 史雅凝 辛志宏 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第18期229-235,240,共8页

以非核糖体多肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)基因为筛选靶点,从葡萄中筛选出含有NRPS基因的附生真菌,以期发现具有抗菌作用的环肽类化合物。采用平板划线技术、斜面分离纯化技术分离葡萄附生真菌,从中筛选出一株含有N... 以非核糖体多肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)基因为筛选靶点,从葡萄中筛选出含有NRPS基因的附生真菌,以期发现具有抗菌作用的环肽类化合物。采用平板划线技术、斜面分离纯化技术分离葡萄附生真菌,从中筛选出一株含有NRPS基因的附生真菌(编号PTLM-1)。在此基础上,构建系统发育进化树,结合形态学方法,将该菌株鉴定为腐皮镰刀菌Fusarium solani。经过NRPS系统发育进化树分析,发现该菌株有产生抗菌环肽类化合物——环孢菌素的潜力。通过对该菌的发酵产物进行电喷雾质谱分析,进一步证实了该预测结果。该研究为定向筛选产生环肽类化合物的菌株提供了新的研究方法与理论依据。 展开更多

关键词 葡萄 附生真菌 18S RDNA ITS RDNA 分离鉴定 非核糖体多肽合成酶

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中国被毛孢分离鉴定及其PKS、NRPS功能基因的多样性 被引量：2

10

作者 任朝辉 牛晓娟 +1 位作者 杜静 张传博 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第18期117-123,130,共8页

探究中国被毛孢(Ophiocordyceps sinensis)遗传、聚酮合成酶(Polyketide synthase,PKS)、非核糖体多肽合成酶(Non-ribosomal peptide synthase,NRPS)的多样性,为寻找合成生物活性物质的潜在菌株奠定基础。采用组织分离法从冬虫夏草中分... 探究中国被毛孢(Ophiocordyceps sinensis)遗传、聚酮合成酶(Polyketide synthase,PKS)、非核糖体多肽合成酶(Non-ribosomal peptide synthase,NRPS)的多样性,为寻找合成生物活性物质的潜在菌株奠定基础。采用组织分离法从冬虫夏草中分离获得一株具有较强抑菌活性的真菌ZG4-23,采用多基因系统分析的方法对该菌株进行鉴定;利用兼并性引物对菌株ZG4-23的PKS基因和NRPS基因进行PCR扩增及序列测定分析,构建系统发育树,明确菌株ZG4-23的PKS基因序列和NRPS基因序列的系统进化地位。结果表明,多基因序列分析显示,菌株ZG4-23与多个中国被毛孢菌株同源性高达99%,因此确定该菌株为中国被毛孢(O.sinensis)。菌株基因组含有PKS I、NRPS基因,经比对,PKS I片段与已知Ophiocordyceps sinensis PKS序列相似度为99%,NRPS片段与Trichophyton rubrum NRPS序列相似度为76%。中国被毛孢具有较强合成生物活性次生代谢产物的潜在能力,值得进一步开发研究和应用。 展开更多

关键词 冬虫夏草 系统发育 功能基因 聚酮合酶 非核糖体多肽合成酶

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海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因的克隆、表达和纯化 被引量：3

11

作者 陆胜利 祁超 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第6期876-884,共9页

海洋放线菌S.arenicola CNS-205是首次报道的专属海洋性放线菌属Salinispora的代表菌株之一.选取海洋放线菌S.arenicola CNS-205非核糖体多肽合成酶氨基酸腺苷化结构域基因sare 0357,对其进行生物信息学分析后进行原核重组质粒的构建和... 海洋放线菌S.arenicola CNS-205是首次报道的专属海洋性放线菌属Salinispora的代表菌株之一.选取海洋放线菌S.arenicola CNS-205非核糖体多肽合成酶氨基酸腺苷化结构域基因sare 0357,对其进行生物信息学分析后进行原核重组质粒的构建和表达及蛋白纯化.分别构建了pET-28a-sare 0357和pGEX-KG-sare 0357重组质粒,并转化E.coli BL21(DE3)进行不同诱导条件的诱导表达,sare 0357基因均以包涵体的形式表达.收集Sare0357重组蛋白包涵体,选取6mol/L的盐酸胍对其进行变性并将变性后的重组蛋白进行镍柱纯化.得到了可溶性的Sare0357融合蛋白. 展开更多

关键词 海洋放线菌 非核糖体多肽合成酶 腺苷化结构域

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海洋放线菌Salinispora areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活测定 被引量：2

12

作者 陆胜利 祁超 《安徽农业科学》 CAS 2014年第33期11632-11635,11668,共5页

[目的]测定海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活。[方法]选取海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS A domain基因sare0357,对其进行克隆表达和功能鉴定。[结果]在以Trp为底物时测定Sare0357蛋白的... [目的]测定海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活。[方法]选取海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS A domain基因sare0357,对其进行克隆表达和功能鉴定。[结果]在以Trp为底物时测定Sare0357蛋白的酶动力学参数为:Km=(0.040 33±0.003 67)mmol/L,Vmax=(2.135 05±0.029 43)μmol/(min·L),kcat=(14.233 6±0.196 2)min;Phe为底物时:Km=(0.027 65±0.001 51)mmol/L,Vmax=(1.558 06±0.009 7)μmol/(min·L),kcat=(10.387 1±0.064 6)min。[结论]丰富洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS腺苷化结构域的底物特异性和密码子领域的研究,为组合生物学和体外酶系合成NRPs提供依据。 展开更多

关键词 海洋放线菌 非核糖体多肽合成酶 腺苷化结构域 底物特异性 sare0357

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西藏米拉山草甸土壤PKS和NRPS基因多样性

13

作者 罗坤 杜桂萍 +2 位作者 赵志祥 谢丙炎 黎定军 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期506-511,共6页

为了解西藏米拉山草甸土壤中的聚酮合成酶(PKS)基因和非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因多样性,采用直接提取土壤总DNA,PCR扩增Ⅰ型PKS基因KS域和NRPS基因A域,并在NCBI进行Blast比对,分析其系统进化发育.得到27个PKS基因KS片段,经NCBI比对,... 为了解西藏米拉山草甸土壤中的聚酮合成酶(PKS)基因和非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因多样性,采用直接提取土壤总DNA,PCR扩增Ⅰ型PKS基因KS域和NRPS基因A域,并在NCBI进行Blast比对,分析其系统进化发育.得到27个PKS基因KS片段,经NCBI比对,主要来自蓝细菌(Cyanobaeteria)、α-和γ-变形菌(Proteobaeteria)和不能培养的微生物,得到NPRSA片段32个,主要属于变形菌门、蓝细菌门等. 展开更多

关键词 聚酮合成酶 非核糖体多肽合成酶 土壤 西藏米拉山草甸

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一种不易诱发耐药性的新型抗生素teixobactin的研究进展 被引量：1

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作者 张焕云 李瑞娟 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2019年第1期9-17,共9页

细菌耐药问题已经成为21世纪世界上最大的健康问题之一。发现新抗生素的速度越来越慢以及新耐药细菌的产生加速了新抗生素的需求。来源于难培养土壤微生物的缩肽类抗生素teixobactin具有独特新颖的抗菌机制,即和细菌细胞壁上肽聚糖前体... 细菌耐药问题已经成为21世纪世界上最大的健康问题之一。发现新抗生素的速度越来越慢以及新耐药细菌的产生加速了新抗生素的需求。来源于难培养土壤微生物的缩肽类抗生素teixobactin具有独特新颖的抗菌机制,即和细菌细胞壁上肽聚糖前体脂质Ⅱ及壁磷壁酸前体脂质Ⅲ的保守序列结合,以致细菌细胞壁不能合成,可以杀死多种耐药性致病菌,包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)等。这种特殊的作用方式使病原体对其很难产生耐药性,因此,teixobactin被认为是"明星抗生素"。自teixobactin发现以来,它的生物活性、作用机制、构效关系等逐步被揭示,其化学全合成也得以实现,但是生物合成的研究相对滞后。本文总结了近几年来有关teixobactin的研究进展,讨论了其不易诱发耐药性的机制,并展望了其在生物合成方面的研究。 展开更多

关键词 Teixobactin 环缩肽 耐药性 非核糖体多肽合成酶 脂质Ⅱ 生物合成

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基于NRPSs基因筛选与鉴定海芦笋内生细菌 被引量：1

15

作者 李代婧 殷跃 +3 位作者 刘梦婕 卫婷 郭佳 辛志宏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期58-63,共6页

利用形态学观察和分子生物学相结合的方法分离鉴定海芦笋内生细菌,并筛选含有NRPS基因的菌株(nonribosomal peptide synthetase,NRPS),以期获得能够产生环肽化合物的菌株。研究结果表明,共从海芦笋中分离到6株内生细菌Srtli-F1~Srtli-F6... 利用形态学观察和分子生物学相结合的方法分离鉴定海芦笋内生细菌,并筛选含有NRPS基因的菌株(nonribosomal peptide synthetase,NRPS),以期获得能够产生环肽化合物的菌株。研究结果表明,共从海芦笋中分离到6株内生细菌Srtli-F1~Srtli-F6,分别鉴定为绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)、组氨酸节杆菌(Arthrobacter histidinolovorans)、庆盛芽孢杆菌(Bacillus qingshengii)、类芽孢杆菌羽扇豆根瘤菌(Paenibacillus lupini)、假蕈状芽孢杆菌(Bacillus pseudomycoides)、高山麝病原性阿尔伯蒂埃希氏杆菌(Escherichia albertii),其中菌株Srtli-F5检测到含有NRPS基因,经系统发育树分析,预测该菌株可能产生环肽类化合物,该株菌经过发酵,有机溶剂萃取发酵产物,并用电喷雾质谱ESI-MS(electrospray mass,ESI-MS)分析Srtli-F5能产生环肽化合物——杆菌肽,证实了该预测结果。该研究为定向筛选能够产生环肽类化合物的菌种开拓了新思路。 展开更多

关键词 内生细菌 分离鉴定 系统发育分析 非核糖体多肽合成酶 质谱 环肽

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银白色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

16

作者 郭正洋 刘钟栋 +4 位作者 王远洋 陈晶 陈国培 兰全学 刘小青 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期222-226,共5页

本文旨在建立一种银白色葡萄球菌实时荧光 PCR 检测方法。根据对 NCBI 数据库中银白色葡萄球菌非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因序列的比对分析,设计引物及探针,并基于所设计的引物及探针建立 Taq-man 实时荧光 PCR 的检测方法。结果表明,... 本文旨在建立一种银白色葡萄球菌实时荧光 PCR 检测方法。根据对 NCBI 数据库中银白色葡萄球菌非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因序列的比对分析,设计引物及探针,并基于所设计的引物及探针建立 Taq-man 实时荧光 PCR 的检测方法。结果表明,本实验所建立的方法特异性较强,只能扩增出银白色葡萄球菌,而其他常见菌株的检测结果呈阴性;该方法的灵敏度为10 pg/uL;在对实验室通过传统方法分离的金黄色葡萄球菌的检测中,发现有两个分离菌株呈阳性,其结果与普通 PCR 方法完全一致。 展开更多

关键词 银白色葡萄球菌 非核糖体多肽合成酶 实时荧光PCR

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球孢白僵菌中与致病相关的NRPS基因的克隆与表达 被引量：1

17

作者 原晓龙 李桂凤 +1 位作者 李云琴 王毅 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2019年第6期135-139,共5页

以真菌球孢白僵菌为研究对象,以基因序列相似性为基础从球孢白僵菌基因组中挖掘获得Bbnrps1基因,再通过序列相似性和聚类分析等生物信息学方法推断该基因功能,并比较相同环境下不同的培养基配方对该基因表达水平差异等手段以寻找能够诱... 以真菌球孢白僵菌为研究对象,以基因序列相似性为基础从球孢白僵菌基因组中挖掘获得Bbnrps1基因,再通过序列相似性和聚类分析等生物信息学方法推断该基因功能,并比较相同环境下不同的培养基配方对该基因表达水平差异等手段以寻找能够诱导该基因表达的最佳条件。结果表明,Bbnrps1基因的cDNA全长4032bp,编码1343个氨基酸;BbNRPS1是一种定位于细胞质基质,无信号肽具7个跨膜结构域的蛋白;BbNRPS1与羊毛状小孢子菌(Microsporum canis,XP_002842845)、Nannizzia gypsea(XP_003169294)、Xylona heveae(XP_018190776)聚为一支,可能负责参与ETP类毒素的生物合成。在以乳糖、葡萄糖、山梨醇和肌醇为碳源添加物的培养基上,Bbnrps1基因表达量较高,在以甘露糖和果糖为碳源添加物的培养基上表达量较低,在麦芽糖上不表达;在以牛肉浸粉(SGB)、胰蛋白胨(SGT)和马铃薯浸粉(SGP)为氮源添加物的培养基上表达量较高,在酪蛋白胨(SGC)上不表达。本研究有助于预测nrps基因功能,为异源表达球孢白僵菌中nrps基因奠定基础。 展开更多

关键词 球孢白僵菌 非核糖体多肽合成酶 聚类分析 基因克隆 基因表达

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